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人生长激素基因组DNA在家蚕BmN细胞中的瞬时表达
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作者 张昕泂 胡惠民 +1 位作者 董良 陆长德 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期765-768,共4页
目的 :探讨内含子对外源基因在真核细胞中表达的作用。 方法 :直接将含有 4个内含子和自身信号肽的 1.5 kb全长人生长激素基因直接克隆至真核表达载体 pc DNA3.0 ,然后利用脂质体转染家蚕 Bm N细胞 ,收取细胞上清 ,PAGE电泳和Western印... 目的 :探讨内含子对外源基因在真核细胞中表达的作用。 方法 :直接将含有 4个内含子和自身信号肽的 1.5 kb全长人生长激素基因直接克隆至真核表达载体 pc DNA3.0 ,然后利用脂质体转染家蚕 Bm N细胞 ,收取细胞上清 ,PAGE电泳和Western印迹分析鉴定表达产物 ;将全长基因序列、缺失第 1内含子基因序列和 c DNA序列的表达载体 ,分别转染细胞后检测各片段表达产物之间的差异。结果 :测序结果表明人生长激素基因组 DNA在细胞内正确转录、剪接。蛋白质电泳分析和免疫学检测证明转染细胞能够有效合成并分泌蛋白质。 EL ISA检测发现 3种基因片段中 ,全长的基因序列在表达效果上要高于后两者 (P<0 .0 5 ) ,其中缺失第 1内含子的序列表达效率较 c DNA序列明显降低 (P<0 .0 5 )。结论 :在家蚕细胞中能够正确表达带有自身内含子和信号肽的人源蛋白基因 ; 展开更多
关键词 人生长激素基因组 DNA 家蚕 BmN细胞 瞬时表达 基因表达
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中心组合优化重组毕赤酵母生产S-腺苷甲硫氨酸用发酵培养基 被引量:7
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作者 朱闪 储炬 +3 位作者 胡晓清 庄英萍 张嗣良 袁中一 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期181-185,共5页
利用统计学实验设计方法优化了重组毕赤酵母生产S-腺苷甲硫氨酸(sAM)的发酵培养基。采用中心组合设计和响应面分析对诱导相培养基中硫酸铵、甲醇和L-甲硫氨酸三个关键因素的浓度进行了优化,使SAM在全合成培养基上的摇瓶产量提高了60... 利用统计学实验设计方法优化了重组毕赤酵母生产S-腺苷甲硫氨酸(sAM)的发酵培养基。采用中心组合设计和响应面分析对诱导相培养基中硫酸铵、甲醇和L-甲硫氨酸三个关键因素的浓度进行了优化,使SAM在全合成培养基上的摇瓶产量提高了60%,达到1.9g/L,并考察了胞内SAM合成酶活性的变化与SAM积累的相关性。 展开更多
关键词 响应面分析 S-腺苷甲硫氨酸 培养基优化 重组毕赤酵母 SAM合成酶
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哺乳动物氨基酰-tRNA合成酶复合物中三个辅助因子在分子信号网络中的重要作用 被引量:3
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作者 贺然 王恩多 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第4期398-402,共5页
氨基酰-tRNA合成酶是一类古老而保守的蛋白质,它们催化蛋白质生物合成的第一步反应.哺乳动物细胞内存在一个由8种氨基酰-tRNA合成酶和3种辅助因子组成的氨基酰-tRNA合成酶复合物.近年来,陆续发现该复合物中的3个辅助因子p43、p38和p18... 氨基酰-tRNA合成酶是一类古老而保守的蛋白质,它们催化蛋白质生物合成的第一步反应.哺乳动物细胞内存在一个由8种氨基酰-tRNA合成酶和3种辅助因子组成的氨基酰-tRNA合成酶复合物.近年来,陆续发现该复合物中的3个辅助因子p43、p38和p18在复合物外的多种生命活动中扮演着重要角色:辅助因子p43是细胞因子内皮单核细胞激活肽Ⅱ的前体,参与了血管生成和细胞凋亡等许多生命过程;辅助因子p38在肺部发育中至关重要,同时它在神经细胞中的不正确积累可能与帕金森病有关.更有趣的是,辅助因子p38和p18可以在时空上高度有序地通过不同的通路参与细胞对DNA损伤的修复.这些研究增加了对于氨基酰-tRNA合成酶和细胞内大分子信号网络之间关系的认识,并将促进对该领域的研究与发展. 展开更多
关键词 哺乳动物 氨基酰-TRNA合成酶 辅助因子 DNA损伤修复 信号网络
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WW结构域——蛋白质蛋白质相互作用的一种模式 被引量:3
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作者 李琦 胡红雨 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第3期333-337,共5页
WW结构域是由 38~ 40个氨基酸残基严密组织形成一个连贯、紧凑的结构域 ;它以包含两个色氨酸残基为主要特征 ,能专一地与含有XPPXY保守序列的蛋白质相互作用 .这种相互作用涉及许多细胞内事件 ,如非受体信号传导、转录调节、蛋白质降... WW结构域是由 38~ 40个氨基酸残基严密组织形成一个连贯、紧凑的结构域 ;它以包含两个色氨酸残基为主要特征 ,能专一地与含有XPPXY保守序列的蛋白质相互作用 .这种相互作用涉及许多细胞内事件 ,如非受体信号传导、转录调节、蛋白质降解等等 ,并且这种相互作用的变化会直接或间接影响到人体的正常生理代谢功能而引起疾病 . 展开更多
关键词 WW结构域 蛋白质-蛋白质相互作用 疾病
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来源于tRNA的小分子RNA——降解碎片还是新的调控分子 被引量:3
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作者 陈鑫 王恩多 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第8期681-687,共7页
具有经典三叶草结构的tRNA作为细胞蛋白质合成机器的重要元件,已经拥有几十年深入细致的研究历史.但是,对于其功能的认识远没有止境,尤其在其作为潜在的基因表达调控分子前体的功能目前正逐渐被人们认识.最新的多项研究结果表明,在多种... 具有经典三叶草结构的tRNA作为细胞蛋白质合成机器的重要元件,已经拥有几十年深入细致的研究历史.但是,对于其功能的认识远没有止境,尤其在其作为潜在的基因表达调控分子前体的功能目前正逐渐被人们认识.最新的多项研究结果表明,在多种细胞系中通过高通量测序发现某种来源于tRNA的小片段RNA,这些剪切产物被认为与多种microRNA加工体系关键分子(如Dicer、Ago家族中的蛋白质)具有相互作用的能力.同时,报告基因检测系统的研究结果也暗示,这些小片段RNA具有类似microRNA的潜在调控功能,可能在细胞应对外界环境刺激时发挥重要的调节作用.如其具体的作用机制能够被更多的实验结果阐明,将极大地扩展我们对于非编码RNA调控功能的认识. 展开更多
关键词 TRNA MICRORNA 调控分子
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