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利用ELISA与qRT-PCR技术检测番木瓜PRSV病毒的方法研究被引量：1: 1; 作者谢秀菊夏启玉 +7 位作者霍姗姗杜晓希麦贤俊张雨良郭安平李峰孔祥义赵辉《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期2534-2541,共8页; 番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜生产上最严重的病害之一,其发病率高,传播快,危害重。为及时发现感染PRSV的番木瓜植株,本研究建立了分别利用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术和荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)技术检测番... 展开更多; 关键词番木瓜环斑病毒酶联免疫吸附荧光定量逆转录PCR; 在线阅读下载PDF 职称材料

一种农杆菌介导的糜子高效遗传转化方法: 2; 作者夏启玉降彦苗 +5 位作者刘亚男李海权程汝宏郭安平刘国庆赵辉《热带作物学报》北大核心 2025年第1期44-50,共7页; 糜子(Panicum miliaceum L.)是我国传统的粮食作物,截至目前,针对糜子遗传转化方法的研究仍较少,本研究旨在建立农杆菌介导的糜子高效遗传转化方法。以糜子品种冀黍5号的成熟种子为外植体,在CIM和MSD诱导培养基上分别诱导糜子的胚性愈伤... 展开更多; 关键词糜子农杆菌遗传转化转化效率; 在线阅读下载PDF 职称材料

两种PCR快速检测转基因糜子中外源基因的插入拷贝数: 3; 作者董晓静夏启玉 +3 位作者降彦苗刘国庆程汝宏赵辉《热带农业科学》 2025年第2期55-63,共9页; 近年来,糜子(Panicum miliaceum L.)的转基因育种研究越来越多,本研究旨在建立简单快速检测转基因糜子中外源基因插入拷贝数的方法。从糜子基因组中筛选了一个单拷贝基因SD1,并以其为内参基因,以潮霉素抗性基因(Hyg)为外源基因,建立了数... 展开更多; 关键词转基因糜子外源基因插入拷贝数数字PCR 荧光定量PCR; 在线阅读下载PDF 职称材料

数字PCR和荧光定量PCR检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数方法的建立及其应用被引量：3: 4; 作者谢秀菊夏启玉 +7 位作者刘帅麦贤俊贾瑞宗郭安平徐志胜李峰孔祥义赵辉《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期663-673,共11页; 传统的检测转基因植物中外源基因拷贝数的方法是Southern杂交,该方法成本高、周期长,难以满足高通量检测外源基因拷贝数的育种需求,因此,本研究旨在建立快速且高通量检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数的方法。本研究从番木瓜基因组中筛... 展开更多; 关键词转基因番木瓜拷贝数内参基因数字PCR 荧光定量PCR; 在线阅读下载PDF 职称材料

油莎豆5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶基因CeEPSPS的克隆与分析被引量：6: 5; 作者邹智肖艳华 +1 位作者张丽赵永国《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2023年第1期26-34,共9页; 起源于非洲和地中海沿岸的油莎豆以适应性广、产油量高而成为我国的新型油料作物。为促进该物种的开发与利用,研究基于基因组和转录组数据对油莎豆及代表性单子叶植物的EPSPS基因进行系统鉴定。结果表明:与大多数植物类似,油莎豆仅含有1... 展开更多; 关键词油莎豆莎草科油料作物 5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶草甘膦; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名利用ELISA与qRT-PCR技术检测番木瓜PRSV病毒的方法研究被引量：1: 1; 作者谢秀菊夏启玉霍姗姗杜晓希麦贤俊张雨良郭安平李峰孔祥义赵辉; 机构中国热带农业科学院三亚研究院/中国热带农业科学院热带生物技术研究所/海南省南繁生物安全与分子育种重点实验室三亚市热带农业科学院山东舜丰生物科技有限公司; 出处《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期2534-2541,共8页; 基金三亚市科技创新专项(No.2022KJCX21) 海南省院士创新平台项目。; 文摘番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜生产上最严重的病害之一,其发病率高,传播快,危害重。为及时发现感染PRSV的番木瓜植株,本研究建立了分别利用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术和荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)技术检测番木瓜植株感染PRSV的方法,利用这2种方法检测多株转基因番木瓜与非转基因番木瓜的PRSV含量,并对结果进行比较分析。结果表明:利用PRSV多肽抗原作为标准品制备的抗体建立的标准曲线拟合度较好,可用于ELISA法检测PRSV;qRT-PCR法中选择的内参基因Cpa03g018830在番木瓜的不同生长阶段均稳定表达,可作为PRSV含量测定的内参基因;ELISA法和qRT-PCR法对多株转基因和非转基因番木瓜植株中PRSV含量的检测结果基本一致,表明这2种方法均可用于番木瓜植株中PRSV含量的检测。利用这2种检测手段,可及时发现并铲除感染了PRSV的番木瓜植株,有效预防与控制PRSV传播。; 关键词番木瓜环斑病毒酶联免疫吸附荧光定量逆转录PCR; Keywords PRSV ELISA qRT-PCR; 分类号 S436.67 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名一种农杆菌介导的糜子高效遗传转化方法: 2; 作者夏启玉降彦苗刘亚男李海权程汝宏郭安平刘国庆赵辉; 机构中国热带农业科学院三亚研究院/中国热带农业科学院热带生物技术研究所/海南省南繁生物安全与分子育种重点实验室河北农林科学院谷子研究所; 出处《热带作物学报》北大核心 2025年第1期44-50,共7页; 基金三亚崖州湾科技城科技专项(No.SCKJ-JYRC-2022-90) 中央引导地方科技发展资金项目(No.226Z6301G) 国家自然科学基金项目(No.32241043)。; 文摘糜子(Panicum miliaceum L.)是我国传统的粮食作物,截至目前,针对糜子遗传转化方法的研究仍较少,本研究旨在建立农杆菌介导的糜子高效遗传转化方法。以糜子品种冀黍5号的成熟种子为外植体,在CIM和MSD诱导培养基上分别诱导糜子的胚性愈伤,以其作为转化受体材料,用含植物表达载体的农杆菌侵染60min并共培养6d,转接至含0.025g/L潮霉素的筛选培养基上筛选出抗性愈伤,接着在含0.015g/L潮霉素的分化培养基上分化,最后在含0.015g/L潮霉素的生根培养基上生根成苗,用载体特异性引物对再生植株进行PCR检测,鉴定其是否为阳性转基因植株。根据多个批次的转化实验统计糜子的抗性再生植株的筛选效率和转化效率。结果表明:CIM和MSD诱导培养基均能诱导出糜子胚性愈伤,但CIM培养基诱导的糜子胚性愈伤效果更好;糜子胚性愈伤在被农杆菌侵染及与农杆菌共培养后,经在含潮霉素的培养基上筛选、分化和生根后获得多株抗性再生糜子植株,3次试验获得的糜子抗性再生植株的PCR鉴定阳性率为100%,平均转化效率为30%以上。本研究成功建立了农杆菌介导的糜子遗传转化方法,操作简单,转化效率高,成本低廉,且转化不受季节限制,能规模化开展,为糜子的遗传改良提供有效的技术手段。; 关键词糜子农杆菌遗传转化转化效率; Keywords broomcorn millet(Panicum miliaceum L.) Agrobacterium genetic transformation transformation effi-ciency; 分类号 S516 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名两种PCR快速检测转基因糜子中外源基因的插入拷贝数: 3; 作者董晓静夏启玉降彦苗刘国庆程汝宏赵辉; 机构中国热带农业科学院三亚研究院/中国热带农业科学院热带生物技术研究所/海南省南繁生物安全与分子育种重点实验室洛阳师范学院生命科学学院河北农林科学院谷子研究所; 出处《热带农业科学》 2025年第2期55-63,共9页; 基金三亚崖州湾科技城科技专项(No.SCKJ-JYRC-2022-90) 中央引导地方科技发展资金项目(No.226Z6301G) 国家自然科学基金(No.32241043)。; 文摘近年来,糜子(Panicum miliaceum L.)的转基因育种研究越来越多,本研究旨在建立简单快速检测转基因糜子中外源基因插入拷贝数的方法。从糜子基因组中筛选了一个单拷贝基因SD1,并以其为内参基因,以潮霉素抗性基因(Hyg)为外源基因,建立了数字PCR检测转基因糜子中外源基因插入拷贝数的方法。并以数字PCR鉴定的一个双拷贝样品为参照样本,建立了荧光定量PCR检测转基因糜子中外源基因插入拷贝数的方法。生物信息学分析表明,SD1为单拷贝基因,可作为转基因糜子中外源基因插入拷贝数检测的内参基因。数字PCR法检测的转基因糜子样品中,9份样品均为单拷贝或双拷贝插入;荧光定量PCR法检测的转基因糜子样品中,10份样品为单拷贝或双拷贝插入,其余13份样品均为多拷贝插入;对其中的4份低拷贝样品也进行了数字PCR检测,结果与荧光定量PCR法的检测结果完全一致,表明荧光定量PCR法检测转基因糜子中外源基因低拷贝时的准确度较高。本研究建立的数字PCR法简单快速,准确度高,适合在样品数量较少时使用,而荧光定量PCR法检测低拷贝插入时准确度较高,且成本低廉,适合从大量转基因株系中初筛出的低拷贝插入株系。这2种方法均可简单快速地检测糜子转基因育种中外源基因插入拷贝数。; 关键词转基因糜子外源基因插入拷贝数数字PCR 荧光定量PCR; Keywords transgenic broomcorn millet exogenous genes insertion copy number digital PCR quantitative fluorescence PCR; 分类号 S516 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名数字PCR和荧光定量PCR检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数方法的建立及其应用被引量：3: 4; 作者谢秀菊夏启玉刘帅麦贤俊贾瑞宗郭安平徐志胜李峰孔祥义赵辉; 机构中国热带农业科学院三亚研究院/中国热带农业科学院热带生物技术研究所/海南省南繁生物安全与分子育种重点实验室南京农业大学三亚市热带农业科学院山东舜丰生物科技有限公司; 出处《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期663-673,共11页; 基金三亚市科技创新专项(No.2022KJCX21) 海南省重大科技计划项目“南繁育种区生物安全防控”(No.ZDKJ202002) 海南省院士创新平台资助项目。; 文摘传统的检测转基因植物中外源基因拷贝数的方法是Southern杂交,该方法成本高、周期长,难以满足高通量检测外源基因拷贝数的育种需求,因此,本研究旨在建立快速且高通量检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数的方法。本研究从番木瓜基因组中筛选出2个单拷贝基因Cpa03g018830和Cpa03g018770,以已知外源基因为单拷贝整合的转基因番木瓜为参照,利用数字PCR鉴定其拷贝数,进一步以其为内参基因,以番木瓜转基因育种常用的筛选标记基因NPTⅡ为外源目的基因,建立利用数字PCR和荧光定量PCR技术检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数的方法。结果表明:Cpa03g018830和Cpa03g018770均为单拷贝基因;建立的数字PCR方法对转基因番木瓜中的外源基因拷贝数的检测准确可靠,而荧光定量PCR对转基因番木瓜中外源基因单低拷贝整合的检测准确度较高,对外源基因多拷贝整合的检测准确度则较低,因此,荧光定量PCR适合用来在大量转基因植株中初筛出单低拷贝整合的植株。本研究鉴定的单拷贝基因Cpa03g018830和Cpa03g018770可作为转基因番木瓜中外源基因拷贝数检测的内参基因,且建立的利用数字PCR和荧光定量PCR技术检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数的方法,操作简单,速度快,适合批量检测,可为番木瓜转基因抗病育种中单低拷贝株系的选育提供新的方法。; 关键词转基因番木瓜拷贝数内参基因数字PCR 荧光定量PCR; Keywords transgenic papaya copy number reference gene digital PCR fluorescence quantitative PCR; 分类号 S667.9 [农业科学—果树学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名油莎豆5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶基因CeEPSPS的克隆与分析被引量：6: 5; 作者邹智肖艳华张丽赵永国; 机构中国热带农业科学院三亚研究院/中国热带农业科学院热带生物技术研究所/海南省南繁生物安全与分子育种重点实验室中南民族大学生命科学学院/武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室广东石油化工学院生物与食品工程学院; 出处《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2023年第1期26-34,共9页; 基金海南省自然科学基金项目(No.320RC705) 国家自然科学基金项目(No.31971688) 中国热带农业科学院基本科研业务费专项资金(No.1630052017011)。; 文摘起源于非洲和地中海沿岸的油莎豆以适应性广、产油量高而成为我国的新型油料作物。为促进该物种的开发与利用,研究基于基因组和转录组数据对油莎豆及代表性单子叶植物的EPSPS基因进行系统鉴定。结果表明:与大多数植物类似,油莎豆仅含有1个EPSPS基因,其包含7个内含子,命名为CeEPSPS;RT-PCR分离到的CeEPSPS编码区序列为1584 bp,预测编码514个氨基酸,其N端的前70个残基为叶绿体信号肽,77~508位残基为高度保守的EPSP合酶结构域(PF00275);与EPSP合酶结构域相比,信号肽在不同植物中变异较大;CeEPSPS成熟蛋白的理论分子量为47.32 kDa,等电点为5.49,总平均疏水指数为0.069,脂肪族指数为93.76,不稳定系数为31.73,与其他物种相近,均属于稳定的疏水型酸性蛋白;进化分析支持油莎豆划归为禾本目莎草科。序列比对和基因组测序分析结果显示,56份油莎豆种质不存在已报道的草甘膦抗性变异。qRT-PCR分析结果显示,CeEPSPS主要在成熟叶片和块茎中表达,其表达水平显著高于芽、幼嫩叶片、衰老叶片和芽茎。此外,本研究还构建了CeEPSPS的植物过表达载体,这为下一步的草甘膦抗性育种奠定了坚实的基础。; 关键词油莎豆莎草科油料作物 5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶草甘膦; Keywords Cyperus esculentus L. Cyperaceae oil crop EPSPS glyphosate; 分类号 S565.9 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	利用ELISA与qRT-PCR技术检测番木瓜PRSV病毒的方法研究	谢秀菊夏启玉霍姗姗杜晓希麦贤俊张雨良郭安平李峰孔祥义赵辉	《热带作物学报》 CSCD 北大核心	2024	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	一种农杆菌介导的糜子高效遗传转化方法	夏启玉降彦苗刘亚男李海权程汝宏郭安平刘国庆赵辉	《热带作物学报》北大核心	2025	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	两种PCR快速检测转基因糜子中外源基因的插入拷贝数	董晓静夏启玉降彦苗刘国庆程汝宏赵辉	《热带农业科学》	2025	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	数字PCR和荧光定量PCR检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数方法的建立及其应用	谢秀菊夏启玉刘帅麦贤俊贾瑞宗郭安平徐志胜李峰孔祥义赵辉	《热带作物学报》 CSCD 北大核心	2024	3	在线阅读下载PDF 职称材料
5	油莎豆5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶基因CeEPSPS的克隆与分析	邹智肖艳华张丽赵永国	《热带作物学报》 CSCD 北大核心	2023	6	在线阅读下载PDF 职称材料