用核糖体工程技术开拓海洋微生物药用资源的研究 被引量：16

1

作者 于志斌 崔承彬 +4 位作者 朱天骄 卢克刚 顾谦群 方玉春 刘红兵 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期87-90,共4页

利用核糖体工程技术对海洋中无活性的放线菌B3054进行诱导,获得了突变菌株B3054/M,其形态、菌丝体颜色都与母体菌株有显著的差异,发酵液经HPLC分析发现,代谢产物有明显的变化,特别是突变株产生了能抑制小鼠乳腺癌tsFT210细胞周期活性的... 利用核糖体工程技术对海洋中无活性的放线菌B3054进行诱导,获得了突变菌株B3054/M,其形态、菌丝体颜色都与母体菌株有显著的差异,发酵液经HPLC分析发现,代谢产物有明显的变化,特别是突变株产生了能抑制小鼠乳腺癌tsFT210细胞周期活性的活性代谢产物.这是首次利用核糖体工程技术诱变得到的具有细胞周期抑制活性的海洋放线菌菌株,这一研究结果表明,利用该技术对自然界的无活性微生物进行诱导来拓展微生物药用资源是可行的. 展开更多

关键词 工程技术 药用资源 核糖体 海洋微生物 开拓 HPLC分析 活性代谢产物 细胞周期 海洋放线菌 活性微生物 突变菌株 抑制活性 研究结果 菌丝体 发酵液 乳腺癌 自然界 诱导 株产

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用核糖体工程技术二次开发海洋微生物菌株资源的研究 被引量：23

2

作者 于志斌 朱天骄 +4 位作者 崔承彬 顾谦群 刘红兵 方玉春 朱伟明 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1190-1194,共5页

经对无活性的海洋来源放线菌B3054进行链霉素抗性筛选，获得了一株具有抗肿瘤活性的链霉素抗性突变株SY-1。从该突变株的发酵物中分离得到了4个活性化合物，其中1个为新天然产物。对该菌株突变前后的rpsL基因（编码核糖体蛋白S12）进行... 经对无活性的海洋来源放线菌B3054进行链霉素抗性筛选，获得了一株具有抗肿瘤活性的链霉素抗性突变株SY-1。从该突变株的发酵物中分离得到了4个活性化合物，其中1个为新天然产物。对该菌株突变前后的rpsL基因（编码核糖体蛋白S12）进行分析未发现发生突变，提示突变位点可能在核糖体的另外亚基上。实验结果表明，核糖体工程技术可用于无活性菌株资源的二次开发利用。 展开更多

关键词 核糖体工程 海洋放线菌 B3054 SY-1 抗肿瘤产物

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一种海洋弧菌(Vibrio sp.WYA)褐藻胶裂合酶降解特性研究 被引量：5

3

作者 张真庆 于广利 +3 位作者 赵峡 王远红 吕志华 管华诗 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2006年第1期71-74,共4页

从海洋弧菌（Vibrio sp．WYA）中得到一种褐藻胶裂合酶，将其分别作用于寡聚甘露糖醛酸和古罗糖醛酸纯品（dp5～7）以及褐藻胶，采用HPTLC和FPLC等技术对产物进行分析，并应用ESI-MS和NMR进行结构分析．结果表明，该酶最小识别片段为六... 从海洋弧菌（Vibrio sp．WYA）中得到一种褐藻胶裂合酶，将其分别作用于寡聚甘露糖醛酸和古罗糖醛酸纯品（dp5～7）以及褐藻胶，采用HPTLC和FPLC等技术对产物进行分析，并应用ESI-MS和NMR进行结构分析．结果表明，该酶最小识别片段为六糖，终产物主要为三糖，且识别和切割位点为甘露糖醛酸残基． 展开更多

关键词 褐藻胶 寡糖 褐藻胶裂合酶 海洋弧菌 三糖酶解机理

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海洋来源真菌烟曲霉(Aspergillus fumigatus)次级代谢产物研究(Ⅰ):生物碱 被引量：5

4

作者 赵文英 朱庆书 顾谦群 《青岛科技大学学报（自然科学版）》 CAS 2007年第3期199-201,共3页

对一株海洋来源的微生物中的次级代谢产物进行了研究，从中分离并鉴别了5个喹唑啉生物碱类化合物（1～5），分别为fumiquinazoline G（1），fumiquinazoline F（2），fumiquinazoline A（3），fumiquinazoline C（4）和fumiquinazoline ... 对一株海洋来源的微生物中的次级代谢产物进行了研究，从中分离并鉴别了5个喹唑啉生物碱类化合物（1～5），分别为fumiquinazoline G（1），fumiquinazoline F（2），fumiquinazoline A（3），fumiquinazoline C（4）和fumiquinazoline D（5）。 展开更多

关键词 海洋来源真菌 烟曲霉 生物碱类

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靶向抗肿瘤药物甲氨喋呤-琥珀酰壳聚糖缀合物的制备及其体外稳定性的初步探讨 被引量：15

5

作者 王银松 李英霞 +1 位作者 宋妮 张华 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2003年第11期2103-2106,共4页

报道了甲氨喋呤 -琥珀酰壳聚糖缀合物的合成方法 ,并通过紫外光谱、红外光谱及核磁共振谱进行了结构验证 .流式细胞仪的检测结果表明 ,N -琥珀酰壳聚糖对 K5 62白血病肿瘤细胞具有较强的亲和性 ;溶解性实验结果表明 ,甲氨喋呤 -琥珀酰... 报道了甲氨喋呤 -琥珀酰壳聚糖缀合物的合成方法 ,并通过紫外光谱、红外光谱及核磁共振谱进行了结构验证 .流式细胞仪的检测结果表明 ,N -琥珀酰壳聚糖对 K5 62白血病肿瘤细胞具有较强的亲和性 ;溶解性实验结果表明 ,甲氨喋呤 -琥珀酰壳聚糖缀合物的水溶性较好 ( p H=1～ 1 4) ;体外释放实验结果表明 ,缀合物性质稳定 ,能明显延缓甲氨喋呤的释放 ,为抗肿瘤药物的靶向及缓控释给药体系的研究提供了初步参考 . 展开更多

关键词 N-琥珀酰壳聚糖 白血病 肿瘤细胞 抗肿瘤活性 甲氨喋呤 靶向抗癌药物 缓控释给药体系

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Nisin与香辛料提取液在五香牛肉保鲜中的应用研究 被引量：18

6

作者 贺红军 姜竹茂 +2 位作者 孙承锋 江涛 金海珠 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期59-61,共3页

用滤纸片琼脂扩散法比较了8种天然香辛料提取液对五香牛肉中腐败菌的抑制效果,研究了香辛料提取物对五香牛肉货架期的影响。结果证明丁香与桂皮提取液抑菌作用最强,以1.5%丁香+3%桂皮+0.05%Nisin组合保鲜液处理五香牛肉,在0～4℃条件下... 用滤纸片琼脂扩散法比较了8种天然香辛料提取液对五香牛肉中腐败菌的抑制效果,研究了香辛料提取物对五香牛肉货架期的影响。结果证明丁香与桂皮提取液抑菌作用最强,以1.5%丁香+3%桂皮+0.05%Nisin组合保鲜液处理五香牛肉,在0～4℃条件下可以将产品货架期延长至15d,室温条件下贮存,货架期可达5d,且不影响产品的感官品质。 展开更多

关键词 香辛料 NISIN 保鲜 五香牛肉

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使用本征值方法研究抗氧化剂的构效关系 被引量：6

7

作者 孔德信 江涛 +1 位作者 阎作伟 管华诗 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2004年第4期713-716,共4页

利用本征值 ( EVA)方法对一组分子多样性较大的酚类或苯胺类抗氧化剂进行了理论研究 ,在未采用任何实验数据的情况下 ,研究结果接近于文献报道的 QSAR模型 ,表明 EVA方法是研究抗氧化剂抗氧化活性构效关系的良好工具 .

关键词 抗氧化剂 定量构效关系 本征值方法 QSAR EVA方法 药物

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丁二酮肟双核铜配合物与DNA相互作用的电化学研究 被引量：4

8

作者 徐桂云 焦奎 +2 位作者 李延团 任勇 张旭志 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第1期49-52,共4页

用电化学方法研究了丁二酮肟双核铜配合物[Cu2(Hdmg)4]与DNA的相互作用.考察了pH、温度、离子强度和配合物浓度等因素对配合物与DNA相互作用的影响,初步探讨了配合物与DNA相互作用的机理.实验结果表明,配合物与DNA的碱基结合形成非电活... 用电化学方法研究了丁二酮肟双核铜配合物[Cu2(Hdmg)4]与DNA的相互作用.考察了pH、温度、离子强度和配合物浓度等因素对配合物与DNA相互作用的影响,初步探讨了配合物与DNA相互作用的机理.实验结果表明,配合物与DNA的碱基结合形成非电活性物质,使溶液中游离配合物的浓度降低,配合物的峰电流减小.单链DNA(ssDNA)充分暴露的碱基使其与配合物的结合能力大于双链DNA(dsDNA).Cu2(Hdmg)4与ssDNA和dsDNA的结合比分别为2∶1和1∶1,结合常数分别为3.56×109和2.75×105. 展开更多

关键词 双核铜配合物 丁二酮肟 DNA 循环伏安法 相互作用

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一种碱溶性灰树花菌丝体多糖GFM2A的制备和结构表征 被引量：15

9

作者 于广利 王莹 +2 位作者 赵峡 高昊东 管华诗 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第1期87-91,共5页

以灰树花菌丝体为原料,经过碱提取和柱色谱分离纯化,得到一种碱溶性多糖(GFM2A).经高碘酸氧化、Sm ith降解、乙酰解并采用GCMS,IR,2D NMR等方法对该多糖的化学结构进行了表征.结果表明,该多糖由葡萄糖(G lc)、甘露糖(M an)和木糖(Xyl)组... 以灰树花菌丝体为原料,经过碱提取和柱色谱分离纯化,得到一种碱溶性多糖(GFM2A).经高碘酸氧化、Sm ith降解、乙酰解并采用GCMS,IR,2D NMR等方法对该多糖的化学结构进行了表征.结果表明,该多糖由葡萄糖(G lc)、甘露糖(M an)和木糖(Xyl)组成,其摩尔比为9∶2∶1,其主链由6个-α1,3-D-G lc和2个-α1,3-D-M an构成,且-α1,3-D-G lc残基O-4位有两个分支,其中一个分支连接3个-β1,4-D-G lc,另一个分支连接一个-α1,4-D-Xyl. 展开更多

关键词 灰树花菌丝体 多糖 制备 结构表征

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甲氨喋呤-乳糖酰基壳聚糖的制备及其体外实验 被引量：19

10

作者 王银松 韩月莲 +2 位作者 李英霞 王玉玫 李荣珊 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1092-1097,共6页

制备了不同乳糖酰基取代度的N-乳糖酰基壳聚糖(LCH),并通过红外光谱(IR)及核磁共振氢谱(1H NMR)对其进行了结构表征.体外放射性配基竞争结合实验结果显示,当乳糖酰基取代度为15·5%～38·9%时,LCH对肝实质细胞膜表面去唾液酸糖... 制备了不同乳糖酰基取代度的N-乳糖酰基壳聚糖(LCH),并通过红外光谱(IR)及核磁共振氢谱(1H NMR)对其进行了结构表征.体外放射性配基竞争结合实验结果显示,当乳糖酰基取代度为15·5%～38·9%时,LCH对肝实质细胞膜表面去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)具有特异亲和性,即具有潜在的肝靶向性.将甲氨喋呤(MTX)与壳聚糖以酰胺键偶联,制备MTX-壳聚糖(MTX-CH),再与乳糖酸反应生成目标产物MTX-乳糖酰基壳聚糖(MTX-LCH),并通过紫外分光光度法(UV)检测MTX的取代度为5·6%,乳糖酰基取代度为33·8%.溶解性实验结果显示,MTX-LCH溶于pH=1～14的水溶液;体外释放实验结果表明,MTX-LCH性质稳定,能明显延缓MTX的释放. 展开更多

关键词 N-乳糖酰基壳聚糖 甲氨喋呤 去唾液酸糖蛋白受体 肝靶向 高分子前体药

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几种寡聚古罗糖醛酸的制备和结构表征 被引量：13

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作者 王莹 于广利 +2 位作者 赵峡 管华诗 杜宇国 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2005年第1期179-183,共5页

以多聚古罗糖醛酸为原料 ,在稀酸加压条件下进行酸水解得到寡聚古罗糖醛酸混合物 ,用低压凝胶渗透色谱 (LPGPC)和高效液相色谱 (HPLC)进行分离纯化 ,并用荧光基团辅助碳水化合物电泳 (FACE)检测纯度 .运用 IR,ESI/MS/MS,1 D,2 D NMR等... 以多聚古罗糖醛酸为原料 ,在稀酸加压条件下进行酸水解得到寡聚古罗糖醛酸混合物 ,用低压凝胶渗透色谱 (LPGPC)和高效液相色谱 (HPLC)进行分离纯化 ,并用荧光基团辅助碳水化合物电泳 (FACE)检测纯度 .运用 IR,ESI/MS/MS,1 D,2 D NMR等方法对古罗糖醛酸二糖至五糖的化学结构进行了表征 . 展开更多

关键词 寡聚古罗糖醛酸 制备 结构表征

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低温培养对大肠杆菌电穿孔转化效率的影响 被引量：5

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作者 韩峰 褚艳 于文功 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第9期30-34,共5页

在18℃和37℃振荡培养大肠杆菌DH5α并制备感受态细胞,用Eppendorf公司的Multiporator电转移仪进行电穿孔转化,研究了培养温度对转化效率的影响.实验结果表明,低温(18℃)培养的细菌,回收时的OD600值在0.5～1.0时,转化效率都维持在高水平... 在18℃和37℃振荡培养大肠杆菌DH5α并制备感受态细胞,用Eppendorf公司的Multiporator电转移仪进行电穿孔转化,研究了培养温度对转化效率的影响.实验结果表明,低温(18℃)培养的细菌,回收时的OD600值在0.5～1.0时,转化效率都维持在高水平;而在37℃培养的细菌,转化效率仅在OD600 0.6～0.7时出现一个锐利的峰值,此OD600值前后转化效率显著下降.在不影响细胞生长的情况下,18℃培养细菌的转化效率随电场强度增加而升高;而37℃培养的细菌在电场强度超过20.5 kV/cm时转化效率将大幅度下降.另外,还对影响转化效率的其他因素(培养基、振荡培养时的转速、细胞密度、质粒浓度、电击前后冰浴时间等)进行了优化,建立了一个便利而高效的质粒DNA电转化方法,获得1.02×1010cfu/μg DNA的高转化效率. 展开更多

关键词 低温培养 感受态细胞 大肠杆菌 DH5Α 电穿孔 转化效率 电场强度

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灰树花β-葡聚糖的高效凝胶渗透色谱行为 被引量：2

13

作者 宋乐天 于广利 +3 位作者 赵峡 高昊东 杨晓华 杨海 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期353-355,共3页

以4种不同蛋白质含量的灰树花β-1，3／1，6-葡聚糖（GF1，GF2，GF3，GF4）和1种α-1，4／1，6-葡聚糖（P100）为研究对象，探讨了它们在不同盐浓度和不同pH下的高效凝胶渗透色谱（HPGPC）行为。结果表明：灰树花口．葡聚糖相对分子质... 以4种不同蛋白质含量的灰树花β-1，3／1，6-葡聚糖（GF1，GF2，GF3，GF4）和1种α-1，4／1，6-葡聚糖（P100）为研究对象，探讨了它们在不同盐浓度和不同pH下的高效凝胶渗透色谱（HPGPC）行为。结果表明：灰树花口．葡聚糖相对分子质量在低于0．025mol／L的氯化钠溶液中急剧降低，在0．1—0．2mol／L的氯化钠溶液中趋于平稳。在pH3—6时，其相对分子质量随pH增加而急剧增加；在pH6—9范围内变化较小；pH高于9后又稍微增加。在相同条件下，α-1，4／1，6-葡聚糖的相对分子质量不受盐浓度和pH值变化的影响。灰树花β-葡聚糖在水溶液中可形成超螺旋结构，该结构受溶液盐浓度和pH值变化的影响，导致分子聚集状态不同，从而呈现不同的凝胶渗透色谱行为，表现为相对分子质量升高或降低。 展开更多

关键词 高效凝胶渗透色谱 相对分子质量 聚集状态 Β-葡聚糖 灰树花

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肝素与HIV-1膜表面蛋白gp120相互作用的预测和模拟 被引量：3

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作者 阎作伟 胡远东 +1 位作者 李松 江涛 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2004年第3期522-525,392,共5页

用分子模拟软件研究肝素与 HIV-1膜表面蛋白 gp1 2 0的相互作用 .将肝素中的单糖、二糖和三糖片段作为探针对 gp1 2 0蛋白进行搜索 ,统计分析确定肝素结合区域 .用肝素六糖片段和结合区域进行反应分子对接 ,获得两种结合模式 .最终建立... 用分子模拟软件研究肝素与 HIV-1膜表面蛋白 gp1 2 0的相互作用 .将肝素中的单糖、二糖和三糖片段作为探针对 gp1 2 0蛋白进行搜索 ,统计分析确定肝素结合区域 .用肝素六糖片段和结合区域进行反应分子对接 ,获得两种结合模式 .最终建立的模型能够很好地解释肝素体外抑制 HIV-1的现象 。 展开更多

关键词 GP120 肝素结合区域 探针 分子对接

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均匀设计优化白花蛇舌草中对香豆酸的提取工艺 被引量：2

15

作者 刘静 郭森辉 +1 位作者 李国强 钟惠民 《青岛科技大学学报（自然科学版）》 CAS 2007年第5期394-396,共3页

采用均匀设计优化白花蛇舌草中对香豆酸的提取工艺。以对香豆酸含量、干浸膏得率为指标,考察药材的提取溶剂、溶媒量、提取温度、提取时间等因素对提取工艺的影响。优化工艺:水为提取溶剂,料液质量比1∶100,提取温度100℃,提取时间4 h... 采用均匀设计优化白花蛇舌草中对香豆酸的提取工艺。以对香豆酸含量、干浸膏得率为指标,考察药材的提取溶剂、溶媒量、提取温度、提取时间等因素对提取工艺的影响。优化工艺:水为提取溶剂,料液质量比1∶100,提取温度100℃,提取时间4 h。提取工艺可靠、简便。 展开更多

关键词 白花蛇舌草 均匀设计 对香豆酸 高效液相色谱法 提取工艺

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胰淀素及2型糖尿病新药开发

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作者 刘明 辛现良 耿美玉 《临床荟萃》 CAS 北大核心 2006年第2期141-143,共3页

关键词 糖尿病 2型 胰淀素 胰岛淀粉样蛋白沉积

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利用DNA重组技术构建产生多聚甘露糖醛酸的突变菌株 被引量：1

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作者 沈洪波 韩峰 +2 位作者 林育姿 韩文君 于文功 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期175-180,共6页

本文旨在以海洋细菌Pseudomonas sp．QDA褐藻多糖（alginate）生物合成操纵元中的algG基因为靶点，利用DNA重组技术改建褐藻多糖的生物合成途径，以期获得产生甘露糖醛酸的突变菌株。首先，利用PCR克隆幽G基因两侧大小分别为1．7kb和1．... 本文旨在以海洋细菌Pseudomonas sp．QDA褐藻多糖（alginate）生物合成操纵元中的algG基因为靶点，利用DNA重组技术改建褐藻多糖的生物合成途径，以期获得产生甘露糖醛酸的突变菌株。首先，利用PCR克隆幽G基因两侧大小分别为1．7kb和1．8kb的DNA片段作为同源片段，用编码Gm抗性的aacCl基因替换algG基因，构建成打靶载体pEX100TUDG。将打靶载体转入QDA，利用Gm抗生素和蔗糖为选择压力进行培养，通过PCR和Southern杂交验证，获得了突变菌株。^1H—NMR、PAGE和GPC分析发现，突变菌株胞外产物为多聚甘露糖醛酸。该突变菌株的获得丰富了具有较高药物开发价值的甘露糖醛酸的来源，为褐藻多糖途径工程的进一步研究提供了理论依据和技术支持。 展开更多

关键词 多聚甘露糖醛酸 途径工程 假单胞菌 差向异构酶

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基于良好表达框架的全合成人源抗体库的构建方法

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作者 王尚资 尹长城 +6 位作者 林正红 王祥斌 刘晶 张逸 于文功 管华诗 黄华糅 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第6期32-38,共7页

构建大容量高质量抗体库，从而提高针对任意抗原的重组抗体的筛出率是一项有意义而又繁琐的工作。本文在现有建库方法的基础上，兼顾操作方法的简便和高质量抗体库的要求，设计了一种易于操作、步骤简洁的建库方法，并通过构建一个中等... 构建大容量高质量抗体库，从而提高针对任意抗原的重组抗体的筛出率是一项有意义而又繁琐的工作。本文在现有建库方法的基础上，兼顾操作方法的简便和高质量抗体库的要求，设计了一种易于操作、步骤简洁的建库方法，并通过构建一个中等库容的单骨架全合成单链抗体模式库，验证了该方法的可行性。本工作选用两条表达性能良好，在入抗体库中高频率出现的胚系基因作为抗体库的骨架，以期保证合成库的代表性和良好的表达折叠性能。在可变区的设计上，对重轻链可变区的CDR3区同时进行了随机化。在CDR区随机化合成策略的选择上，采用一种新颖的分组式合成法。本工作为其他骨架或多骨架合成库的构建提供了一种可供参考的构建模式，本抗体库也可用于抗体前导物的筛斌。 展开更多

关键词 合成抗体库 单链抗体 噬菌体展示 噬菌体 克隆效率 表达率

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