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NSPc1-shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定
1
作者
李辉
龚燕华
+1 位作者
胡光宇
阴彬
《山西医科大学学报》
CAS
2010年第9期775-779,共5页
目的构建并鉴定NSPc1-shRNA慢病毒表达载体,以便应用RNAi技术以及慢病毒感染系统进一步研究NSPc1的功能。方法设计针对NSPc1mRNA靶序列的小发夹状RNA,化学合成含茎环结构的正义链与反义链,退火形成带内切酶粘/平末端的双链后,与酶切后的...
目的构建并鉴定NSPc1-shRNA慢病毒表达载体,以便应用RNAi技术以及慢病毒感染系统进一步研究NSPc1的功能。方法设计针对NSPc1mRNA靶序列的小发夹状RNA,化学合成含茎环结构的正义链与反义链,退火形成带内切酶粘/平末端的双链后,与酶切后的pLentiLox3.7载体片段进行连接、转化。用双酶切及DNA测序鉴定重组克隆。提取阳性克隆质粒并转染293T细胞,收集细胞全蛋白用Western检测RNAi效果。结果重组克隆经酶切证实shRNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确,Western检测证实设计的三条RNA干扰序列有效敲低了293T细胞中的内源性NSPc1。结论 3个NSPc1-shRNA慢病毒表达载体的成功构建为应用基于慢病毒系统的RNAi技术来研究NSPc1基因的功能打下了基础。
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关键词
RNA干扰
NSPC1
小发夹状RNA
慢病毒载体
多梳家族
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职称材料
小片段红系特异增强子对MEL细胞中外源β珠蛋白基因表达调控的作用
2
作者
陶吉中
刘德培
+6 位作者
韦启泽
翟锦彬
阎波
刘庆辉
王晶
贾佩臣
梁植权
《高技术通讯》
CAS
CSCD
1996年第11期47-49,共3页
在以往研究基础上，本文进一步采用了１００ｂｐ红系特异增强子，构建了反转录病毒重组体Ｎ＿２Ａ·β·Ｅ１００和Ｎ＿２Ａ·β·Ｅ１００，经Ψ－２和ＰＡ３１７两轮包装细胞系转染后，利用出芽的病毒粒子感染ＭＥＬ...
在以往研究基础上，本文进一步采用了１００ｂｐ红系特异增强子，构建了反转录病毒重组体Ｎ＿２Ａ·β·Ｅ１００和Ｎ＿２Ａ·β·Ｅ１００，经Ψ－２和ＰＡ３１７两轮包装细胞系转染后，利用出芽的病毒粒子感染ＭＥＬ细胞，检测外源基因的整合与表达。结果表明１００ｂｐ和３６ｂｐ之间的差异序列对病毒滴度和前病毒整合无明显影响，但能使外源β珠蛋白基因的表达水平提高约一倍。
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关键词
β珠蛋白基因
红系特异增强子
细胞
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职称材料
题名
NSPc1-shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定
1
作者
李辉
龚燕华
胡光宇
阴彬
机构
武警
医学
院组织胚胎学教研室
中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室
武警
医学
院
生物
化学教研室
出处
《山西医科大学学报》
CAS
2010年第9期775-779,共5页
基金
国家自然科学基金面上项目(30971614
31070929)
医学分子生物学国家重点实验室开放课题
文摘
目的构建并鉴定NSPc1-shRNA慢病毒表达载体,以便应用RNAi技术以及慢病毒感染系统进一步研究NSPc1的功能。方法设计针对NSPc1mRNA靶序列的小发夹状RNA,化学合成含茎环结构的正义链与反义链,退火形成带内切酶粘/平末端的双链后,与酶切后的pLentiLox3.7载体片段进行连接、转化。用双酶切及DNA测序鉴定重组克隆。提取阳性克隆质粒并转染293T细胞,收集细胞全蛋白用Western检测RNAi效果。结果重组克隆经酶切证实shRNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确,Western检测证实设计的三条RNA干扰序列有效敲低了293T细胞中的内源性NSPc1。结论 3个NSPc1-shRNA慢病毒表达载体的成功构建为应用基于慢病毒系统的RNAi技术来研究NSPc1基因的功能打下了基础。
关键词
RNA干扰
NSPC1
小发夹状RNA
慢病毒载体
多梳家族
Keywords
RNA interference
NSPc1
small hairpin RNA
lentivirus vector
polycomb group
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
小片段红系特异增强子对MEL细胞中外源β珠蛋白基因表达调控的作用
2
作者
陶吉中
刘德培
韦启泽
翟锦彬
阎波
刘庆辉
王晶
贾佩臣
梁植权
机构
中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室
出处
《高技术通讯》
CAS
CSCD
1996年第11期47-49,共3页
文摘
在以往研究基础上，本文进一步采用了１００ｂｐ红系特异增强子，构建了反转录病毒重组体Ｎ＿２Ａ·β·Ｅ１００和Ｎ＿２Ａ·β·Ｅ１００，经Ψ－２和ＰＡ３１７两轮包装细胞系转染后，利用出芽的病毒粒子感染ＭＥＬ细胞，检测外源基因的整合与表达。结果表明１００ｂｐ和３６ｂｐ之间的差异序列对病毒滴度和前病毒整合无明显影响，但能使外源β珠蛋白基因的表达水平提高约一倍。
关键词
β珠蛋白基因
红系特异增强子
细胞
Keywords
globin gene, Erythroid enhancer, Retrovirus vectors
分类号
Q51 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
NSPc1-shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定
李辉
龚燕华
胡光宇
阴彬
《山西医科大学学报》
CAS
2010
0
在线阅读
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职称材料
2
小片段红系特异增强子对MEL细胞中外源β珠蛋白基因表达调控的作用
陶吉中
刘德培
韦启泽
翟锦彬
阎波
刘庆辉
王晶
贾佩臣
梁植权
《高技术通讯》
CAS
CSCD
1996
0
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职称材料
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