等位酶标记快速鉴定杂交水稻种子初步研究 被引量：5

1

作者 方宣钧 牟同敏 +1 位作者 卢兴桂 孙梅 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1997年第8期41-45,共5页

应用改进的淀粉凝胶同工酶电泳技术，对21种同工酶进行了分析，获得32个位点，47个等位酶基因，筛选出5个杂交水稻组合特异性等位酶标记，辅助标记鉴定标记9个，可对供试的9个杂交水稻组合进行真伪及纯度鉴定。应用该项技术每天每人可测... 应用改进的淀粉凝胶同工酶电泳技术，对21种同工酶进行了分析，获得32个位点，47个等位酶基因，筛选出5个杂交水稻组合特异性等位酶标记，辅助标记鉴定标记9个，可对供试的9个杂交水稻组合进行真伪及纯度鉴定。应用该项技术每天每人可测定160个样品，每个样品检测成本在0．5元人民币左右。因此，应用等位酶标记适用于大样本量逐粒鉴定杂交水稻种子的真伪及纯度，并可初步区分混杂的原因，是一套可用于杂交水稻种子商业化鉴定的实用技术。 展开更多

关键词 杂产稻 等位酶标记 纯度鉴定 淀粉凝胶电泳

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转抗病基因棉花的培育研究初报

2

作者 上官晓霞 王志兴 +2 位作者 张林水 吴霞 李燕娥 《中国棉花》 北大核心 2006年第11期9-10,共2页

关键词 棉花主产区 抗病基因 培育 棉花黄萎病 棉花生产 产量损失 纤维品质 经济损失

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快速一步法(ROSE法)提取DNA应用于RAPD-PCR扩增 被引量：32

3

作者 方宣钧 孔巍 金芜军 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1997年第10期40-43,共4页

对ROSE法的操作程序进行了进一步的简化，“一管一步”即可完成DNA提取全过程，系统地与CTAB和SDS法进行了比较，其提取过程明显比CTAB法、SDS法简单，提取效率分别比CTAB、SDS提高4倍和9倍，无污染物产生；与CTAB和SDs法相比分别节省费... 对ROSE法的操作程序进行了进一步的简化，“一管一步”即可完成DNA提取全过程，系统地与CTAB和SDS法进行了比较，其提取过程明显比CTAB法、SDS法简单，提取效率分别比CTAB、SDS提高4倍和9倍，无污染物产生；与CTAB和SDs法相比分别节省费用200％和700％。提取的DNA能满足RAPD－PCR研究的需要。因此，改良后的ROSE法可能是一种适合于DNA提取自动化的方法，同时可能成为植物分子育种实验室提取DNA的常规方法。 展开更多

关键词 DNA 抽提 快速一步法 ROSE

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转Bt基因植物对不同抗性棉铃虫的生长抑制作用 被引量：10

4

作者 范贤林 赵建周 +1 位作者 范云六 石西平 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期3-5,共3页

采用转Bt基因的烟草和棉花 ,对经转Bt单基因、转Bt与CpTI双基因烟草汰选 1 8代和常规烟草处理的棉铃虫种群进行生长抑制作用的比较测定。结果表明 ,转Bt烟草对以汰选后的抗Bt单基因汰选棉铃虫种群的体重抑制作用显著低于转双基因烟草汰... 采用转Bt基因的烟草和棉花 ,对经转Bt单基因、转Bt与CpTI双基因烟草汰选 1 8代和常规烟草处理的棉铃虫种群进行生长抑制作用的比较测定。结果表明 ,转Bt烟草对以汰选后的抗Bt单基因汰选棉铃虫种群的体重抑制作用显著低于转双基因烟草汰选种群和对照种群 ;转Bt棉花对单基因种群的杀虫活性、体重。 展开更多

关键词 转Bt基因植物 抗性 抽铃虫 生长抑制 烟草 棉花

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利用转基因植物生产新型疫苗 被引量：8

5

作者 王跃驹 李刚强 刘德虎 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1997年第12期57-60,46,共5页

综述了国内外利用转基因植物生产疫苗研究的现状及进展，从原理、方法、优缺点及发展方向等方面进行了概括。认为从目前来讲，由于发展中国家缺少生产疫苗的系统和保证疫苗活性的冷冻设施，使疫苗的普及和推广受到限制。鉴于转基因植物... 综述了国内外利用转基因植物生产疫苗研究的现状及进展，从原理、方法、优缺点及发展方向等方面进行了概括。认为从目前来讲，由于发展中国家缺少生产疫苗的系统和保证疫苗活性的冷冻设施，使疫苗的普及和推广受到限制。鉴于转基因植物生产廉价疫苗的优势及其产生的抗原蛋白良好的免疫应答反应，过去依靠微生物或细胞培养系统生产疫苗的方式已不适于疫苗的发展及推广普及，而利用转基因植物生产疫苗可能成为当今疫苗生产的趋势。 展开更多

关键词 转基因植物 植物 疫苗 免疫生物学

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与大豆孢囊线虫病抗性相关的RAPD标记 被引量：4

6

作者 章彦 金芜军 +2 位作者 李莹 刘学义 方宣钧 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1998年第11期45-48,共4页

利用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术，对７个抗大豆孢囊线虫的大豆材料和１０个感病大豆品种的基因组ＤＮＡ进行了ＲＡＰＤ分析，供试的２００个随机引物均产生了清晰稳定的ＲＡＰＤ扩增产物，其中有２１个随机引物产生的ＲＡＰＤ扩增产物具有多... 利用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术，对７个抗大豆孢囊线虫的大豆材料和１０个感病大豆品种的基因组ＤＮＡ进行了ＲＡＰＤ分析，供试的２００个随机引物均产生了清晰稳定的ＲＡＰＤ扩增产物，其中有２１个随机引物产生的ＲＡＰＤ扩增产物具有多态性。获得了５个与大豆孢囊线虫病抗性相关的ＤＮＡ片段，这些ＲＡＰＤ标记具有较高的重复性和稳定性，可辅助抗大豆孢囊线虫病大豆新品种的选育。 展开更多

关键词 RAPD 大豆孢囊线虫 分子标记 抗病品种 育种

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植物抗体基因工程：I．分泌马铃薯Y病毒中和抗体杂交瘤细胞系的筛选 被引量：3

7

作者 刘德虎 郭军 +2 位作者 陈三风 梁华 王海扬 《高技术通讯》 CAS CSCD 1995年第2期42-44,共3页

酶联免疫吸附试验证实，Ｄ７３、Ｄ９０和Ａ６９三个杂交瘤细胞系产生的单克隆抗体均能够与马铃薯Ｙ病毒株系ＰＶＹ￣ｏ、ＰＶＹ￣Ｎ和ＰＶＹ￣ｃ发生反应，但以Ｄ７３的亲和性为最强。进而进行的侵染抑制试验也证实经Ｄ７３单克隆抗体... 酶联免疫吸附试验证实，Ｄ７３、Ｄ９０和Ａ６９三个杂交瘤细胞系产生的单克隆抗体均能够与马铃薯Ｙ病毒株系ＰＶＹ￣ｏ、ＰＶＹ￣Ｎ和ＰＶＹ￣ｃ发生反应，但以Ｄ７３的亲和性为最强。进而进行的侵染抑制试验也证实经Ｄ７３单克隆抗体处理后的病毒接种物，其在‘Ａ６’（ＳｏｌａｎｕｍｄｅｍｉｓｓｕｍｘＳ．ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）离休叶片引起枯斑的能力显著地受到抑制。因此，选用Ｄ７３杂交瘤细胞系作为分离马铃薯Ｙ病毒中和抗体基因的材料，对其分泌的抗体轻链和重链的亚类进行鉴定，结果发现组成该单克隆抗体分子的轻链和重链分别为Ｋ链（ｋａｐｐａ）和γ＿１链。 展开更多

关键词 马铃薯Y病毒 杂交瘤细胞系 植物 抗体 基因工程

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甘薯病毒及类似病毒病害 被引量：11

8

作者 李汝刚 蔡少华 宋伯符 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 1992年第2期31-32,共2页

近十年来,发现甘薯种性退化比较严重,导致块根产量降低。退化的原因除去无性变异等外,病毒及类似病毒病的危害也是重要因素之。病毒引起马铃薯退化已是众所周知,而引起甘薯退化尚未引起足够的重视。 甘薯是我国四大主要的粮食作物之一,... 近十年来,发现甘薯种性退化比较严重,导致块根产量降低。退化的原因除去无性变异等外,病毒及类似病毒病的危害也是重要因素之。病毒引起马铃薯退化已是众所周知,而引起甘薯退化尚未引起足够的重视。 甘薯是我国四大主要的粮食作物之一,也是食品工业、轻工业和饲料工业的重要原料。我国甘薯种植面积达8000万亩。 展开更多

关键词 甘薯 病毒 病毒病 病害

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在大肠杆菌中表达具有抗黄曲霉活性的鲎素 被引量：5

9

作者 张春义 范云六 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1999年第1期43-46,共4页

人工设计并合成了抗真菌多肽鲎素基因。将合成的鲎素基因首先克隆到ｐＵＣ１８载体上，利用通用引物测序，获得了与预期碱基序列完全一致的目的基因。再将鲎素基因转入大肠杆菌，诱导表达融合蛋白。３７℃下诱导表达的ＧＳＴ—鲎素融合... 人工设计并合成了抗真菌多肽鲎素基因。将合成的鲎素基因首先克隆到ｐＵＣ１８载体上，利用通用引物测序，获得了与预期碱基序列完全一致的目的基因。再将鲎素基因转入大肠杆菌，诱导表达融合蛋白。３７℃下诱导表达的ＧＳＴ—鲎素融合蛋白完全不溶解，以包涵体的形式出现；而在３０℃诱导表达时，有少部分融合蛋白是可溶的。利用ｇｌｕ－ｔａｔｈｉｏｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ对可溶性的融合蛋白纯化后，纯化产物具有抑制黄曲霉孢子萌发的生物活性。 展开更多

关键词 鲎素基因 表达 黄曲霉 大肠杆菌 抑制

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光敏核不育籼稻 Hs-1 可育和不育幼穗 cDNA 文库的构建 被引量：2

10

作者 江树业 陈启锋 方宣钧 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1998年第10期45-48,共4页

分别取光敏核不育籼稻Ｈｓ－１在可育（１０ｈ／１７℃）和不育（１４ｈ／２７℃）条件下育性转换敏感期１—３ｃｍ幼穗为材料，以λＴｒｉｐｌＥｘ为载体，经离体包装构建成一对可育和不育ｃＤＮＡ文库，该文库具有构建快速、重组率高... 分别取光敏核不育籼稻Ｈｓ－１在可育（１０ｈ／１７℃）和不育（１４ｈ／２７℃）条件下育性转换敏感期１—３ｃｍ幼穗为材料，以λＴｒｉｐｌＥｘ为载体，经离体包装构建成一对可育和不育ｃＤＮＡ文库，该文库具有构建快速、重组率高以及便于插入片段的亚克隆及其表达分析等特点。讨论了文库的应用前景，认为构建的两个文库用于筛选高丰度表达的光敏核不育基因是可行的。 展开更多

关键词 光敏核不育 水稻 CDNA文库 幼穗 基因克隆

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基因工程正在开辟植物病虫害防治的新途径 被引量：33

11

作者 黄大昉 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期34-36,共3页

诞生于本世纪７０年代的基因工程技术，自８０年代中后期以来取得了日新月异、突飞猛进的发展。由于与病虫害防治有关的各类基因的发现以及植物转基因和微生物重组技术的一系列突破，用于植物保护的基因工程产品首先得到开发并在农业上... 诞生于本世纪７０年代的基因工程技术，自８０年代中后期以来取得了日新月异、突飞猛进的发展。由于与病虫害防治有关的各类基因的发现以及植物转基因和微生物重组技术的一系列突破，用于植物保护的基因工程产品首先得到开发并在农业上实现商业化应用。生物技术正在开辟病... 展开更多

关键词 植物病虫害 防治 基因工程

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植物抗体基因工程：II．马铃薯Y病毒中和抗体cDNA基因文库的构建及含抗体轻链和重链基因阳性克隆的筛选 被引量：1

12

作者 刘德虎 郭军 +2 位作者 陈三风 梁华 王海扬 《高技术通讯》 CAS CSCD 1995年第3期44-46,共3页

从大量繁殖的Ｄ７３杂交瘤细胞中提取制备其基因组ｍＲＮＡ，并以此为模板，经反转录途径获得基因组ｃＤＮＡ，随后将其插入到λｇｔ１１中，构建了马铃薯Ｙ病毒小鼠单克隆抗体ｃＤＮＡ基因文库。经免疫原位杂交，从该基因文库中筛选出... 从大量繁殖的Ｄ７３杂交瘤细胞中提取制备其基因组ｍＲＮＡ，并以此为模板，经反转录途径获得基因组ｃＤＮＡ，随后将其插入到λｇｔ１１中，构建了马铃薯Ｙ病毒小鼠单克隆抗体ｃＤＮＡ基因文库。经免疫原位杂交，从该基因文库中筛选出３０个含抗体轻链基因和１０个含抗体重链基因的阳性克隆，进一步将其插入到ｎＧＥＭ－７Ｚ（＋）质粒中，经酶切分析和电泳检测，证实在获得的轻链和重链阳性克隆中各有一个质粒（Ｋ６和Ｇ９）具有较长的外源ＤＮＡ插入（分别为１Ｋｂ和１．６Ｋｂ），它们可能编码完整的抗体轻链和重链蛋白。 展开更多

关键词 马铃薯Y病毒 单克隆抗体 基因克隆 基因工程

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植物抗体基因工程：Ⅲ．马铃薯Y病毒小鼠中和抗体链基因的序列分析及其植物表达载体的构建 被引量：1

13

作者 刘德虎 陈三凤 +1 位作者 王海扬 李刚强 《高技术通讯》 CAS CSCD 1995年第4期46-46,共1页

序列分析表明，马铃薯Ｙ病毒小鼠中和抗体轻链基因（Ｋ６）全长为９５６个核苷酸碱基（不包括ｐｏｌｙ（Ａ）尾巴），其中包括５＇端非编码区３１个核苷酸碱基，编码轻链信号肽的５７个核苷酸碱基，编码成熟蛋白的６５７个核苷酸基和３... 序列分析表明，马铃薯Ｙ病毒小鼠中和抗体轻链基因（Ｋ６）全长为９５６个核苷酸碱基（不包括ｐｏｌｙ（Ａ）尾巴），其中包括５＇端非编码区３１个核苷酸碱基，编码轻链信号肽的５７个核苷酸碱基，编码成熟蛋白的６５７个核苷酸基和３＇端非编码区的２１１个核苷酸碱基。与已知的其它Ｋ轻链基因（ＭＲＫ１６）相比，核苷酸的序列同源性为９８．７％，由核苷酸序列所推导出的氨基酸序列同源性为９７．０％，其变异主要发生在三个抗原识别位点内（ＣＯＲ）。将完整的抗体轻链基因正向插入植物表达载体ｐＢ１２１中的原ＧＵＳ基因位置上，置于花椰菜花叶病毒３５Ｇ启动子控制之下，获得了能够在植物细胞内表达马铃薯Ｙ病毒中和抗体轻链基因的植物表达载体ｐＹＬ。 展开更多

关键词 马铃薯Y病毒 单克隆抗体 基因工程 植物抗体

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植物抗体基因工程：Ⅳ．马铃薯Y病毒小鼠中和抗体重链基因的序列分析及其植物表达 被引量：1

14

作者 刘德虎 陈三风 李刚强 《高技术通讯》 CAS CSCD 1996年第4期8-11,共4页

序列分析表明，马铃薯Ｙ病毒小鼠中和抗体重链基因（Ｇ９）全长为１５０５个核苷酸碱基（不包括Ｐｏｌｙ（Ａ）尾巴），其中包括５＇端非编码区１６个核苷酸碱基、编码重链信号肽的５７个核苷酸碱基、编码成熟蛋白的１３２９个核苷酸碱... 序列分析表明，马铃薯Ｙ病毒小鼠中和抗体重链基因（Ｇ９）全长为１５０５个核苷酸碱基（不包括Ｐｏｌｙ（Ａ）尾巴），其中包括５＇端非编码区１６个核苷酸碱基、编码重链信号肽的５７个核苷酸碱基、编码成熟蛋白的１３２９个核苷酸碱基和３＇端非编码区的１０３个核苷酸碱基。与已知的小鼠抗体Ｍｏｐｃ２１的重链基因（γ１）相比，核苷酸的序列同源性为９４．４％，由核苷酸序列所推导出的氨基酸序列同源性为９２．６％，其中可变区内（ＶＨ）的氨基酸序列同源性达７４．５％，这表明二者起源于同一种系基因。将完整的抗体重链基因正向插入植物表达载体ｐＢⅠ１２１中的原ＧＵＳ基因位置上，置于花椰莱花叶病毒３５Ｓ启动子控制之下，获得了能够在植物细胞内表达马铃薯Ｙ病毒中和抗体重链基因的植物表达载体ｐＹＨ。 展开更多

关键词 马铃薯Y病毒 单克隆抗体 植物表达载体

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香椿籽油的制取、精炼及品质分析［注］ 被引量：13

15

作者 徐欣 王远程 +5 位作者 杨峰 张金英 王春林 杨群英 薛爱红 王德槟 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 1994年第3期38-40,共3页

本文用溶剂萃取法测得香椿籽含油率为３４％。机榨法制得的毛油经过脱胶、碱炼、脱色等工序可精炼成营养价值高、品质优良的食用油；其不饱和脂肪酸含量高达９０％以上，其中亚油酸含量为５５％，亚麻酸含量为２５％。

关键词 香椿籽油 精炼 品质分析 食用油

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