H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组新城疫病毒活载体疫苗株组织嗜性的研究 被引量：1

1

作者 董俊斌 步志高 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期668-672,共5页

为了研究H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组新城疫病毒活载体疫苗株[La Sota-HAmut(GD)]的组织嗜性,用重组疫苗[La Sota-HAmut(GD)]人工感染2日龄SPF鸡,接种后定期采集病鸡的各组织器官制备成石蜡切片,用建立的检测石蜡切片中[rLa Sota-HAmu... 为了研究H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组新城疫病毒活载体疫苗株[La Sota-HAmut(GD)]的组织嗜性,用重组疫苗[La Sota-HAmut(GD)]人工感染2日龄SPF鸡,接种后定期采集病鸡的各组织器官制备成石蜡切片,用建立的检测石蜡切片中[rLa Sota-HAmut(GD)]病毒的免疫酶组化染色技术,对人工感染[rLaSota-HAmut(GD)]鸡发病后病毒的组织器官亲嗜性和动态分布规律进行研究。[rLa Sota-HAmut(GD)]在胞浆内复制,主要亲嗜气管黏膜的上皮细胞和固有层腺体细胞,肝小叶间胆管上皮细胞。病毒出现的先后顺序为气管,肝脏,肺脏。结果表明:外源基因HAmut的插入对LaSota疫苗株的组织嗜性的影响很大。 展开更多

关键词 rLa Sota-HAmut(GD) 组织嗜性 研究

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Annexin蛋白家族调控病毒复制和抗病毒天然免疫反应的研究进展

2

作者 薛梦迪 黄丽 翁长江 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1014-1019,共6页

病毒复制一般包括吸附、穿入、脱壳、生物合成及装配与释放5个阶段,Annexin蛋白能够与流感病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等病毒编码的蛋白相互作用进而影响病毒吸附、穿入及脱壳等复制过程。天然免疫是机体针对各种病原微生物和... 病毒复制一般包括吸附、穿入、脱壳、生物合成及装配与释放5个阶段,Annexin蛋白能够与流感病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等病毒编码的蛋白相互作用进而影响病毒吸附、穿入及脱壳等复制过程。天然免疫是机体针对各种病原微生物和异物的侵袭而介导抗病毒免疫反应的第一道防线,其激活依赖于模式识别受体(Pattern-recognition receptors,PRRs)识别病原体保守的分子结构称病原相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),以激活下游相关信号通路,发挥抵御病原体侵入的功能。 展开更多

关键词 病毒吸附 模式识别受体 病毒复制 复制过程 病原相关分子模式 第一道防线 病原微生物 流感病毒

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2009年我国部分地区禽白血病分子流行病学调查 被引量：72

3

作者 高玉龙 邵华斌 +7 位作者 罗青平 潘伟 秦立廷 孙芬芬 刘超男 高宏雷 祁小乐 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期32-35,43,共5页

为了解自2009年年初以来国内一些地区禽白血病流行情况及流行毒株的分子特征,我们从湖北、黑龙江、山东、辽宁、吉林、广东、宁夏、安徽8个省区39个鸡场采集疑似禽白血病病料样品178份,用ALV-A、ALV-B和ALV-J特异性引物,通过PCR方法进... 为了解自2009年年初以来国内一些地区禽白血病流行情况及流行毒株的分子特征,我们从湖北、黑龙江、山东、辽宁、吉林、广东、宁夏、安徽8个省区39个鸡场采集疑似禽白血病病料样品178份,用ALV-A、ALV-B和ALV-J特异性引物,通过PCR方法进行检测。结果表明,8个省的35个鸡场的124份病料中检出了ALV-J(69.7%);25份病料中检出了ALV-A(13.9%);7份病料中检出了ALV-B(3.9%)。14个分离毒株env基因氨基酸同源性为84.3%～99%;与J亚群原型毒株HPRS-103的氨基酸序列同源性为87.3%～98.2%;与其它J亚群env基因氨基酸序列同源性为83%～97.4%。遗传进化分析表明,14个ALV-J分离株分别分属于不同的分支。其中,LJL09DH02分离株与其它分离株及参考毒株的的亲缘关系最远,与HPRS-103的氨基酸同源性仅为87.3%。另外4个分离株的env基因与HPRS-103的氨基酸同源性低于93%,其余9株与HPRS-103的同源性较高(96.6%以上)。该调查结果表明,我国目前ALV的感染主要以J亚群为主,ALV-A和B同时存在。 展开更多

关键词 禽白血病 J亚群白血病 血管瘤 ENV基因 分子流行病学

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猪圆环病毒2型衣壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：3

4

作者 姚永红 崔然 +3 位作者 赵钦 王刚 肖一红 周恩民 《山东农业科学》 2012年第9期9-12,21,共5页

为获得猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白单克隆抗体,将516 bp的ORF2基因片段克隆入pET-28a(+),转化入大肠杆菌,在IPTG的诱导下表达,用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定。将纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备单克隆抗体,叠加ELISA方法检... 为获得猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白单克隆抗体,将516 bp的ORF2基因片段克隆入pET-28a(+),转化入大肠杆菌,在IPTG的诱导下表达,用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定。将纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备单克隆抗体,叠加ELISA方法检测两株单克隆抗体识别的抗原表位关系。SDS-PAGE和Western blot结果表明重组蛋白ORF2得到高效表达;筛选获得两株稳定分泌抗ORF2单克隆抗体的杂交瘤细胞系3H3和3F2,其分泌的单体均为IgG1亚型;且均具有较高的特异性和敏感性;叠加ELISA显示,两株单克隆抗体识别不同的抗原表位。本研究制备的单抗有较好的生物学特性,为PCV2的研究及快速准确诊断方法的建立提供了平台。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 ORF2蛋白 单克隆抗体

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马传染性贫血病毒疫苗株S2基因不同变异位点逆向突变感染性克隆的体外复制特性分析

5

作者 高旭 姜成刚 +4 位作者 高华 林跃智 赵立平 相文华 周建华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期919-924,共6页

为研究EIAV弱毒疫苗株(EIAVFDDV15)S2基因发生的稳定性突变对疫苗株特性的作用以及S2基因的功能,以EIAVFDDV15感染性克隆质粒pFDDV3-8为模板,根据疫苗研制过程中S2基因发生的4个主要稳定性变异位点,构建及拯救出S2基因不同差异位点逆向... 为研究EIAV弱毒疫苗株(EIAVFDDV15)S2基因发生的稳定性突变对疫苗株特性的作用以及S2基因的功能,以EIAVFDDV15感染性克隆质粒pFDDV3-8为模板,根据疫苗研制过程中S2基因发生的4个主要稳定性变异位点,构建及拯救出S2基因不同差异位点逆向突变为强毒株相应氨基酸的6株感染性克隆衍生毒株。经实时定量PCR、逆转录酶活性和western blot等检测表明,疫苗株S2基因4个稳定性变异位点全部逆向突变的感染性克隆衍生毒vpFDDVS2r1-3-4-5在体外培养靶细胞中的复制水平低于亲本疫苗株感染性克隆衍生病毒和其他组合的逆向突变的感染性克隆衍生病毒,提示EIAV疫苗株S2蛋白4个稳定突变位点的综合作用可能是决定疫苗株和强毒株特性差异的因素之一。以上结果为体内感染S2基因逆向突变感染性克隆衍生病毒,进一步揭示S2基因在EIAV弱毒疫苗致弱过程中的作用提供了依据。 展开更多

关键词 马传染性贫血病毒 S2基因 逆向突变 感染性克隆 复制特性

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山羊关节炎-脑炎病毒甘肃株env基因的克隆和序列分析

6

作者 曲娟娟 赵立平 +1 位作者 沈荣显 相文华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期478-481,共4页

本试验参考GenBank上发表的CAEV-63株的env基因核苷酸序列设计一对引物,以CAEV甘肃株前病毒DNA为模板,PCR扩增产物约2.9kb,与预期的目的片段大小一致。回收目的基因片段并将其克隆到pMD18-T载体上,经PCR及酶切鉴定阳性的重组质粒测序,... 本试验参考GenBank上发表的CAEV-63株的env基因核苷酸序列设计一对引物,以CAEV甘肃株前病毒DNA为模板,PCR扩增产物约2.9kb,与预期的目的片段大小一致。回收目的基因片段并将其克隆到pMD18-T载体上,经PCR及酶切鉴定阳性的重组质粒测序,结果表明所扩增2893个核苷酸片段含有CAEV囊膜基因的全序列,编码964个氨基酸。核苷酸和氨基酸序列分析显示,CAEV甘肃株env基因与CAEV-63美国株的env基因核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.0%和98.1%。 展开更多

关键词 山羊关节炎-脑炎病毒 ENV基因 克隆 序列分析

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牛分枝杆菌ag85b-esat-6融合基因的克隆表达

7

作者 宫强 刘思国 龚明贵 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2008年第5期63-64,156,共3页

利用PCR技术和重叠延伸剪接(SOE)技术扩增牛分枝杆菌ag85 b、esat-6基因和ag85 b-esat-6融合基因,克隆到真核载体pcDNA3.1(+)上,构建重组质粒pCAE,将该重组质粒体外转染小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0细胞),间接免疫荧光试验检测目的蛋白的表达... 利用PCR技术和重叠延伸剪接(SOE)技术扩增牛分枝杆菌ag85 b、esat-6基因和ag85 b-esat-6融合基因,克隆到真核载体pcDNA3.1(+)上,构建重组质粒pCAE,将该重组质粒体外转染小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0细胞),间接免疫荧光试验检测目的蛋白的表达情况。结果表明成功构建了真核表达质粒pCAE,转染后的SP2/0细胞中出现绿色荧光,说明ag85 b-esat-6融合基因在SP2/0细胞中成功进行了瞬时表达,为进一步研制牛结核病DNA疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 牛分枝杆菌 融合基因 克隆 表达

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豫西南猪主要病毒性传染病流行病学调查 被引量：9

8

作者 鲍印 翟洪月 +7 位作者 李慧敏 袁志乔 马玉静 丁雨善 阚云超 姚伦广 田志军 冷超粮 《河南农业科学》 北大核心 2021年第1期152-157,共6页

为了解豫西南地区规模化猪场主要病毒性疾病的流行情况和抗体水平,从而制订科学合理的疾病综合防控措施,采用PCR和ELISA方法对南阳、驻马店、信阳市2017—2019年57个猪场送检的723份病猪组织样品(淋巴结、肺脏、脾脏、肾脏、脑等)和247... 为了解豫西南地区规模化猪场主要病毒性疾病的流行情况和抗体水平,从而制订科学合理的疾病综合防控措施,采用PCR和ELISA方法对南阳、驻马店、信阳市2017—2019年57个猪场送检的723份病猪组织样品(淋巴结、肺脏、脾脏、肾脏、脑等)和2476份血液样品进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的抗原和抗体检测。结果表明,CSFV、PRRSV、PCV2和PRV的感染具有普遍性,病原平均阳性率分别达到了42.20%(192/455)、56.85%(328/577)、45.03%(136/302)和28.85%(73/253),且部分存在以PRRSV为主的混合感染。抗体检测结果显示,CSFV、PRRSV、PCV2、PRV gE和PRV gB抗体的平均阳性率分别为78.37%(1841/2349)、75.93%(1565/2061)、84.62%(682/806)、33.12%(627/1893)和94.00%(1504/1600)。此外,CSFV、PCV2和PRV的病原检出率在2019年大幅下降。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪瘟病毒 猪圆环病毒2型 猪伪狂犬病病毒 病毒性传染病 流行病学调查

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一株重配型H1N2猪流感病毒的进化分析及对小鼠的致病性 被引量：4

9

作者 许程志 吴运谱 +7 位作者 贾云慧 杨时鳗 何利昆 陈艳 周晨阳 杨焕良 乔传玲 陈化兰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期802-810,共9页

为了进一步了解我国辽宁省猪流感(SI)的流行情况及病原的进化规律,对2016年年末在辽宁省某生猪屠宰场进行SI病原学监测时分离到的一株H1N2亚型猪流感病毒(SIV)A/swine/Liaoning/FX575/2016(简称FX575)进行全基因组序列测定,通过对其8个... 为了进一步了解我国辽宁省猪流感(SI)的流行情况及病原的进化规律,对2016年年末在辽宁省某生猪屠宰场进行SI病原学监测时分离到的一株H1N2亚型猪流感病毒(SIV)A/swine/Liaoning/FX575/2016(简称FX575)进行全基因组序列测定,通过对其8个基因片段的基因来源进行分析,确定基因型;构建系统进化树;分析相关分子特征;进一步以6周龄雌性BALB/c小鼠为感染模型,通过测定感染后小鼠的体重变化和脏器病毒含量评估病毒的致病性。结果显示:FX575为一株三重重配型的H1N2病毒,遗传进化分析结果显示病毒的HA基因来自于欧亚类禽型H1N1(EA H1N1)分支的SIV,NA基因来自于北美三重配型H1N2分支的SIV,6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M和NS)均来自于2009/H1N1分支的病毒。以10~6EID_(50)的剂量经鼻腔途径感染小鼠后,能够引起小鼠出现明显的体重下降,其中有1只小鼠在感染后第7天体重下降的比率超过25%,判为死亡;感染后第3天在小鼠肺及鼻甲骨中均检测到较高滴度的病毒,含量分别为4.82、4.20 log_(10)EID_(50)·mL^(-1)。结果表明SIV在不断流行的过程中,不同基因型病毒之间发生重组导致出现基因三重配的病毒,病毒对小鼠呈现中等致病力特征,提示应进一步加强对SI的主动监测,从而降低病毒对兽医及公共卫生学风险。 展开更多

关键词 猪流感病毒 H1N2亚型 进化分析 致病性

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鹅源星状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：8

10

作者 苏世博 蒲路莎 +2 位作者 陈肖韩 赵丽丽 陈洪岩 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第3期43-48,共6页

目的建立一种可快速诊断鹅源星状病毒的荧光定量PCR方法。方法分析比对NCBI下载的鹅源星状病毒全基因组序列,在其ORF1a保守区设计一对特异性引物及Taq Man探针,优化反应条件,建立标准曲线,并验证其特异性,敏感性和稳定性。结果该方法最... 目的建立一种可快速诊断鹅源星状病毒的荧光定量PCR方法。方法分析比对NCBI下载的鹅源星状病毒全基因组序列,在其ORF1a保守区设计一对特异性引物及Taq Man探针,优化反应条件,建立标准曲线,并验证其特异性,敏感性和稳定性。结果该方法最低检测线限为1.50×10^(2)copies/μL,批内和批间检测变异系数分别小于0.5%和4%,且对其他常见水禽病毒无特异性扩增。临床应用结果显示检出率明显高于常规RT-PCR方法。结论建立了一种鹅源星状病毒的Taq Man荧光定量PCR方法,该方法特异性强,灵敏度高且重复性良好,适用于鹅源星状病毒的早期检测和定量分析。 展开更多

关键词 鹅源星状病毒 荧光定量PCR 雏鹅痛风 检测方法

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流感病毒先天免疫应答和先天免疫逃逸的机制 被引量：4

11

作者 张乃心 许程志 +2 位作者 吴运谱 乔传玲 陈化兰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2022年第4期690-698,共9页

流感病毒引起人类和动物的呼吸道感染已是全世界严重的经济和公共卫生问题。在感染早期,流感病毒会导致机体的先天免疫信号被激活,起到防御、清除病毒以及辅助适应性免疫应答的作用。但在与宿主共进化的过程中,流感病毒形成了多种逃逸策... 流感病毒引起人类和动物的呼吸道感染已是全世界严重的经济和公共卫生问题。在感染早期,流感病毒会导致机体的先天免疫信号被激活,起到防御、清除病毒以及辅助适应性免疫应答的作用。但在与宿主共进化的过程中,流感病毒形成了多种逃逸策略,主要是通过病毒自身蛋白质阻断宿主天然免疫通路,抑制干扰素和炎性因子的生成。基于现有的研究成果,本文针对流感病毒先天免疫应答和先天免疫逃逸的机制做一扼要综述,这有助于加强流感病毒抗原进化的监测、探索疫苗和抗病毒药物的合理靶标,为更好地预防和控制该病提供有效的策略。 展开更多

关键词 流感病毒 病毒蛋白 天然免疫 免疫逃逸

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猫疱疹病毒Ⅰ型US3基因剪接异构体的鉴定 被引量：1

12

作者 孙雪 田进 +3 位作者 刘大飞 吴红霞 祖少坡 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期103-106,共4页

为鉴定猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)US3基因的编码产物,本研究以提取FHV-1感染细胞的总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增US3基因转录产物,测序结果显示除了全长US3基因(1 056 bp)外,还出现了一个825 bp的片段(US3-X1)。该片段是由全长US3基因在22... 为鉴定猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)US3基因的编码产物,本研究以提取FHV-1感染细胞的总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增US3基因转录产物,测序结果显示除了全长US3基因(1 056 bp)外,还出现了一个825 bp的片段(US3-X1)。该片段是由全长US3基因在226 bp^458 bp位置发生了自我剪接,导致234 bp DNA缺失而产生,但ORF并没有改变。此外,通过重叠延伸PCR将US3基因226 bp处碱基"A"突变为"G"(m US3),改变自我剪接位点。将全长US3基因、m US3和US3-X1基因分别克隆至p3×Flag-CMV-10中,转染F81细胞,经western blot检测表明FHV-1 US3可以表达两种不同分子量的异构蛋白,大小约为45 ku和50 ku。这种US3基因的剪接异构体现象在猪伪狂犬病毒和人单纯疱疹病毒中已有报道,而FHV-1 US3基因的剪接异构体的鉴定尚属首次。该研究结果为进一步研究FHV-1 US3异构体蛋白的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 猫疱疹病毒I型 US3基因 剪接异构体

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黑龙江省一株马流感病毒的全基因组测序及同源性分析 被引量：2

13

作者 赵钊 郭巍 +3 位作者 关平原 王晓钧 吕洋 安茹 《中国动物检疫》 CAS 2015年第12期69-72,共4页

通过采集一匹患病马的病料及后续的病毒分离、病毒核酸提取、RT-PCR、连接T载体等一系列分子生物学技术,对病毒核酸进行测序,经NCBI比对分析,获得一株H3N8亚型马流感病毒。将获得的毒株与我国分离的A/equine/Jilin/1/1989禽源性毒株、2... 通过采集一匹患病马的病料及后续的病毒分离、病毒核酸提取、RT-PCR、连接T载体等一系列分子生物学技术,对病毒核酸进行测序,经NCBI比对分析,获得一株H3N8亚型马流感病毒。将获得的毒株与我国分离的A/equine/Jilin/1/1989禽源性毒株、2002年美国肯塔基分离株A/equine/Kentucky/1/02(美洲谱系Florida亚型)、A/equine/Argentine/77(美洲谱系Argentine亚型)等有代表性毒株进行同源性分析,发现该毒株与Florida-2型马流感病毒基因片段的同源率最高。根据马流感病毒的命名规则,将这毒株命名为A/equine/Heilongjiang/1/2010。本次所分离到的黑龙江株马流感病毒,丰富了我国马流感病毒资源库,为我国马流感流行病学研究、诊断技术及疫苗研究提供了重要基础。 展开更多

关键词 马流感病毒 基因组 同源性 分子生物学技术

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一株野鸟源H3N8亚型流感病毒分离株的全基因组序列分析 被引量：3

14

作者 兰玲 王涛 +3 位作者 王晶 程子兵 邓国华 陈化兰 《中国动物检疫》 CAS 2016年第4期77-79,93,共4页

本研究对2014年从新疆额敏县分离到的一株野鸟源H3N8亚型流感病毒A/wild bird/Xinjiang/S3525/2014(H3N8)进行了全基因序列和进化分析。序列分析显示,HA裂解位点序列为^(339)PEKQTR-GLFG^(348),为典型的低致病性禽流感病毒特征,NA基因具... 本研究对2014年从新疆额敏县分离到的一株野鸟源H3N8亚型流感病毒A/wild bird/Xinjiang/S3525/2014(H3N8)进行了全基因序列和进化分析。序列分析显示,HA裂解位点序列为^(339)PEKQTR-GLFG^(348),为典型的低致病性禽流感病毒特征,NA基因具有6个潜在的糖基化位点,与病毒株A/mallard/Czech Republic/14333-1K/2011(H3N8)核苷酸高度同源(97.7%)。该毒株的内部基因来源较复杂,其PB1、NP基因分别与A/ruddy shell duck/Mongolia/921C2/2009(H7N1)和A/wild duck/Korea/MHC39-26/2011(H7N9)的同源性最高,其余内部基因与H2、H3、H6、H7等亚型禽流感病毒分离株同源性最高,呈现明显的异源性。除PB2基因外,其余基因片段均来源于野鸟源禽流感病毒。 展开更多

关键词 流感病毒 H3N8亚型 基因组分析

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胶体金检测试纸卡在检测非洲猪瘟病毒抗体上的应用 被引量：4

15

作者 张元峰 刘锡玲 +8 位作者 毕路 李佳 方瑞 李乾 赵俊龙 毕丁仁 黄丽 步志高 翁长江 《养殖与饲料》 2020年第11期15-18,共4页

本研究采用非洲猪瘟病毒抗体检测试纸卡检测倍比稀释后的非洲猪瘟病毒标准阳性血清,将标准阳性血清倍比稀释至1∶256时,试纸卡检测线仍呈现清晰的、肉眼可见的红色沉淀线;标准阴性血清、空载体血清及其他无关病毒阳性血清各稀释度均无... 本研究采用非洲猪瘟病毒抗体检测试纸卡检测倍比稀释后的非洲猪瘟病毒标准阳性血清,将标准阳性血清倍比稀释至1∶256时,试纸卡检测线仍呈现清晰的、肉眼可见的红色沉淀线;标准阴性血清、空载体血清及其他无关病毒阳性血清各稀释度均无沉淀线。检测已知感染猪血清时,最早感染后第8天即能查出阳性抗体,与ELISA检测结果一致。用非洲猪瘟病毒抗体检测试纸卡对230份送检猪血清中的非洲猪瘟抗体进行检测,并与西班牙INGENASA非洲猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒进行比较试验。试验结果显示,阳性符合率为80%,阴性符合率为89.2%,总符合率为84.8%,说明本试验所制备的试纸卡在检测非洲猪瘟病毒抗体的临床应用中特异性强、准确度高,与常规ELISA试剂盒比较,能更快、更便捷地查出猪群中非洲猪瘟病毒抗体阳性猪,更适合于普通实验室及养殖单位现场临床应用。 展开更多

关键词 非洲猪瘟 抗体检测 胶体金检测试纸卡 病毒抗体

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Gga-miR-7b和靶基因SNCA在两品系鸡脾脏中的表达分析

16

作者 肖春婷 廉传江 +1 位作者 易诚 陈洪岩 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第4期874-879,共6页

为确定gga-miR-7b与SNCA的靶向关系以及检测他们在MDV超强毒株Md5感染SPF抗性鸡(B21单倍型)和易感鸡(B19单倍型)后5 d、14 d、25 d脾脏中的表达量。利用TargetScan、miRBD软件预测gga-miR-7b的靶基因,通过双荧光素酶报告基因检测系统体... 为确定gga-miR-7b与SNCA的靶向关系以及检测他们在MDV超强毒株Md5感染SPF抗性鸡(B21单倍型)和易感鸡(B19单倍型)后5 d、14 d、25 d脾脏中的表达量。利用TargetScan、miRBD软件预测gga-miR-7b的靶基因,通过双荧光素酶报告基因检测系统体外验证gga-miR-7b与SNCA之间的靶向关系。qRT-PCR检测SNCA和gga-miR-7b在B21、B19感染Md5脾脏中的表达量。荧光素酶活性结果显示,gga-miR-7b与SNCA-wt-3′UTR共转染后显著抑制萤火虫荧光素酶活性(P<0.05),对SNCA-mut-3′UTR活性无显著影响。qRT-PCR结果显示,SNCA在B21、B19中,Md5感染5 d均显著上调表达(P<0.05),Md5感染25 d时SNCA在B21中极显著上调表达(P<0.01),在B19中极显著下调表达(P<0.01)。gga-miR-7b在Md5感染14 d,在B21中显著上调表达而在B19中显著下调表达(P<0.05),Md5感染25 d,gga-miR-7b在B21、B19中均极显著上调表达(P<0.01)。综上所述,SNCA是gga-miR-7b的靶基因。gga-miR-7b和SNCA可能与MD抗性/易感性以及MD肿瘤转化有关。 展开更多

关键词 gga-miR-7b SNCA 靶向关系 表达分析

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