线粒体DNA指纹技术的研究及其应用 被引量：5

1

作者 赵兴波 李宁 吴常信 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第5期94-98,共5页

线粒体DNA指纹是指线粒体DNA控制区内的高变异区碱基突变导致的多态、重复序列数目的变异导致的异质型多态和分子长度多态。线粒体DNA指纹技术具有多态信息广泛、特异性强，对样品质量要求宽松，实验操作简便、快速、经济、安全，结果... 线粒体DNA指纹是指线粒体DNA控制区内的高变异区碱基突变导致的多态、重复序列数目的变异导致的异质型多态和分子长度多态。线粒体DNA指纹技术具有多态信息广泛、特异性强，对样品质量要求宽松，实验操作简便、快速、经济、安全，结果准确、稳定、重复性好、灵敏度高的特点。其在动物亲缘关系鉴定、遗传纯度分析、进化、个体及细胞的标记与识别、重要经济性状的核外基因效应研究等领域具有广阔的研究和应用前景。 展开更多

关键词 线粒体DNA指纹 碱基突变 分子长度多态 异质型多态 核外基因效应 个体识别鉴定

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密码子优化的牛精蛋白基因在大肠杆菌中的表达 被引量：16

2

作者 张雅丽 杨国庆 +1 位作者 郭英 陈永福 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2002年第4期42-46,共5页

以PCR的方法得到牛精蛋白基因组基因 ,去其内含子 ,得到牛精蛋白cDNA ,克隆入原核表达载体 pGEX 2T中 ,组装成表达载体 pGEX 2T PE。利用大肠杆菌偏好的编码精氨酸的密码子CGT将野生型牛精蛋白基因中编码精氨酸的稀有密码子 (AGA或A... 以PCR的方法得到牛精蛋白基因组基因 ,去其内含子 ,得到牛精蛋白cDNA ,克隆入原核表达载体 pGEX 2T中 ,组装成表达载体 pGEX 2T PE。利用大肠杆菌偏好的编码精氨酸的密码子CGT将野生型牛精蛋白基因中编码精氨酸的稀有密码子 (AGA或AGG)替换掉 ,通过基因合成得到密码子优化的牛精蛋白基因 ,将其克隆入原核表达载体pGEX 2T ,组装成表达载体pGEX 2T PS。将这两个表达载体分别转化入大肠杆菌表达菌株BL2 1中 ,经IPTG诱导 ,同样条件下 ,野生型牛精蛋白基因无法得到表达 ,密码子优化的牛精蛋白基因能够得到良好的表达 ,表达产物约占细菌总蛋白的 18%。将表达蛋白纯化 ,进行DNA—蛋白结合实验 ,发现其能与DNA发生非特异性的结合。 展开更多

关键词 密码子优化 牛精蛋白 大肠杆菌 基因表达 编码精氨酸 非特异性结合

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农杆菌介导玉米转基因的影响因素研究 被引量：7

3

作者 白云凤 王国英 +2 位作者 苟明月 赵晋锋 董志刚 《中国生态农业学报》 CAS CSCD 2006年第3期173-175,共3页

研究了农杆菌介导玉米转基因过程中涉及的外植体选择、高渗和农杆菌共培养、选择培养基筛选转化体等因素对愈伤组织生长及转化效率的影响。结果表明,同一基因型玉米自交系中有少数幼穗幼胚诱导出的愈伤组织生长速度快,转化效率高;高渗... 研究了农杆菌介导玉米转基因过程中涉及的外植体选择、高渗和农杆菌共培养、选择培养基筛选转化体等因素对愈伤组织生长及转化效率的影响。结果表明,同一基因型玉米自交系中有少数幼穗幼胚诱导出的愈伤组织生长速度快,转化效率高;高渗和农杆菌共培养以及除草剂筛选抑制愈伤组织的生长,致使部分转基因愈伤不能分化成苗,并提出其解决途径。 展开更多

关键词 玉米转基因 农杆菌介导 除草剂 转化效率

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Bt转基因玉米的获得及其对玉米螟的抗性分析 被引量：14

4

作者 张红伟 张红梅 +3 位作者 郑祖平 陈刚 王国英 谭振波 《西北植物学报》 CAS CSCD 2004年第7期1266-1270,共5页

以玉米幼胚和愈伤组织为受体,利用基因枪法将Bt基因GFMCry1A导入玉米杂交种"京玉7号(501/京24)"的亲本自交系501中,从转基因高世代材料中筛选出高抗玉米螟的转基因株系T123。T123及其与京24配制的杂交种的田间食叶级别均小于2... 以玉米幼胚和愈伤组织为受体,利用基因枪法将Bt基因GFMCry1A导入玉米杂交种"京玉7号(501/京24)"的亲本自交系501中,从转基因高世代材料中筛选出高抗玉米螟的转基因株系T123。T123及其与京24配制的杂交种的田间食叶级别均小于2级,而且也没有观察到玉米螟在茎杆中运动的隧道,表现出高抗玉米螟。 展开更多

关键词 优良自交系 基因枪 GFMCry1A

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小麦黄花叶病毒人工侵染体系的研究 被引量：5

5

作者 尚巧霞 韩成贵 +2 位作者 于嘉林 杨莉莉 刘仪 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2002年第4期54-58,共5页

通过大量的接种实验,分析了影响病毒接种效率的各种因素,经ELISA和RT PCR方法进行检测,确立了较为稳定有效的小麦黄花叶病毒机械传毒体系。采用新鲜病叶或用氯化钙干燥保存的病叶作为接种毒源,在0 2mol·L-1磷酸缓冲液中研磨后,对... 通过大量的接种实验,分析了影响病毒接种效率的各种因素,经ELISA和RT PCR方法进行检测,确立了较为稳定有效的小麦黄花叶病毒机械传毒体系。采用新鲜病叶或用氯化钙干燥保存的病叶作为接种毒源,在0 2mol·L-1磷酸缓冲液中研磨后,对低温下(11～13℃)培养的小麦幼苗(1～2叶龄)进行叶面接种,并将接种后的小麦低温培养可获得较高的接种效率(12 57%～13 43%)。对毒源类型、小麦苗龄和接种部位等其他可能影响接种效率的因素进行了测定。 展开更多

关键词 小麦 黄花叶病毒 人工侵染体系 机械接种 病毒检测

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柿果ACC合成酶基因的克隆与植物表达载体的构建 被引量：6

6

作者 唐霞 马俊莲 +1 位作者 刘月英 王国英 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期172-174,共3页

以柿果组织中分离的总RNA为模板,经RT-PCR扩增到约1.1 kb的富有柿果ACC合成酶(Fuyu-ACS)的 基因片段,将此片段克隆到pGEMR-T easy vector上,经测序分析与Genbank中平核无柿果的DK-ACS1基因核苷酸 序列的同源性为99％。设计了2对带限制... 以柿果组织中分离的总RNA为模板,经RT-PCR扩增到约1.1 kb的富有柿果ACC合成酶(Fuyu-ACS)的 基因片段,将此片段克隆到pGEMR-T easy vector上,经测序分析与Genbank中平核无柿果的DK-ACS1基因核苷酸 序列的同源性为99％。设计了2对带限制性内切酶位点的特异性引物,以测序质粒为模板,PCR扩增到2个ACS- Fuyu片段。2个片段经双酶切消化后,分别以正反2个方向插入到植物表达载体pBI121的35 S启动子和NOS终止 子之间,构建成Fuyu-ACS基因的植物表达载体。 展开更多

关键词 柿果 ACC合成酶 植物表达载体

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利用RAPD标记分析鸵鸟种群的遗传变异 被引量：7

7

作者 周霞 李宁 +1 位作者 张劳 崔庆为 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期420-422,共3页

为探讨分子遗传标记在鸵鸟 (Struthiocamelus)育种中的应用 ,利用RAPD技术分析了我国养殖的三个主要鸵鸟品种内和品种间的遗传变异。蓝颈鸵鸟、澳洲灰和非洲黑三个品种在品种内和品种间显示出低水平的变异。品种间的遗传距离较好地说明... 为探讨分子遗传标记在鸵鸟 (Struthiocamelus)育种中的应用 ,利用RAPD技术分析了我国养殖的三个主要鸵鸟品种内和品种间的遗传变异。蓝颈鸵鸟、澳洲灰和非洲黑三个品种在品种内和品种间显示出低水平的变异。品种间的遗传距离较好地说明了三个品种的育种改良过程 ,同时预示出用澳洲灰与其他品种鸵鸟进行杂交育种的可行性。选择的 2 0条在鸡中能稳定扩增的RAPD引物其 75 %能在鸵鸟基因组中扩增出产物 ,显示出两种禽类DNA具有同源性 ,为今后利用鸡的微卫星引物对鸵鸟进行基因组扫描 (genomescan)分析奠定基础。 展开更多

关键词 鸵鸟 遗传变异 RAPD标记 品种

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敲除猪α1,3-半乳糖基转移酶基因并敲入HLA-G1基因的打靶载体构建 被引量：2

8

作者 周健 林爱星 陈永福 《中国生物医学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第4期498-502,共5页

本实验室已克隆到猪α1,3半乳糖基转移酶基因(α1,3GT,第九外显子不全)。其中pMD3arm载体上有5.0kb的片段,该片段包括了小部分第8外显子,完整的第8内含子和一部分第9外显子。本实验中利用LAPCR的方法,从猪的基因组中获得约2.0kb的猪α1,... 本实验室已克隆到猪α1,3半乳糖基转移酶基因(α1,3GT,第九外显子不全)。其中pMD3arm载体上有5.0kb的片段,该片段包括了小部分第8外显子,完整的第8内含子和一部分第9外显子。本实验中利用LAPCR的方法,从猪的基因组中获得约2.0kb的猪α1,3GT的第9外显子序列的扩增产物,将片段克隆于pGEMTeasy载体。将5.0kb和2.0kb片段分别作为打靶载体的5′,3′同源臂,以neo为正选择标记基因,以GFP为负选择标记基因,构建敲除猪α1,3半乳糖基转移酶基因并同时能表达人白细胞抗原HLAG1基因的的打靶载体pZJ。经酶切图谱和测序结果的鉴定成功地构建出敲除猪α1,3半乳糖基转移酶基因并同时能表达人白细胞抗原HLAG1基因的正负双向选择的打靶载体,为异种器官移植提供了很好的探索。 展开更多

关键词 α1 3-半乳糖基转移酶基因 基因打靶 人白细胞抗原HLA-G1

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功能基因组学研究进展 被引量：2

9

作者 苗向阳 刘海涛 《中国畜牧兽医》 CAS 2004年第6期29-32,共4页

基因组研究计划包括以全基因组测序为目标的结构基因组学和以基因功能鉴定为目标的功能基因组学 2方面的内容。作者对功能基因组的主要研究方法 :微阵列或 DNA芯片、表达序列标签法、基因表达系列分析法、蛋白质组学分析法以及反向遗传... 基因组研究计划包括以全基因组测序为目标的结构基因组学和以基因功能鉴定为目标的功能基因组学 2方面的内容。作者对功能基因组的主要研究方法 :微阵列或 DNA芯片、表达序列标签法、基因表达系列分析法、蛋白质组学分析法以及反向遗传学技术等进行了简要介绍 。 展开更多

关键词 功能基因组学 SAGE EST CDNA微阵列 DNA芯片 蛋白质组学

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离子强度对于牛精蛋白在大肠杆菌中的表达的影响

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作者 张雅丽 任立明 +3 位作者 郭英 陈立栋 杨国庆 陈永福 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第8期39-44,共6页

通过基因合成将大肠杆菌偏好的精氨酸密码子CGT取代野生型牛精蛋白基因中的稀有精氨酸密码子AGA和AGG ,得到密码子优化的牛精蛋白基因 ,并将其克隆入原核表达载体 pGEX 2T中 ,组装成表达载体 pGEX 2T PS。将这个表达载体转化入大肠杆菌... 通过基因合成将大肠杆菌偏好的精氨酸密码子CGT取代野生型牛精蛋白基因中的稀有精氨酸密码子AGA和AGG ,得到密码子优化的牛精蛋白基因 ,并将其克隆入原核表达载体 pGEX 2T中 ,组装成表达载体 pGEX 2T PS。将这个表达载体转化入大肠杆菌表达菌株BL2 1中 ,经IPTG诱导 ,可得到一 33kD融合蛋白表达带 ,首次成功地将牛精蛋白在大肠杆菌中进行了表达 ,但其表达量很低 ,约为总菌体蛋白的 13%。增加表达菌株培养液的离子强度 ,可将蛋白表达含量提高到 2 8% ,且蛋白表达量与离子强度呈正相关。纯化后的牛精蛋白可在体外条件下与DNA发生结合。 展开更多

关键词 离子强度 牛精蛋白 大肠杆菌 表达 精氨酸密码子 纯化

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识别序列为非回纹对称结构限制核酸酶的正确切割位点

11

作者 颜炳学 李宁 吴常信 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期420-422,共3页

限制性内切核酸酶的切割识别序列分为回纹对称和非回纹对称结构两类,由于DNA是互补双链,所以对于识别序列为回纹对称结构的限制酶,其识别序列在DNA的两条链上是一致的,可以写为一个,但对于识别序列为非回纹对称结构的限制酶来说,其识别... 限制性内切核酸酶的切割识别序列分为回纹对称和非回纹对称结构两类,由于DNA是互补双链,所以对于识别序列为回纹对称结构的限制酶,其识别序列在DNA的两条链上是一致的,可以写为一个,但对于识别序列为非回纹对称结构的限制酶来说,其识别序列应为两个,而一些工具书、参考书中仅写为一个。本文通过一个酶切实验证明其识别序列为两个。同时希望通过本文,敦促一些工具书、参考书更正其错误。 展开更多

关键词 识别序列 非回纹对称结构 切割位点 限制性内切酶 AciI

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转基因鸡的研究与应用 被引量：1

12

作者 李震 陈永福 《农牧产品开发》 1996年第8期4-6,共3页

转基因鸡的研究与应用李震，陈永福（中国农业大学生物技术国家重点实验室）８０年代生产转基因鸡的技术进步十分明显，但距离生产实践应用还存在一定距离。因为家禽的生殖生理的特点，不易对早期发育阶段的鸡胚进行精细操作。所以不少... 转基因鸡的研究与应用李震，陈永福（中国农业大学生物技术国家重点实验室）８０年代生产转基因鸡的技术进步十分明显，但距离生产实践应用还存在一定距离。因为家禽的生殖生理的特点，不易对早期发育阶段的鸡胚进行精细操作。所以不少人把注意力放在孵化中的鸡蛋上面。鸡... 展开更多

关键词 鸡 转基因 育种 生物工艺学

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转基因抗病毒病四倍体西瓜的培育 被引量：9

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作者 黄学森 牛胜鸟 +11 位作者 王锡民 于嘉林 赵福兴 王生有 翟光明 蔡晓雨 师范生 曹永刚 许艳 郑芳 王小红 金霞 《中国瓜菜》 CAS 2007年第6期1-4,共4页

利用西瓜花叶病毒2号(WMV-2)外壳蛋白(CP)基因、小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)复制酶(NIb)基因和黄瓜花叶病毒(CMV)复制酶基因构建三价基因的植物表达载体,通过农杆菌介导转化四倍体西瓜植株,经分子检测证明目的基因成功地导入西瓜植株,并... 利用西瓜花叶病毒2号(WMV-2)外壳蛋白(CP)基因、小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)复制酶(NIb)基因和黄瓜花叶病毒(CMV)复制酶基因构建三价基因的植物表达载体,通过农杆菌介导转化四倍体西瓜植株,经分子检测证明目的基因成功地导入西瓜植株,并在后代中稳定遗传。经温室及大田接种鉴定,T3代转基因西瓜抗病毒性达中抗水平,为抗病毒无籽西瓜新品种的培育提供了可能性。 展开更多

关键词 四倍体西瓜 病毒病 转基因 抗病性

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西瓜转基因抗病毒病新材料BH-1 被引量：10

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作者 黄学森 牛胜鸟 +13 位作者 王锡民 于嘉林 赵福兴 王生有 翟光明 师范生 蔡晓雨 刘彦军 曹永刚 李凯莉 许艳 郑芳 王小红 王桂莲 《中国西瓜甜瓜》 2004年第1期5-7,共3页

西瓜新材料BH-1,是导入了西瓜花叶病毒(WMV)外壳蛋白基因、小西葫芦黄化花叶病毒(ZYMV)复制酶基因、黄瓜花叶病毒(CMV)复制酶基因的转基因新材料。经温室及大田抗病毒病鉴定表明其抗性达中抗以上水平,是我国第1个通过转基因获得的抗病... 西瓜新材料BH-1,是导入了西瓜花叶病毒(WMV)外壳蛋白基因、小西葫芦黄化花叶病毒(ZYMV)复制酶基因、黄瓜花叶病毒(CMV)复制酶基因的转基因新材料。经温室及大田抗病毒病鉴定表明其抗性达中抗以上水平,是我国第1个通过转基因获得的抗病毒病西瓜新材料。 展开更多

关键词 西瓜 转基因 抗病毒病 西瓜花叶病毒 外壳蛋白基因 小西葫芦黄化花叶病毒 复制酶基因 黄瓜花叶病毒 抗性 BH—l

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