一个大鼠心肌缺血-再灌诱导表达上调的新基因Mip1的克隆和特性分析 被引量：15

1

作者 袁灿 张华莉 +2 位作者 刘瑛 王秋鹏 肖献忠 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第3期231-236,共6页

采用生物信息学方法和 5′cDNA末端快速扩增法 (RACE)技术相结合 ,克隆了一个大鼠心肌缺血 再灌诱导表达上调的新基因Mip1,并经RT PCR测序及多组织膜RNA印迹证实 .生物信息学分析显示 ,MIP 1定位于大鼠染色体 1q12区 ,含 5个外显子和 ... 采用生物信息学方法和 5′cDNA末端快速扩增法 (RACE)技术相结合 ,克隆了一个大鼠心肌缺血 再灌诱导表达上调的新基因Mip1,并经RT PCR测序及多组织膜RNA印迹证实 .生物信息学分析显示 ,MIP 1定位于大鼠染色体 1q12区 ,含 5个外显子和 4个内含子 ,开放阅读框 (ORF)为 182 7bp ,编码 6 0 8个氨基酸 ,其编码蛋白N端含KRAB结构域 ,C端含 14个连续的C2H2型锌指蛋白结构域 ,氨基酸第 2 77位至 2 93位为双向的核定位信号 ,多组织膜RNA印迹显示该基因在脑组织表达最高 ,其次是心脏 ,在其他组织表达较低或无表达 .进一步深入研究该基因的功能具有重要生物学意义 . 展开更多

关键词 大鼠 心肌缺血-再灌 基因 生物信息学 cDNA末端快速扩增法 克隆 脑组织 表达 心肌细胞

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大鼠心肌缺血预适应诱导表达上调基因的筛选和鉴定 被引量：8

2

作者 袁灿 吕青兰 +5 位作者 陈广文 刘瑛 王尧玲 刘海军 邹江 肖献忠 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第3期390-394,共5页

采用反复短时间结扎及松解左冠状动脉前降支构建大鼠心肌缺血预适应动物模型 ,运用抑制消减杂交技术建立大鼠心肌缺血预适应诱导表达上调基因的消减cDNA文库 ,通过反向RNA点杂交对部分文库基因进行差异表达初筛 ,选取表达差异最明显的 8... 采用反复短时间结扎及松解左冠状动脉前降支构建大鼠心肌缺血预适应动物模型 ,运用抑制消减杂交技术建立大鼠心肌缺血预适应诱导表达上调基因的消减cDNA文库 ,通过反向RNA点杂交对部分文库基因进行差异表达初筛 ,选取表达差异最明显的 85个基因进行测序 ,获得了 3 1个核编码基因和 18个新基因 (EST) ,核编码基因中有相当一部分与细胞保护或信号转导有关 ,新基因已被GenBank收录 .从已测序基因中任选 5个进行RT PCR检测 ,并任选 2个进行RNA印迹检测 ,均证实在缺血预适应时表达增高 . 展开更多

关键词 大鼠 心肌缺血预适应 诱导表达 上调基因 筛选 鉴定 抑制消减杂交

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丙型肝炎病毒NS3蛋白促进人源肝细胞的增殖及其相关机制研究 被引量：6

3

作者 李波 冯德云 +5 位作者 程瑞雪 孙树艳 何琼琼 胡忠良 郑晖 文继舫 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第10期991-997,共7页

丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白与肝癌细胞(HCC)的发生密切相关,但其机制尚不清楚.既往体外研究极少采用HCV的自然宿主细胞——人肝细胞作为研究体系,故所获研究结果有待进一步探讨和证实.构建了表达HCVNS3蛋白的真核质粒,通过稳定转染人源... 丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白与肝癌细胞(HCC)的发生密切相关,但其机制尚不清楚.既往体外研究极少采用HCV的自然宿主细胞——人肝细胞作为研究体系,故所获研究结果有待进一步探讨和证实.构建了表达HCVNS3蛋白的真核质粒,通过稳定转染人源永生化肝细胞系QSG7701,建立了稳定表达HCVNS3蛋白的人源永生化肝细胞系QSG7701/NS3,以此为实验平台,检测了细胞增殖的变化,丝裂原蛋白激酶(MAPK)通路激酶磷酸化水平的改变及转录因子AP-1、NF-κB和STAT3的活性变化.结果表明:HCVNS3蛋白可促进人源永生化肝细胞QSG7701的增殖,HCVNS3蛋白激活ERKs/AP-1可能是其促进细胞增殖的重要机制,并通过上调转录因子NF-κB和STAT3的活性,诱导宿主细胞急性炎症损伤. 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒NS3蛋白 肝细胞 丝裂原蛋白激酶(MAPK) 增殖

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氧化低密度脂蛋白诱导主动脉平滑肌细胞胆固醇酯聚集和凋亡(英文) 被引量：8

4

作者 袁中华 杨永宗 杨小毅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第2期217-222,共6页

细胞内胆固醇代谢的失衡和细胞凋亡都与动脉粥样硬化的发生有关 .为了研究两者之间的关系 ,我们把猪的主动脉平滑肌细胞与 15mg/L氧化低密度脂蛋白共同孵育 72h ,发现细胞内胆固醇酯与总胆固醇的比值由 2 6 2 %增加到 6 4 1% ,并且细... 细胞内胆固醇代谢的失衡和细胞凋亡都与动脉粥样硬化的发生有关 .为了研究两者之间的关系 ,我们把猪的主动脉平滑肌细胞与 15mg/L氧化低密度脂蛋白共同孵育 72h ,发现细胞内胆固醇酯与总胆固醇的比值由 2 6 2 %增加到 6 4 1% ,并且细胞内胆固醇酯的积聚有剂量依赖关系 ,表明细胞已经转化为平滑肌源性的泡沫细胞 .另外 ,使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜和流式细胞仪分别发现 ,与氧化低密度脂蛋白共孵育的细胞有典型的凋亡形态改变 .从实验可以推测 ,由氧化低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞凋亡 ,除了低密度脂蛋白氧化的因素外 ,也可能与细胞内胆固醇酯与总胆固醇的比值升高有关 . 展开更多

关键词 主动脉 氧化低密度脂蛋白 胆固醇酯 平滑肌细胞凋亡 动脉粥样硬化

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18例直肠间质瘤的诊治分析 被引量：3

5

作者 刘合利 廖国庆 +2 位作者 晏仲舒 张艳仙 尹红玲 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期335-337,341,共4页

目的:直肠间质瘤(Gastrointestinal stromal tumour,GIST)是相对少见的疾病,缺少统一的治疗规范。本研究探讨直肠间质瘤的临床特点、诊断及治疗方法。方法:对中南大学湘雅医院2002年1月～2009年4月间收治的18例直肠GIST的临床资料、治... 目的:直肠间质瘤(Gastrointestinal stromal tumour,GIST)是相对少见的疾病,缺少统一的治疗规范。本研究探讨直肠间质瘤的临床特点、诊断及治疗方法。方法:对中南大学湘雅医院2002年1月～2009年4月间收治的18例直肠GIST的临床资料、治疗方法及结果进行回顾性分析。结果:直肠GIST的临床表现无特异性,多表现为血便或大便次数增多。CT或MRI显示肿块边界清楚,瘤内有出血坏死及无淋巴结肿大。18例标本免疫组化检测CD117和CD34阳性率均100%。低危险性和极低危险性共8例,占44.4%。全组均经手术治疗,行局部切除12例,直肠前切除术(Dixon)3例,腹会阴联合切除术(Miles)3例。术前以伊马替尼新辅助化疗3例,均达部分缓解(partial response,PR),然后均行局部切除。随访1～84个月,5例患者复发转移,其中3例行伊马替尼治疗,病情稳定。另外2例未接受伊马替尼治疗,死亡1例,另1例反复局部切除后行Miles手术。局部切除组与Miles组的无复发生存时间分别为(75.0±8.4)个月和(26.0±11.1)个月(P=0.023)。结论:直肠GIST的治疗方法应有别于直肠癌,需要制定个体化的外科治疗方案。对大部分低危险性的患者可通过各种手术路径行局部切除而达到满意效果。伊马替尼新辅助化疗的应用,可使部分直肠GIST患者获得保肛机会。 展开更多

关键词 直肠间质瘤 诊断 外科手术 伊马替尼

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鼻咽癌变过程中基因表达的cDNA阵列研究 被引量：5

6

作者 唐发清 李建玲 +3 位作者 荆照政 蒋海鹰 段朝军 邓锡云 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第5期397-401,共5页

目的 :比较研究鼻咽癌变过程中不同阶段鼻咽上皮组织基因表达谱的差异 ,观察鼻咽癌发生中多个基因的作用 ,寻找与鼻咽癌变相关的基因。方法 :用二亚硝基哌嗪 (N ,N’Dinitrosopiperazine ,DNP)诱导大鼠鼻咽癌 ,获取癌变过程中单纯增生... 目的 :比较研究鼻咽癌变过程中不同阶段鼻咽上皮组织基因表达谱的差异 ,观察鼻咽癌发生中多个基因的作用 ,寻找与鼻咽癌变相关的基因。方法 :用二亚硝基哌嗪 (N ,N’Dinitrosopiperazine ,DNP)诱导大鼠鼻咽癌 ,获取癌变过程中单纯增生、异型增生和癌组织 ,提取总RNA后逆转录标记成cDNA探针 ,与 5 88个基因的AtlasTM RatcDNAExpressionArray杂交 ,灰度扫描杂交信号及统计分析差异。结果 :在鼻咽癌组织中 ,PDGFB ,M6 P IGFR2 ,ErbB3EGF等瘤基因抑瘤基因、CCNE ,CCND3等细胞周期调节基因以及NF κB ,JNK转录因子和细胞信号转导等基因表达升高。鼻咽异型增生组织表达升高的基因较癌组织少 ,有prothymosin alpha,Cu ZnSOD1 ,MAPK1 等基因表达升高 ,但较鼻咽单纯性增生组织高表达基因多 ;鼻咽上皮组织单纯性增生仅有个别基因表达升高 ,大部分基因表达与正常鼻咽组织基因表达无明显差异。结论 :多个基因的表达变化在鼻咽癌变过程中起作用 。 展开更多

关键词 癌变过程 鼻咽癌 基因表达 CDNA阵列 研究

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心肌组织特异性高表达核仁素转基因小鼠的构建与鉴定 被引量：3

7

作者 刘艳娟 周斌 +4 位作者 蒋碧梅 童中艺 孙丽 李媛彬 肖献忠 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1228-1232,共5页

目的:构建并鉴定心肌组织特异性高表达核仁素(Ncl)的转基因小鼠,为从整体水平上研究核仁素对心肌功能的影响及其发挥心肌保护作用的机制提供动物模型。方法:采用基因重组法将小鼠核仁素基因的全长cDNA插入含心肌细胞特异性启动子的Alpha... 目的:构建并鉴定心肌组织特异性高表达核仁素(Ncl)的转基因小鼠,为从整体水平上研究核仁素对心肌功能的影响及其发挥心肌保护作用的机制提供动物模型。方法:采用基因重组法将小鼠核仁素基因的全长cDNA插入含心肌细胞特异性启动子的Alpha-MyHC clone 26载体,构建Alpha-MyHC clone 26-Ncl重组载体,通过双酶切及基因测序鉴定其正确性;采用PCR鉴定阳性小鼠并用Western blotting法观察转基因小鼠中核仁素的表达情况,采用组织切片及HE染色法观察转基因小鼠心肌组织形态;测量心脏重量指数和左室压最大上升速率,观察核仁素在心肌组织高表达后对小鼠心脏形态功能是否有影响。结果:PCR法观察显示获得4只阳性小鼠(51、52、56和86,其中52和86系繁殖良好),Western blotting结果表明转基因小鼠的核仁素表达量明显高于野生鼠,HE染色等结果表明核仁素对心肌形态学、心脏/体重比值及心功能无明显影响。结论:成功制备了心肌组织特异性高表达核仁素的转基因小鼠,与野生型小鼠相比,转基因小鼠心肌形态及心功能无明显差异。 展开更多

关键词 核仁素 转基因 心肌 小鼠

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HSF1抑制热应激所致RAW264.7巨噬细胞凋亡 被引量：2

8

作者 鄂顺梅 肖卫民 +4 位作者 王慷慨 王秋鹏 刘梅冬 刘可 肖献忠 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期162-166,共5页

目的:探讨热休克因子1(heat shock factor 1,HSF1)对热应激所致Raw2 6 4.7巨噬细胞凋亡的影响。方法:采用热应激(4 2.5℃±0.5℃)处理稳定表达小鼠HSF1基因的Raw2 6 4.7巨噬细胞1h,3 7℃分别恢复6,9,1 2,2 4 h,采用流式细胞术,hoech... 目的:探讨热休克因子1(heat shock factor 1,HSF1)对热应激所致Raw2 6 4.7巨噬细胞凋亡的影响。方法:采用热应激(4 2.5℃±0.5℃)处理稳定表达小鼠HSF1基因的Raw2 6 4.7巨噬细胞1h,3 7℃分别恢复6,9,1 2,2 4 h,采用流式细胞术,hoechst3 3 2 5 8染色和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果:流式细胞术结果显示,热应激后对照组(转空载体)细胞凋亡核百分率较热应激前明显升高,9 h达峰值(约为6 0%),此时荧光染色可见3 0%的细胞出现核固缩,凋亡小体等典型的凋亡形态学改变;并于热应激后6,9,1 2 h均能检测到清晰的DNA梯状条带。与转空载体对照组相比,HSF1过表达能显著降低热应激所致凋亡及明显抑制DNA的断裂。结论:HSF1可以抑制热应激所致的Raw2 6 4.7巨噬细胞凋亡。 展开更多

关键词 热休克因子1 凋亡 热应激 RAW264.7巨噬细胞

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类风湿关节炎患者血清热休克蛋白70水平的测定及意义 被引量：5

9

作者 罗心静 莫选荣 肖献忠 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2009年第9期1417-1419,共3页

目的:观察类风湿关节炎(RA)患者血清中热休克蛋白70(HSP70)的水平变化,并对其与疾病活动性相关指标和细胞因子之间的相关性进行分析,以探讨细胞外HSP70在RA发病中的作用及意义。方法:应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测RA患者、骨关节炎(OA... 目的:观察类风湿关节炎(RA)患者血清中热休克蛋白70(HSP70)的水平变化,并对其与疾病活动性相关指标和细胞因子之间的相关性进行分析,以探讨细胞外HSP70在RA发病中的作用及意义。方法:应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测RA患者、骨关节炎(OA)患者和健康人血清中HSP70的水平,并与RA疾病活动性相关指标和血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6),白介素-10(IL-10)含量进行相关性分析。结果:RA患者血清中HSP70含量(2.84±1.16)ng/mL明显高于OA患者(0.74±0.34)ng/mL和正常对照组(0.84±0.42)ng/mL(P<0.05),并且活动期RA患者血清中HSP70含量(3.31±1.09)ng/mL明显高于非活动期RA患者(1.89±0.06)ng/mL(P<0.05);RA患者血清中HSP70水平与TNF-α、IL-6水平呈正相关;RA患者血清HSP70的水平与血沉、CRP、类风湿因子呈正相关。结论:细胞外HSP70可能参与RA的炎症过程,血清中HSP70水平在评估RA病情活动中具有潜在价值。 展开更多

关键词 关节炎 类风湿热休克蛋白70 细胞因子

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热休克因子1对内毒素所致G-CSF基因表达的影响 被引量：4

10

作者 王秋鹏 张华莉 +6 位作者 袁灿 刘瑛 肖卫民 王慷慨 刘双 于凤秀 肖献忠 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期390-396,共7页

为探讨热休克因子1(heatshockfactor 1,HSF1)活化和过表达对内毒素(endotoxin ,ET)所致粒细胞集落刺激因子(granulocyte colonystimulatingfactor,G CSF)基因表达的影响,采用大肠杆菌内毒素即脂多糖(lipopolysaccharide ,LPS)处理RAW2 6... 为探讨热休克因子1(heatshockfactor 1,HSF1)活化和过表达对内毒素(endotoxin ,ET)所致粒细胞集落刺激因子(granulocyte colonystimulatingfactor,G CSF)基因表达的影响,采用大肠杆菌内毒素即脂多糖(lipopolysaccharide ,LPS)处理RAW2 6 4 7巨噬细胞,并通过热休克预处理诱导HSF1活化,采用Western印迹检测HSP70的表达观察HSF1的活化情况,RT PCR检测热休克反应(heatshockresponse ,HSR)对G CSFmRNA表达的影响;构建HSF1的pcDNA3 1真核表达质粒,采用脂质体转染法建立HSF1过表达RAW 2 6 4 7巨噬细胞株,用免疫细胞化学和Western印迹观察HSF1的表达,RT- PCR及Northern印迹进一步研究HSF1对G CSF基因表达的可能影响.发现LPS诱导巨噬细胞中G- CSFmRNA表达增多,并随时间的延长,表达量逐渐增加;与单纯内毒素处理组相比,热休克预处理后,LPS诱导的巨噬细胞G- CSFmRNA的表达明显被抑制;建立的稳定表达HSF1的RAW 2 6 4 7细胞株中有HSF1蛋白的核移位;HSF1过表达可明显抑制LPS诱导的RAW2 6 4 7巨噬细胞G -CSFmRNA的表达.上述结果表明热休克预处理能抑制LPS诱导的巨噬细胞G- CSFmRNA的表达;HSF1过表达可抑制内毒素诱导的巨噬细胞G CSFmRNA的表达. 展开更多

关键词 热休克因子1 RAW264.7巨噬细胞 内毒素 粒细胞集落刺激因子 热休克反应

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老年人巨细胞动脉炎的炎性细胞浸润类型及其分布 被引量：2

11

作者 胡治平 杨期东 +5 位作者 李景和 郑晖 曹立 卢伟 宋兴旺 周为军 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 2003年第4期255-257,共3页

目的　研究老年人巨细胞动脉炎的炎性细胞浸润类型及其分布特征。方法　用免疫组织化学技术检测 2 0例巨细胞动脉炎患者颞动脉活检标本T淋巴细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞、多核巨细胞和粒细胞表达的情况。以常规HE、美蓝染色及铅铀双重染... 目的　研究老年人巨细胞动脉炎的炎性细胞浸润类型及其分布特征。方法　用免疫组织化学技术检测 2 0例巨细胞动脉炎患者颞动脉活检标本T淋巴细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞、多核巨细胞和粒细胞表达的情况。以常规HE、美蓝染色及铅铀双重染色 ,在光镜和电镜下观察病理变化 ,比较病理变化与炎性细胞类型及分布的关系。结果　2 0例颞动脉活检标本中 ,浸润的炎性细胞由T淋巴细胞、巨噬细胞和粒细胞构成 ,构成比分别为 40 .5 %、33.5 %和 2 6 .0 %,未见B淋巴细胞和多核巨细胞。炎性细胞分布于颞动脉壁及其周围组织 ,以外膜最明显、内膜次之、中膜居末 ;有明显跳跃现象。炎性细胞分布与病理变化为非比例关系 ,病理损害以内膜明显。结论　老年人巨细胞动脉炎其颞动脉活检标本中可能有较多的粒细胞浸润 ,无多核巨细胞。 展开更多

关键词 巨细胞 动脉炎 免疫组织化学

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P21在单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化中的表达及依那普利对其表达的调节 被引量：1

12

作者 肖云 陶立坚 +7 位作者 Damu Tang 金鸥 周建华 沈明 胡静 刘春燕 孙剑 宁旺斌 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期663-666,670,共5页

目的:动态观察P21在单侧输尿管梗阻肾间质纤维化大鼠模型中的表达,以及依那普利对其表达的调节。方法:将SD大鼠随机分为假手术组(SOR组)、单侧输尿管结扎组(UUO组)和依那普利治疗组(EnT组)。用免疫组织化学的方法检测3组大鼠术后7,14和... 目的:动态观察P21在单侧输尿管梗阻肾间质纤维化大鼠模型中的表达,以及依那普利对其表达的调节。方法:将SD大鼠随机分为假手术组(SOR组)、单侧输尿管结扎组(UUO组)和依那普利治疗组(EnT组)。用免疫组织化学的方法检测3组大鼠术后7,14和21d肾小管上皮细胞P21的表达;用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法检测肾脏p21mRNA的变化;并观察依那普利对肾脏P21表达的调节。结果:在UUO大鼠模型早期,肾小管上皮细胞P21以及肾脏p21mRNA的表达即有明显增高,随着梗阻时间的延长,P21的表达逐渐增强;依那普利能明显抑制P21的表达。结论:P21在UUO大鼠肾小管上皮细胞高表达,依那普利可抑制其表达。P21可能参与肾小管间质纤维化的发病过程。 展开更多

关键词 P21 肾脏 纤维化 依那普利

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高剂量表阿霉素联合治疗非小细胞肺癌的临床疗效 被引量：1

13

作者 肖奇明 张卫东 +2 位作者 周建华 海镇环 陈琼 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第4期397-398,共2页

关键词 表阿霉素 非小细胞肺癌 药物联合治疗

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芯片家族新成员——组织芯片 被引量：1

14

作者 邓征浩 周建华 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期102-104,共3页

组织芯片作为芯片家族新成员 ,结合了分子生物学和形态学的优势 ,具有经济、简便快捷、信息量大的特点 ,可同时从DNA ,mRNA和蛋白质 3个水平检测基因表达 ,广泛运用于生物科学研究 。

关键词 组织芯片 肿瘤 组织切片技术 分子生物学 基因表达

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七氟醚预处理对缺血/再灌注心肌的保护作用 被引量：7

15

作者 徐军美 常业恬 +1 位作者 胡冬煦 肖卫民 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第1期79-82,共4页

为观察七氟醚预处理对左冠脉前降支阻断 3h后再灌注 3h的在体兔心的保护作用 ,48只新西兰白兔随机分成对照组、缺血预处理组、七氟醚预处理组、缺血预处理 +优降糖 (三磷酸腺苷敏感的钾离子通道阻断剂 )组、七氟醚 +优降糖组及单纯优降... 为观察七氟醚预处理对左冠脉前降支阻断 3h后再灌注 3h的在体兔心的保护作用 ,48只新西兰白兔随机分成对照组、缺血预处理组、七氟醚预处理组、缺血预处理 +优降糖 (三磷酸腺苷敏感的钾离子通道阻断剂 )组、七氟醚 +优降糖组及单纯优降糖组。结果显示缺血预处理组和七氟醚预处理组心肌梗死面积与缺血面积的比率比对照组显著减少 (P <0 .0 5 ) ,凡加用优降糖的各组与对照组相比差异无显著性 (P <0 .0 5 )。各组血流动力学指标在各时间点差异无显著性。提示七氟醚预处理对缺血 3h后再灌注 3h的在体兔心具有保护作用 ,其机制与激活三磷酸腺苷敏感的钾离子通道有关。 展开更多

关键词 七氟醚 缺血预处理 再灌注损伤 心肌缺血

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