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CRISPR-Cas9系统的发现 被引量:11
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作者 潘少伟 张华莉 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1392-1402,共11页
2020年诺贝尔化学奖授予法国科学家艾曼纽尔·卡彭蒂耶(Emmanuelle Charpentier)和美国科学家詹妮弗·杜德纳(Jennifer A.Doudna),以表彰她们发现基因技术中最大的利器之一CRISPR-Cas9基因剪刀。CRISPR-Cas系统是一种细菌针对... 2020年诺贝尔化学奖授予法国科学家艾曼纽尔·卡彭蒂耶(Emmanuelle Charpentier)和美国科学家詹妮弗·杜德纳(Jennifer A.Doudna),以表彰她们发现基因技术中最大的利器之一CRISPR-Cas9基因剪刀。CRISPR-Cas系统是一种细菌针对外源性遗传物质的防御免疫系统,该系统可以特异性识别并剪切DNA,因而被广泛应用于动物、植物和微生物DNA的精准编辑上。CRISPR-Cas9基因剪刀的发现使得原本繁琐复杂的细胞基因编辑工作能在几周甚至更短的时间内完成,推动了各个领域基因编辑技术的发展,并给生命科学领域带来革命性影响。同时CRISPR基因编辑技术因靶点数目多、操作较为简便,成为肿瘤的新型疗法之一,也使得基因治疗有可能成为现实。虽然该技术目前依旧需要解决脱靶、启动子低效等问题,但随着生命科学与基础医学的不断发展,相信CRISPR-Cas系统将会在更多的领域展现其独有的优势。 展开更多
关键词 CRISPR-Cas9系统 sgRNA PAM序列 基因编辑
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MiR-412-3p表达水平与鼻咽癌发病的关系及其对鼻咽癌细胞株CNE1顺铂敏感性的影响 被引量:3
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作者 刘惺 喻泊遥 +3 位作者 王慷慨 马恒 梁琳 周艳宏 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期745-751,共7页
目的:探讨miR-412-3p及乳运铁蛋白(lactotransferrin,LTF)在鼻咽癌组织及癌旁组织中的表达差异并观察干预miR-412-3p能否改善鼻咽癌细胞株CNE1的顺铂敏感性。方法:分别采用实时反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法检测收集的20... 目的:探讨miR-412-3p及乳运铁蛋白(lactotransferrin,LTF)在鼻咽癌组织及癌旁组织中的表达差异并观察干预miR-412-3p能否改善鼻咽癌细胞株CNE1的顺铂敏感性。方法:分别采用实时反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法检测收集的20例配对的鼻咽癌组织及癌旁组织中miR-412-3p及LTF的表达水平;MTT法及克隆形成实验检测miR-412-3p抑制剂、顺铂处理对CNE1细胞活性及克隆形成能力的影响;蛋白质印迹法检测不同处理对CNE1细胞ERK1/2,STAT3,AKT信号通路的影响。结果:与配对的癌旁组织相比,鼻咽癌组织中miR-412-3p的表达明显升高,伴随LTF表达的显著降低(均P<0.01);在体外培养的CNE1细胞中,不同浓度的miR-412-3p抑制剂可显著抑制miR-412-3p及磷酸化AKT蛋白的表达,同时促进LTF蛋白的表达(P<0.05);预先使用200 nmol/L miR-412-3p抑制剂处理CNE1细胞24 h后,可明显增加20μg/mL顺铂对CNE1细胞活性及克隆形成能力的抑制(P<0.01)。结论:鼻咽癌组织中miR-412-3p的高表达及LTF的低表达可能与鼻咽癌的发病有关;利用miR-412-3p抑制剂降低CNE1细胞中miR-412-3p的水平可增加CNE1细胞对顺铂的敏感性。 展开更多
关键词 鼻咽癌 miR-412-3p 乳运铁蛋白 顺铂 蛋白激酶B
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非小细胞肺癌患者区域淋巴结LUNX基因表达及其临床意义 被引量:8
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作者 谭思创 程章波 +4 位作者 马宇超 谭斯品 殷照初 胡文 喻风雷 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1236-1241,共6页
目的:探讨人类肺组织特异性X蛋白(lung-specific X protein,LUNX)的基因诊断在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)微转移中的临床意义。方法:随机收集43例临床非小细胞肺癌患者作为实验组,同时随机收集15例良性肺部病变患... 目的:探讨人类肺组织特异性X蛋白(lung-specific X protein,LUNX)的基因诊断在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)微转移中的临床意义。方法:随机收集43例临床非小细胞肺癌患者作为实验组,同时随机收集15例良性肺部病变患者作为对照组。通过反转录-聚合酶链式反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测人类LUNX的靶基因的mRNA在实验组和对照组患者淋巴结中的表达,并与患者相对应的临床病理资料进行相关性分析。结果:LUNX mRNA在两组患者的肺组织及肿块中均为阳性表达;实验组43例患者的87枚淋巴结中有33枚(37.93%)有LUNX mRNA表达,对照组15例肺部良性病变患者的26枚淋巴结中有2枚(7.69%)表达LUNX mRNA,两组比较差异有统计学意义(P(0.05)。LUNX mRNA淋巴结表达阳性与肺癌患者病理类型、细胞分化程度、临床分期有密切关系(r=0.660,0.500,0.460;P=0.011,0.017,0.021);而与患者性别、年龄、吸烟史,以及血清肺癌4项肿瘤标志物(CEA,CA125,NSE和CYFRA211)无明显关系(r=0.230,0.235,0.180,0.354;P=0.739,0.714,0.773,0.125)。结论:与传统的病理切片检查判断NSCLC淋巴结微转移相比,RT-PCR检测肺癌患者淋巴结LUNX mRNA的表达有较高的敏感性。LUNX mRNA的表达是检测肺癌微转移的一个有价值的指标,可为制定治疗方案和评估预后提供重要参考依据。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 微转移 人类肺组织特异性X蛋白 反转录-聚合酶链式反应
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心型脂肪酸结合蛋白对脂多糖所致心肌细胞损伤的保护作用 被引量:5
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作者 李异 王慷慨 +1 位作者 蒋永芳 陈军 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期457-463,共7页
目的:探讨心型脂肪酸结合蛋白(heart-fatt y acid binding protein,H-FABP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)所致心肌细胞损伤的保护作用。方法:以原代培养的新生大鼠心肌细胞为模型,通过基因转染方式改变H-FABP表达水平,采用Western... 目的:探讨心型脂肪酸结合蛋白(heart-fatt y acid binding protein,H-FABP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)所致心肌细胞损伤的保护作用。方法:以原代培养的新生大鼠心肌细胞为模型,通过基因转染方式改变H-FABP表达水平,采用Western印迹、定量PCR检测原代培养中H-FABP的表达。分别检测心肌细胞培养液中TNF-α,IL-1β,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量以及细胞存活率来反映LPS诱导的心肌细胞损伤与炎症反应。结果:LPS处理24 h能增加H-FABP表达。Si RNA降低H-FABP后,显著促进LPS引起的心肌细胞存活率下降、LDH释放以及TNF-α和IL-1β释放。相反,H-FABP过表达能显著抑制LPS引起的心肌细胞损伤与炎症反应。结论:H-FABP对LPS引起的心肌细胞损伤具有保护作用。 展开更多
关键词 心型脂肪酸结合蛋白 脂多糖 心肌细胞 炎症反应
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核仁素在糖尿病性心肌病中的表达 被引量:4
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作者 孙丽 贺欣 +5 位作者 王娟 蒋碧梅 童中艺 刘艳娟 李媛彬 肖献忠 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1056-1060,共5页
目的:探讨核仁素在糖尿病性心肌病中的表达情况。方法:实验分为对照组和II型糖尿病性心肌病模型组(模型组);模型组采用高脂高糖饲料持续喂养(第5,6周于小鼠腹腔注射60 mg/kg链脲佐菌素)构建,第8周末测定小鼠血糖,第20周末测定两组小鼠... 目的:探讨核仁素在糖尿病性心肌病中的表达情况。方法:实验分为对照组和II型糖尿病性心肌病模型组(模型组);模型组采用高脂高糖饲料持续喂养(第5,6周于小鼠腹腔注射60 mg/kg链脲佐菌素)构建,第8周末测定小鼠血糖,第20周末测定两组小鼠空腹血糖值并计算心脏质量与体质量的比值,观察心肌形态学病理改变,采用免疫组织化学法和Western印迹检测心肌核仁素的表达水平。结果:糖尿病模型组小鼠较对照组空腹血糖值明显升高(P<0.05);模型组小鼠心肌细胞肥大、排列紊乱,出现断裂及溶解;免疫组织化学染色及Western印迹显示模型组小鼠心肌核仁素蛋白水平较对照组明显升高(P<0.05)。结论:核仁素可能在糖尿病性心肌病的发生和发展中起着一定的作用。 展开更多
关键词 Ⅱ型糖尿病 心肌病 核仁素 表达
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人抗肌萎缩蛋白Dp71 shRNA载体构建与检测
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作者 谭思创 陈志康 +4 位作者 曹小霞 文俏程 张蔚林 曾庆仁 谭斯品 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期338-343,共6页
目的:构建有效针对人Dystrophin Dp71基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,并验证其干扰效果。方法:设计合成3对针对人Dystrophin Dp71基因的和1对无同源性的siRNA片段,在两端和中间加上酶切位点和Loop环。将合成的DN... 目的:构建有效针对人Dystrophin Dp71基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,并验证其干扰效果。方法:设计合成3对针对人Dystrophin Dp71基因的和1对无同源性的siRNA片段,在两端和中间加上酶切位点和Loop环。将合成的DNA片段插入到干扰载体pRNAT-U6.1/Neo中,经过酶切和测序验证,成功构建人Dp71基因的shRNA和空白对照载体。将各干扰载体和空白载体转染人正常胃黏膜上皮细胞(gastric epithelial cells,GES-1)和人支气管上皮细胞(human bronchial epithelium,HBE),Western印迹检测Dp71 shRNA真核表达载体的干扰效率。结果:酶切和测序验证均表明各Dp71-shRNA载体构建成功。将空载体及各Dp71 shRNA载体分别转染GES-1和HBEC,和空白细胞对照及shRNA空白载体组相比,3组Dp71-shRNA能够明显抑制Dp71蛋白表达,但是3组质粒的抑制效率有一定的差异,以Dp71 shRNA2对Dp71表达的干扰效率最强。结论:成功构建了3个有效针对人Dystrophin Dp71基因的shRNA干扰载体,3组质粒都能有效地抑制Dp71在GES-1和HBEC中的表达,其中以Dp71-shRNA2的抑制效率最高。 展开更多
关键词 DYSTROPHIN Dp71 shRNA载体 干扰效率
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脓毒症相关性脑病患者血清胶质纤维酸性蛋白的表达及其临床意义 被引量:18
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作者 颜姗珊 高敏 +2 位作者 陈欢 靳欣 杨明施 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1137-1142,共6页
目的:观察脓毒症相关性脑病(sepsis-associated encephalopathy,SAE)患者血清胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达水平,并探讨其临床意义。方法:选取中南大学湘雅三医院在2016年10月至2018年8月间收治的确诊... 目的:观察脓毒症相关性脑病(sepsis-associated encephalopathy,SAE)患者血清胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达水平,并探讨其临床意义。方法:选取中南大学湘雅三医院在2016年10月至2018年8月间收治的确诊为脓毒症的患者,采用酶联免疫吸附法检测患者血清GFAP及神经元特异性烯醇化酶(neuronspecific enolase,NSE)和中枢神经特异蛋白S100β水平。同时对患者行ICU患者意识模糊评估法(Confusion Assessment Method for the ICU,CAM-ICU)评分,依据CAM-ICU评分将其分为SAE组和脓毒症未合并脑病(non-SAE)组。比较2组患者的一般临床资料及住ICU时间、28 d病死率和180 d病死率。结果:152例脓毒症患者纳入本研究,其中SAE组58例,non-SAE组94例。SAE组患者的序贯器官衰竭评价(Sequential Organ Failure Assessment,SOFA)得分、28 d病死率和180 d病死率均显著高于non-SAE组(均P<0.001)。SAE患者24 h内血清GFAP,NSE,S100β水平均明显高于non-SAE组(均P<0.001)。当血清GFAP水平为0.67μg/L时,诊断SAE的灵敏度为75.9%,特异度为77.7%;GFAP诊断SAE的ROC曲线下面积(area under the receiver operating characteristic curve,AUROC)为0.803,优于NSE(0.795)和S100β(0.750)。经Pearson分析显示血清GFAP水平与急性生理学与慢性健康状况评价Ⅱ(Acute Physiology and Chronic Health Evaluation Ⅱ,APACHE Ⅱ)评分和SOFA评分呈正相关,与格拉斯哥昏迷评分(Glasgow Coma Scale,GCS)、28 d生存率、180 d生存率呈负相关。结论:SAE患者血清GFAP水平明显升高,与SAE发病率及其病情严重程度和预后有关。 展开更多
关键词 脓毒症 脓毒症相关性脑病 胶质纤维酸性蛋白
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热休克因子1通过上调蛋白质C减轻脓毒症凝血功能障碍保护小鼠急性肺损伤 被引量:4
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作者 王浩 李涛 +5 位作者 肖归 刘梅冬 刘可 张华莉 朱雅茜 肖献忠 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2022年第4期788-797,共10页
目的探讨热休克因子1(HSF1)减轻脓毒症凝血功能障碍,保护小鼠急性肺损伤的机制。方法本研究采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)制备脓毒症小鼠模型,检测凝血相关指标和观察小鼠肺部病理变化,通过酶联免疫吸附实验(ELI... 目的探讨热休克因子1(HSF1)减轻脓毒症凝血功能障碍,保护小鼠急性肺损伤的机制。方法本研究采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)制备脓毒症小鼠模型,检测凝血相关指标和观察小鼠肺部病理变化,通过酶联免疫吸附实验(ELISA)、q RT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)等方法检测蛋白质C表达水平,通过质粒转染抑制或增强HSF1表达从而观察蛋白质C表达水平的变化,并利用生物信息学、凝胶电泳迁移实验(EMSA)和双荧光素酶报告基因实验探讨HSF1调节蛋白质C转录的机制。结果在CLP脓毒症小鼠模型中,HSF^(-/-)组小鼠的凝血活性与HSF1;组相比明显增强,肺损伤明显加重。ELISA、qRT-PCR和Western blot检测发现,HSF;脓毒症小鼠血浆和肺组织中的蛋白质C表达水平显著低于野生型小鼠。体外bEnd.3血管内皮细胞的实验结果显示,HSF1抑制脂多糖(LPS)诱导的蛋白质C表达,HSF1过表达则增强蛋白质C表达。生物信息学数据分析提示,蛋白质C启动子区含有HSF1结合元件(HSE),通过EMSA和双荧光素酶报告基因实验显示HSF1与蛋白质C启动子区域的HSE结合,从而上调蛋白质C转录。结论本研究揭示了HSF1参与小鼠脓毒症急性肺损伤的发生,并通过上调蛋白质C转录,减轻脓毒症凝血功能障碍,从而对小鼠肺组织起到保护作用。 展开更多
关键词 热休克因子1 脓毒症 蛋白质C 凝血 急性肺损伤
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shRNA干扰MIPU1基因对脑星形细胞瘤U251细胞生物学行为的影响
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作者 刘梅冬 王智 +3 位作者 孙慧 蒋碧梅 刘可 肖献忠 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期109-114,共6页
目的:探讨特异性短发夹RNA(shRNA)干扰心肌缺血预适应上调基因1(myocardial ischemia preconditioning upregulated gene 1,MIPU1)对人脑星形细胞瘤U251细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭能力的影响。方法:采用瞬时转染MIPU1 shRNA干扰质粒,... 目的:探讨特异性短发夹RNA(shRNA)干扰心肌缺血预适应上调基因1(myocardial ischemia preconditioning upregulated gene 1,MIPU1)对人脑星形细胞瘤U251细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭能力的影响。方法:采用瞬时转染MIPU1 shRNA干扰质粒,蛋白质印迹检测其干扰效率,MTT法检测各组细胞的增殖情况,Hoechest染色法和caspase-3活性检测细胞凋亡程度,划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力。结果:转染MIPU1shRNA可明显降低MIPU1蛋白的表达(P<0.05);与对照组比较,MIPU1 shRNA组的U251细胞增殖能力下降,凋亡明显增加,细胞迁移及侵袭能力减弱(均P<0.05)。结论:MIPU1 shRNA能有效降低U251细胞中MIPU1蛋白的表达,干扰MIPU1的表达可促进U251细胞凋亡,抑制U251细胞的增殖、迁移及侵袭。 展开更多
关键词 MIPU1基因 SHRNA干扰 U251细胞 生物学行为
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