中国迟发型2型糖尿病患者葡萄糖激酶基因突变研究 被引量：3

1

作者 刘征 邓昊 +6 位作者 唐炜立 夏家辉 唐北沙 戴和平 周智广 邓汉湘 夏昆 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第2期99-101,共3页

目的 :探讨中国迟发型 2型糖尿病患者葡萄糖激酶 ( glucokinase ,GCK)基因的突变情况。方法 :收集了中国汉族 47个迟发型 2型糖尿病 (late onsetType 2diabetes)家系 ,应用多聚酶链反应 单链构像多态性 ( polymerasechainreaction sing... 目的 :探讨中国迟发型 2型糖尿病患者葡萄糖激酶 ( glucokinase ,GCK)基因的突变情况。方法 :收集了中国汉族 47个迟发型 2型糖尿病 (late onsetType 2diabetes)家系 ,应用多聚酶链反应 单链构像多态性 ( polymerasechainreaction singlestrandconformationpolymorphism ,PCR SSCP)的分析方法 ,对先证者GCK基因 12个外显子进行突变检测。结果 :6 ,9号外显子SSCP电泳时 ,出现异常电泳条带。测序证实在 6号内含子 38bp处发生C→T的单个碱基改变 ,变异基因频率为 35 .1%;9号内含子 8bp处发生C→T的单个碱基改变 ,变异基因频率为5 7.5 %。结论 :发现了中国人两个单核苷酸多态位点 :IVS6%D 38C→T ;IVS9%D 8C→T。GCK基因突变不是中国汉族迟发型 2型糖尿病的主要致病原因。 展开更多

关键词 中国 迟发型 2型糖尿病 葡萄糖激酶 基因突变 研究

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变性梯度凝胶电泳在遗传性多发性外生性骨疣基因诊断中的应用 被引量：1

2

作者 何洪波 胡正茂 +5 位作者 李贺君 朱勇 施小六 雷光华 周江南 李康华 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期323-327,共5页

目的:采用检测遗传性多发性外生性骨疣(hereditary multiple exostoses,HME)患者EXT2基因的突变,分析该方法的敏感性及用于HME基因诊断的可行性。方法:收集5个HME家系和3个HME散发患者,利用变性梯度凝胶电泳方法对EXT2基因的所有编码外... 目的:采用检测遗传性多发性外生性骨疣(hereditary multiple exostoses,HME)患者EXT2基因的突变,分析该方法的敏感性及用于HME基因诊断的可行性。方法:收集5个HME家系和3个HME散发患者,利用变性梯度凝胶电泳方法对EXT2基因的所有编码外显子及其旁侧内含子序列进行检测,并对出现异常构象的片段进行DNA测序分析。结果:在两个家系中分别发现了一种A313T的无义突变和一种319insGT的移码突变。结论:在HME患者中发现了2个EXT2基因致病突变,DGGE可作为基因诊断理想的候选方法。 展开更多

关键词 外生性骨疣 EXT2基因 基因诊断 变性梯度凝胶电泳

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一种新的高效快速检测遗传性耳聋的方法(英文) 被引量：1

3

作者 门美超 薛晋杰 +3 位作者 蒋璐 王鸿涵 潘乾 冯永 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1079-1084,共6页

目的:探寻在不同人群中应用快速、准确的检测非综合征性耳聋的方法。方法:将引物延伸及变性高效液相色谱法相结合,检测180例中国人群的6种常见耳聋突变点(GJB2-235delC,GJB2-299delAT,PDS-A2168G,PDS IVS7-2A>G,mtDNA-A1555G,以及mtD... 目的:探寻在不同人群中应用快速、准确的检测非综合征性耳聋的方法。方法:将引物延伸及变性高效液相色谱法相结合,检测180例中国人群的6种常见耳聋突变点(GJB2-235delC,GJB2-299delAT,PDS-A2168G,PDS IVS7-2A>G,mtDNA-A1555G,以及mtDNA-C1494T)。PCR扩增的靶序列,经引物延伸,得到中国人遗传性非综合征性耳聋6个常见突变的特异性延伸片段,用全变性高效液相色谱分析延伸片段混合物,分离图谱可鉴定被检样本的基因型。结果:盲法分析显示180例样品的引物延伸变性高效液相色谱法与直接测序法检测结果完全符合。结论:该法是一种准确、高效的检测非综合征性遗传性耳聋突变的分析方法,并可以探讨将其应用到其他遗传病的检测中。 展开更多

关键词 遗传性耳聋 变性高效液相色谱 基因突变 引物延伸

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肝细胞核因子-1α基因A1a98 Val变异与中国汉族迟发型2型糖尿病的关系 被引量：1

4

作者 邓昊 唐炜立 +6 位作者 刘征 夏家辉 唐北沙 胡正茂 周智广 邓汉湘 夏昆 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第2期93-94,共2页

目的 :探讨肝细胞核因子 1α(HNF 1α)基因外显子 1Ala98Val变异是否与中国汉族迟发型 2型糖尿病相关。方法 :选择中国汉族 15 0例迟发型 2型糖尿病患者及 15 5例正常对照者 ,应用聚合酶链反应———限制性片段长度多态 (PCR SSCP)及直... 目的 :探讨肝细胞核因子 1α(HNF 1α)基因外显子 1Ala98Val变异是否与中国汉族迟发型 2型糖尿病相关。方法 :选择中国汉族 15 0例迟发型 2型糖尿病患者及 15 5例正常对照者 ,应用聚合酶链反应———限制性片段长度多态 (PCR SSCP)及直接测序法检测Ala98Val变异。结果 :受检者均不存在Ala98Val变异。结论 :Ala98Val变异不是引起中国汉族迟发型 2型糖尿病的重要遗传因素。 展开更多

关键词 肝细胞核因子-1α基因 A1a98Val变异 中国 汉族 迟发型 2型糖尿病

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平皿-微滴法玻璃化冷冻保存小鼠胚胎 被引量：6

5

作者 王果 马燕琳 +3 位作者 吕祁峰 郑多 戴和平 夏昆① 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第4期299-301,共3页

目的 :使用平皿 微滴法玻璃化冷冻小鼠 8～ 12细胞胚胎 ,检验该方法对胚胎的冻存效果。方法 :胚胎在EG2 0 中平衡 3min ,EFS4 0 中平衡 1min ,将含有胚胎的小于 0 .5 μl的EFS4 0 微滴吹于 35mm平皿上并立即直接浸入液氮保存。结果 :解... 目的 :使用平皿 微滴法玻璃化冷冻小鼠 8～ 12细胞胚胎 ,检验该方法对胚胎的冻存效果。方法 :胚胎在EG2 0 中平衡 3min ,EFS4 0 中平衡 1min ,将含有胚胎的小于 0 .5 μl的EFS4 0 微滴吹于 35mm平皿上并立即直接浸入液氮保存。结果 :解冻后胚胎回收率达到 98.1% ,透明带无破损 ,冷冻后存活率为 95 .2 %。冻融胚胎体外发育和体内发育能力与对照组胚胎比较差异无显著性 (84 .3%对 90 .1% ,12 .1%对 13.5 % ,P >0 .0 5 )。结论 :小鼠 8～ 12细胞胚胎可以用平皿 微滴法有效地进行玻璃化冻存。 展开更多

关键词 平皿-微滴法 玻璃化 冷冻保存 小鼠 胚胎

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人皮肤成纤维细胞的分离和体外培养 被引量：6

6

作者 陈勇 戴和平 +4 位作者 龙志高 潘乾 郑多 夏昆 夏家辉 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第5期477-478,共2页

关键词 皮肤 成纤维细胞 分离 体外培养 基因治疗

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人皮肤角质形成细胞的分离与原代无血清培养 被引量：5

7

作者 陈勇 戴和平 +5 位作者 龙志高 文娟 潘乾 陈玉祥 夏昆 夏家辉 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第5期481-484,共4页

目的 :建立一种体外人皮肤角质形成细胞分离与原代培养的方法。方法 :采用两步消化法对皮肤进行消化 ,获取角质形成细胞进行体外无血清培养基培养 ,进行细胞形态学观察、免疫组织化学、透射电镜鉴定及生长曲线的绘制与分析。结果 :该方... 目的 :建立一种体外人皮肤角质形成细胞分离与原代培养的方法。方法 :采用两步消化法对皮肤进行消化 ,获取角质形成细胞进行体外无血清培养基培养 ,进行细胞形态学观察、免疫组织化学、透射电镜鉴定及生长曲线的绘制与分析。结果 :该方法可获取较多高纯度的角质形成细胞 ,且在体外可快速稳定增殖。结论 展开更多

关键词 皮肤 角质形成细胞 分离 原代培养 无血清

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p11融合蛋白表达、纯化及抗血清的制备 被引量：3

8

作者 谭志平 黄亮群 +3 位作者 郑多 房海燕 夏昆 夏家辉 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期189-191,共3页

目的 :表达GST p11和 6xHis p11融合蛋白并制备GST p11特异性抗体。方法 :将人p11基因克隆入两种原核表达载体pGEX 4T 2和pQE30 ,分别在大肠杆菌BL2 1和M15中表达 ,用GlutathioneSepharose 4B和Ni NTAagar ose亲和柱分别纯化目的蛋白。... 目的 :表达GST p11和 6xHis p11融合蛋白并制备GST p11特异性抗体。方法 :将人p11基因克隆入两种原核表达载体pGEX 4T 2和pQE30 ,分别在大肠杆菌BL2 1和M15中表达 ,用GlutathioneSepharose 4B和Ni NTAagar ose亲和柱分别纯化目的蛋白。利用纯化的GST p11蛋白制备多克隆抗体。结果 :得到高表达量的融合蛋白 ,经亲和层析柱纯化获得较高纯度的GST p11和 6xHis p11蛋白。以GST p11蛋白免疫新西兰兔得到p11多克隆抗体 ,Westernblotting证实该抗体能够识别 6xHis p11蛋白 ,具有较高特异性。结论 :利用原核表达人p11融合蛋白制备的p11多克隆抗体具有较好的特异性 。 展开更多

关键词 p11融合蛋白 纯化 抗血清 制备 亲和层析 p11多克隆抗体

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一个先天性眼球震颤家系致病基因的初步定位 被引量：2

9

作者 刘志蓉 张宝荣 +4 位作者 丁美萍 夏昆 胡正茂 邓昊 夏家辉 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期437-440,共4页

为确定一个X染色体显性遗传先天性眼球震颤家系的致病基因与X染色体的连锁关系,选用X染色体上的DXS1214、DXS1068、DXS993、DXS8035、DXS1047、DXS8033、DXS1192和DXS1232共8个微卫星DNA标记对该家系进行基因扫描与基因分型,并利用LINK... 为确定一个X染色体显性遗传先天性眼球震颤家系的致病基因与X染色体的连锁关系,选用X染色体上的DXS1214、DXS1068、DXS993、DXS8035、DXS1047、DXS8033、DXS1192和DXS1232共8个微卫星DNA标记对该家系进行基因扫描与基因分型,并利用LINKAGE等软件包对基因分型结果进行分析,探讨该家系致病基因与X染色体的连锁关系。两点连锁分析时X染色体短臂4个基因座最大LOD值均小于-1,不支持与该家系致病基因连锁;X染色体长臂4个基因座中最大LOD值达到2,提示存在较大的连锁可能性。该家系的致病基因可初步定位于X染色体长臂,且提示Xq26～Xq28区间附近可能是先天性眼球震颤一个共同的致病基因座,但区间范围仍较大,仍须进一步选择合适的微卫星标记进行精确的定位以缩小候选基因的筛查范围。 展开更多

关键词 先天性眼球震颤 基因定位 微卫星标记 连锁分析

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人源基因载体pHrn介导p53基因在Bel-7402中的抗癌研究(英文) 被引量：2

10

作者 薛志刚 李剑 +9 位作者 尹彪 张雅坤 刘雄昊 潘乾 龙志高 戴和平 夏昆 邬玲仟 梁德生 夏家辉 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第5期465-470,共6页

利用人源基因载体结合人巨细胞病毒(CMV)增强子,人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子及肿瘤抑制基因p53构建肿瘤抑制载体,研究它们在肝癌细胞株Bel-7402中的功能.将CMV增强子(CMVe)与肿瘤特异性启动... 利用人源基因载体结合人巨细胞病毒(CMV)增强子,人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子及肿瘤抑制基因p53构建肿瘤抑制载体,研究它们在肝癌细胞株Bel-7402中的功能.将CMV增强子(CMVe)与肿瘤特异性启动子hTERTp组合,分别结合GFP及精氨酸型和脯氨酸型肿瘤抑制基因p53,构建GFP表达载体pchEGFP以及p53表达载体pchp53Arg和pchp53Pro;脂质体2000转染肝癌细胞株Bel-7402;24h后利用荧光显微镜以及流式细胞仪检测GFP的表达;RT-PCR、蛋白质印迹检测p53基因的表达;利用Hoechst33258、Annexin V/PI染色,检测p53促使肿瘤细胞的促凋亡情况.结果表明:GFP荧光表达载体在Bel-7402细胞中能有效表达;RT-PCR及蛋白质印迹检测到精氨酸型和脯氨酸型p53基因在Bel-7402细胞内表达;Hoechst33258染色及Annexin V/PI染色检测细胞凋亡实验没有得到明显的细胞凋亡结果.结果表明:实验所构建的肿瘤抑制载体在肝癌细胞Bel-7402能有表达,并能形成外源性p53蛋白,但没有检测到明显的p53促使肝癌细胞调亡的结果.这可能与p53对hTERT的负调控作用有关. 展开更多

关键词 人源基因载体 人端粒酶逆转录酶(hTERT) P53

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非综合征性语前聋人群中α-盖膜蛋白基因突变检测 被引量：1

11

作者 胡鹏 谢鼎华 +4 位作者 肖自安 伍伟景 葛圣雷 胡正茂 夏昆辉 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 2004年第3期145-147,T001,共4页

目的　探讨中国人非综合征性语前聋患者α -盖膜蛋白基因突变频率和特性。方法　收集非综合征性语前聋家系 34个 ,大部分来自湖南地区 ,共计 6 5例 ,散发患者 31例 ,健康对照组 10 0例。聚合酶链反应扩增α -盖膜蛋白基因的部分外显子 ... 目的　探讨中国人非综合征性语前聋患者α -盖膜蛋白基因突变频率和特性。方法　收集非综合征性语前聋家系 34个 ,大部分来自湖南地区 ,共计 6 5例 ,散发患者 31例 ,健康对照组 10 0例。聚合酶链反应扩增α -盖膜蛋白基因的部分外显子 ,单链构象多态分析初筛可疑突变者 ,发现异常构象带后再行DNA测序。结果　在α-盖膜蛋白基因 9号和 18号外显子的SSCP检测中发现多个患者有异常构象带 ,测序证实为多态性改变。未发现导致非综合征性语前聋的突变。结论　目前在国人非综合征性语前聋患者中尚未检测到α -盖膜蛋白基因的致聋突变 。 展开更多

关键词 基因 突变 语前聋 α-盖膜蛋白

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浆膜蛋白RTN1和RTN4基因在小鼠内耳的表达 被引量：1

12

作者 胡鹏 谢鼎华 +3 位作者 肖自安 伍伟景 陈勇 夏昆 《中华耳科学杂志》 CSCD 2005年第4期275-277,共3页

目的探讨浆膜蛋白RTN1和RTN4基因在小鼠内耳的表达。方法采用5只成年小鼠内耳组织提取总RNA,逆转录后获得小鼠内耳细胞cDNA,根据RTN1和RTN4基因编码区序列设计的引物进行PCR扩增,通过PCR产物分析和DNA测序确定RTN1和RTN4是否在小鼠内耳... 目的探讨浆膜蛋白RTN1和RTN4基因在小鼠内耳的表达。方法采用5只成年小鼠内耳组织提取总RNA,逆转录后获得小鼠内耳细胞cDNA,根据RTN1和RTN4基因编码区序列设计的引物进行PCR扩增,通过PCR产物分析和DNA测序确定RTN1和RTN4是否在小鼠内耳细胞表达。结果采用小鼠内耳组织总RNA,RT-PCR扩增出RTN1和RTN4基因部分编码区,扩增产物测序证实小鼠内耳中有RTN1和RTN4基因的表达。结论RTN1和RTN4基因在内耳有表达,为RTN1和RTN4与连接蛋白26(connexin26)蛋白的互作关系提供了进一步的证据。浆膜蛋白RTN1和RTN4可能与连接蛋白26在听觉生理中起作用。 展开更多

关键词 浆膜蛋白 逆转录聚合酶链反应 信使RNA 内耳

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逆转录病毒载体介导的RNAi技术稳定抑制前列腺癌细胞株β-catenin的表达 被引量：3

13

作者 胡政 蔡芳 +3 位作者 程莉娟 夏昆 夏家辉 张灼华 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期253-257,共5页

目的:建立稳定抑制βcatenin基因表达的前列腺癌细胞株,为探讨Wnt/βcatenin信号在前列腺癌发生中的作用提供合适的细胞模型。方法:在βcatenin基因编码区选择3个RNAi作用的靶位点,体外合成前体DNA链,复性后连入逆转录病毒载体pSUPERret... 目的:建立稳定抑制βcatenin基因表达的前列腺癌细胞株,为探讨Wnt/βcatenin信号在前列腺癌发生中的作用提供合适的细胞模型。方法:在βcatenin基因编码区选择3个RNAi作用的靶位点,体外合成前体DNA链,复性后连入逆转录病毒载体pSUPERretro,转染包装细胞PA317,收集含病毒颗粒的培养上清感染DU145细胞,经嘌呤霉素筛选并扩大培养后得到克隆,继续培养2个月形成稳定克隆。免疫印迹检测癌细胞内βcatenin及受其调控的靶基因cmyc和cyclinD1的表达;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测βcatenin基因表达抑制的细胞和对照组细胞的增殖。结果:免疫印迹和RTPCR结果显示,筛选得到的2个克隆中细胞内βcatenin表达水平下降;且克隆内cmyc,cyclinD1基因的表达下调;MTT检测显示,βcatenin表达抑制的细胞克隆吸光度值下降,这表明克隆内细胞数量减少,细胞增殖受到了抑制。结论:成功建立稳定抑制βcatenin基因表达的前列腺癌细胞株。 展开更多

关键词 Wnt/β—catenin RNAi 前列腺癌 逆转录病毒载体 稳定抑制

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脑溢安对谷氨酸致神经元损伤的保护作用 被引量：3

14

作者 聂亚雄 黎杏群 +2 位作者 黄亮群 聂亚雄 黄如训 《中国康复理论与实践》 CSCD 2002年第7期421-422,431,共3页

目的探讨中医平肝熄风 ,凉血泻火治法的抗神经损伤机理。方法建立谷氨酸致体外培养的大鼠海马神经元兴奋毒性损伤模型 ,并用脑溢安含药血清、细胞外调节蛋白激酶 (ERK)阻滞剂PD 980 59进行干预 ,分别检测各组神经元活化的ERK、c jun氨... 目的探讨中医平肝熄风 ,凉血泻火治法的抗神经损伤机理。方法建立谷氨酸致体外培养的大鼠海马神经元兴奋毒性损伤模型 ,并用脑溢安含药血清、细胞外调节蛋白激酶 (ERK)阻滞剂PD 980 59进行干预 ,分别检测各组神经元活化的ERK、c jun氨基末端激酶 (JNK)水平及上清液LDH活性。结果脑溢安含药血清能上调谷氨酸损伤后的大鼠海马神经元ERK水平 ,下调JNK水平 ,PD980 59能阻断脑溢安对受损经元的保护作用。结论以平肝熄风、凉血泻火为主要治法的脑溢安含药血清对谷氨酸致培养大鼠海马神经元损伤后的保护作用与MAPK信号转导途径有关 ,脑溢安上调ERK表达 ,下调JNK表达 。 展开更多

关键词 脑溢安 谷氨酸 神经元损伤 保护作用 兴奋性氨基酸 乳酸脱氢酶 脑缺血 中药

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人Endostatin cDNA的克隆及其在HT1080细胞中的表达 被引量：3

15

作者 卿志荣 唐爱发 +5 位作者 蒋冬贵 郑多 夏昆 李宜雄 陈主初 夏家辉 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第5期393-396,共4页

目的 :构建能表达人Endostatin的真核表达质粒。方法 :设计引物从成人肝cDNA文库中通过PCR扩增到EndostatincDNA ,并在 5′端融合编码人胰岛素信号肽序列 ,经测序证实后连接到真核表达载体pcDNA3.1(- )中。将携带基因的真核表达载体质粒... 目的 :构建能表达人Endostatin的真核表达质粒。方法 :设计引物从成人肝cDNA文库中通过PCR扩增到EndostatincDNA ,并在 5′端融合编码人胰岛素信号肽序列 ,经测序证实后连接到真核表达载体pcDNA3.1(- )中。将携带基因的真核表达载体质粒pcDNA3.1(- ) SEND转染HT10 80细胞后用G4 18筛选获得克隆 ,采用RT PCR和West ern blot检测Endostatin的表达。结果 :测序结果表明克隆的人EndostatincDNA完全正确 ,并且在其 5′端融合编码人胰岛素信号肽序列 ;RT PCR显示转染后的HT10 80细胞可以有效地转录EndostatinmRNA ;Western blot检测到转染后的HT10 80细胞上清有相应的蛋白质 ,大小为 2 0kD左右。结论 :含有人胰岛素信号肽序列的人EndostatincDNA重组质粒pcDNA3.1(- ) SEND转染HT10 80细胞后可以有效的表达目的蛋白并能分泌到细胞外 。 展开更多

关键词 ENDOSTATIN 血管形成抑制因子 HT1080细胞 肿瘤 表达

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荧光多重PCR对α地中海贫血的基因诊断 被引量：1

16

作者 文曙 邬玲仟 +4 位作者 李崎 潘乾 龙志高 夏家辉 夏昆 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第2期123-126,共4页

目的 :建立一种快速、灵敏的α地中海贫血诊断方法。方法 :应用荧光引物对正常人和患者进行多重PCR ,同时扩增α1和α2 珠蛋白基因和内对照β肌动蛋白 ( β actin) ,用PerkinElmerABIPRISMTM3 77DNASequencer自动分析结果 ,并对所得数... 目的 :建立一种快速、灵敏的α地中海贫血诊断方法。方法 :应用荧光引物对正常人和患者进行多重PCR ,同时扩增α1和α2 珠蛋白基因和内对照β肌动蛋白 ( β actin) ,用PerkinElmerABIPRISMTM3 77DNASequencer自动分析结果 ,并对所得数据进行统计。用连锁分析的方法PCR扩增同一批模板α2 珠蛋白基因上游的 (CA) n,跑变性胶并将结果与前一种方法对照。结果 :荧光多重PCR自动分析和扩增 (CA) n 连锁分析得出的结论与实际情况完全相符 ,结果判断容易。结论 :荧光多重PCR法灵敏、简便 ,单管内就能完成 ,适合运用于α地中海贫血的快速诊断 ,并有可能运用于移植前诊断和母体外周血分离胎儿有核红细胞产前诊断。 展开更多

关键词 荧光多重PCR Α地中海贫血 基因诊断 α2珠蛋白基因 β肌动蛋白

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