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重组人粒细胞集落刺激因子在Escherichia coli中的表达研究 被引量:5
1
作者 乌垠 杨红 +4 位作者 陆军 胡波 麻彤晖 李玉新 郝水 《东北师大学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2000年第4期46-51,共6页
根据人天然粒细胞集落刺激因子 (G -CSF)基因序列设计出引物 ,通过RT -PCR从人外周血单个核细胞mRNA获得G -CSFcDNA片段 .将该片段与原核表达载体 pT 7构建成重组体 ,导入大肠杆菌后发现天然G -CSFcD NA表达量并不理想 .这可能是由于天... 根据人天然粒细胞集落刺激因子 (G -CSF)基因序列设计出引物 ,通过RT -PCR从人外周血单个核细胞mRNA获得G -CSFcDNA片段 .将该片段与原核表达载体 pT 7构建成重组体 ,导入大肠杆菌后发现天然G -CSFcD NA表达量并不理想 .这可能是由于天然hG -CSF 5’端G +C的比例过高 ,使转录后的mRNA很容易形成二级结构而影响翻译起始 ,因此在大肠杆菌中很难获得高效表达 .根据密码子简并性原则 ,在不改变编码氨基酸顺序的前提下 ,通过重新设计PCR引物 ,将hG -CSF的前 3个氨基酸密码子中的几个GC碱基作了改动 ,获得了新的cDNA突变体 ,将其与pT 7的重组体导入大肠杆菌 。 展开更多
关键词 粒细胞集落刺激因子 原核表达 G-CSFcDNA片段
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草木樨状黄芪单细胞培养再生植株及其影响因素的研究 被引量:4
2
作者 张根发 李凤霞 +1 位作者 安利佳 罗希明 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第1期8-13,共6页
从草木樨状黄芪的子叶和胚轴诱导的愈伤组织中选取结构松脆的颗粒状愈伤组织,用液体培养基S_(12)进行悬浮培养建立了悬浮细胞系。取换液3天左右生长旺盛的悬浮系材料分离单细胞,用基本培养基S_(12)与不同浓度的植物血球... 从草木樨状黄芪的子叶和胚轴诱导的愈伤组织中选取结构松脆的颗粒状愈伤组织,用液体培养基S_(12)进行悬浮培养建立了悬浮细胞系。取换液3天左右生长旺盛的悬浮系材料分离单细胞,用基本培养基S_(12)与不同浓度的植物血球凝集素组成的系列培养基MC_1-MC_6进行液体浅层静置暗培养;形成小愈伤组织后,经M_3(MS+2,4-D2mg/L,NAA0.2mg/L,KT1mg/L)培养基增殖,MR_2培养基诱导分化出苗,再经RI(1/2MS+IBA0.8-1.5mg/L)培养基诱导生根,获得完整再生植株。研究表明适量的植物血球凝集素对草木樨状黄芪的单细胞培养是有益的。本文还对影响悬浮系细胞和单细胞培养的其他一些因素也进行了探讨。 展开更多
关键词 单细胞 草木樨状黄芪 细胞培养
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遗传多样性研究中的分子生物学方法 被引量:5
3
作者 黄百渠 曾庆华 尹东 《东北师大学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1996年第3期90-92,共3页
论述了遗传多样性研究在物种保护中的地位,并介绍了同工酶和蛋白质分析,限制性片段长度多态标记,多聚酶链式反应,随机扩增多态性DNA,扩增和错配对检测以及基因克隆和转移等分子生物学技术在遗传多样性研究中的应用和前景.
关键词 遗传多样性 分子生物学 物种保护
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水稻遗传转化研究进展 被引量:7
4
作者 王景余 林秀云 李明生 《生物技术通报》 CAS CSCD 2002年第1期20-25,共6页
水稻遗传转化的主要方法 ,包括农杆菌介导法、基因枪法、电激法、PEG法等。论述了用于水稻转化的各种外植体、影响水稻遗传转化和植株分化的各种因素、各种标记基因及相应的选择方法和外源基因在转基因水稻中的遗传规律 ,比较了常用启... 水稻遗传转化的主要方法 ,包括农杆菌介导法、基因枪法、电激法、PEG法等。论述了用于水稻转化的各种外植体、影响水稻遗传转化和植株分化的各种因素、各种标记基因及相应的选择方法和外源基因在转基因水稻中的遗传规律 ,比较了常用启动子在水稻中的表达强度 ,一些已转移到优良水稻品种中的有益农艺性状基因 ,如抗病、抗虫、抗除草剂等 ,介绍了它们在水稻品种改良中所发挥的作用。 展开更多
关键词 水稻 转基因 遗传转化 研究进展
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单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白B基因疫苗的构建及细胞免疫学研究 被引量:3
5
作者 李光源 贺冰 +3 位作者 冯非 孟祥俊 宋忆淑 王晓祺 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期535-539,共5页
目的:构建、制备单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSVⅠ)糖蛋白BDNA疫苗,检测其诱导机体产生的细胞免疫应答。方法:PCR扩增编码HSVⅠgB去除N端部分信号肽序列(39bp)的基因片段(2673bp),定向插入pcDNA3载体中,构建pcDNA3gB基因疫苗并对其进行PCR、酶切... 目的:构建、制备单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSVⅠ)糖蛋白BDNA疫苗,检测其诱导机体产生的细胞免疫应答。方法:PCR扩增编码HSVⅠgB去除N端部分信号肽序列(39bp)的基因片段(2673bp),定向插入pcDNA3载体中,构建pcDNA3gB基因疫苗并对其进行PCR、酶切及测序鉴定。于BALBc小鼠注射免疫3次,观察小鼠CD4+、CD8+T细胞亚群的变化,CFSEPI双标记的流式细胞计数法检测CTL活性。结果:双酶切分析结果为目的基因(2.7kb)和线性质粒pcDNA3(5.4kb);PCR扩增结果为特异产物(2.7kb);测序结果与GenBankgB基因序列同源性达99.5%;CTL活性增强;BALBc小鼠脾CD4+T细胞增加。结论:经鉴定证实了HSVⅠgB基因疫苗的构建;HSVⅠgB基因疫苗可以诱导较强的细胞免疫应答,应用于预防HSVⅠ的感染具有良好的前景。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 DNA疫苗 糖蛋白B 流式细胞术 CFSE
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栝楼愈伤组织细胞中天花粉蛋白的免疫细胞化学定位研究 被引量:2
6
作者 佟宏霞 李喜文 邢苗 《东北师大学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1996年第3期58-62,共5页
采用免疫荧光和免疫胶体金方法,对栝楼(TrichosantheskirilowiiMaxim)愈伤组织中天花粉蛋白(Trichosanthin,简称TCS)进行了细胞学定位研究,并对TCS在括楼愈伤组织细胞中的分布进... 采用免疫荧光和免疫胶体金方法,对栝楼(TrichosantheskirilowiiMaxim)愈伤组织中天花粉蛋白(Trichosanthin,简称TCS)进行了细胞学定位研究,并对TCS在括楼愈伤组织细胞中的分布进行讨论.用间接免疫荧光染色方法在光学显微镜下发现,TCS主要分布在细胞壁处和一些细胞质颗粒中;电子显微镜下对免疫胶体金标记样品的观察结果进一步证实,TCS集中分布在细胞壁处. 展开更多
关键词 天花粉蛋白 细胞学定位 愈伤组织 栝楼
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小麦细胞核仁中DNA原位位置与rRNA基因转录位点的研究
7
作者 赫杰 陶伟 郝水 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期231-236,共6页
以小麦细胞为研究材料,应用常规电子显微镜技术和DNA细胞化学特异染色NAMA-Ur技术,在原位水平对核仁中DNA的分布和特征进行了直观的观察。结果表明,小麦细胞核仁中DNA位于纤维中心(Fibrillar Centers,FC)、致密纤维组分(Dense Fibrillar... 以小麦细胞为研究材料,应用常规电子显微镜技术和DNA细胞化学特异染色NAMA-Ur技术,在原位水平对核仁中DNA的分布和特征进行了直观的观察。结果表明,小麦细胞核仁中DNA位于纤维中心(Fibrillar Centers,FC)、致密纤维组分(Dense Fibrillar Component,DFC)以及两者的过渡区域,并呈现出环绕FC排布的构型;应用RNP优先染色(Benhard staining)技术分析了核仁中RNP的分布及其原位位置,直观的显示了小麦细胞核仁中RNP颗粒主要集中在FC与DFC的过渡区域及DFC和颗粒组分(Granular Component,GC)中;并且在FC与DFC的过渡区域,它们不太均匀也不太连续地半围绕着FC而排布;进一步借助于RNA/DNA杂合体抗体在原位水平标记和分析了细胞核仁中活跃基因转录的精细位点,结果表明小麦细胞核仁rRNA基因的转录位点位于FC与DFC的过渡区域及DFC中。 展开更多
关键词 DNA特异染色 RNP优先染色 RNA/DNA杂合体 小麦
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人间充质干细胞成骨分化早期HOX家族基因转录的表观遗传调控 被引量:1
8
作者 黄珍东 谭江 +1 位作者 陆军 黄百渠 《东北师大学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期101-107,共7页
人间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)是一类具有多分化潜能的成体干细胞,在体内外可以被人工定向诱导分化成多种不同的细胞.有报道表明,在干细胞分化的过程中,细胞核内染色质发生重塑.HOX家族基因作为一类转录因子,在... 人间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)是一类具有多分化潜能的成体干细胞,在体内外可以被人工定向诱导分化成多种不同的细胞.有报道表明,在干细胞分化的过程中,细胞核内染色质发生重塑.HOX家族基因作为一类转录因子,在胚胎发育以及细胞分化过程中发挥着十分重要作用.通过体外定向诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,对比分化前后细胞中HOX家族基因的表达状况,发现HOX家族基因的表达水平在hMSCs早期成骨分化过程中显著下降.进一步的研究发现,HOX家族基因的这种表达变化是由其启动子区的组蛋白H3-Lys9乙酰化和二甲基化水平发生变化而导致的.一系列实验证据表明,在间充质干细胞的成骨分化过程中,HOX家族基因表达受到抑制,而这种抑制作用是与其分化过程中发生的染色质重塑事件密切相关的. 展开更多
关键词 人间充质干细胞(hMSCs) 成骨分化 染色质重塑
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竹叶中黄酮提取纯化工艺研究 被引量:26
9
作者 李瑶 齐晓丽 +4 位作者 孟祥颖 鲍永利 乌垠 周毓麟 李玉新 《东北师大学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期91-94,共4页
采用正交试验的方法对竹叶中黄酮的乙醇提取条件进行了系统研究,同时采用大孔吸附树脂吸附法对纯化条件进行了研究.结果表明:以30倍体积80%的乙醇水溶液在80℃水浴中浸提3 h为最佳,4种大孔吸附树脂中AB-8树脂为纯化的最适树脂.
关键词 竹叶 黄酮 正交设计 大孔吸附树脂
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提取高质量人参RNA的方法研究 被引量:16
10
作者 王昆 王颖 +3 位作者 鲍永利 孟祥颖 乌垠 李玉新 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第1期95-99,共5页
针对人参组织多酚、多糖类物质含量较高的特点,比较了改良的异硫氰酸胍法、改良的CTAB法和改良的Trizol法等3种不同的RNA提取方法.3种改良的方法均能从人参组织中提取到总RNA.其中改良的Trizol法能有效地抑制酚类物质和多糖对总RNA提取... 针对人参组织多酚、多糖类物质含量较高的特点,比较了改良的异硫氰酸胍法、改良的CTAB法和改良的Trizol法等3种不同的RNA提取方法.3种改良的方法均能从人参组织中提取到总RNA.其中改良的Trizol法能有效地抑制酚类物质和多糖对总RNA提取的影响,能从成熟的叶片中获得高质量、完整性好的总RNA,每克新鲜组织RNA产量在90~120!g之间,电泳分析,28SrRNA亮度约为18SrRNA的2倍,A260/A280介于1.8~2.0之间.用改良的Trizol法分离的RNA,已成功进行了RT-PCR及人参叶cDNA文库构建等研究. 展开更多
关键词 RNA提取 人参 次生物质
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核桃楸青果皮(GPJM)水提物诱生小鼠肿瘤坏死因子的实验研究 被引量:17
11
作者 兰英 房金波 +1 位作者 张维晶 常雅萍 《东北师大学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期78-81,共4页
 核桃楸青果皮(GPJM)经沸水煮提得水提物,应用MTT法分析,GPJM水提物在体外可协同亚剂量ConA(2 5μg mL)诱导小鼠脾细胞合成TNF;在体内也有诱生内源性TNF的作用.这表明核桃楸青果皮水提物(GPJM)具有一定的免疫调节作用.
关键词 GPJM 水提物 小鼠 实验研究 核桃楸 青果皮 刀豆蛋白A 肿瘤坏死因子 中药 免疫调节作用
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系统性白色念珠菌感染的免疫应答反应及疫苗研究进展 被引量:8
12
作者 杨琼 苏全平 +1 位作者 温得中 王丽 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期259-262,共4页
由于肿瘤化疗药物和免疫抑制剂的广泛应用,使系统性念珠菌感染的发病率明显升高,该病严重地威胁着住院患者的生命。在白色念珠菌感染过程中,特异性抗体、Th细胞和一些非特异性免疫细胞存在着复杂的调节机制。先天性免疫应答和获得性免... 由于肿瘤化疗药物和免疫抑制剂的广泛应用,使系统性念珠菌感染的发病率明显升高,该病严重地威胁着住院患者的生命。在白色念珠菌感染过程中,特异性抗体、Th细胞和一些非特异性免疫细胞存在着复杂的调节机制。先天性免疫应答和获得性免疫应答机制的研究,对开发出有效的抗真菌疫苗具有重要意义。 展开更多
关键词 系统性白色念珠菌感染 CD^4 TH细胞 树突状细胞 疫苗
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噬菌体展示外源多肽的免疫原性研究 被引量:11
13
作者 王桂云 朱筱娟 王丽 《东北师大学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期101-104,共4页
利用噬菌体展示技术将丝状噬菌体fd基因 8克隆入 pKK2 2 3-3质粒中 .将白色念珠菌特异表位基因插入到修饰后的质粒载体中 ,并制备了杂合噬菌体 .利用纯化的该表位抗原PA免疫小鼠 ,结果表明该噬菌体 -表位抗原PA在有无佐剂存在的情况下... 利用噬菌体展示技术将丝状噬菌体fd基因 8克隆入 pKK2 2 3-3质粒中 .将白色念珠菌特异表位基因插入到修饰后的质粒载体中 ,并制备了杂合噬菌体 .利用纯化的该表位抗原PA免疫小鼠 ,结果表明该噬菌体 -表位抗原PA在有无佐剂存在的情况下均产生抗体 ,用ELISA方法采用双波长 (4 50 / 6 30nm)检测抗体 ,其在有无佐剂存在的情况下光密度值无明显差别 .免疫后小鼠脾淋巴细胞在有无佐剂的情况下均产生明显增殖 ,未见明显的毒副作用 ,具有良好的安全性 .该方法产生的抗体与传统的合成多肽相比具有方法简便、低价高效等特点 .它将成为生产高效低价疫苗的有效途径 .该噬菌体 -表位抗原PA为真菌疫苗的研制打下基础 . 展开更多
关键词 噬菌体-表位抗原 噬菌体展示 免疫 疫苗 外源多肽
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植物纤维素合成酶基因的研究进展 被引量:15
14
作者 周晓馥 王景余 王兴智 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期376-378,共3页
纤维素是植物细胞壁的主要成分。自然界中每年大约有 180 0亿吨的纤维素产物生成。纤维素的巨大经济价值使纤维素合成酶基因成为基因工程的热点之一。 1996年 ,Delmer小组首次从植物中克隆出纤维素合成酶基因。近年来 ,在纤维素合成酶... 纤维素是植物细胞壁的主要成分。自然界中每年大约有 180 0亿吨的纤维素产物生成。纤维素的巨大经济价值使纤维素合成酶基因成为基因工程的热点之一。 1996年 ,Delmer小组首次从植物中克隆出纤维素合成酶基因。近年来 ,在纤维素合成酶的结构、功能、定位和基因功能的研究方面成果斐然。 展开更多
关键词 植物 纤维素合成酶基因 研究进展 催化亚基 玫瑰花状结构
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大麦细胞核骨架及染色体骨架肌动蛋白免疫细胞化学定位 被引量:4
15
作者 陶伟 段晓刚 +2 位作者 万里红 卜秀玲 何孟元 《西北植物学报》 CAS CSCD 1998年第1期30-35,共6页
以大麦(Hordeumvulgare)根尖分生细胞为实验材料,采用免疫荧光标记技术证明了大麦细胞核骨架及染色体骨架中存在肌动蛋白;并进一步采用免疫电镜技术在原位水平探讨了肌动蛋白在细胞核及染色体中的分布规律。还对肌动... 以大麦(Hordeumvulgare)根尖分生细胞为实验材料,采用免疫荧光标记技术证明了大麦细胞核骨架及染色体骨架中存在肌动蛋白;并进一步采用免疫电镜技术在原位水平探讨了肌动蛋白在细胞核及染色体中的分布规律。还对肌动蛋白在细胞核及染色体中的功能进行了讨论。 展开更多
关键词 大麦 肌动蛋白 细胞核 骨架 染色体 定位
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乳腺癌细胞MDA-MB-231肺转移模型的建立及其评价 被引量:11
16
作者 曹让娟 翟艳华 +2 位作者 卿旭 刘雅文 朱筱娟 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期403-406,I0001,共5页
目的:探讨用绿色荧光蛋白(GFP)标记的乳腺癌细胞MDA-MB-231建立可量化评估的自发性肺转移和实验性肺转移动物模型,为研究乳腺癌的转移机制提供依据。方法:采用慢病毒载体介导的病毒包装体系,获得稳定表达GFP的细胞系MDA-MB-231-GFP,通... 目的:探讨用绿色荧光蛋白(GFP)标记的乳腺癌细胞MDA-MB-231建立可量化评估的自发性肺转移和实验性肺转移动物模型,为研究乳腺癌的转移机制提供依据。方法:采用慢病毒载体介导的病毒包装体系,获得稳定表达GFP的细胞系MDA-MB-231-GFP,通过皮下注射方式将细胞接种于Balb/C裸鼠皮下,建立自发性肺转移模型,通过尾静脉注射方式将细胞接种到重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠体内,建立实验性肺转移模型,分别于8周和5周后处死小鼠,取肺组织于体视显微镜下观察。结果:自发性肺转移小鼠接种细胞8周后,原位形成直径约为15 mm的肿瘤块;处死小鼠后肺部大体标本未见结节状转移灶,但488 nm激发光下见转移灶呈绿色点状分布。实验性肺转移小鼠接种细胞5周后处死小鼠,肺部形成的转移灶肉眼不可见,但在488 nm激发光波长下同样呈现绿色点状分布。肺转移灶易于观察和统计。结论:成功建立了可以量化的MDA-MB-231细胞肺转移动物模型。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 慢病毒体系 肺转移 动物模型
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草苁蓉多糖的毒性实验研究 被引量:17
17
作者 费瑞 迟立超 +3 位作者 杜建石 付军权 何源 邢沈阳 《东北师大学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期98-100,共3页
按照我国《食品安全性毒理学评价程序和方法》的要求,采用急性毒性实验(LD50)、最大耐受量测定、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验及小鼠精子畸变实验,研究了草苁蓉多糖急性毒性及遗传毒性作用.结果表明,草苁蓉多糖LD50值大于24g/kg,最大... 按照我国《食品安全性毒理学评价程序和方法》的要求,采用急性毒性实验(LD50)、最大耐受量测定、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验及小鼠精子畸变实验,研究了草苁蓉多糖急性毒性及遗传毒性作用.结果表明,草苁蓉多糖LD50值大于24g/kg,最大耐受量为30g/kg;小鼠骨髓嗜多染红细胞微核数量、小鼠精子畸变数量与空白对照组比较无明显差异.草苁蓉多糖属一级无毒物,未见有致突变作用. 展开更多
关键词 草苁蓉多糖 急毒 致突变作用
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菌株8-A-2对萘降解特性的初步研究 被引量:10
18
作者 潘学芳 倪秀珍 王浩 《东北师大学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期70-73,共4页
 从济南炼油厂附近的污染土壤中,分离出能高效降解烃类的菌株8-A-2,初步鉴定为假单胞菌属.菌株8-A-2对萘降解特性的初步研究表明:此菌株能以萘为惟一碳源进行生长,并且确立了最适合的培养条件.在含萘0 2%的无机盐培养基上生长,35℃摇...  从济南炼油厂附近的污染土壤中,分离出能高效降解烃类的菌株8-A-2,初步鉴定为假单胞菌属.菌株8-A-2对萘降解特性的初步研究表明:此菌株能以萘为惟一碳源进行生长,并且确立了最适合的培养条件.在含萘0 2%的无机盐培养基上生长,35℃摇床培养48h,降解率可达98%以上.表明在温度为35℃,pH值为7 0,萘的含量为0 2%时,该菌株对萘的降解率最好. 展开更多
关键词 降解特性 菌株8-A-2 降解率 土壤污染 多环芳烃 微生物降解 有机污染物
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啤酒大麦极限糊精酶的研究进展 被引量:5
19
作者 李芬 朱筱娟 王兴智 《东北师大学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1998年第4期68-75,共8页
介绍了大麦极限糊精酶研究的最新进展,及其在制麦芽和啤酒酿造过程中的作用.阐述了大麦极限糊精酶的提纯、特点、检测方法及最新发现的两个抑制蛋白.
关键词 极限糊精酶 麦芽 啤酒 酿造 大麦
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系统性白色念珠菌感染小鼠动物模型的研究 被引量:14
20
作者 杨琼 宋祥福 王桂云 《东北师大学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期86-89,共4页
 为了建立稳定的系统性白色念珠菌感染的C57BL/6小鼠模型,选用国际标准型白色念珠菌10231(Candidaalbicans),经小鼠尾静脉直接注射白色念珠菌酵母细胞;接种后从感染小鼠的脾中能够分离出白色念珠菌,病理学检查肾组织可见肾盂内有大量...  为了建立稳定的系统性白色念珠菌感染的C57BL/6小鼠模型,选用国际标准型白色念珠菌10231(Candidaalbicans),经小鼠尾静脉直接注射白色念珠菌酵母细胞;接种后从感染小鼠的脾中能够分离出白色念珠菌,病理学检查肾组织可见肾盂内有大量白色念珠菌的孢子、菌丝体和炎性细胞浸润.噬菌体展示的白色念珠菌HSP90多肽和热灭活的白色念珠菌菌苗能明显减少感染小鼠肾脏负荷的真菌量.结果说明经尾静脉注射合适剂量的白色念珠菌可建立稳定的小鼠系统性白色念珠菌感染模型,该模型可用于研究系统性白色念珠菌感染的致病机理、免疫和预防. 展开更多
关键词 白色念珠菌 感染 动物模型
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