利用转基因动物乳腺生物反应器生产溶栓药物的研究进展 被引量：2

1

作者 徐寒梅 成国祥 沈子龙 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期474-477,共4页

目前 ,溶栓试剂主要有七大类 ,其中 ,纤溶酶原激活剂 ( PA)及其突变体是急性心肌梗塞的常规用药 ,但是由于来源有限 ,价格昂贵 ,远远不能满足临床需要。利用转基因动物乳腺作为生物反应器来生产溶栓药物能够降低成本 ,是一种高效率的表... 目前 ,溶栓试剂主要有七大类 ,其中 ,纤溶酶原激活剂 ( PA)及其突变体是急性心肌梗塞的常规用药 ,但是由于来源有限 ,价格昂贵 ,远远不能满足临床需要。利用转基因动物乳腺作为生物反应器来生产溶栓药物能够降低成本 ,是一种高效率的表达系统 .转基因动物乳腺生物反应器是将目的基因构建于乳腺表达载体 ,通过显微注射等方法注入动物的受精卵中 ,使目的基因整合到动物的染色体中 ,最终在动物乳汁中获得目的蛋白的一种制药方法。到目前为止 ,转基因组织型纤溶酶原激活剂 ( t PA) ,尿激酶型纤溶酶原激活剂 ( u PA) ,长效组织型纤溶酶原激活剂 ( LAt PA)的转基因小鼠 ,及长效组织型纤溶酶原激活剂 ( LAt PA)的转基因羊都已产生 ,并且在从转基因羊乳汁中纯化长效组织型纤溶酶原激活剂 ( LAt PA)蛋白方面也取得了突破性的进展。可以预测 ,利用转基因动物乳腺生物反应器生产溶栓药物将会有广阔的前景。 展开更多

关键词 溶栓试剂 纤溶酶原激活剂 转基因动物 乳腺生物反应器 溶栓药物

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转基因动物在药理学研究中的应用及前景 被引量：1

2

作者 李凌云 王霆 成国祥 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期244-248,共5页

转基因动物是指基因组中稳定整合外源基因 (或特定的DNA片段 )并且能遗传和表达的一类动物。啮齿类转基因技术最早是Gordon在 1980年开创的 ,这一技术的应用打开了生物技术和基因调节之门 ,通过建立整体模型转入基因调控成分 ,已经能在... 转基因动物是指基因组中稳定整合外源基因 (或特定的DNA片段 )并且能遗传和表达的一类动物。啮齿类转基因技术最早是Gordon在 1980年开创的 ,这一技术的应用打开了生物技术和基因调节之门 ,通过建立整体模型转入基因调控成分 ,已经能在复杂的细胞组织环境中再现或模拟人类的一部分疾病。药物研究的动物模型不断发展和运用 ,正在开辟新药研制和生产的新天地。 展开更多

关键词 转基因动物 动物模型 药理学 研究 分子药物靶

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乳腺特异高表达人促红细胞生成素转基因奶山羊的制备 被引量：1

3

作者 张爱民 陈建泉 +5 位作者 刘思国 沙红英 徐旭俊 吴友兵 陈娟 成国祥 《中国比较医学杂志》 CAS 2007年第8期439-443,共5页

目的制备乳腺特异性高表达人促红细胞生成素(hEPO)转基因奶山羊。方法采用牛β-乳球蛋白基因(BLG)调控元件和hEPO全长编码序列基因组DNA构建真核表达载体,应用受精卵原核注射的方法制备hEPO转基因山羊。结果在原核注射获得的188头羔羊中... 目的制备乳腺特异性高表达人促红细胞生成素(hEPO)转基因奶山羊。方法采用牛β-乳球蛋白基因(BLG)调控元件和hEPO全长编码序列基因组DNA构建真核表达载体,应用受精卵原核注射的方法制备hEPO转基因山羊。结果在原核注射获得的188头羔羊中,经Southern blot法检测有4头羊含有hEPO基因,其中3头为母羊,1头公羊于出生后20d死亡;3头转基因母羊hEPO基因的拷贝数分别为1、10、2;Western blot检测结果显示转基因羊乳中的hEPO分子质量为32kDa;MTT法检测结果表明,在泌乳10d的3只转基因羊乳汁中,每毫升乳汁中hEPO活性分别达到1.17×102IU、1.90×104IU、1.91×104IU。结论牛BLG能够调控hEPO基因在山羊乳腺中高表达,为实现其他药用蛋白在山羊乳腺中表达奠定了基础。 展开更多

关键词 hEPO 奶山羊 乳腺表达 原核注射

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利用五特征转基因小鼠制备全人源血管内皮生长因子165单克隆抗体

4

作者 刘煜 顾月 +3 位作者 恽冬杰 陈建泉 刘思国 张爱民 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期269-272,共4页

目的:利用转入人免疫球蛋白基因的五特征小鼠制备全人源血管内皮生长因子165(VEGF165)单克隆抗体,并初步探讨该单抗的抗肿瘤活性。方法:采用常规杂交瘤细胞融合技术,利用间接ELISA效价测定方法筛选能稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株;比较了... 目的:利用转入人免疫球蛋白基因的五特征小鼠制备全人源血管内皮生长因子165(VEGF165)单克隆抗体,并初步探讨该单抗的抗肿瘤活性。方法:采用常规杂交瘤细胞融合技术,利用间接ELISA效价测定方法筛选能稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株;比较了五特征小鼠和BALB/c小鼠的免疫效果;亲和色谱法从腹水中纯化单抗;利用分泌VEGF的人膀胱癌细胞系T24细胞考察单抗的体外抗肿瘤活性。结果:成功获得了4株能稳定分泌表达单抗的杂交瘤细胞株(V2,V50,V71,V75),建立了间接ELISA效价测定方法,发现同样方法免疫的BALB/c鼠血清效价约为五特征小鼠的10倍。采用甘露糖结合蛋白(MBP)亲和色谱柱从腹水中获得了纯化的单抗样品,经SDS-PAGE和Western blotting检测,证实该单抗为全人源VEGF165IgM单抗。体外抗肿瘤活性结果显示,V2、V75单抗对人类膀胱癌细胞系T24细胞的增殖有较好的抑制作用。结论:可利用五特征小鼠制备全人源抗VEGF单抗,该单抗具有潜在的抗肿瘤活性。 展开更多

关键词 五特征小鼠 全人源单抗 抗肿瘤 血管内皮生长因子165

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检测Cre位点特异重组酶活性的双报告转基因小鼠建立

5

作者 朱焕章 陈建泉 +1 位作者 成国祥 薛京伦 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期32-35,共4页

目的　建立用于检测Cre位点特异重组酶活性的双报告转基因小鼠。方法　采用显微注射方法 ,将携带lacZ和人碱性磷酸酶 (humanalkalinephosphatase ,hAP)报告基因的ZAP载体导入近交C5 7BL/6小鼠 5 5 4枚受精卵 ;利用PCR ,Southernblottin... 目的　建立用于检测Cre位点特异重组酶活性的双报告转基因小鼠。方法　采用显微注射方法 ,将携带lacZ和人碱性磷酸酶 (humanalkalinephosphatase ,hAP)报告基因的ZAP载体导入近交C5 7BL/6小鼠 5 5 4枚受精卵 ;利用PCR ,Southernblotting技术对其仔鼠进行基因整合鉴定 ;应用X gal染色方法 ,对转基因小鼠胚胎进行转基因表达检测。结果　存活的 3 98枚受精卵被移入 2 1只假孕受体小鼠输卵管 ;13只受体怀孕产下 68只后代。合子存活率和出生率分别为 71%( 3 98/5 5 4)和 17%( 68/3 98)。在 68只小鼠中 ,5只雄性和 4只雌性小鼠整合有双报告基因。转基因整合率和有效率分别为 13 %( 9/68)和 1.6%( 9/5 5 4)。 9只首建鼠与正常C5 7BL/6小鼠杂交产生F1代小鼠。F1代小鼠转基因的传递符合孟德尔规律 ,X gal染色仅在 3只首建鼠的 13 5d龄胚胎中观察到。结论　检测Cre位点特异重组酶活性的双报告转基因小鼠已建立。 展开更多

关键词 转基因小鼠 LACZ 碱性磷酸酶 CRE重组酶

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xylE转基因小鼠的繁育及其纯合子的筛选 被引量：2

6

作者 陈建泉 罗金平 +4 位作者 黄建 成国祥 曹洁 印木泉 徐少甫 《中国比较医学杂志》 CAS 2003年第4期200-203,共4页

目的　进行转基因小鼠的繁育与纯合子转基因小鼠的筛选。方法　选用致突变xylE转基因原代小鼠 31号和 9号进行传代 ,自F2 起采用全同胞交配繁育至F3。结果　转基因能遗传且各世代转基因小鼠表型无异常 ,亦未见近交衰退现象。经不同世代... 目的　进行转基因小鼠的繁育与纯合子转基因小鼠的筛选。方法　选用致突变xylE转基因原代小鼠 31号和 9号进行传代 ,自F2 起采用全同胞交配繁育至F3。结果　转基因能遗传且各世代转基因小鼠表型无异常 ,亦未见近交衰退现象。经不同世代载体回收和转化检验表明 ,靶基因功能未因世代传递而改变 ,并从 31号系的F3中筛选出一只纯合雄鼠 ,经与非转基因雌鼠交配所产 4窝 2 8只小鼠 ,PCR Southern检测均呈阳性 ,证实为一纯合子。结论　xylE转基因能遗传 ,4个世代内便筛选出纯合子小鼠 ,极大地缩短了育种周期。 展开更多

关键词 转基因 小鼠 纯合子 染色体 繁育

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用荧光原位杂交技术检测hEPO转基因山羊染色体上外源基因的整合状况 被引量：2

7

作者 曹莹莹 王晴 +5 位作者 陈冰 吴国祥 赵建阳 陈建泉 汤家铭 成国祥 《中国比较医学杂志》 CAS 2003年第3期132-134,i001,共4页

目的　对采用受精卵显微注射方法获得的 3头hEPO转基因山羊进行检测和整合状况分析。方法　用荧光原位杂交的方法 ,以正常羊及正常人染色体标本为对照 ,通过生物素标记的探针与转基因羊染色体标本进行杂交。结果　经信号放大及DAPI染色... 目的　对采用受精卵显微注射方法获得的 3头hEPO转基因山羊进行检测和整合状况分析。方法　用荧光原位杂交的方法 ,以正常羊及正常人染色体标本为对照 ,通过生物素标记的探针与转基因羊染色体标本进行杂交。结果　经信号放大及DAPI染色后 ,3头转基因羊分别在不同染色体上各有一对明显的荧光信号 ,而对照组无信号。结论　hEPO基因在转基因山羊染色体上的整合是单位点整合 。 展开更多

关键词 荧光原位杂交技术 hEPO 转基因山羊 染色体 外源基因 染色方法

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纯合子NEO^r转基因小鼠品系的建立及鉴定 被引量：3

8

作者 曲玉秀 汤家铭 +2 位作者 连安 刘铁铮 成国祥 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2004年第2期76-80,共5页

目的　建立清洁级Neor 转基因小鼠纯合子品系。方法　通过胚胎移植生物净化方法获得 1 0只清洁级NeorF1 小鼠 ,按孟德尔遗传法则交配 ,用PCR、Southernblot杂交和交配实验检测相结合的方法筛选纯合子。结果　选育出 4只纯合子 ,并建系... 目的　建立清洁级Neor 转基因小鼠纯合子品系。方法　通过胚胎移植生物净化方法获得 1 0只清洁级NeorF1 小鼠 ,按孟德尔遗传法则交配 ,用PCR、Southernblot杂交和交配实验检测相结合的方法筛选纯合子。结果　选育出 4只纯合子 ,并建系。该纯合转基因小鼠与野生型小鼠交配制备的胎儿成纤维细胞具有G4 1 8抗性 ,可作为ES细胞基因打靶培养中的饲养层细胞。结论　通过微生物学和遗传学上对Neor 转基因小鼠进行质量控制 ,使Neor 转基因小鼠达到了清洁级 ,并建立纯合子品系。 展开更多

关键词 纯合子 Neo^r 转基因 小鼠 品系 生物净化 聚合酶链反应

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激素短处理技术在青年转基因山羊人工诱导泌乳上的应用

9

作者 吴友兵 徐旭俊 +2 位作者 王璞 何俊民 陈建泉 《中国草食动物》 CAS 2009年第3期27-30,共4页

利用外源激素短处理技术,对青年期转基因山羊(10～12月龄)进行人工诱导泌乳,并分析外源激素的处理对转基因山羊乳房发育、泌乳规律、乳汁成分、身体健康的影响,评估此技术对青年转基因山羊进行人工诱导泌乳的可行性。试验组A:8只转基因... 利用外源激素短处理技术,对青年期转基因山羊(10～12月龄)进行人工诱导泌乳,并分析外源激素的处理对转基因山羊乳房发育、泌乳规律、乳汁成分、身体健康的影响,评估此技术对青年转基因山羊进行人工诱导泌乳的可行性。试验组A:8只转基因母羊联合注射雌激素和孕酮(E2∶P4按1∶8)配以利血平进行人工诱导泌乳;试验组B:另7只转基因母羊采用E2∶P4按1∶3进行人工诱导泌乳;并且选择同龄的10只普通母山羊作为对照组C,人工诱导泌乳方案同试验组A;选择同龄的10只普通母山羊作为对照组D,人工诱导泌乳方案同试验组B。结果表明:①转基因山羊经高比例的雌激素水平(E2∶P4=1∶3)的诱导作用,乳腺发育充分,乳房饱满且内部充盈乳汁,乳房容积率是低雌激素水平组羊(E2∶P4=1∶8)的2倍;②最初1周,经高比例的雌激素水平诱导的转基因山羊产奶量是低比例的雌激素水平组的2倍,差异极显著(182 mL/d±25 mL/dvs93 mL/d±12 mL/d,P<0.01);③转基因山羊经激素诱导泌乳,在最初1周内乳汁分泌量呈先下降后逐步上升的变化规律;④通过人工激素诱导转基因山羊产生的乳汁,乳糖含量为4.35%～4.66%,乳脂含量3.71%～4.16%,蛋白质含量4.06%～4.11%,均与对照组乳汁无显著差异;⑤诱导泌乳,对山羊自身的健康无显著影响,试验后,能够恢复情期并产羔。可见外源激素人工诱导泌乳短处理技术在青年转基因山羊上应用是可行的。 展开更多

关键词 转基因山羊 诱导泌乳 外源激素

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体细胞介导制备转基因动物的新途径 被引量：1

10

作者 汤家铭 成国祥 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2002年第3期188-192,共5页

体细胞介导制备转基因动物的技术路线是在核移植技术的基础上建立起来的。它的问世不过只有四五年时间 ,但显示了其具有广泛的应用前景。本综述比较了不同制备转基因动物技术的优缺点 ,介绍了体细胞介导制备转基因动物的基本技术路线 ,... 体细胞介导制备转基因动物的技术路线是在核移植技术的基础上建立起来的。它的问世不过只有四五年时间 ,但显示了其具有广泛的应用前景。本综述比较了不同制备转基因动物技术的优缺点 ,介绍了体细胞介导制备转基因动物的基本技术路线 ,着重阐述了体细胞转染和整合细胞的克隆 。 展开更多

关键词 体细胞介导 制备 转基因动物 转染 核移植

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血管内皮细胞生长因子基因移植制备大鼠血管瘤模型 被引量：3

11

作者 刘军 宋建星 +4 位作者 邢新 吴国祥 欧阳天祥 杨超 杨志勇 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1124-1127,共4页

目的:探讨血管内皮细胞生长因子基因移植制备大鼠血管瘤模型的可行性。方法:构建MFG逆转录病毒VEGF表达质粒(pMFGVEGF),转染鼠成肌细胞,将具有高分泌VEGF的大鼠成肌细胞移植入大鼠骨骼肌。大鼠随机分成对照组(15只)和VEGF组(18只)。对... 目的:探讨血管内皮细胞生长因子基因移植制备大鼠血管瘤模型的可行性。方法:构建MFG逆转录病毒VEGF表达质粒(pMFGVEGF),转染鼠成肌细胞,将具有高分泌VEGF的大鼠成肌细胞移植入大鼠骨骼肌。大鼠随机分成对照组(15只)和VEGF组(18只)。对照组移植携带LacZ基因的成肌细胞,VEGF组移植转染有VEGF表达质粒并携带LacZ基因成肌细胞。注射部位:右腓肠肌;注射细胞数目:5×105/5μlPBS。2组按时间再各分成3亚组:C11、C24、C44,V11、V24、V44,分别于注射后第11、24、44天处死行移植部位组织学检查。结果:免疫荧光检测VEGF阳性的成肌细胞占85%～90%,ELISA法检测培养液中VEGF浓度平均为214ng/(106cell·24h)。注射后第24天注射VEGF成肌细胞的一侧鼠下肢肿大,组织学示肿大部位是由许多紊乱血管所构成的血管瘤。第44天所有VEGF注射的下肢肿胀更加明显,周径是对照肢体的2倍,表面皮肤发紫;组织学检查示VEGF注射侧肢体主要由血管瘤以及血池组成。VEGF组的免疫荧光显示此区域有单个或集聚成群的PECAM1阳性的细胞,这些细胞周围有巨噬细胞的浸润。而血管瘤相邻部位的肌肉内血管密度并没有改变(P<0.05)。V24组血标本检测不到VEGF。V44组VEGF水平为(40±21)ng/ml,而新生血管瘤内部血标本VEGF水平远远高于其全血水平。结论:VEGF基因移植方法可以产生稳定有效的大鼠血管瘤模型。 展开更多

关键词 血管内皮细胞生长因子 基因移植 血管瘤 模型 动物

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人Sox2基因的克隆表达和纯化 被引量：4

12

作者 张琦 忻珍桦 +6 位作者 蔡引凤 高云霞 沙红英 刘思国 陈建泉 张爱民 成国祥 《华中师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2008年第1期102-105,共4页

应用RT-PCR方法从人胚胎干细胞中扩增出Sox2基因,构建pET28b-Sox2表达载体.用IPTG诱导转化pET28b-Sox2表达载体的大肠杆菌BL21(DE3),并优化表达条件为37℃IPTG0.8 mmol/L诱导4 h.以Ni-NTA亲和层析法纯化Sox2重组蛋白,对变性蛋白进行柱... 应用RT-PCR方法从人胚胎干细胞中扩增出Sox2基因,构建pET28b-Sox2表达载体.用IPTG诱导转化pET28b-Sox2表达载体的大肠杆菌BL21(DE3),并优化表达条件为37℃IPTG0.8 mmol/L诱导4 h.以Ni-NTA亲和层析法纯化Sox2重组蛋白,对变性蛋白进行柱上和透析复性,复性后蛋白得率为0.7 mg/g湿菌重. 展开更多

关键词 SOX2 原核表达 纯化 复件

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应用氯化锶对小鼠卵母细胞孤雌活化的研究 被引量：9

13

作者 杨红 陈建泉 +3 位作者 刘海峰 李厚达 顾惠心 成国祥 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2003年第1期15-17,共3页

目的　探讨小鼠卵母细胞孤雌激活的最佳作用条件。方法　将MⅡ期小鼠卵母细胞随机分为 2组 ,第一组 ,将小鼠卵母细胞分别放入 2、4、6、8、10mmol ml不同浓度的氯化锶激活液中 ,作用 6h ,观察激活率及囊胚发育率。第二组 ,将小鼠卵母细... 目的　探讨小鼠卵母细胞孤雌激活的最佳作用条件。方法　将MⅡ期小鼠卵母细胞随机分为 2组 ,第一组 ,将小鼠卵母细胞分别放入 2、4、6、8、10mmol ml不同浓度的氯化锶激活液中 ,作用 6h ,观察激活率及囊胚发育率。第二组 ,将小鼠卵母细胞放入 10mmol ml氯化锶激活液中 ,分别作用 3、6、9h ,观察激活率及囊胚发育率。结果　第一组 ,激活率分别为 86 49%、82 6 1%、88 0 0 %、86 6 7%、81 18%。各组间差异无显著性。体内培养 72h回收囊胚 ,囊胚发育率分别为 0、31 42 %、43 33%、6 2 5 0 %、5 0 0 0 %。 6～ 10mmol mlSrCl2 激活液激活后囊胚发育率高于 0～ 4mmol ml(P <0 0 5 )。第二组 ,激活率分别为 82 86 %、89 6 1%、91.40 %。 72h囊胚发育率分别为 2 6 5 3 %、5 0 0 0 %、5 3 2 2 %。激活 6、9h的囊胚发育率高于激活 3h的囊胚发育率 (P <0 0 1)。结论　结果表明 ,6～ 10mmol ml的SrCl2 为卵母细胞孤雌活化的最佳作用浓度 ,6～ 9h的激活时间为最佳作用时间 ;表明SrCl2 的浓度和作用时间对小鼠卵母细胞的活化有显著的影响。 展开更多

关键词 孤雌激活 氯化锶 卵母细胞 小鼠 孤雌活化

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幼龄小鼠卵泡的超数及卵母细胞同步成熟的研究 被引量：1

14

作者 沙红英 沈晓晖 +4 位作者 陈娟 刘思国 陈建泉 张爱民 成国祥 《上海畜牧兽医通讯》 2005年第6期8-11,共4页

人工合成的雌性激素己烯雌酚可以促进出生18～20日龄左右的小鼠大量卵泡同步发育(有腔卵泡),每只小鼠可获得300枚左右的未成熟卵母细胞,并在体外成熟培养16h后,90%以上的卵母细胞排放第一极体,体外受精后2细胞的分裂率达到50%～65%,受... 人工合成的雌性激素己烯雌酚可以促进出生18～20日龄左右的小鼠大量卵泡同步发育(有腔卵泡),每只小鼠可获得300枚左右的未成熟卵母细胞,并在体外成熟培养16h后,90%以上的卵母细胞排放第一极体,体外受精后2细胞的分裂率达到50%～65%,受精卵经体内培养后,发育到囊胚的比例达到50%以上。以上结果表明,幼龄小鼠卵巢卵母细胞能在外源的雌性激素作用下大量同步发育,并能在体外成熟、受精与发育至囊胚期胚胎。该研究结果不仅为深入探讨哺乳动物卵母细胞发育及成熟机制奠定基础,更重要的是为大家畜提供了一个重要的卵母细胞的来源途径。 展开更多

关键词 卵泡 卵母细胞 颗粒细胞 己烯雌酚 体外成熟 体外受精 胚胎发育 家畜

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重组人瑞替普酶基因在山羊胎儿成纤维细胞β-酪蛋白基因座的定点整合

15

作者 王宏 沈子龙 +5 位作者 奚涛 李治国 刘红如 赵周英 吴国祥 成国祥 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期73-77,共5页

目的 :利用体细胞基因打靶技术来获得定点整合有重组人瑞替普酶 (rPA)的山羊胎儿成纤维细胞株。方法 :构建了针对山羊 β- 酪蛋白基因座的定点打靶载体 ,其上游同源臂为 β 酪蛋白启动子端同时包含其信号肽编码区长约 6 .1kb的基因组片... 目的 :利用体细胞基因打靶技术来获得定点整合有重组人瑞替普酶 (rPA)的山羊胎儿成纤维细胞株。方法 :构建了针对山羊 β- 酪蛋白基因座的定点打靶载体 ,其上游同源臂为 β 酪蛋白启动子端同时包含其信号肽编码区长约 6 .1kb的基因组片段 ,下游同源臂为 3.3kb从 β- 酪蛋白外显子 6至外显子 9的基因组片段。rPA小基因起始密码子位于 β- 酪蛋白信号肽编码区下游。将载体瞬时转染C12 7小鼠乳腺癌细胞 ,并通过激素进行诱导 ,酶联免疫吸附分析 (ELISA)检测细胞培养上清中的rPA表达量来验证载体表达功能。将载体通过电穿孔的方法转染同基因型的山羊胎儿成纤维细胞。利用G4 18和GANC进行药物筛选 ,并通过PCR和southern杂交的方法进行基因组DNA检测。结果 :获得了一株定点整合的细胞克隆 ,绝对基因打靶效率为 2× 10 7。结论 :本实验结果为后续利用核移植技术制备乳腺生物反应器提供了坚实的实验基础。 展开更多

关键词 体细胞 基因打靶 胎儿成纤维细胞 乳腺生物反应器 重组人瑞替普酶

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转人乳铁蛋白基因山羊乳对大鼠生长及代谢机能的影响 被引量：5

16

作者 王二先 徐旭俊 +3 位作者 苗晋锋 陈建泉 成国祥 杨倩 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期119-123,共5页

选用30只100 g左右清洁级SD大鼠,雌雄各半,随机均分为3组,转基因乳组每天2次灌胃转人乳铁蛋白基因(hLF)波尔山羊乳1 mL(蛋白含量0.93 g.mL-1),普通乳组灌胃未经任何处理的普通波尔山羊乳1 mL(蛋白浓度0.93 g.mL-1),生理盐水组灌胃等量... 选用30只100 g左右清洁级SD大鼠,雌雄各半,随机均分为3组,转基因乳组每天2次灌胃转人乳铁蛋白基因(hLF)波尔山羊乳1 mL(蛋白含量0.93 g.mL-1),普通乳组灌胃未经任何处理的普通波尔山羊乳1 mL(蛋白浓度0.93 g.mL-1),生理盐水组灌胃等量灭菌生理盐水;自由采食、饮水,连续15 d;颈部静脉采血致死,收集血清。结果显示:灌胃转hLF基因山羊乳显著提高了雌、雄大鼠的日增重,与生理盐水组相比差异极显著(P<0.01),与普通乳组相比差异显著(P<0.05),而普通乳组与生理盐水组相比差异不显著;灌胃转基因和普通山羊乳对其他表观及生化指标均无显著影响(P>0.05)。试验结果表明:短期灌胃转hLF基因山羊乳能够促进大鼠的生长,但对大鼠的代谢机能没有显著影响。 展开更多

关键词 人乳铁蛋白 转基因山羊乳 大鼠 代谢

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哺乳动物Prion病研究新进展 被引量：3

17

作者 朱采红 俞国华 +2 位作者 李蓓 陈建泉 成国祥 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1156-1159,共4页

关键词 PRION病 哺乳动物 传染性海绵状脑病 中枢神经系统 神经胶质细胞增生 神经细胞死亡 退行性脑病

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敲除山羊胎儿成纤维细胞中的抗体重链基因 被引量：2

18

作者 李蓓 俞慧清 +3 位作者 朱采红 谢发展 陈建泉 成国祥 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第8期899-904,共6页

在针对大动物的精确基因修饰研究中,基于体细胞的同源重组是唯一可行与有效的方法.其中,沉默基因位点的重组尤为困难.为获得抗体基因功能缺失的山羊用于人源化抗体的研究,通过体细胞同源重组技术,首次成功地获得了抗体基因敲除的山羊胎... 在针对大动物的精确基因修饰研究中,基于体细胞的同源重组是唯一可行与有效的方法.其中,沉默基因位点的重组尤为困难.为获得抗体基因功能缺失的山羊用于人源化抗体的研究,通过体细胞同源重组技术,首次成功地获得了抗体基因敲除的山羊胎儿成纤维细胞株,该细胞株可用于体细胞克隆制备抗体基因功能缺失的转基因山羊.以35日龄的山羊胎儿成纤维细胞(GEF88)基因组DNA为模板,扩增山羊抗体重链J-Cμ基因作为同源臂,构建了同基因型的正负筛选打靶载体GTIgH.将此打靶载体经电穿孔的方法转染GEF88细胞,并通过0.8mg/L的嘌呤霉素进行药物筛选,获得了362个抗性细胞克隆,PCR、测序及DNA印迹鉴定结果显示,其中的GT211抗性细胞克隆为中靶细胞,该细胞克隆中的抗体重链基因的一条等位基因已被成功敲除. 展开更多

关键词 基因敲除 体细胞基因打靶 山羊胎儿成纤维细胞 抗体重链基因(IgH) 沉默基因

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用粘粒载体构建山羊基因组文库 被引量：3

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作者 张大鹏 石强 +3 位作者 刘铁铮 杨利国 吴国祥 成国祥 《江苏农业学报》 CSCD 2003年第2期104-108,共5页

为配合山羊乳腺生物反应器的研究,构建定点整合'打靶框架'和筛选同源基因,用SuperCosl建立了山羊基因组粘粒文库.本试验共获得3.62×105个克隆,阳性克隆率达到97.5%,插入片段大小为34～45kb,平均为40kb.用5对引物分别对文库... 为配合山羊乳腺生物反应器的研究,构建定点整合'打靶框架'和筛选同源基因,用SuperCosl建立了山羊基因组粘粒文库.本试验共获得3.62×105个克隆,阳性克隆率达到97.5%,插入片段大小为34～45kb,平均为40kb.用5对引物分别对文库做PCR分析,均有特异性扩增. 展开更多

关键词 粘粒载体 文库构建 山羊 基因组文库

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转hLF基因山羊血液生理生化指标检测分析 被引量：7

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作者 乔娜 干驰 +3 位作者 朱佳琪 徐旭俊 陈建泉 成国祥 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期483-487,共5页

[目的]本试验旨在研究人乳铁蛋白(human lactoferrin,h LF)基因的整合对转基因山羊代谢和血液学指标的影响。[方法]选择出生日期相近,饲养条件相同,健康、无病的转h LF基因山羊(试验组)30只,非转基因山羊(对照组)20只,公、母各半,分别... [目的]本试验旨在研究人乳铁蛋白(human lactoferrin,h LF)基因的整合对转基因山羊代谢和血液学指标的影响。[方法]选择出生日期相近,饲养条件相同,健康、无病的转h LF基因山羊(试验组)30只,非转基因山羊(对照组)20只,公、母各半,分别在不同时期检测血液常规指标白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)等,血液生化指标直接胆红素(DBIL)、肌酐(CREA)、甘油三酯(TG)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、葡萄糖(GLU)、尿素等,并对指标进行品种(转h LF基因羊和非转基因羊)和性别间的比较分析。[结果]各时期转h LF基因羊与正常非转基因羊的白细胞数、红细胞数、血红蛋白含量和红细胞压积差异均不显著(P>0.05),18月龄雄性转h LF基因羊总蛋白水平显著高于非转基因羊(P<0.05)。各时期性别间的比较结果显示:直接胆红素、甘油三酯、丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶和尿素等指标在不同性别之间存在显著差异(P<0.05),其他各项生化指标在各时期的转基因羊和非转基因羊之间、性别之间差异均不显著(P>0.05)。[结论]h LF基因对山羊的代谢和血液学指标无显著影响。 展开更多

关键词 人乳铁蛋白 转基因 山羊 血液常规指标 血液生化指标

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