分化早期小儿急性白血病细胞免疫球蛋白和T细胞受体基因结构的变化 被引量：3

1

作者 钱关祥 仇一华 +3 位作者 徐铿 林梓 应大明 陈诗书 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1991年第2期79-84,共6页

从29例免疫分型的小儿急性白血病中选出髓过氧化物酶染色阴性和不与细胞系相关或成熟细胞系相关的单克隆抗体反应的6例白血病细胞,进一步作免疫球蛋白(包括重链和κ轻链)和T细胞受体(包括δ、γ、β)基因结构的分析。所有6例均有IgH基... 从29例免疫分型的小儿急性白血病中选出髓过氧化物酶染色阴性和不与细胞系相关或成熟细胞系相关的单克隆抗体反应的6例白血病细胞,进一步作免疫球蛋白(包括重链和κ轻链)和T细胞受体(包括δ、γ、β)基因结构的分析。所有6例均有IgH基因的重排,提示这些白血病细胞是β细胞来源。两例CD_(10)阴性和白病细胞.κ链基因没有重排,其中一例的TCRδ、γ、β基因也都处于胚系,另一例的TCRβ处于胚系。在CD_(10)阳性白血病细胞中,其中两例κ链基因丢失,TCR基因结构都有不同程度的变化(重排或丢失)。这些结果可能提示在CD_(10)阳性白血病细胞中能产生功能性IgH的重排,并可导致IgL和TCR基因结构的变化。 展开更多

关键词 白血病 免疫球蛋白 T细胞受体

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绿色荧光蛋白标记基因在肿瘤研究中的应用 被引量：5

2

作者 于丽莉 陈诗书 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1999年第2期81-82,共2页

绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)来源于海洋生物水母,近年来在生物化学和细胞生物学中成为最广泛应用的标记性蛋白质之一.GFP的cDNA约740bp,它编码238个氨基酸残基.在激发光下,GFP肽链内部第65～67位的丝氨酸-酪氨酸-甘氨... 绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)来源于海洋生物水母,近年来在生物化学和细胞生物学中成为最广泛应用的标记性蛋白质之一.GFP的cDNA约740bp,它编码238个氨基酸残基.在激发光下,GFP肽链内部第65～67位的丝氨酸-酪氨酸-甘氨酸通过自身环化和氧化形成一个发色基团,有效地发射内部荧光且易于观察.这种特性使其具有吸引力而且有很大的应用价值.GFP的晶体结构分析提供了一种很好的机会去了解和使用蛋白质结构和光谱功能之间的关系.由于GFP的克隆基因能在异源组织中表达产生荧光,90年代初提出了GFP作为报告分子可用于生物学研究领域.GFP作为报告基因的特点和优势:①野生型GFP在395nm波长处可吸收一个激发光,在510nm发射一个绿色荧光,只要有足够的表达,在长紫外波长或蓝光照射下,无需引入别的物质,在活体内通过显微镜就能清晰地观察到.而其它一些报告基因如氯霉素乙酰转移酶Ⅱ(CAT)、β-半乳糖苷酶(β-gal)、荧光素酶(Luc) 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白 基因 标记 肿瘤转移 肿瘤发生

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α-TNF修饰肝癌细胞辐射后增殖性和致瘤性的改变 被引量：2

3

作者 徐荣婷 朱敏 +3 位作者 张腾飞 胡亮 吴兆平 陈诗书 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1997年第3期182-184,共3页

将含α－肿瘤坏死因于互补DNA（α－TNFcDNA）的缺陷型逆转录病毒感染人肝癌细胞株（HHCL），经新霉素衍生物（G418）筛选，获得HHCL－TNF基因修饰株，用不同强度60Co辐射后，以不同浓度，分别接种BALB／C裸鼠，定期观察接种处肿瘤的生... 将含α－肿瘤坏死因于互补DNA（α－TNFcDNA）的缺陷型逆转录病毒感染人肝癌细胞株（HHCL），经新霉素衍生物（G418）筛选，获得HHCL－TNF基因修饰株，用不同强度60Co辐射后，以不同浓度，分别接种BALB／C裸鼠，定期观察接种处肿瘤的生长情况。发现：（1）未经60Co辐射的HHCL细胞致瘤性明显高于60Co辐射组（P＜0．01）；（2）未经60Co辐射的HHCL－TNF细胞的致瘤性明显高于60Co辐射组（P＜0．01），但不同辐射剂量组间（40Gy～100Gy）无差异；③未经60Co辐射的HHCL细胞的致瘤性明显高于未经60Co辐射的HHCL－TNF组（P＜0．01）。结果显示：经60Co辐射后HHCL和HHCL－TNF细胞的致瘤性均基本消失，为"肿瘤疫苗"用于临床治疗提供参考依据。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子 ^60CO辐射 肿瘤疫苗 肝肿瘤

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H-2K^b cDNA的克隆及其在多种真核细胞中的表达 被引量：2

4

作者 钱书兵 钱关祥 陈诗书 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1999年第3期193-196,200,共5页

目的克隆H－2KbcDNA及研究其在多种真核细胞中的表达。方法RT－PCR法扩增H－2KbcDNA，克隆入双顺反子逆转录病毒载体pGCEN，PA317包装出重组病毒后，分别感染NIH3T3、COS7及MM45T．Li，PCR和RT－PCR分析目的基因表达，FACS分析H－2Kb在... 目的克隆H－2KbcDNA及研究其在多种真核细胞中的表达。方法RT－PCR法扩增H－2KbcDNA，克隆入双顺反子逆转录病毒载体pGCEN，PA317包装出重组病毒后，分别感染NIH3T3、COS7及MM45T．Li，PCR和RT－PCR分析目的基因表达，FACS分析H－2Kb在细胞膜上的表达。结果以双顺反子逆转录病毒载体pGCEN介导，分别建立了H－2Kb基因转导细胞：NIH3T3／Kb、COS7／Kb及MM45T．Li／Kb。PCR结果表明目的基因已存在于宿主细胞中，RT－PCR结果表明目的基因已获得正确表达。FACS结果表明H－2Kb分子已稳定表达在细胞膜表面。结论MHC分子基因在多种真核细胞中的表达为研究抗原递呈及抗肿瘤作用提供了基础。 展开更多

关键词 H-2K^b基因 克隆 逆转录病毒载体 真核表达 CDNA

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NIH3T3细胞恶变早期相关新基因的鉴定与功能分析 被引量：1

5

作者 杨劲松 郑新民 陈诗书 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期173-181,共9页

利用已建立的蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)诱导表达模型寻找与PTPα高表达导致NIH3T3细胞恶变早期相关的新基因 ,探索肿瘤早期形成的机理 .诱导PTPα表达 2 4h ,用差异显示逆转录PCR获得 65条差异片段 ,利用生物信息学方法分析这些差异... 利用已建立的蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)诱导表达模型寻找与PTPα高表达导致NIH3T3细胞恶变早期相关的新基因 ,探索肿瘤早期形成的机理 .诱导PTPα表达 2 4h ,用差异显示逆转录PCR获得 65条差异片段 ,利用生物信息学方法分析这些差异片段 .发现其中含有 2 9种已知基因 ,12种已知ESTs ,6种未知ESTs .对EST片段 ,利用芯片拼接 (insilicocloning)的方法获得 2条新的带有完整开放阅读框 (ORF)的全长cDNA .利用生物信息学方法分析其同源性、二级结构、功能模体(motif)、保守区、结构域和家族分布情况 ,并且对这 2条新全长cDNA进行部分克隆测序鉴定 ,用半定量RT PCR实验证实其差异表达的真实性 .结果表明 ,这 2条全长cDNA为新基因 (GenBankAY0 35 2 12 ,AY0 35 2 13) ,它们在PTPα诱导表达前后确实存在差异表达 ,并与细胞能量代谢及酶功能相关 。 展开更多

关键词 蛋白质酪氨酸磷酸酶α NIH3T3细胞恶变 肿瘤 早期形成机理 基因 鉴定 功能分析 DDRT-PCR 生物信息学

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复制缺陷型腺病毒载体介导hVEGF cDNA在C2C12和NIH3T3细胞中的表达 被引量：1

6

作者 孙欲晓 陈诗书 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期704-709,共6页

为提高hVEGFcDNA在心肌中的表达 ,降低在其它组织中表达可能产生的不良反应 ,用PCR法得到人磷酸肌酸激酶 (MCK)增强子和CMV核心启动子 .利用克隆技术构建了含双拷贝MCK增强子 (m)和人巨细胞病毒 (CMV)核心启动子 (c)的嵌合启动子 (mmc) ... 为提高hVEGFcDNA在心肌中的表达 ,降低在其它组织中表达可能产生的不良反应 ,用PCR法得到人磷酸肌酸激酶 (MCK)增强子和CMV核心启动子 .利用克隆技术构建了含双拷贝MCK增强子 (m)和人巨细胞病毒 (CMV)核心启动子 (c)的嵌合启动子 (mmc) ,构建真核表达质粒pK3 mmcLacZ ,制备受mmc嵌合启动子调控的重组腺病毒Ad mmcVEGF .经X gal染色、β 半乳糖苷酶定量分析、RT PCR、hVEGFELISA定量分析、VEGF活性测定等研究表明 。 展开更多

关键词 人磷酸肌酸激酶增强子 嵌合启动子 肌细胞 特异性表达 血管内皮生长因子 腺病毒载体 心肌缺血 基因治疗 复制

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透析膜和内毒素对单个核细胞白细胞介素-1受体拮抗物产生的协同作用

7

作者 丁峰 顾勇 +3 位作者 薛骏 郑秀娟 赵涵芳 林善锬 《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第3期223-226,T002,共5页

目的　研究不同透析膜和内毒素对尿毒症患者外周血单个核细胞 (PBMC)白细胞介素 1受体拮抗物(IL 1Ra)基因转录和IL 1Ra合成的影响。方法　细胞和不同透析膜孵育后采用细胞原位杂交检测mRNA水平 ,PBMC培养后采用酶联免疫吸附试验法测定细... 目的　研究不同透析膜和内毒素对尿毒症患者外周血单个核细胞 (PBMC)白细胞介素 1受体拮抗物(IL 1Ra)基因转录和IL 1Ra合成的影响。方法　细胞和不同透析膜孵育后采用细胞原位杂交检测mRNA水平 ,PBMC培养后采用酶联免疫吸附试验法测定细胞IL 1Ra水平。结果　不同透析膜孵育后的PBMC在未用内毒素刺激情况下IL 1RamRNA水平有显著差别 ,但IL 1Ra合成量无差异 ,其中正常人仅有极微量IL 1Ra合成 ;内毒素刺激下的PBMCIL 1Ra合成量明显高于未刺激组 ,与铜仿膜孵育后的合成量明显高于聚砜膜孵育后和对照组。结论　内毒素和透析膜对正常人和尿毒症患者PBMC的IL 展开更多

关键词 透析膜 内毒素 白细胞介素-1受体拮抗物 尿毒症

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人胃癌组织和对应正常胃粘膜cDNA文库的构建

8

作者 赵涵芳 章有章 +1 位作者 程枫 陈诗书 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1993年第2期114-119,共6页

作者从一例人高转移型原发性胃癌组织及其对应的正常胃粘膜中分别提取总RNA和分离多聚(A)^+RNA,进而合成cDNA。cDNA第一条链合成效率前者为58.8%,后者为29.8%;第二条链合成效率前者为98.3%,后者为93.3%。cDNA分子大小在0.5～8Kb之间。c... 作者从一例人高转移型原发性胃癌组织及其对应的正常胃粘膜中分别提取总RNA和分离多聚(A)^+RNA,进而合成cDNA。cDNA第一条链合成效率前者为58.8%,后者为29.8%;第二条链合成效率前者为98.3%,后者为93.3%。cDNA分子大小在0.5～8Kb之间。cDNA接上含有NotI切点和EcoRI粘性末端的接头,重组到经EcoRI酶解5端脱磷酸化的pT7T318U质粒上,转化大肠杆菌NM522,构建了二个cDNA文库,文库的容量分别为1.2×10~5与1.0×10~5重组子,重组率均为80%,克隆效率分别为2.4×10~6克隆/lμg cDNA与2.0×10~6克降/lμg cDNA,插入片段的大小在0.5Kb～4Kb之间。 展开更多

关键词 CDNA文库 胃肿瘤 胃粘膜

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人β2微球蛋白基因启动子的克隆及其在P815细胞中的活性研究 被引量：5

9

作者 张兴黔 梅文瀚 钱关祥 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期672-675,共4页

目的:克隆人β2微球蛋白(β2m)基因启动子,并研究其在小鼠肥大细胞瘤细胞P815中对下游报告基因的启动活性。方法:用PCR法从基因组内扩增β2m基因启动子。通过基因重组的方法,构建含此启动子的EGFP基因真核表达载体,然后分别瞬时和稳定转... 目的:克隆人β2微球蛋白(β2m)基因启动子,并研究其在小鼠肥大细胞瘤细胞P815中对下游报告基因的启动活性。方法:用PCR法从基因组内扩增β2m基因启动子。通过基因重组的方法,构建含此启动子的EGFP基因真核表达载体,然后分别瞬时和稳定转染P815细胞。通过RT-PCR、荧光显微镜摄像和流式细胞术分析,观察IFN-γ作用前后EGFP的表达。结果:从基因组内扩增出302bp的人β2m基因的启动子,成功地构建了含此启动子的真核报告载体。RT-PCR的结果表明,IFN-γ对启动子的活性具有诱导作用,且呈浓度依赖性。流式细胞术的结果显示,在5×105U/LIFN-γ作用下,尽管表达EGFP的细胞数量没有差异,但刺激组EGFP的表达强度是未刺激组的2倍。结论:人β2m基因启动子在小鼠肥大细胞瘤细胞P815中具有高度的启动活性。通过该启动子中所含干扰素刺激反应元件(ISRE),可在IFN-γ诱导作用下调控下游目的基因的表达。 展开更多

关键词 Β2微球蛋白 启动子 IFN-1

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应用聚合酶链反应检测婴儿肝炎综合征患儿CMV感染:附112例分析

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作者 董枫 程新建 陈诗书 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1993年第3期158-158,共1页

利用聚合酶链反应法对112名嬰儿肝炎综合征(IHS)患儿尿中人巨细胞病毒进行检测,结果75名患儿尿中带有该病毒(占66.96%),34名正常嬰幼儿仅5名尿中检出病毒(占14.70%),两组有显著差异(P<0.01)。本法检测嬰儿尿中巨细胞病毒,为一种快速... 利用聚合酶链反应法对112名嬰儿肝炎综合征(IHS)患儿尿中人巨细胞病毒进行检测,结果75名患儿尿中带有该病毒(占66.96%),34名正常嬰幼儿仅5名尿中检出病毒(占14.70%),两组有显著差异(P<0.01)。本法检测嬰儿尿中巨细胞病毒,为一种快速、简便和可靠的IHS诊断方法。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 肝炎 综合征 CMV

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利用Taq DNA聚合酶对PCR产物直接进行顺序分析

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作者 魏洋 卢健 陈诗书 《生物化学杂志》 CSCD 1991年第4期468-475,共8页

Taq DNA聚合酶具有反应速度快、温度作用范围广及良好的续进性等特点,可视为一种理想的DNA顺序分析酶。本文首先对非对称性PCR扩增过程中单、双链DNA产物的积累情况进行了分析,然后采用标记延伸二步法,对Taq DNA聚合酶的性质及影响因素... Taq DNA聚合酶具有反应速度快、温度作用范围广及良好的续进性等特点,可视为一种理想的DNA顺序分析酶。本文首先对非对称性PCR扩增过程中单、双链DNA产物的积累情况进行了分析,然后采用标记延伸二步法,对Taq DNA聚合酶的性质及影响因素进行分析。为进一步改进Taq DNA聚合酶测序的方法,本反应建立了“Klenow-型”的直接掺入标记同位素测序法,即在反应液中加入与标记核苷酸相应的一定浓度的冷dNTP。此法不但解决了二步法中引物后部分DNA顺序无法读出的缺点,而且简化了反应步骤,亦能得到令人满意的顺序分析结果,每次可读出至少400碱基的序列。 展开更多

关键词 PCR扩增 DNA聚合酶 顺序分析

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细胞内RNA的原位杂交

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作者 王敦瑞 陈季 +2 位作者 汪肖钢 于丽莉 陈诗书 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1989年第4期284-286,共3页

本文介绍用原位杂交方法测定细胞内的RNA。该方法特异性较高,能保持细胞曲完整性。我们测定了不同细胞的rRNA基因的转录和原癌基因c-myc,c-H-rgs的转录,取得了较满意的结果。RNase处理细胞或质粒pBR322作探针,细胞中显影颗粒很少。本文... 本文介绍用原位杂交方法测定细胞内的RNA。该方法特异性较高,能保持细胞曲完整性。我们测定了不同细胞的rRNA基因的转录和原癌基因c-myc,c-H-rgs的转录,取得了较满意的结果。RNase处理细胞或质粒pBR322作探针,细胞中显影颗粒很少。本文对原位杂交方法学进行了初步的讨论。 展开更多

关键词 RNA 细胞原位杂交

全文增补中