多媒体在生物化学教学中的应用 被引量：12

1

作者 厉兴君 章有章 +1 位作者 夏爱娣 钱关祥 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2002年第3期271-273,共3页

目的介绍多媒体课件和网络资源进行生化的教学。方法 利用网络资源丰富教学内容并制作多媒体课件,使教学直观,易于理解。结果 多媒体课件使枯燥、深奥的内容得以形象演示,图文并茂,产生动态效果;提高了教学效果。结论 多媒体课件的使用... 目的介绍多媒体课件和网络资源进行生化的教学。方法 利用网络资源丰富教学内容并制作多媒体课件,使教学直观,易于理解。结果 多媒体课件使枯燥、深奥的内容得以形象演示,图文并茂,产生动态效果;提高了教学效果。结论 多媒体课件的使用提高了生化教学的效果,网络的发展也为生化教学提供了丰富的资源。 展开更多

关键词 多媒体 生物化学 教学 应用

在线阅读 下载PDF 职称材料

核骨架基质结合区(S/MAR)提高逆转录病毒载体介导egfp在NIH3T3细胞中的表达 被引量：10

2

作者 戴冰冰 梅文瀚 +2 位作者 王家敏 钱关祥 卢健 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期24-30,共7页

为减轻逆转录病毒介导的外源基因的沉默 ,进一步提高逆转录病毒MFG载体介导的转移基因的表达 ,将人 β INF基因上游 80 0bp的核骨架基质结合区 (S MAR)分别反向和正向克隆至MFG载体 3′LTR上游 ,以egfp为报告基因观察S MAR对egfp基因表... 为减轻逆转录病毒介导的外源基因的沉默 ,进一步提高逆转录病毒MFG载体介导的转移基因的表达 ,将人 β INF基因上游 80 0bp的核骨架基质结合区 (S MAR)分别反向和正向克隆至MFG载体 3′LTR上游 ,以egfp为报告基因观察S MAR对egfp基因表达水平以及对病毒滴度的影响 .结果显示 :反向和正向的S MAR在瞬时表达的情况都不能提高egfp的表达 ,但在稳定整合的情况下反向S MAR可明显提高egfp在NIH3T3细胞内的表达 ,而正向的S MAR作用不明显 ,另外反向S MAR可明显提高MFG逆转录病毒载体的滴度约 5倍 ;因此改造后的MFG逆转录病毒载体将能更好地用来介导外源治疗基因的表达 .同时还观察到 ,同一个载体骨架在稳定表达的情况下 ,磷酸钙介导较逆转录病毒载体介导的表达水平高 . 展开更多

关键词 核骨架基质结合区 逆转录病毒载体 基因沉默

在线阅读 下载PDF 职称材料

用RT－PCR方法检测烧伤愈合时生长因子的表达 被引量：17

3

作者 赵涵芳 程枫 章有章 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 1995年第S1期37-42,共6页

作者采用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测烧伤愈合过程中细胞生长因子ＴＧＦ－α，ＴＧＦ－β１及ＰＤＧＦ表达量的变化。实验特点有二：１．烧伤愈合时渗出液细胞总ＲＮＡ用（ＡＧＰＣ）一步法提取；２．逆转录反应后用二对引物同时在一反应体系... 作者采用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测烧伤愈合过程中细胞生长因子ＴＧＦ－α，ＴＧＦ－β１及ＰＤＧＦ表达量的变化。实验特点有二：１．烧伤愈合时渗出液细胞总ＲＮＡ用（ＡＧＰＣ）一步法提取；２．逆转录反应后用二对引物同时在一反应体系里进行ＰＣＲ反应，有助于准确检测生长因子基因表达量变化。 展开更多

关键词 RNA提取 RT-PCR 生长因子基因表达 烧伤愈合

在线阅读 下载PDF 职称材料

PI3KγmRNA 3′非翻译区可能存在基因表达负调控区 被引量：5

4

作者 戴冰冰 卢健 +3 位作者 王家敏 梅文瀚 王楚 钱关祥 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期630-635,共6页

为探索人磷脂酰肌醇 3 激酶γ(phosphoinositide 3 kinasePI3Kγ)基因 3′端非翻译区内AU富含区是否在基因表达调控中起作用 ,首先通过生物信息学分析发现在其 3′端非翻译区 (UTR)内存在0 9kb的AU富含区 ,其中包括 4个AU富含元件 ,以... 为探索人磷脂酰肌醇 3 激酶γ(phosphoinositide 3 kinasePI3Kγ)基因 3′端非翻译区内AU富含区是否在基因表达调控中起作用 ,首先通过生物信息学分析发现在其 3′端非翻译区 (UTR)内存在0 9kb的AU富含区 ,其中包括 4个AU富含元件 ,以及 1个与众多基因非翻译区高度同源的长 130个碱基的区域 .将AU富含区插入报告基因egfp的下游构建pcDNA3 egfp AUR表达载体 .将表达载体转导NIH 3T3,74 0 2及K5 6 2细胞 ,流式细胞检测egfp的表达情况 .PI3Kγ基因 3′非翻译区AU富含区可显著降低egfp的表达 2～ 3倍 (P <0 0 1) .利用放线菌素D阻断RNA转录后 ,Northern印迹分析结果显示egfp AURmRNA较egfpmRNA不稳定 .实验结果提示 ,PI3Kγ基因 3′非翻译区AU富含区内可能存在转录后水平的基因表达负调控区 。 展开更多

关键词 基因表达 负调控区 转录后调控 磷脂酰肌醇3—激酶γ基因 3′非翻译区

在线阅读 下载PDF 职称材料

粘附分子P选择素在狼疮性肾炎中的作用 被引量：12

5

作者 周同 李晓 +3 位作者 郝翠兰 姚建 傅秀兰 程枫 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1998年第6期441-443,共3页

采用酶联免疫吸附法、免疫组化及原位杂交检测35例狼疮性肾炎(LN)患者血浆和肾组织中 P 选择素表达水平。结果表明 LN 患者血浆中 P 选择素水平显著高于正常人,其中肾病综合征组和肾功能不全组水平显著高于轻型组和慢性肾炎组;P 选择素... 采用酶联免疫吸附法、免疫组化及原位杂交检测35例狼疮性肾炎(LN)患者血浆和肾组织中 P 选择素表达水平。结果表明 LN 患者血浆中 P 选择素水平显著高于正常人,其中肾病综合征组和肾功能不全组水平显著高于轻型组和慢性肾炎组;P 选择素在肾组织中广泛表达,且在Ⅳ型和Ⅴ型 LN 肾小球中表达水平明显高于Ⅱ型和Ⅲ型,而它们在肾小管、肾间质的表达水平与小管间质病变程度密切相关。提示血浆和肾组织中 P选择素表达水平可成为判断狼疮性肾炎严重程度及预后的的指标。 展开更多

关键词 狼疮性肾炎 P选择素 粘附分子

在线阅读 下载PDF 职称材料

分化早期小儿急性白血病细胞免疫球蛋白和T细胞受体基因结构的变化 被引量：3

6

作者 钱关祥 仇一华 +3 位作者 徐铿 林梓 应大明 陈诗书 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1991年第2期79-84,共6页

从29例免疫分型的小儿急性白血病中选出髓过氧化物酶染色阴性和不与细胞系相关或成熟细胞系相关的单克隆抗体反应的6例白血病细胞,进一步作免疫球蛋白(包括重链和κ轻链)和T细胞受体(包括δ、γ、β)基因结构的分析。所有6例均有IgH基... 从29例免疫分型的小儿急性白血病中选出髓过氧化物酶染色阴性和不与细胞系相关或成熟细胞系相关的单克隆抗体反应的6例白血病细胞,进一步作免疫球蛋白(包括重链和κ轻链)和T细胞受体(包括δ、γ、β)基因结构的分析。所有6例均有IgH基因的重排,提示这些白血病细胞是β细胞来源。两例CD_(10)阴性和白病细胞.κ链基因没有重排,其中一例的TCRδ、γ、β基因也都处于胚系,另一例的TCRβ处于胚系。在CD_(10)阳性白血病细胞中,其中两例κ链基因丢失,TCR基因结构都有不同程度的变化(重排或丢失)。这些结果可能提示在CD_(10)阳性白血病细胞中能产生功能性IgH的重排,并可导致IgL和TCR基因结构的变化。 展开更多

关键词 白血病 免疫球蛋白 T细胞受体

在线阅读 下载PDF 职称材料

小鼠Egr-1基因启动子的克隆及其辐射诱导基因表达 被引量：6

7

作者 魏道严 陈诗书 王中和 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2000年第4期326-329,共4页

研究克隆小鼠Egr 1基因启动子及其辐射诱导基因表达特性。方法 :用合成的一对引物 ,以BALB c小鼠基因组为模板 ,扩增出 44 9bp大小含 6个CC(A T) 6 GG基序的序列 ,通过亚克隆技术分别将其插入pBluescriptⅡ测序载体和pHGFP S6 5T报告载... 研究克隆小鼠Egr 1基因启动子及其辐射诱导基因表达特性。方法 :用合成的一对引物 ,以BALB c小鼠基因组为模板 ,扩增出 44 9bp大小含 6个CC(A T) 6 GG基序的序列 ,通过亚克隆技术分别将其插入pBluescriptⅡ测序载体和pHGFP S6 5T报告载体中。利用测序载体对克隆的DNA序列进行分析 ,报告质粒载体经Li pofecTAMINE脂质体介导转染COS 7细胞后给予γ射线照射或H2 O2 处理 ,用流式细胞仪观察GFP表达阳性细胞数。结果 :PCR扩增的DNA片段经测序证实与文献报道完全一致 ,报告质粒转细胞实验结果提示 ,照射或H2 O2 处理可经Egr 1基因启动子而诱导GFP(绿色荧光蛋白 )的表达。结论 :成功地克隆了Egr 1基因启动子 ,经照射能诱导报告基因GFP的表达 。 展开更多

关键词 启动子 EGR-1基因 辐射诱导 肿瘤 基因治疗

在线阅读 下载PDF 职称材料

绿色荧光蛋白标记基因在肿瘤研究中的应用 被引量：5

8

作者 于丽莉 陈诗书 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1999年第2期81-82,共2页

绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)来源于海洋生物水母,近年来在生物化学和细胞生物学中成为最广泛应用的标记性蛋白质之一.GFP的cDNA约740bp,它编码238个氨基酸残基.在激发光下,GFP肽链内部第65～67位的丝氨酸-酪氨酸-甘氨... 绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)来源于海洋生物水母,近年来在生物化学和细胞生物学中成为最广泛应用的标记性蛋白质之一.GFP的cDNA约740bp,它编码238个氨基酸残基.在激发光下,GFP肽链内部第65～67位的丝氨酸-酪氨酸-甘氨酸通过自身环化和氧化形成一个发色基团,有效地发射内部荧光且易于观察.这种特性使其具有吸引力而且有很大的应用价值.GFP的晶体结构分析提供了一种很好的机会去了解和使用蛋白质结构和光谱功能之间的关系.由于GFP的克隆基因能在异源组织中表达产生荧光,90年代初提出了GFP作为报告分子可用于生物学研究领域.GFP作为报告基因的特点和优势:①野生型GFP在395nm波长处可吸收一个激发光,在510nm发射一个绿色荧光,只要有足够的表达,在长紫外波长或蓝光照射下,无需引入别的物质,在活体内通过显微镜就能清晰地观察到.而其它一些报告基因如氯霉素乙酰转移酶Ⅱ(CAT)、β-半乳糖苷酶(β-gal)、荧光素酶(Luc) 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白 基因 标记 肿瘤转移 肿瘤发生

在线阅读 下载PDF 职称材料

α-TNF修饰肝癌细胞辐射后增殖性和致瘤性的改变 被引量：2

9

作者 徐荣婷 朱敏 +3 位作者 张腾飞 胡亮 吴兆平 陈诗书 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1997年第3期182-184,共3页

将含α－肿瘤坏死因于互补DNA（α－TNFcDNA）的缺陷型逆转录病毒感染人肝癌细胞株（HHCL），经新霉素衍生物（G418）筛选，获得HHCL－TNF基因修饰株，用不同强度60Co辐射后，以不同浓度，分别接种BALB／C裸鼠，定期观察接种处肿瘤的生... 将含α－肿瘤坏死因于互补DNA（α－TNFcDNA）的缺陷型逆转录病毒感染人肝癌细胞株（HHCL），经新霉素衍生物（G418）筛选，获得HHCL－TNF基因修饰株，用不同强度60Co辐射后，以不同浓度，分别接种BALB／C裸鼠，定期观察接种处肿瘤的生长情况。发现：（1）未经60Co辐射的HHCL细胞致瘤性明显高于60Co辐射组（P＜0．01）；（2）未经60Co辐射的HHCL－TNF细胞的致瘤性明显高于60Co辐射组（P＜0．01），但不同辐射剂量组间（40Gy～100Gy）无差异；③未经60Co辐射的HHCL细胞的致瘤性明显高于未经60Co辐射的HHCL－TNF组（P＜0．01）。结果显示：经60Co辐射后HHCL和HHCL－TNF细胞的致瘤性均基本消失，为"肿瘤疫苗"用于临床治疗提供参考依据。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子 ^60CO辐射 肿瘤疫苗 肝肿瘤

在线阅读 下载PDF 职称材料

绿色荧光蛋白GFP在转化细胞和肿瘤细胞中的表达 被引量：5

10

作者 于丽莉 陈诗书 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2000年第5期408-411,共4页

目的在肿瘤基因治疗研究中建立一个用绿色荧光蛋白 (greenfluorescentprotein ,GFP)为标记基因的合适条件。　方法用带有GFP突变体的质粒转染到表达细胞 ,观察GFP瞬时表达的情况 :1 直接测定GFP在COS- 7细胞中的表达并观察表达的稳定性... 目的在肿瘤基因治疗研究中建立一个用绿色荧光蛋白 (greenfluorescentprotein ,GFP)为标记基因的合适条件。　方法用带有GFP突变体的质粒转染到表达细胞 ,观察GFP瞬时表达的情况 :1 直接测定GFP在COS- 7细胞中的表达并观察表达的稳定性 ;2 比较不同启动子驱动的 pcDNA3 - EGFP和 pSVK3 -S6 5T两种质粒在不同肿瘤细胞中的转染效率 ;3 用LacZ基因与GFP基因共转染 48h后 ,通过FACS分选测定两种基因在同一细胞中的表达情况。　结果在不同条件下的活细胞中有GFP基因表达 ,且表达具有稳定性 ,表达持续约 2周左右 ;CMV启动子和SV4 0 启动子调控的GFP对不同肿瘤细胞株的转染效率有差异。当两种基因共转染后用FACS分选 ,选出GFP细胞带有LacZ基因细胞在 1∶4时可达 85 %以上。　结论通过GFP表达可连续而直接地观察活细胞中的基因表达 ,利用GFP可快速地挑选带有靶基因的细胞。 展开更多

关键词 GFP表达 标记基因 肿瘤 基因治疗 绿色荧光蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

H-2K^b cDNA的克隆及其在多种真核细胞中的表达 被引量：2

11

作者 钱书兵 钱关祥 陈诗书 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1999年第3期193-196,200,共5页

目的克隆H－2KbcDNA及研究其在多种真核细胞中的表达。方法RT－PCR法扩增H－2KbcDNA，克隆入双顺反子逆转录病毒载体pGCEN，PA317包装出重组病毒后，分别感染NIH3T3、COS7及MM45T．Li，PCR和RT－PCR分析目的基因表达，FACS分析H－2Kb在... 目的克隆H－2KbcDNA及研究其在多种真核细胞中的表达。方法RT－PCR法扩增H－2KbcDNA，克隆入双顺反子逆转录病毒载体pGCEN，PA317包装出重组病毒后，分别感染NIH3T3、COS7及MM45T．Li，PCR和RT－PCR分析目的基因表达，FACS分析H－2Kb在细胞膜上的表达。结果以双顺反子逆转录病毒载体pGCEN介导，分别建立了H－2Kb基因转导细胞：NIH3T3／Kb、COS7／Kb及MM45T．Li／Kb。PCR结果表明目的基因已存在于宿主细胞中，RT－PCR结果表明目的基因已获得正确表达。FACS结果表明H－2Kb分子已稳定表达在细胞膜表面。结论MHC分子基因在多种真核细胞中的表达为研究抗原递呈及抗肿瘤作用提供了基础。 展开更多

关键词 H-2K^b基因 克隆 逆转录病毒载体 真核表达 CDNA

在线阅读 下载PDF 职称材料

NIH3T3细胞恶变早期相关新基因的鉴定与功能分析 被引量：1

12

作者 杨劲松 郑新民 陈诗书 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期173-181,共9页

利用已建立的蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)诱导表达模型寻找与PTPα高表达导致NIH3T3细胞恶变早期相关的新基因 ,探索肿瘤早期形成的机理 .诱导PTPα表达 2 4h ,用差异显示逆转录PCR获得 65条差异片段 ,利用生物信息学方法分析这些差异... 利用已建立的蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)诱导表达模型寻找与PTPα高表达导致NIH3T3细胞恶变早期相关的新基因 ,探索肿瘤早期形成的机理 .诱导PTPα表达 2 4h ,用差异显示逆转录PCR获得 65条差异片段 ,利用生物信息学方法分析这些差异片段 .发现其中含有 2 9种已知基因 ,12种已知ESTs ,6种未知ESTs .对EST片段 ,利用芯片拼接 (insilicocloning)的方法获得 2条新的带有完整开放阅读框 (ORF)的全长cDNA .利用生物信息学方法分析其同源性、二级结构、功能模体(motif)、保守区、结构域和家族分布情况 ,并且对这 2条新全长cDNA进行部分克隆测序鉴定 ,用半定量RT PCR实验证实其差异表达的真实性 .结果表明 ,这 2条全长cDNA为新基因 (GenBankAY0 35 2 12 ,AY0 35 2 13) ,它们在PTPα诱导表达前后确实存在差异表达 ,并与细胞能量代谢及酶功能相关 。 展开更多

关键词 蛋白质酪氨酸磷酸酶α NIH3T3细胞恶变 肿瘤 早期形成机理 基因 鉴定 功能分析 DDRT-PCR 生物信息学

在线阅读 下载PDF 职称材料

人胃癌组织RNA的抽提及其c-H-ras原癌基因的表达 被引量：1

13

作者 章有章 钱关祥 +4 位作者 钱晓岚 王璐 于丽莉 陈诗书 王瑞年 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1990年第4期304-308,共5页

用自制平板式不锈钢组织粉碎器。直接从手术切除的新鲜人原发性胃癌组织中用异硫氰酸胍-氯化铯超离心法抽提组织总RNA,再用Oligo(dT)纤维素柱分离得到mRNA,以经典的Northern印迹及分子杂交、放射自显影法观察到人原发性胃癌组织中c-H-ra... 用自制平板式不锈钢组织粉碎器。直接从手术切除的新鲜人原发性胃癌组织中用异硫氰酸胍-氯化铯超离心法抽提组织总RNA,再用Oligo(dT)纤维素柱分离得到mRNA,以经典的Northern印迹及分子杂交、放射自显影法观察到人原发性胃癌组织中c-H-ras原癌基因的表达强于或等于自身对照的相应正常胃粘膜组织。 展开更多

关键词 胃癌 RNA 原癌基因

在线阅读 下载PDF 职称材料

复制缺陷型腺病毒载体介导hVEGF cDNA在C2C12和NIH3T3细胞中的表达 被引量：1

14

作者 孙欲晓 陈诗书 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期704-709,共6页

为提高hVEGFcDNA在心肌中的表达 ,降低在其它组织中表达可能产生的不良反应 ,用PCR法得到人磷酸肌酸激酶 (MCK)增强子和CMV核心启动子 .利用克隆技术构建了含双拷贝MCK增强子 (m)和人巨细胞病毒 (CMV)核心启动子 (c)的嵌合启动子 (mmc) ... 为提高hVEGFcDNA在心肌中的表达 ,降低在其它组织中表达可能产生的不良反应 ,用PCR法得到人磷酸肌酸激酶 (MCK)增强子和CMV核心启动子 .利用克隆技术构建了含双拷贝MCK增强子 (m)和人巨细胞病毒 (CMV)核心启动子 (c)的嵌合启动子 (mmc) ,构建真核表达质粒pK3 mmcLacZ ,制备受mmc嵌合启动子调控的重组腺病毒Ad mmcVEGF .经X gal染色、β 半乳糖苷酶定量分析、RT PCR、hVEGFELISA定量分析、VEGF活性测定等研究表明 。 展开更多

关键词 人磷酸肌酸激酶增强子 嵌合启动子 肌细胞 特异性表达 血管内皮生长因子 腺病毒载体 心肌缺血 基因治疗 复制

在线阅读 下载PDF 职称材料

透析膜和内毒素对单个核细胞白细胞介素-1受体拮抗物产生的协同作用

15

作者 丁峰 顾勇 +3 位作者 薛骏 郑秀娟 赵涵芳 林善锬 《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第3期223-226,T002,共5页

目的　研究不同透析膜和内毒素对尿毒症患者外周血单个核细胞 (PBMC)白细胞介素 1受体拮抗物(IL 1Ra)基因转录和IL 1Ra合成的影响。方法　细胞和不同透析膜孵育后采用细胞原位杂交检测mRNA水平 ,PBMC培养后采用酶联免疫吸附试验法测定细... 目的　研究不同透析膜和内毒素对尿毒症患者外周血单个核细胞 (PBMC)白细胞介素 1受体拮抗物(IL 1Ra)基因转录和IL 1Ra合成的影响。方法　细胞和不同透析膜孵育后采用细胞原位杂交检测mRNA水平 ,PBMC培养后采用酶联免疫吸附试验法测定细胞IL 1Ra水平。结果　不同透析膜孵育后的PBMC在未用内毒素刺激情况下IL 1RamRNA水平有显著差别 ,但IL 1Ra合成量无差异 ,其中正常人仅有极微量IL 1Ra合成 ;内毒素刺激下的PBMCIL 1Ra合成量明显高于未刺激组 ,与铜仿膜孵育后的合成量明显高于聚砜膜孵育后和对照组。结论　内毒素和透析膜对正常人和尿毒症患者PBMC的IL 展开更多

关键词 透析膜 内毒素 白细胞介素-1受体拮抗物 尿毒症

在线阅读 下载PDF 职称材料

腺病毒介导反义VEGF降低肿瘤诱导免疫抑制及增强IL-2的抗肿瘤效果

16

作者 糜军 戴冰冰 陈诗书 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2002年第1期10-14,共5页

目的 :本研究旨在探讨腺病毒介导的反义VEGF降低肿瘤诱导的免疫抑制及增强IL 2的抗肿瘤效果。方法 :用反义VEGF修饰及反义VEGF与IL 2基因共同修饰MM45T .Li小鼠肝癌细胞 ,然后观察修饰后的肿瘤细胞的致瘤性 ;并在体内观察反义VEGF与IL ... 目的 :本研究旨在探讨腺病毒介导的反义VEGF降低肿瘤诱导的免疫抑制及增强IL 2的抗肿瘤效果。方法 :用反义VEGF修饰及反义VEGF与IL 2基因共同修饰MM45T .Li小鼠肝癌细胞 ,然后观察修饰后的肿瘤细胞的致瘤性 ;并在体内观察反义VEGF与IL 2基因诱导肝癌模型小鼠肿瘤细胞的凋亡 ,以及肿瘤组织中CD4+ ,CD8+ 细胞浸润情况。结果 :反义VEGF降低了肝癌细胞MM45T .Li的致瘤性 ;增加了肿瘤组织周围CD4+ ,CD8+ 细胞浸润 ,改善了模型小鼠的免疫抑制状态 ;提高了IL 2抗肿瘤效果。结论 :反义VEGF不仅可抑制新生血管的生成 ,而且可降低肿瘤诱导的免疫抑制 ,从而提高免疫系统对肿瘤细胞的识别 ,与IL 2免疫基因治疗相联合可明显提高对肿瘤的杀伤效果。 展开更多

关键词 腺病毒 反义VEGF 肿瘤 免疫抑制 IL-2 免疫基因治疗

在线阅读 下载PDF 职称材料

电离辐射对不同启动子驱动的GFP报告基因表达的影响

17

作者 厉兴君 徐悦 +4 位作者 叶展 夏爱娣 陈诗书 钱关祥 王中和 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2003年第1期5-9,共5页

目 的 研究电离辐射调控脂质体介导的EGR-1基因启动子、CMV启动子驱动的GFP报告基因在人肝癌7402细胞内的表达。 方法 利用CMV启动子、ECR-1基因启动子构建pcDNA3-CMV-GFP、pcDNA3-EGR-GFP重组质粒,经阳离子脂质体LipofectAMINE介导转... 目 的 研究电离辐射调控脂质体介导的EGR-1基因启动子、CMV启动子驱动的GFP报告基因在人肝癌7402细胞内的表达。 方法 利用CMV启动子、ECR-1基因启动子构建pcDNA3-CMV-GFP、pcDNA3-EGR-GFP重组质粒,经阳离子脂质体LipofectAMINE介导转染人肝癌7402细胞株,对脂质体转染条件进行优化,在最佳转染条件下,分别给予不同浓度H2O2、不同剂量γ射线处理转染细胞,用荧光显微镜、流式细胞仪(FACS)检测GFP的表达情况。 结果FACS检测显示氧自由基、电离辐射可诱导EGR-1基因启动子驱动的GFP基因表达,而不诱导CMV启动子驱动的GFP表达。 结论EGR-1基因启动子具有电离辐射诱导特性。 展开更多

关键词 EGR-1基因启动子 CMV启动子 阳离子脂质体 电离辐射 肝癌

在线阅读 下载PDF 职称材料

人胃癌组织和对应正常胃粘膜cDNA文库的构建

18

作者 赵涵芳 章有章 +1 位作者 程枫 陈诗书 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1993年第2期114-119,共6页

作者从一例人高转移型原发性胃癌组织及其对应的正常胃粘膜中分别提取总RNA和分离多聚(A)^+RNA,进而合成cDNA。cDNA第一条链合成效率前者为58.8%,后者为29.8%;第二条链合成效率前者为98.3%,后者为93.3%。cDNA分子大小在0.5～8Kb之间。c... 作者从一例人高转移型原发性胃癌组织及其对应的正常胃粘膜中分别提取总RNA和分离多聚(A)^+RNA,进而合成cDNA。cDNA第一条链合成效率前者为58.8%,后者为29.8%;第二条链合成效率前者为98.3%,后者为93.3%。cDNA分子大小在0.5～8Kb之间。cDNA接上含有NotI切点和EcoRI粘性末端的接头,重组到经EcoRI酶解5端脱磷酸化的pT7T318U质粒上,转化大肠杆菌NM522,构建了二个cDNA文库,文库的容量分别为1.2×10~5与1.0×10~5重组子,重组率均为80%,克隆效率分别为2.4×10~6克隆/lμg cDNA与2.0×10~6克降/lμg cDNA,插入片段的大小在0.5Kb～4Kb之间。 展开更多

关键词 CDNA文库 胃肿瘤 胃粘膜

在线阅读 下载PDF 职称材料

人β2微球蛋白基因启动子的克隆及其在P815细胞中的活性研究 被引量：5

19

作者 张兴黔 梅文瀚 钱关祥 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期672-675,共4页

目的:克隆人β2微球蛋白(β2m)基因启动子,并研究其在小鼠肥大细胞瘤细胞P815中对下游报告基因的启动活性。方法:用PCR法从基因组内扩增β2m基因启动子。通过基因重组的方法,构建含此启动子的EGFP基因真核表达载体,然后分别瞬时和稳定转... 目的:克隆人β2微球蛋白(β2m)基因启动子,并研究其在小鼠肥大细胞瘤细胞P815中对下游报告基因的启动活性。方法:用PCR法从基因组内扩增β2m基因启动子。通过基因重组的方法,构建含此启动子的EGFP基因真核表达载体,然后分别瞬时和稳定转染P815细胞。通过RT-PCR、荧光显微镜摄像和流式细胞术分析,观察IFN-γ作用前后EGFP的表达。结果:从基因组内扩增出302bp的人β2m基因的启动子,成功地构建了含此启动子的真核报告载体。RT-PCR的结果表明,IFN-γ对启动子的活性具有诱导作用,且呈浓度依赖性。流式细胞术的结果显示,在5×105U/LIFN-γ作用下,尽管表达EGFP的细胞数量没有差异,但刺激组EGFP的表达强度是未刺激组的2倍。结论:人β2m基因启动子在小鼠肥大细胞瘤细胞P815中具有高度的启动活性。通过该启动子中所含干扰素刺激反应元件(ISRE),可在IFN-γ诱导作用下调控下游目的基因的表达。 展开更多

关键词 Β2微球蛋白 启动子 IFN-1

在线阅读 下载PDF 职称材料

T 细胞受体δ、γ基因在小儿急性白血病中的变化 被引量：2

20

作者 仇一华 钱关祥 +3 位作者 徐铿 林梓 应大明 陈诗书 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1993年第1期43-48,共6页

本文在细胞形态,表面抗原分析的基础上,对20例小儿急性白血症细胞进行TCRδ和γ基因结构的分析。11例属分化早期的白血病中有9例发生TCRδ基因的重排和缺失,其中5例也有TCRγ基因的重排。在5例属非淋巴细胞系的白血病中有3例发生TCRδ... 本文在细胞形态,表面抗原分析的基础上,对20例小儿急性白血症细胞进行TCRδ和γ基因结构的分析。11例属分化早期的白血病中有9例发生TCRδ基因的重排和缺失,其中5例也有TCRγ基因的重排。在5例属非淋巴细胞系的白血病中有3例发生TCRδ基因的重排.3例粒细胞性白血病细胞的TCR基因(δ和γ)均为胚系。有一例细胞表型仅有CD_2表达的白血病细胞,其TCR 基因(δ和γ)也为胚系。结果还显示:TCRδ基因结构发生变化的白血病细胞均有CD_(10)抗原表达。研究提示:TCRδ基因的重排不显示严格的细胞特异性,但是TCR 基因的变化与淋巴细胞系白血病细胞某些表面抗原的表达存在某种联系。 展开更多

关键词 T细胞 受体 基因 白血病

在线阅读 下载PDF 职称材料