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非霍奇金淋巴瘤的IgH和TCRδ基因重排 被引量:12
1
作者 王萍 王瑞年 +1 位作者 卢健 陈诗书 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 2002年第1期21-23,共3页
目的 :探讨非霍奇金淋巴瘤 (NHL)免疫球蛋白重链 (IgH)和T细胞受体δ链 (TCRδ)基因重排情况。 方法 :用半重叠式聚合酶链反应 (PCR)方法检测IgH及TCRδ基因重排。 结果 :5 7例NHL中 4 1例 (72 % )发生IgH基因重排 ,30例 (5 3% )出现TC... 目的 :探讨非霍奇金淋巴瘤 (NHL)免疫球蛋白重链 (IgH)和T细胞受体δ链 (TCRδ)基因重排情况。 方法 :用半重叠式聚合酶链反应 (PCR)方法检测IgH及TCRδ基因重排。 结果 :5 7例NHL中 4 1例 (72 % )发生IgH基因重排 ,30例 (5 3% )出现TCRδ基因重排。结论 :检测克隆性基因重排可以作为诊断NHL有效基因标志 。 展开更多
关键词 非霍奇金氏淋巴瘤 基因重排 免疫球蛋白类 重链 受体抗原 T细胞受体δ链 TCRδ
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医学生物化学实验课改革的探索 被引量:11
2
作者 赵涵芳 徐洪 +2 位作者 徐悦 沈文红 张怡平 《实验室研究与探索》 CAS 2000年第6期18-20,共3页
鉴于生命科学新理论、新技术的发展 ,进行了医学生物化学实验教学改革 ,改编了实验指导书 ,改进了实验教学方法 ,并提出了开设综合性实验的构想。
关键词 生物化学实验 教学方法 教学改革
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弓形虫感染对围产儿致畸致病的影响 被引量:7
3
作者 金武官 李云珠 +6 位作者 俞善昌 杨惠珍 徐克继 钱宗立 夏爱娣 顾允中 陈诗书 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1991年第3期168-170,共3页
本文报告用免疫学和分子生物学方法对28例畸形儿产妇,10例畸形儿及其母亲,75例婴儿肝炎综合征进行弓形虫检测。23例产妇血清弓形虫抗体阳性率48%,10例畸形儿母亲血清抗体阳性率90%,而畸形儿弓形虫DNA杂交及动物接种分离弓形虫阳性率分别... 本文报告用免疫学和分子生物学方法对28例畸形儿产妇,10例畸形儿及其母亲,75例婴儿肝炎综合征进行弓形虫检测。23例产妇血清弓形虫抗体阳性率48%,10例畸形儿母亲血清抗体阳性率90%,而畸形儿弓形虫DNA杂交及动物接种分离弓形虫阳性率分别为70%和80%。婴儿肝炎综合征血清抗体阳性率9.8%,上述阳性率均显著高于正常人群弓形虫血清抗体阳性率。说明弓形虫感染是导致胎儿致畸及婴儿肝炎综合征的重要病原之一。 展开更多
关键词 弓形体 围产儿 畸形 感染
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中国人群MHC—Ⅱ类抗原DR4基因体外扩增定型分析及其与类风湿关节炎相关性的研究 被引量:6
4
作者 朱乃硕 林性玉 +5 位作者 王亚新 张来仪 陈顺乐 王元 顾懿 陈诗书 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1992年第3期155-160,共6页
本工作拟建立一种 HLA 基因组 DNA 定型方法,采用聚合酶链反应技术对所要分析的 HLA—Ⅱ DR4基因进行体外扩增,并配合等位基因特异性寡核苷酸探针对扩增产物进行分析,以确定个体是否带有该型等位基因.我们用该方法对上海地区52例正常人... 本工作拟建立一种 HLA 基因组 DNA 定型方法,采用聚合酶链反应技术对所要分析的 HLA—Ⅱ DR4基因进行体外扩增,并配合等位基因特异性寡核苷酸探针对扩增产物进行分析,以确定个体是否带有该型等位基因.我们用该方法对上海地区52例正常人及32例类风湿关节炎病人 DR4基因进行了分析,结果显示正常人 DR4基因携带者为17.3%,而类风湿关节炎病人高达43.8%(RR=3.7,P<0.01),DR4阳性的病人多为重症活动者(X^2=11.7,P<0.005).此外,我们将该方法与血清学定型方法进行了比较. 展开更多
关键词 MHC 聚合酶链反应 类风湿关节炎
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^(60)Co辐射后IL-2基因修饰肿瘤细胞生物学行为的改变 被引量:4
5
作者 徐荣婷 张腾飞 +3 位作者 胡亮 历兴君 杨红英 陈诗书 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2000年第S1期10-12,24,共4页
目的研究IL - 2基因修饰人肿瘤细胞生物学行为是否因辐射而发生变化。 方法分别从细胞形态结构、MHC分子表达、整合的基因IL - 2基因是否丢失、能否保持mRNA表达、能否分泌表达生物活性的IL - 2等方面进行了实验。结果未见整合的IL - ... 目的研究IL - 2基因修饰人肿瘤细胞生物学行为是否因辐射而发生变化。 方法分别从细胞形态结构、MHC分子表达、整合的基因IL - 2基因是否丢失、能否保持mRNA表达、能否分泌表达生物活性的IL - 2等方面进行了实验。结果未见整合的IL - 2基因丢失 ,能表达IL - 2mRNA且在一定时间内持续分泌具有生物活性的IL - 2 ;细胞膜表面MHC分子无明显改变 ;细胞形态结构无明显变化。结论经60 Co辐射修饰的肿瘤细胞致瘤性消失 ,但在一定时间内能分泌IL - 2 ,这为开展基因工程“瘤苗”的临床应用提供了依据。 展开更多
关键词 IL-2基因 瘤苗 60Co辐射 致瘤性 IL-2基因转导人肿瘤细胞
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大鼠浅Ⅱ度烧伤渗液细胞原位杂交生长因子mRNA表达 被引量:5
6
作者 程枫 赵涵芳 +3 位作者 章有章 冯世杰 密磊 史济湘 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 1997年第S1期10-12,共3页
作者采用大鼠浅Ⅱ度烧伤模型,以DIG标记3’末端寡核苷酸探针对烧伤后皮肤渗出液中的单核-巨噬细胞作mRNA表达的原位杂交,观察3种生长因子在烧伤愈合过程中mRNA表达的变化,反映其在愈合过程中的作用。结果:PDGFmRNA在第3d有一个表... 作者采用大鼠浅Ⅱ度烧伤模型,以DIG标记3’末端寡核苷酸探针对烧伤后皮肤渗出液中的单核-巨噬细胞作mRNA表达的原位杂交,观察3种生长因子在烧伤愈合过程中mRNA表达的变化,反映其在愈合过程中的作用。结果:PDGFmRNA在第3d有一个表达高峰;TGF-αmRNA从6h始表达量逐渐增加,高峰出现在第10d;TGF-βmRNA在第7d出现表达高峰。结论:DIG原位杂交法对检测单个细胞内生长因子mRNA表达是一个比较好的方法,可以定量、灵敏无损伤地观察细胞生长因子基因的激活与表达,认识生长因子在烧伤愈合中的作用。 展开更多
关键词 生长因子 烧伤愈合 原位杂交 基因表达
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不同年龄组人红细胞内ATP含量 被引量:16
7
作者 徐镜 杨伟宗 李立群 《安徽医科大学学报》 CAS 1995年第4期266-267,共2页
本文用萤光素-萤光素酶生物发光法测定了不同年龄组人红细胞内ATP含量,发现老年组和脐血组红细胞内ATP含量分别为1.55±0.28mmol·L^(-1)RBC和1.56±0.25mmol·L^(-1)R... 本文用萤光素-萤光素酶生物发光法测定了不同年龄组人红细胞内ATP含量,发现老年组和脐血组红细胞内ATP含量分别为1.55±0.28mmol·L^(-1)RBC和1.56±0.25mmol·L^(-1)RBC,中年组和青年组红细胞内ATP含量分别为1.45±0.12mmol·L^(-1)RBC和1.42±0.12mmol·L^(-1)RBC,老年组和脐血组红细胞内ATP含量明显高于中青年组。 展开更多
关键词 发光 生物学 红细胞 腺苷三磷酸 年龄
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阳离子脂质体介导细胞因子基因对小鼠肝癌抑制的作用 被引量:4
8
作者 王克敏 赵宇 +2 位作者 张景迎 夏爱娣 陈诗书 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1999年第6期504-507,共4页
目的观察阳离子脂质体介导细胞因子TNF-a及IL-2基因对小鼠肝癌的抑制作用。方法构建含细胞因子TNF-a及IL-2的质粒载体,用阳离子脂质体LipofectAMINE或DOSPER介导的含细胞因子TNF-a及IL-... 目的观察阳离子脂质体介导细胞因子TNF-a及IL-2基因对小鼠肝癌的抑制作用。方法构建含细胞因子TNF-a及IL-2的质粒载体,用阳离子脂质体LipofectAMINE或DOSPER介导的含细胞因子TNF-a及IL-2的质粒DNA分别体外转染小鼠肝癌细胞株MM45T.Li,并在荷瘤小鼠体内分别直接注射上述阳离子脂质体-DNA复合物,观察瘤体大小及小鼠生存期。结果两种阳离子脂质体介导的细胞因子转染后都具有生物学活性,转染效率为10%左右,瘤内注射后均能延长荷瘤小鼠的生存期。DOSPER介导细胞因子的治疗效果较佳。结论LipofectAMINE或DOSPER介导细胞因子TNF-a及IL-2基因均具有抑制小鼠肝癌生长、延长荷瘤小鼠生存期的作用,DOSPER的效果较好。 展开更多
关键词 阳离子脂质体 细胞因子 肝癌 基因转移 基因治疗
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HLA-DRB1基因位点多态性的PCR-RFLP分析 被引量:10
9
作者 黄啸宇 王亚新 +1 位作者 王福庆 陈诗书 《生物化学杂志》 CSCD 1996年第6期674-680,共7页
设计并建立一套适合国内应用的改良PCR-RFLR方法,分5组特异性扩增DNA样品,随后进行酶切定型分析,准确检测了编码DR抗原特异性的HLA-DRB1基因位点的多态性,该法采用分组扩增,不发生与其它DRB位点等位基因... 设计并建立一套适合国内应用的改良PCR-RFLR方法,分5组特异性扩增DNA样品,随后进行酶切定型分析,准确检测了编码DR抗原特异性的HLA-DRB1基因位点的多态性,该法采用分组扩增,不发生与其它DRB位点等位基因的交叉扩增,不仅适合纯合子的区分而且可以清楚准确地检测杂合子样品,已报道过的DRB1位点编码的特异性组合都可以通过这个方法得到准确分析。所使用的Ⅱ类限制性内切酶均价格便宜、易购。 展开更多
关键词 人白细胞抗原 DRB1基因 聚合酶链反应 RFLP
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复制缺陷型腺病毒载体介导的人凝血因子Ⅷ基因在体内外的高效转移和表达 被引量:3
10
作者 姜志龙 卢健 陈诗书 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第1期36-41,共6页
为了构建含人凝血因子Ⅷ基因的重组腺病毒载体系统,首先构建了含FⅧ(B结构域缺失型)的载体质粒pAd-hFⅧ和插入内含子结构的pAdI-hFⅧ,经脂质体介导,证明两质粒的目的基因均能在COS-7细胞中表达有凝血活性的F... 为了构建含人凝血因子Ⅷ基因的重组腺病毒载体系统,首先构建了含FⅧ(B结构域缺失型)的载体质粒pAd-hFⅧ和插入内含子结构的pAdI-hFⅧ,经脂质体介导,证明两质粒的目的基因均能在COS-7细胞中表达有凝血活性的FⅧ因子,其中经纯化的载体质粒pAd-hFⅧ与pBHG10经脂质体介导,共转染至293包装细胞,经同源重组和E1蛋白反式互补,形成E1/E3缺失型重组腺病毒载体颗粒Ad-hFⅧ.PCR检则到病理293培养液上清的病毒DNA中具有目的基因扩增片段,证明病毒DNA含有FⅧ基因.经扩增、纯化、滴度测定,用于感染离体细胞COS-7、A549、L929、293.证实该病毒能在上述细胞中高效转移和表达目的基因,其表达量具有一定范围内的剂量依赖性.COS-7细胞中,MOI>1000时,有细胞毒效应,表达量反而下降.经耳缘静脉注射Ad-hFⅧ至家兔后,1~4周能测到一定水平的FⅧ蛋白,1周内升至最高峰.免疫组化研究表明感染的离体细胞和家兔肝等组织均有FⅧ表达,其中肝脏表达最高. 展开更多
关键词 腺病毒载体 人凝血因子Ⅷ 基因治疗 甲型血友病
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人TGFβ_1cDNA高表达重组质粒的构建 被引量:2
11
作者 赵涵芳 于丽莉 +1 位作者 刘军 章有章 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1999年第3期246-248,共3页
目的为了得到基因工程制备的人重组TGFβ1,构建人TGFβ;cDNA高表达重组质粒。方法从人血小板中提取总RNA,经RT-PCR得到TGFβ;cDNA基因,并克隆到表达质粒pBLMVL2中,构建了在PL启动控制基因表达质粒pBLMVL2-TGFβ;,使其在大肠... 目的为了得到基因工程制备的人重组TGFβ1,构建人TGFβ;cDNA高表达重组质粒。方法从人血小板中提取总RNA,经RT-PCR得到TGFβ;cDNA基因,并克隆到表达质粒pBLMVL2中,构建了在PL启动控制基因表达质粒pBLMVL2-TGFβ;,使其在大肠杆菌中进行温敏诱导表达。结果RT-PCR得到的TGFβcDNA经DNA序列分析与文献报道一致,pBLMVL2-TGFβ1在大肠杆菌中表达产物人重组TGFβ1经还原型SDS-PAGE电泳,呈一条蛋白条带,分子量12.5kd,表达产物约占全菌蛋白20%。结论构建的重组质粒pBLMVL2-TGFβ1能高表达人重组TGFβ1。 展开更多
关键词 TGFΒ1 重组质粒 基因表达 构建 CDNA
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中国正常人及类风湿关节炎病人MHC-Ⅱ类DR_4亚型基因核苷酸序列初步分析 被引量:2
12
作者 朱乃硕 王亚新 陈诗书 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 1994年第2期92-97,共6页
对中国人群正常人及类风湿关节炎病人DR_4亚型基因决定型别特异性的第二个外显子进行体外扩增、克隆及序列分析显示,6例正常人及3例类风湿关节炎病人存在三种DR_4亚型(DRBl0402,DRBl0405,DRBl.04... 对中国人群正常人及类风湿关节炎病人DR_4亚型基因决定型别特异性的第二个外显子进行体外扩增、克隆及序列分析显示,6例正常人及3例类风湿关节炎病人存在三种DR_4亚型(DRBl0402,DRBl0405,DRBl.0406),中国人这三种亚型第二个外显子核苷酸序列与白种人一致。序列分析结果为进一步应用常规PCR-SSO法及PCR-RFLP法进行中国人DR_4基因定型提供了依据。此外,还将序列分析结果与PCR-SSO杂交分析结果进行了比较,具备较全面的覆盖各亚型多态性区域的探针可以减少等位基因同源性干扰。 展开更多
关键词 DR 基因 DNA 类风湿性 关节炎
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细胞生长因子和维拉帕米在肝细胞胶原合成和前胶原基因表达中的作用 被引量:1
13
作者 胡颖 陆汉明 +1 位作者 李定国 程枫 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 1999年第2期146-148,共3页
目的:探索肝细胞在肝纤维化形成中的可能作用。方法:用核酸原位分子杂交方法和3H脯氨酸掺入法,观察原代培养大鼠肝细胞在血小板衍生生长因子(PDGF)刺激前后胶原合成和Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达及钙拮抗剂维拉帕米对此... 目的:探索肝细胞在肝纤维化形成中的可能作用。方法:用核酸原位分子杂交方法和3H脯氨酸掺入法,观察原代培养大鼠肝细胞在血小板衍生生长因子(PDGF)刺激前后胶原合成和Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达及钙拮抗剂维拉帕米对此作用的影响。结果:肝细胞培养一定时间后能够合成胶原,能够表达Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因。PDGF能促进肝细胞的胶原合成和前胶原基因表达。但此刺激作用为维拉帕米所抑制。结论:这些研究为肝细胞参与肝纤维化形成提供了实验依据。 展开更多
关键词 肝纤维化 细胞生长因子 胶原合成 胶原基因表达
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老化和被氧化的红细胞内ATP含量的变化 被引量:3
14
作者 徐镜 杨伟宗 李立群 《安徽医科大学学报》 CAS 1996年第2期96-98,共3页
本文用荧光素-荧光素酶生物发光法测定了老化和被氧化红细胞内ATP含量的变化,结果表明老化的红细胞和被外源性H2O2氧化的红细胞,其内ATP含量均明显降低,而麦芽酚对红细胞氧化具有保护作用,能减少氧化红细胞内ATP含量... 本文用荧光素-荧光素酶生物发光法测定了老化和被氧化红细胞内ATP含量的变化,结果表明老化的红细胞和被外源性H2O2氧化的红细胞,其内ATP含量均明显降低,而麦芽酚对红细胞氧化具有保护作用,能减少氧化红细胞内ATP含量的变化。 展开更多
关键词 红细胞衰老 腺苷三磷酸 血液
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深Ⅱ度烧伤创面细胞bFGF和PDGF对愈合的影响 被引量:1
15
作者 程枫 赵涵芳 +1 位作者 方培耀 史济湘 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2001年第2期113-115,共3页
目的研究bFGF和PDGF在深Ⅱ度烧伤愈合中的表达特点 ,以及与创面愈合中的关系。为临床合理应用外源性的bFGF和PDGF提供实验依据。 方法采用地高辛细胞原位杂交方法检测SD大鼠深Ⅱ度烫伤模型在伤后不同时段的创面渗出液细胞的bFGF和PDGF... 目的研究bFGF和PDGF在深Ⅱ度烧伤愈合中的表达特点 ,以及与创面愈合中的关系。为临床合理应用外源性的bFGF和PDGF提供实验依据。 方法采用地高辛细胞原位杂交方法检测SD大鼠深Ⅱ度烫伤模型在伤后不同时段的创面渗出液细胞的bFGF和PDGF中mRNA表达变化。 结果实验组的bFGF是在 5d开始表达 ,在 7d达到高峰 ,然后缓慢下降 ,至 14d时还有一定水平的表达 ,对照组bFGF的表达水平都较低 ,仅在 5d有低水平表达 ,14d已基本无表达。在检测PDGF时 ,实验组 1~ 3d处于较低水平表达 ,7d开始高水平表达 ,10d是表达的高峰 ,随后下降。对照组PDGF的表达在 1~ 3d处于较低水平 ,5~ 14d有一个低水平的mRNA表达延迟峰段。 结论创面渗出液细胞bFGF、PDGF的mRNA表达的启动、表达的高峰和减弱与深Ⅱ度烧伤的创面愈合状况有关 ,与相关细胞在创面聚集、诱导和分泌bFGF、PDGF有关。 展开更多
关键词 BFGF PDGF 地高辛原位杂交 烧伤愈合 MRNA表达 深Ⅱ度烧伤
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大鼠自体移植静脉PDGF及受体基因表达的实验研究(英文) 被引量:1
16
作者 钱虎声 程枫 +3 位作者 张柏根 朱敏 邝耀麟 陈诗书 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1997年第3期237-240,共4页
内膜增生是移植静脉失败的主要原因.发病机理尚不清楚。本研究取Wistar大鼠80只建立自体颈静脉移植于肾下腹主动脉动物模型.通过电镜和组织切片原位杂交分期于术后2h、24h及术后1周观察移植静脉超微结构和血小板源生长因子(PDGF)及... 内膜增生是移植静脉失败的主要原因.发病机理尚不清楚。本研究取Wistar大鼠80只建立自体颈静脉移植于肾下腹主动脉动物模型.通过电镜和组织切片原位杂交分期于术后2h、24h及术后1周观察移植静脉超微结构和血小板源生长因子(PDGF)及受体基因表达动态变化。结果显示:(1)术后2h.内膜破裂翻卷,SMC线粒体轻度肿胀;PDGF-A及PDGFR-βmRNA表达增加.但PDGF-BmRNA表达量较大;(2)术后24h.大部分内皮细胞脱落,内膜被覆以丝状血栓;PDGF-A与PDGFR-β较术后2h表达明显增加;(3)术后1周,内皮开始重新再生;PDGF-AmRNA表达开始减少.PDGFR-β持续表达。结果表明PDGF在自体静脉移植中与SMC增殖及内膜增生有关。 展开更多
关键词 血小板生长因子 基因表达 自体移植 静脉移植
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人脑胶质瘤c DNA文库的构建 被引量:1
17
作者 覃文新 王尧 +4 位作者 赵涵芳 左剑玲 杜子威 章有章 陈诗书 《生物化学杂志》 CSCD 1993年第3期364-367,共4页
本室曾制备得到两株单克隆抗体,分别特异地针对两种胶质瘤相关抗原-47kD和180kD的膜糖蛋白。为了阐明这两种胶质瘤相关抗原的生物化学本质及其在正常胶质细胞向恶性转化过程中可能起的作用,我们构建了一个λgtll表达型的人脑胶质瘤cDNA... 本室曾制备得到两株单克隆抗体,分别特异地针对两种胶质瘤相关抗原-47kD和180kD的膜糖蛋白。为了阐明这两种胶质瘤相关抗原的生物化学本质及其在正常胶质细胞向恶性转化过程中可能起的作用,我们构建了一个λgtll表达型的人脑胶质瘤cDNA文库,以便用上述单克隆抗体作为探针,从该文库中筛选出与之对应的胶质瘤相关抗原的cDNA克隆。现将建库工作简述于下。 展开更多
关键词 胶质瘤 CDNA 文库 构建
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弓形虫的分子生物学研究 被引量:20
18
作者 夏爱娣 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1994年第1期50-51,共2页
弓形虫的分子生物学研究上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室夏爱娣综述陈诗书审校弓形虫(Toxoplasmagondii)是寄生于人和多种动物组织细胞内的原虫。人群弓形虫感染抗体阳性率英国20-40%,美国50-... 弓形虫的分子生物学研究上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室夏爱娣综述陈诗书审校弓形虫(Toxoplasmagondii)是寄生于人和多种动物组织细胞内的原虫。人群弓形虫感染抗体阳性率英国20-40%,美国50-60%,法国80-90%[2],我... 展开更多
关键词 弓形体 分子生物学
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成纤维细胞生长因子受体的结构与功能 被引量:1
19
作者 叶展 赵涵芳 钱关祥 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2003年第2期176-179,共4页
目前已发现的成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor, FGF)家族至少有19个成员(FGF1-19)[1],它们在发育、血管生成、创伤愈合中有重要作用.而它们的功能是通过与成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor, FGFR... 目前已发现的成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor, FGF)家族至少有19个成员(FGF1-19)[1],它们在发育、血管生成、创伤愈合中有重要作用.而它们的功能是通过与成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor, FGFR)结合后,经过信号传递系统,激活相应的基因而实现的.本文主要介绍FGFR结构和功能的基础知识与研究近况. 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子受体 结构 功能 信号传递
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弓形虫特异DNA片段顺序分析及体外基因扩增 被引量:1
20
作者 夏爱娣 王克敏 +4 位作者 顾允中 张惠民 杨惠珍 徐克继 钱宗立 《生物化学杂志》 CSCD 1992年第6期748-754,共7页
从弓形虫(ZS_2株)基因组文库中筛选出了一个弓形虫特异DNA片段的克隆,对克隆的片段进行了部分顺序分析。根据所得DNA顺序,自行设计并合成特异的寡核苷酸引物对,建立了体外扩增弓形虫特异DNA顺序的聚合酶链反应(PCR)方法。4种不同来源的... 从弓形虫(ZS_2株)基因组文库中筛选出了一个弓形虫特异DNA片段的克隆,对克隆的片段进行了部分顺序分析。根据所得DNA顺序,自行设计并合成特异的寡核苷酸引物对,建立了体外扩增弓形虫特异DNA顺序的聚合酶链反应(PCR)方法。4种不同来源的弓形虫株DNA、人工感染弓形虫的三头幼猪白细胞和胸腺DNA经过PCR扩增,均出现特异的扩增条带;而正常人、正常幼猪外围血白细胞、正常小鼠脾脏、恶性疟原虫、卡氏肺孢子虫、溶组织内阿米巴和人巨细胞病毒DNA均不出现特异的扩增条带。对扩增产物进行了Southern印迹和限制性内切酶图谱分析,证明该PCR产物是弓形虫DNA特异的顺序。该方法可测出少至1pg的弓形虫DNA或1个弓形虫体的裂解液。本文分析的DNA顺序和设计合成的引物顺序数据,经电脑DNA数据库检索,证明无相同的顺序。本方法并具有简便、快速等优点,便于推广应用。 展开更多
关键词 弓形体 顺序分析 DNA片断
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