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不同部位皮下注射DNA疫苗对小鼠体液免疫的影响 被引量：4
1
作者 王和勇 向阳 +1 位作者 唐亮 孙敏 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期89-94,共6页
主要探讨在小鼠不同部位皮下注射DNA疫苗对体液免疫应答的影响,为DNA疫苗在体内获得高滴度抗体提供优化条件.用RT-PCR从人肺癌细胞株A459中克隆VEGF片段,并插入pVAX1质粒构建pVAX1-VEGF真核表达质粒;在耳廓、胸部、腹部、尾跟部、背部... 主要探讨在小鼠不同部位皮下注射DNA疫苗对体液免疫应答的影响,为DNA疫苗在体内获得高滴度抗体提供优化条件.用RT-PCR从人肺癌细胞株A459中克隆VEGF片段,并插入pVAX1质粒构建pVAX1-VEGF真核表达质粒;在耳廓、胸部、腹部、尾跟部、背部及足垫的皮下注射1μg/μL pVAX1-VEGF疫苗DNA 100μL,ELISA法检测血清中VEGF抗原表达及其IgG抗体分布,测定血清中IgG2a和IgG1两亚型水平.实验结果发现:耳廓、胸部、腹部免疫产生的VEGF抗原较快,其中耳廓免疫产生的体液免疫最快最强,与胸部、腹部、背部、尾根及足垫免疫产生的体液免疫反应相比,具有统计学意义,同时pVAX1-VEGF疫苗组与pVAX1对照组的体液免疫差异显著,但pVAX1-VEGF疫苗组主要产生IgG2a型抗体.上述结果表明:所构建人VEGF的DNA疫苗能在小鼠体内有效表达,不同部位皮下免疫后均能产生抗VEGF的IgG抗体,以IgG2a抗体为主;但就抗原表达、抗体及IgG2a而言,以耳廓皮下接种最佳. 展开更多
关键词 皮下注射 DNA疫苗 体液免疫
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异种VEGF融合蛋白疫苗对小鼠Lewis肺癌的抑制作用 被引量：2
2
作者 刘倩 唐亮 +5 位作者 李英辉 周彩存 谈立松 赵玉军 张培德 张尚权 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期422-424,共3页
目的:利用原核表达系统,构建异源血管内皮生长因子融合蛋白疫苗,研究该融合蛋白疫苗对小鼠Lewis肺癌肿瘤模型的抗血管生成主动免疫治疗效果。方法:将鸡VEGF基因克隆入pGEX-4T-2原核表达载体,经IPTG诱导融合蛋白表达,Ni-NTA纯化,透析复性... 目的:利用原核表达系统,构建异源血管内皮生长因子融合蛋白疫苗,研究该融合蛋白疫苗对小鼠Lewis肺癌肿瘤模型的抗血管生成主动免疫治疗效果。方法:将鸡VEGF基因克隆入pGEX-4T-2原核表达载体,经IPTG诱导融合蛋白表达,Ni-NTA纯化,透析复性,构建GST-cVEGF融合蛋白疫苗。将C57BL16J小鼠随机分为3组,GST-cVEGF疫苗组10只、cVEGF疫苗组10只、生理盐水组(NS)10只。将各组样品与等体积弗氏佐剂混合,各组小鼠每只分别0、2、3周免疫100μgGST-cVEGF融合蛋白疫苗、单纯cVEGF蛋白疫苗、生理盐水。接种Lewis肺癌细胞,观察肿瘤的生长情况和小鼠状态。接种肿瘤18d后,处死小鼠,剥离肿瘤称重。检测小鼠血清中特异性抗VEGF抗体滴度。结果:GST-cVEGF疫苗组、cVEGF组、生理盐水组肿瘤均重分别为(1·55±0·534)g、(1·93±0·607)g、(2·87±0·642)g。GST-cVEGF疫苗组肿瘤重量明显小于生理盐水组(P<0·01)。疫苗组血清产生抗VEGF抗体滴度为1∶2000。结论:异种血管内皮生长因子基因重组融合蛋白疫苗可干扰机体对自身VEGF的免疫耐受,可产生较高水平的特异性抗VEGF抗体,并具有抑制小鼠Lewis肿瘤生长的效应。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 融合蛋白疫苗 肿瘤/免疫治疗 小鼠
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液态活检的研究进展 被引量：1
3
作者 李雪飞 赵超 周彩存 《中国医学前沿杂志（电子版）》 2018年第7期1-7,共7页
由于转移性肿瘤内在的分子异质性以及肿瘤基因组的动态进化能力,使得通过活检等手段获取的肿瘤组织无法捕获肿瘤基因组的全部特征,一种新的诊断概念——"液态活检"在过去几年受到广泛关注。液态活检已然改变了肿瘤学的临床实... 由于转移性肿瘤内在的分子异质性以及肿瘤基因组的动态进化能力,使得通过活检等手段获取的肿瘤组织无法捕获肿瘤基因组的全部特征,一种新的诊断概念——"液态活检"在过去几年受到广泛关注。液态活检已然改变了肿瘤学的临床实践,通常用于指导靶向用药、监测疾病进展以及追踪药物耐药。目前正在评估基于血液分子谱检测在肿瘤早期诊断以及监测微小残留病灶中的应用价值。本文将着重关注肺癌液态活检的最新进展,从液态活检的样本类型、常用检测方法以及临床应用等方面进行阐述。 展开更多
关键词 肺癌 液态活检 基因突变
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核苷转运蛋白基因ENT3单核苷酸多态性与肺癌易感性的关系
4
作者 李雪飞 张颉 +1 位作者 张增利 周彩存 《中国肺癌杂志》 CAS 2010年第5期458-463,共6页
背景与目的核苷转运蛋白介导的核苷跨膜转运在调节细胞功能中发挥重要作用,可能是某些肿瘤的候选易感基因。本研究旨在探讨核苷转运蛋白基因ENT3单核苷酸多态性与肺癌易感性的关系。方法采用病例对照研究,收集2008年5月-2009年5月于上... 背景与目的核苷转运蛋白介导的核苷跨膜转运在调节细胞功能中发挥重要作用,可能是某些肿瘤的候选易感基因。本研究旨在探讨核苷转运蛋白基因ENT3单核苷酸多态性与肺癌易感性的关系。方法采用病例对照研究,收集2008年5月-2009年5月于上海市肺科医院就诊的原发性肺癌患者351例和同期住院的非肿瘤患者207例,应用AllGloTM探针结合实时荧光PCR方法分析肺癌组和对照组ENT3基因rs10999776多态位点的基因型分布情况,比较不同基因型与肺癌易感性的关系以及不同基因型联合吸烟对肺癌易感性的影响。肺癌组与对照组基因型和等位基因分布比较用χ2检验,以调整比值比及95%CI表示相对危险度,所有统计检验均为双侧概率检验,所有资料均用SPSS软件进行统计。结果肺癌患者rs10999776多态位点的CC、TC、TT基因型和C、T等位基因频率分布与对照组比较无统计学差异(P>0.05)。与非吸烟的野生型纯合子个体比较,携带突变等位基因T(TC+TT)的吸烟个体罹患肺癌的风险性明显增加,且吸烟≥30包/年者风险性更高,调整OR值分别为2.848(95%CI:1.536-4.879,P=0.005)、3.076(95%CI:2.308-6.741,P=0.001)。而对肺癌不同组织类型的分析发现,三种基因型的吸烟个体罹患肺鳞癌的风险性均增加,且携带突变等位基因T的个体风险性更高,调整OR值为6.066(95%CI:2.884-12.758,P<0.001)。而rs10999776(C>T)多态性联合吸烟对肺腺癌则无显著影响。结论核苷转运蛋白基因ENT3rs10999776多态性可能与肺鳞癌的发病风险相关,且与吸烟环境暴露存在一定的相互作用。 展开更多
关键词 核苷转运蛋白 单核苷酸多态性 探针 肺肿瘤 遗传易感性
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不同转移部位对广泛期小细胞肺癌患者治疗预后的影响 被引量：6
5
作者 刘倩 乔梦 +6 位作者 毛士琦 杨硕 刘弋维 赵超 李雪飞 任胜祥 周彩存 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期45-51,共7页
背景与目的:小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)是肺癌中恶性程度最高的病理学类型,易发生远处转移,转移部位及肿瘤负荷对患者的预后有一定预测作用。比较不同远处转移部位及转移器官个数对广泛期SCLC患者预后的影响,以期为临床... 背景与目的:小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)是肺癌中恶性程度最高的病理学类型,易发生远处转移,转移部位及肿瘤负荷对患者的预后有一定预测作用。比较不同远处转移部位及转移器官个数对广泛期SCLC患者预后的影响,以期为临床决策提供参考。方法:收集2014年5月—2019年2月在同济大学附属上海市肺科医院就诊的广泛期SCLC患者的临床资料,回顾性分析其远处转移部位及转移器官个数与患者总生存期(overall survival,OS)及疗效的关系。结果:206例广泛期SCLC患者中,大部分(69.0%)患者在诊断初期就已发生远处转移,转移器官个数越多,中位OS越短(P=0.0079),中位无进展生存期(progression-free survival,PFS)也越短(P=0.0270)。脑转移、骨转移、对侧肺转移、肝转移及其他器官转移组中位OS分别为14.83、11.70、14.47、11.10及12.47个月(P=0.0311)。脑转移、骨转移、对侧肺转移、肝转移及其他器官转移组中位PFS分别为5.07、4.07、7.10、3.87及4.80个月(P=0.0336)。结论:广泛期SCLC患者远处转移提示预后差,转移器官个数越多,OS及PFS越差。在不同器官转移中,肝转移及骨转移患者OS及PFS较差,提示预后不良。 展开更多
关键词 广泛期小细胞肺癌 器官转移 生存时间
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异种表皮生长因子受体胞外段的表达及其抗肿瘤效果研究 被引量：1
6
作者 李英辉 唐亮 +2 位作者 刘倩 陈德坤 谈立松 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1051-1054,共4页
目的:构建异种EGFR蛋白疫苗并研究其抗肿瘤效果。方法:用PCR方法获得鸡EGFR胞外片段,与pGEX-4T-2载体连接,并在E.coli BL21(DE3)中表达鸡的EGFR胞外片段与GST的融合蛋白,融合蛋白经Ni2+亲和层析柱纯化、复性后,免疫小鼠,免疫3次后,接种... 目的:构建异种EGFR蛋白疫苗并研究其抗肿瘤效果。方法:用PCR方法获得鸡EGFR胞外片段,与pGEX-4T-2载体连接,并在E.coli BL21(DE3)中表达鸡的EGFR胞外片段与GST的融合蛋白,融合蛋白经Ni2+亲和层析柱纯化、复性后,免疫小鼠,免疫3次后,接种小鼠Lewis细胞,观测肿瘤生长情况,ELISA检测小鼠血清中抗EGFR蛋白的抗体效价。结果:成功构建了EGFR胞外段基因的原核表达载体;SDS-PAGE显示成功表达了目的融合蛋白;融合蛋白免疫小鼠后,ELISA法检测到特异性抗EGFR抗体;实验组与对照组肿瘤体积的比较结果显示,融合蛋白疫苗能够在一定程度上抑制肿瘤的生长。结论:异种EGFR蛋白能够克服免疫耐受问题,诱导机体产生抗体,有一定的抗肿瘤效果,为后续的肿瘤疫苗研究打下了基础。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体 胞外段 原核表达 抗肿瘤
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利多卡因对实验性哮喘豚鼠的作用及机制 被引量：4
7
作者 李明星 高文 +2 位作者 李惠萍 邹学超 粟波 《临床麻醉学杂志》 CAS CSCD 2004年第12期736-737,共2页
目的　观察雾化吸入利多卡因对实验性哮喘豚鼠的影响 ,并初步探讨其机制。方法　32只豚鼠随机分为四组 ,每组 8只 :正常组 (C组 )、哮喘组 (A组 )、地塞米松治疗组 (D组 )和利多卡因治疗组 (L组 )。采用卵蛋白致敏和激活制成豚鼠哮喘模... 目的　观察雾化吸入利多卡因对实验性哮喘豚鼠的影响 ,并初步探讨其机制。方法　32只豚鼠随机分为四组 ,每组 8只 :正常组 (C组 )、哮喘组 (A组 )、地塞米松治疗组 (D组 )和利多卡因治疗组 (L组 )。采用卵蛋白致敏和激活制成豚鼠哮喘模型 ,观察各组的诱喘时间及血清和肺灌洗液中一氧化氮 (NO)水平的变化。结果　各治疗组诱喘时间均比哮喘组长。A组血清NO显著高于C组 (P <0 0 5 ) ;与A组相比 ,D组显著降低 (P <0 0 5 ) ,L组无明显差异。肺泡灌洗液中NO值A组较C组明显升高 (P <0 0 5 ) ;与A组比较 ,D组和L组均明显降低 (P <0 0 5 )。结论　雾化吸入利多卡因对实验性哮喘豚鼠有治疗作用 。 展开更多
关键词 利多卡因 哮喘 豚鼠 药物实验 地塞米松 一氧化氮
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环氧合酶2的DNA疫苗构建及其在COS-7细胞中表达 被引量：1
8
作者 罗恒 王和勇 +4 位作者 向阳 唐亮 谈立松 周彩存 孙敏 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期95-99,共5页
构建了环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)的DNA疫苗载体pVAX1-COX-2,并考察在COS-7细胞中表达.用RT-PCR法从肺癌A549细胞中获得环氧合酶-2基因片段,此片段插入pVAX1载体构建pVAX1-COX-2真核重组表达质粒,脂质体介导法转染COS-7细胞,以... 构建了环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)的DNA疫苗载体pVAX1-COX-2,并考察在COS-7细胞中表达.用RT-PCR法从肺癌A549细胞中获得环氧合酶-2基因片段,此片段插入pVAX1载体构建pVAX1-COX-2真核重组表达质粒,脂质体介导法转染COS-7细胞,以pVAX1为对照,收集稳定转染细胞,利用RT-PCR和West-ern-blot分别在mRNA和蛋白水平上考察COX-2表达.实验结果表明:RT-PCR法从A549细胞mRNA中扩增1.8 kb的COX-2基因片段,酶切与测序结果表明所构建的真核表达载体pVAX1-COX-2与预期相符,质脂体法成功地将质粒DNA转染到COS-7细胞中.RT-PCR和Western-blot分析结果表明COX-2已表达.因此,所构建的真核表达载体pVAX1-COX-2正确,且在COS-7细胞中表达. 展开更多
关键词 环氧合酶-2 DNA疫苗 真核表达 COS-7细胞株
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COX-2反义核酸对H1299细胞增殖及顺铂敏感性的影响
9
作者 高志强 唐亮 +2 位作者 粟波 赵印敏 周彩存 《中国肺癌杂志》 CAS 2005年第5期424-427,共4页
背景与目的目前已知环氧化酶2(COX2)在非小细胞肺癌(NSCLC)的浸润、发展及转移中有重要意义,抑制COX2的表达可能抑制NSCLC的发生及发展。用反义COX2重组载体转染高表达COX2的人非小细胞肺癌细胞株H1299,观察其对H1299细胞的生长抑制作... 背景与目的目前已知环氧化酶2(COX2)在非小细胞肺癌(NSCLC)的浸润、发展及转移中有重要意义,抑制COX2的表达可能抑制NSCLC的发生及发展。用反义COX2重组载体转染高表达COX2的人非小细胞肺癌细胞株H1299,观察其对H1299细胞的生长抑制作用及顺铂敏感性的影响。方法通过脂质体介导将COX2反义核酸质粒转入H1299细胞,经氨基糖苷磷酸转移酶(Geneticin,G418)筛选获得稳定表达COX2反义核酸的NSCLC转染细胞系;采用逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)技术检测COX2mRNA的表达水平;应用蛋白质印迹分析(WesternBlot)技术检测COX2蛋白表达水平的变化;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测COX2反义核酸对H1299细胞增生的影响及其对H1299细胞的顺铂敏感性的影响。结果反义COX2基因转染后的H1299细胞中COX2mRNA表达水平明显下调,COX2蛋白表达水平明显减低。转染后的H1299细胞的生长速率明显下降(P<0.05),对顺铂的半数存活浓度(IC50)值由转染前的3.8mg/l降低为1.8mg/l(P<0.05)。结论COX2反义核酸导入不仅可抑制H1299细胞的增生,而且可增加H1299细胞对顺铂的敏感性。 展开更多
关键词 环氧化酶-2 H1299 肺肿瘤 逆转录聚合酶链式反应 反义核酸
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鸡VEGF基因的克隆及融合蛋白的表达与分离纯化
10
作者 刘倩 唐亮 +1 位作者 谈立松 赵玉军 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期447-450,共4页
为获得鸡VEGF基因片段,原核表达GST-cVEG基因,并对融合蛋白进行分离纯化,应用RT-PCR从鸡睾丸中扩增出VEGF片段,将PCR产物克隆至pMD 18-T载体。随后,将cVEGF片段亚克隆至带有GST的原核表达载体pGEX-4T-2中,测序鉴定。将重组质粒pGEX4T2-c... 为获得鸡VEGF基因片段,原核表达GST-cVEG基因,并对融合蛋白进行分离纯化,应用RT-PCR从鸡睾丸中扩增出VEGF片段,将PCR产物克隆至pMD 18-T载体。随后,将cVEGF片段亚克隆至带有GST的原核表达载体pGEX-4T-2中,测序鉴定。将重组质粒pGEX4T2-cVEGF转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,IPTG诱导,并进一步通过Ni-NTA Agarose亲合层析纯化,纯化产物以SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,结果表明,成功地构建了原核表达质粒pGEX4T2-cVEGF。GST-cVEGF融合蛋白在大肠杆菌中得到了表达,Ni-NTA Agarose纯化后得到较纯的蛋白。Western blot分析证实,纯化后蛋白是GST-cVEGF融合蛋白,为进一步研究GST-cVEGF融合蛋白疫苗抗小鼠肿瘤模型奠定了基础。 展开更多
关键词 cVEGF 融合蛋白 原核表达
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