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氯化高铁血红素诱导K562细胞中β-珠蛋白基因表达的研究 被引量:2
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作者 贾春平 陈美珏 +1 位作者 黄淑帧 曾溢滔 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期399-402,共4页
以绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报道基因,构建了在β-珠蛋白启动子驱动及HS2元件调控下的重组表达载体HG,用脂质体转染法将其转染到K562细胞中,并用RT-PCR方法及流式细胞仪检测氯化高铁血红素(Hm)对K562细胞中β-珠蛋白基因表达及重组... 以绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报道基因,构建了在β-珠蛋白启动子驱动及HS2元件调控下的重组表达载体HG,用脂质体转染法将其转染到K562细胞中,并用RT-PCR方法及流式细胞仪检测氯化高铁血红素(Hm)对K562细胞中β-珠蛋白基因表达及重组载体HG在K562细胞中瞬时表达的影响。结果显示:用30μmol/L Hm诱导K562细胞24、28及72h后,不仅其γ-珠蛋白mRNA水平升高,其β-珠蛋白mRNA水平也明显上升,而且这种诱导作用在诱导24、48h后比较明显;Hm还可增强重组表达载体HG在K562细胞中的瞬时表达。提示Hm诱导红系分化的机理可能与γ-β-珠蛋白基因的转换机制相关。 展开更多
关键词 氯化高铁血红素 诱导 K562细胞 Β-珠蛋白 基因表达
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反义核酸对β-地中海贫血基因(IVS-2-654C→T)剪接缺陷抑制作用的研究 被引量:2
2
作者 宫澜 孙琼 +2 位作者 任兆瑞 黄淑帧 曾溢滔 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1997年第5期39-43,共5页
应用体外转录和体外剪接系统,以体外转录产生的特异性反义RNA封闭IVS-2-654→T突变基因中3’隐匿剪接位点和5’异常剪接位点,使之失去活性,以减少异常加工的mRNA,且部分恢复了正常剪接途径,其正常剪接mRNA的水平[β/(β十β... 应用体外转录和体外剪接系统,以体外转录产生的特异性反义RNA封闭IVS-2-654→T突变基因中3’隐匿剪接位点和5’异常剪接位点,使之失去活性,以减少异常加工的mRNA,且部分恢复了正常剪接途径,其正常剪接mRNA的水平[β/(β十β)]从处理前的0.25上升到处理后的0.46—0.61。研究结果提示了应用反义核酸临床治疗β-地贫(IVS-2-654C→T突变)的可能性。 展开更多
关键词 反义核酸 地中海贫血 基因剪接缺陷 基因治疗
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可用于基因表达研究的转基因小鼠乳腺上皮细胞模型的构建 被引量:1
3
作者 蒋世忠 闫亚彬 +3 位作者 谢飞 王娟 黄英 任兆瑞 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期955-960,共6页
目的建立转基因小鼠乳腺上皮细胞模型,为研究乳腺内环境因素调控外源基因的表达和制备高效表达外源基因的乳腺生物反应器提供研究平台。方法通过机械破碎和胶原酶消化的方法获取人转铁蛋白(hTF)转基因小鼠的乳腺上皮细胞,并进行体外原... 目的建立转基因小鼠乳腺上皮细胞模型,为研究乳腺内环境因素调控外源基因的表达和制备高效表达外源基因的乳腺生物反应器提供研究平台。方法通过机械破碎和胶原酶消化的方法获取人转铁蛋白(hTF)转基因小鼠的乳腺上皮细胞,并进行体外原代培养。经胰蛋白酶纯化后,绘制乳腺上皮细胞生长曲线;免疫组织化学方法检测角蛋白18的表达;透射电子显微镜(透射电镜)观察乳腺上皮细胞超微结构;流式细胞仪检测细胞周期分布;显微镜下分析乳腺上皮细胞核型。将牛催乳素真核表达载体(pCMV-bPRL)转染至转基因乳腺上皮细胞中,检测外源bPRL的表达。结果乳腺上皮细胞生长曲线呈"S"形;免疫荧光组织化学分析结果显示hTF转基因小鼠乳腺上皮细胞角蛋白18呈阳性表达;透射电镜观察发现乳腺上皮细胞胞核较大、偏位,有双核或多核,胞质丰富,空泡、粗面内质网、高尔基体丰富;流式细胞仪检测结果显示:乳腺上皮细胞增殖活跃,G2/M期+S期细胞占15%;细胞核型分析结果显示处于分裂期的细胞具有正常的二倍体,染色体完整。pCMV-bPRL转染乳腺上皮细胞24 h后,上清液中检测到bPRL的表达。结论体外培养的转基因乳腺上皮细胞具有类似体内细胞的生物学特征,并可表达真核表达载体,为研究环境因素对乳腺功能的影响及制备乳腺生物反应器提供了一种细胞模型。 展开更多
关键词 转基因小鼠 乳腺上皮细胞 真核表达载体 牛催乳素
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羟基脲(Hu)治疗β-地中海贫血的研究——Hu对珠蛋白基因表达的影响
4
作者 黄淑帧 任兆瑞 +5 位作者 陈美珏 许洪平 曾溢滔 G.P.Rodgers 曾凡一 A.N.Schechter 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1993年第7期1-5,共5页
关键词 地中海贫血 珠蛋白 羟基脲 基因
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反义c-fos寡脱氧核苷酸对淋巴瘤细胞株SAC-IIB_2恶性表型抑制的研究 被引量:4
5
作者 殷连华 孔宪寿 +1 位作者 严开平 郑颂国 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1997年第1期58-60,共3页
已发现SAC-IIB_2淋巴瘤细胞株中原癌基因c-fos呈过度表达.针对小鼠c-fos cDNA第2-7编码序列,设计合成了18聚反义、正义和无义的寡脱氧核苷酸.结果发现,反义c-fos寡脱氧核苷酸能促使SAC-IIB_2的细胞形态向成熟阶段分化并抑制其增殖速率,... 已发现SAC-IIB_2淋巴瘤细胞株中原癌基因c-fos呈过度表达.针对小鼠c-fos cDNA第2-7编码序列,设计合成了18聚反义、正义和无义的寡脱氧核苷酸.结果发现,反义c-fos寡脱氧核苷酸能促使SAC-IIB_2的细胞形态向成熟阶段分化并抑制其增殖速率,同时降低其对裸鼠的致瘤性及Fos蛋白的表达,但对SAC-IIB_2的细胞动力学没有明显的影响.而正义和无义的c-fos寡脱氧核苷酸没有相应的作用.提示反义c-fos寡脱氧核苷酸能特异地抑制小鼠淋巴瘤SAC-IIB_2细胞的恶性表型. 展开更多
关键词 淋巴瘤 细胞株 c-fox 寡脱氧核苷酸 反义技术
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试管牛和试管羊胚胎性别的鉴定 被引量:49
6
作者 黄淑帧 陈美珏 +4 位作者 黄英 孙琼 陆建英 任兆瑞 曾溢滔 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期65-68,共4页
奶牛和山羊的卵母细胞经过体外成熟、体外受精和体外发育至桑椹期 ,在显微操作下 ,吸取4~6个胚胎细胞 ,应用巢式PCR技术对其DNA进行SRY基因的测定以进行胚胎性别鉴定。共有27枚转有外源基因的试管牛胚胎和207枚转基因试管羊胚胎进行了... 奶牛和山羊的卵母细胞经过体外成熟、体外受精和体外发育至桑椹期 ,在显微操作下 ,吸取4~6个胚胎细胞 ,应用巢式PCR技术对其DNA进行SRY基因的测定以进行胚胎性别鉴定。共有27枚转有外源基因的试管牛胚胎和207枚转基因试管羊胚胎进行了SRY基因检测。选取10枚经过性别鉴定的牛胚胎移植于8头受体母牛和124枚已知性别的羊胚胎移植于44头受体母羊 ,移植后妊娠率分别为37 5% (牛 ,3/8)和61 4% (羊 ,27/44)。最后产生1头分娩牛犊和2头流产胎牛以及14头分娩羊羔和2头流产胎羊 ,它们的性别与胚胎性别鉴定的结果完全相符。 展开更多
关键词 体外受精 性别鉴定 早期胚胎 转基因家畜
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应用荧光原位杂交检测人凝血因子Ⅸ在转基因小鼠染色体上的整合 被引量:12
7
作者 肖艳萍 奚鹰 +1 位作者 黄文英 黄英 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期232-236,共5页
应用荧光原位杂交 (FISH)技术检测两个转基因小鼠家系从F1到F4 代的整合情况。阳性转基因小鼠 98%~ 10 0 %的中期分裂相 ,85 %~ 94%的间期核出现杂交信号 ;阴性对照小鼠 10 0 %的中期分裂相、95 %~ 96 %的间期核未出现杂交信号。结... 应用荧光原位杂交 (FISH)技术检测两个转基因小鼠家系从F1到F4 代的整合情况。阳性转基因小鼠 98%~ 10 0 %的中期分裂相 ,85 %~ 94%的间期核出现杂交信号 ;阴性对照小鼠 10 0 %的中期分裂相、95 %~ 96 %的间期核未出现杂交信号。结果表明 ,该FISH实验条件能对转基因整合位点进行高效特异检测。本文分析的两家系转基因小鼠均为单位点整合 ,但整合位点不同。各家系内F1到F4 代的转基因小鼠均可检出整合染色体 ,且整合位点相同 ,表明外源基因稳定整合并遗传给后代。 展开更多
关键词 荧光原位杂交 检测 人凝血因子Ⅸ 转基因小鼠 染色体 整合位点
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核型异常的两性畸形山羊2例报告 被引量:4
8
作者 陆建英 陈雪银 +1 位作者 黄英 任兆瑞 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期160-162,共3页
本文报道2例两性畸形的山羊,它们均具雌雄两套生殖器官,染色体组型分析显示它们均为性染色体嵌合体,核型为60,XX XY,两头畸形山羊的XX细胞系的比例分别为42%和54%,XY细胞系的比例分别为58%和46%。
关键词 山羊 两性畸形 性染色体异常
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山羊β-酪蛋白基因启动子指导人血清白蛋白基因在小鼠组织中的特异性表达 被引量:5
9
作者 曹新 曾溢滔 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期518-520,共3页
对本所构建的pcDNA3.1- β6 .7hALBm表达载体行尾静脉注射直接转染哺乳期母鼠的活体组织。通过RT-PCR检测hALBm基因在小鼠几种组织中的表达来研究该构建体的组织特异性。结果 :构建体在受试鼠组织中的表达显示了较好的乳腺组织特异性。... 对本所构建的pcDNA3.1- β6 .7hALBm表达载体行尾静脉注射直接转染哺乳期母鼠的活体组织。通过RT-PCR检测hALBm基因在小鼠几种组织中的表达来研究该构建体的组织特异性。结果 :构建体在受试鼠组织中的表达显示了较好的乳腺组织特异性。说明构建具有较长 5′端上游乳蛋白调控区的乳腺特异性表达载体对组织特异性表达是必需的。 展开更多
关键词 启动子 表达载体 特异性表达 山羊β-酪蛋白基因 人血清白蛋白
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46,XY女性性反转患者SRY基因启动子区一个新的点突变及其功能分析 被引量:4
10
作者 陈云弟 周刚 +2 位作者 孙琼 陆建英 曾溢滔 《生物化学杂志》 CSCD 1997年第6期655-660,共6页
通过DNA序列测定在一名46,XY女性性反转患者SRY基因启动子区发现了一个新的突变:nt.-81G→A.该突变不见于正常男性,因此不是DNA多态性.为了检测这一点突变对SRY基因表达功能的影响,构建了分别由正常或突... 通过DNA序列测定在一名46,XY女性性反转患者SRY基因启动子区发现了一个新的突变:nt.-81G→A.该突变不见于正常男性,因此不是DNA多态性.为了检测这一点突变对SRY基因表达功能的影响,构建了分别由正常或突变的人SRY基因启动子区片段调控氯霉素乙酰转移酶(CAT)报告基因表达的两个质粒,寡核苷酸探针杂交证实该启动子片段正常或携带有G→A突变.这两个质粒分别与pSV-β-半乳糖苷酶内对照质粒共转染HeLa细胞后,瞬间表达分析显示这一突变对CAT酶活性水平无显著影响(0.50>P>0.20).上述正常和突变的SRY基因启动子片段与K562细胞核抽提物的凝胶阻滞实验也表明,突变对K562细胞核蛋白与SRY基因启动子区的结合影响不大. 展开更多
关键词 46 XY女性 性反转综合征 SRY基因 点突变
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牛催乳素基因组全序列的克隆及在真核细胞中的表达 被引量:4
11
作者 曹新 曾溢滔 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期112-115,共4页
目的:构建牛催乳素(bPRL)为目的基因转基因动物-乳腺生物反应器。方法:采用长距离PCR技术,首次从正常牛外周血细胞中克隆到全长9 388 bp的bPRL基因组序列,利用亚克隆的方法将bPRL基因组DNA克隆到真核表达载体pcD-NA3.1(+)上,构建出pcDNA... 目的:构建牛催乳素(bPRL)为目的基因转基因动物-乳腺生物反应器。方法:采用长距离PCR技术,首次从正常牛外周血细胞中克隆到全长9 388 bp的bPRL基因组序列,利用亚克隆的方法将bPRL基因组DNA克隆到真核表达载体pcD-NA3.1(+)上,构建出pcDNA3.1(+)/bPRL的重组表达载体,通过脂质体转染至非洲绿毛猴肾细胞株(COS-7),逆转录-PCR得到长度为804 bp扩增片段。结果:序列测定bPRL基因包括全部5个外显子和4个内含子,5’端854 bp的上游调控区以及3’端69 bp的非翻译区(UTR)。bPRL cDNA包含信号肽在内的全长序列。结论:克隆的bPRL基因组DNA序列在转录水平上具有生物学功能,在体外培养的真核细胞中能够进行正常表达,为进一步建立转基因动物-乳腺生物反应器奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 长距离PCR COS—7细胞 催乳素 真核细胞 克隆
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可随HeLa细胞传代而传递的反义RNA真核表达系统
12
作者 陈云弟 顾小锋 +4 位作者 宫澜 陈巍 陈美珏 黄淑帧 曾溢滔 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第2期219-222,共4页
为研究反义RNA表达载体在细胞内的稳定性,构建了一个特异性针对β地中海贫血基因IVS-2-654C→T(β654)突变mRNA前体异常剪接位点的反义RNA表达载体pCMVA.pCMVA转染β654HeLa细胞后,通过... 为研究反义RNA表达载体在细胞内的稳定性,构建了一个特异性针对β地中海贫血基因IVS-2-654C→T(β654)突变mRNA前体异常剪接位点的反义RNA表达载体pCMVA.pCMVA转染β654HeLa细胞后,通过RNA定量检测反义片段对β654mRNA异常剪接的纠正作用;再从转染后传代5次并冰冻保存1年的HeLa细胞中回收反义表达载体,转染另外的β654HeLa细胞,同样检测它对β654mRNA异常剪接的纠正作用.结果显示该载体在细胞传代前后均能阻断β654异常剪接,部分恢复其正常剪接途径:用回收的pCMVA转染β654HeLa细胞后,正常剪接的βmRNA水平[β/(β+β*)]由0.05上升到处理后15d的0.48,而2种对照质粒处理后对这一比值影响不大.表明pCMVA可在HeLa细胞中随着细胞传代而传递下去。 展开更多
关键词 Β地中海贫血 反义RNA 剪接 基因治疗
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血友病A的分子诊断:因子Ⅷ基因重排分析
13
作者 陈云弟 王寅文 +4 位作者 陈美珏 盛敏 任兆瑞 曾溢滔 吴竞生 《高技术通讯》 CAS CSCD 1996年第1期47-49,共3页
采用Southern印迹杂交技术对18个无亲缘关系的中国血友病A家系共52名成员的因子Ⅷ基因重排进行了分析。结果表明8个(44%)家系显示因子Ⅷ基因倒位,其中7个为远端倒位,1个为近端倒位。证实因子Ⅷ基因倒位是中国人... 采用Southern印迹杂交技术对18个无亲缘关系的中国血友病A家系共52名成员的因子Ⅷ基因重排进行了分析。结果表明8个(44%)家系显示因子Ⅷ基因倒位,其中7个为远端倒位,1个为近端倒位。证实因子Ⅷ基因倒位是中国人血友病A患者的普遍分子基础,从而为血友病A的分子诊断提供了科学依据。 展开更多
关键词 血友病A FⅧ基因 分子诊断
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直接检测IT15基因(CAG)n重复对亨廷顿氏病进行基因诊断
14
作者 毛跃华 周刚 +4 位作者 陈美珏 任兆瑞 曾溢滔 王秀英 许志大 《高技术通讯》 CAS CSCD 1995年第5期1-6,共6页
应用巢式PCR和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳放射自显影鉴定IT15基因(CAG)n串联重复序列拷贝数的技术,对40名正常中国人以及徐州和浙江两大亨廷顿氏病(HD病)家系46名家庭成员进行了分析。结果表明,正常一国人IT15... 应用巢式PCR和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳放射自显影鉴定IT15基因(CAG)n串联重复序列拷贝数的技术,对40名正常中国人以及徐州和浙江两大亨廷顿氏病(HD病)家系46名家庭成员进行了分析。结果表明,正常一国人IT15基困(CAG)n拷贝数为16左右,而HD患者的突变基因(CAG)n拷贝数均大于40,两者之间不重叠。对38名HD病高风险者进行症状前分子诊断,揭示11名家庭成员为HD基因的携带者,与家系调查和临床分析的结果相吻合。本文结果不仅证明IT15基因的动态突变也是导致中国人HD病的遗传学基础,而且为HD病的基因诊断、遗传咨询和遗传保健提供了科学资料。 展开更多
关键词 亨廷顿氏病 IT15基因 基因诊断 舞蹈病
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应用实时荧光定量PCR测定牛体细胞端粒长度 被引量:2
15
作者 吕昆 林丹 +2 位作者 许淼 朱怡文 黄英 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第9期154-158,共5页
本研究为了验证应用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative PCR,Q-PCR)测定牛基因组端粒长度的可行性,选取18个不同来源牛耳成纤维细胞抽提基因组DNA为样本,对Q-PCR和经典的Southern印迹法进行了相关性分析。结果显示,Q-PCR测定端粒长... 本研究为了验证应用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative PCR,Q-PCR)测定牛基因组端粒长度的可行性,选取18个不同来源牛耳成纤维细胞抽提基因组DNA为样本,对Q-PCR和经典的Southern印迹法进行了相关性分析。结果显示,Q-PCR测定端粒长度相对T/S为1.16±0.24,Southern印迹法测量端粒平均TRF值为16.99 kb±0.85 kb,两种方法获得的结果相关性分析R2=0.5612(P<0.01),因此实时荧光定量PCR是一种测定牛基因组端粒长度的可靠的方法。 展开更多
关键词 荧光定量聚合酶链式反应 印迹法 牛体细胞 端粒长度
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与抑制K562细胞向红系分化相关的Attractin基因的分离和初步鉴定 被引量:1
16
作者 高枫 任兆瑞 黄淑帧 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期1-5,共5页
应用差异显示PCR(DDRT -PCR)方法分离野生型K5 6 2细胞株和能表达人 β -珠蛋白基因的变种K5 6 2细胞株的 4个差异cDNA片段 ,序列测定后 ,挑选差异最明显的片段dd1,经过RT -PCR、Northern印迹鉴定确实为两株细胞间的差异片段 ,测序后经... 应用差异显示PCR(DDRT -PCR)方法分离野生型K5 6 2细胞株和能表达人 β -珠蛋白基因的变种K5 6 2细胞株的 4个差异cDNA片段 ,序列测定后 ,挑选差异最明显的片段dd1,经过RT -PCR、Northern印迹鉴定确实为两株细胞间的差异片段 ,测序后经同源性分析等 ,发现其所对应的基因是吸引素 (Attractin ,GenBank注册号AF10 6 86 1)。根据其结构预测 ,Attractin有可能是K5 6 2细胞表面一个黏附因子受体 ,与抑制K5 6 2细胞向红系分化有关。 展开更多
关键词 K562细胞 差异显示PCR β-球蛋白基因 ATTRACTIN 红系分化 基因鉴定
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人转铁蛋白转基因克隆牛整合位点检测 被引量:1
17
作者 刘宇 朱怡文 +1 位作者 许淼 黄英 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第2期60-63,共4页
为检测外源基因整合在转基因克隆牛染色体上的定位情况,通过优化染色体荧光原位杂交技术,成功对4头人转铁蛋白转基因克隆牛的整合位点进行定位。每头牛分析中期分裂相40个以上,杂交率在53.1%~86.8%之间,且杂交信号分别位于转基因克隆牛... 为检测外源基因整合在转基因克隆牛染色体上的定位情况,通过优化染色体荧光原位杂交技术,成功对4头人转铁蛋白转基因克隆牛的整合位点进行定位。每头牛分析中期分裂相40个以上,杂交率在53.1%~86.8%之间,且杂交信号分别位于转基因克隆牛的11号、15号和19号染色体的相应位置;另外采用定量PCR方法对杂交信号强弱不同的转基因克隆牛个体进行整合位点拷贝数的检测,结果显示拷贝数的多少与杂交信号强弱直接有关。 展开更多
关键词 荧光原位杂交 人转铁蛋白转基因克隆牛 整合位点 拷贝数
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一种快捷可靠评价链霉菌噬菌体准ФC31整合酶功能的双荧光报告系统(英文)
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作者 徐焕宇 马晴雯 +4 位作者 任兆瑞 巩芷娟 黄淑帧 曾凡一 曾溢滔 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第7期929-933,共5页
在NIH3T3细胞中构建了一种链霉菌噬菌体准ФC31整合酶报告系统.该报告载体同时编码红色荧光蛋白和绿色荧光蛋白,与编码准ФC31整合酶的载体共转染可以反映准ФC31整合酶的活性.细胞中从红色荧光到绿色荧光的变化和百分比的变化可经流式... 在NIH3T3细胞中构建了一种链霉菌噬菌体准ФC31整合酶报告系统.该报告载体同时编码红色荧光蛋白和绿色荧光蛋白,与编码准ФC31整合酶的载体共转染可以反映准ФC31整合酶的活性.细胞中从红色荧光到绿色荧光的变化和百分比的变化可经流式细胞仪检出.随着转染中准ФC31整合酶表达载体的比例升高,表达绿色荧光的细胞比例上升.准ФC31整合酶表达载体和报告系统载体比例在10∶1时,可达最高约90%的红绿荧光转变率.这表明该准ФC31整合酶报告系统提供了一种在细胞中快捷可靠的评价准ФC31整合酶功能的方法. 展开更多
关键词 ФC31整合酶 报告系统 位点特异性重组 NIH3T3细胞系
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干细胞和产前治疗
19
作者 王墨林 黄淑帧 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期559-562,共4页
干细胞特殊的生物性质为产前治疗的研究和应用带来了新的希望。近年来,借助干细胞进行的产前治疗的基础研究进展迅速,为早日在临床广泛开展产前治疗提供了大量有益的参考和指导。本文就这方面的研究进展作一综述。
关键词 干细胞 产前治疗 类型 发展方向
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