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新型噬菌粒展示载体pCANTAB5L的构建 被引量：7
1
作者 沈毅珺 潘卫 +7 位作者 易进华 徐容 陈秋莉 潘欣 冯春芝 邓松华 戚中田 刘彦君 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期298-302,共5页
目的 :将柔性多肽接头和多克隆位点引入噬菌粒载体 pCANTAB5X中 ,构建适用于展示各种随机肽库、功能靶蛋白、功能靶蛋白变异体库和大分子量 (>30 0个氨基酸 )功能蛋白的新型噬菌粒展示载体。 方法 :应用 5′端含XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ... 目的 :将柔性多肽接头和多克隆位点引入噬菌粒载体 pCANTAB5X中 ,构建适用于展示各种随机肽库、功能靶蛋白、功能靶蛋白变异体库和大分子量 (>30 0个氨基酸 )功能蛋白的新型噬菌粒展示载体。 方法 :应用 5′端含XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ、KpnⅠ识别序列的引物 ,PCR扩增获得XbaⅠ StuⅠ SalⅠ KpnⅠ [G4S]3 NotⅠ衔接片段 ,将该PCR产物克隆到pMD 18T中 ,再将该片段插入 pCANTAB 5X中构建成新型噬菌粒展示载体 pCANTAB5L。 结果 :限制性内切酶酶谱及DNA序列分析证明[G4S]3多肽接头和限制性内酶切位点XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ、KpnⅠ序列被引入到新构建的噬菌粒载体pCANTAB 5L中。 结论 :成功构建了新型噬菌粒展示载体 pCANTAB5L ,并能有效展示功能靶蛋白。 展开更多
关键词 噬菌体展示 噬菌粒载体 多克隆位点 多肽接头
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噬菌体展示重组人淋巴毒素突变体库及受体亲和筛选 被引量：7
2
作者 沈毅珺 潘卫 +7 位作者 许燕 王征 杨彤 谭靖伟 吴劲松 吴芳 曹峰 刘彦君 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第1期75-80,共6页
淋巴毒素(lymphotoxin,LT) 通过TNFR1受体传递凋亡信号,从而发挥抗肿瘤活性. 对LT的受体结合区域进行多点随机突变,利用噬菌体展示重组人淋巴毒素(rhLT) R46,S106,L130三点随机突变组合文库和S106～F110区域随机突变体库. 噬菌体库与固... 淋巴毒素(lymphotoxin,LT) 通过TNFR1受体传递凋亡信号,从而发挥抗肿瘤活性. 对LT的受体结合区域进行多点随机突变,利用噬菌体展示重组人淋巴毒素(rhLT) R46,S106,L130三点随机突变组合文库和S106～F110区域随机突变体库. 噬菌体库与固相化TNFR1受体进行亲和筛选,富集了能与TNFR1受体结合的rhLT突变体. 随机挑选20个单克隆噬菌体进行ELISA受体结合鉴定,其中80%的克隆与TNFR1受体特异性结合,有4个克隆与TNFR1受体的结合能力高于野生型序列的rhLT. 将这4个结合力高的突变体克隆于pET32a(+)载体,经过大肠杆菌表达和纯化操作后,检测这些突变体蛋白与TNFR1受体的结合活性和对L929细胞的杀伤活性,发现3个克隆的受体结合性质与其展示于噬菌体上时基本吻合,其中C199克隆与TNFR1的结合活性比野生型序列的rhLT提高了近30%,且其对L929细胞的杀伤活性提高了近90%. 应用噬菌体展示技术对淋巴毒素进行体外进化研究的尝试,为下一步的蛋白质结构和功能研究提供了思路,可成为大分子药物开发的有效工具. 展开更多
关键词 淋巴毒素 随机突变 噬菌体展示 亲和筛选
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两性霉素B脂质体药代动力学及组织分布研究 被引量：3
3
作者 徐智儒 秦燕 +1 位作者 毛文学 刘全海 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2009年第9期995-999,共5页
目的:测定血浆及组织中两性霉素B的浓度,并比较受试与参比两性霉素B脂质体在犬体内药代动力学性质及大鼠主要组织分布特性。方法:6只犬静脉随机、交叉给予受试及参比药物,剂量为5 mg/kg,在不同时间点采集血浆样品;大鼠同样剂量静脉给予... 目的:测定血浆及组织中两性霉素B的浓度,并比较受试与参比两性霉素B脂质体在犬体内药代动力学性质及大鼠主要组织分布特性。方法:6只犬静脉随机、交叉给予受试及参比药物,剂量为5 mg/kg,在不同时间点采集血浆样品;大鼠同样剂量静脉给予受试及参比药物,在给药后不同时间点取组织样品。用HPLC法测定生物样品中两性霉素B浓度,并用DAS 2.0软件拟合求算药代动力学参数。结果:犬i.v.给药两性霉素B脂质体后血药浓度-时间曲线符合二室模型,主要药代动力学参数为,受试药物:t1/2β(53.6±2.2)h,AUC(18.7±3.2)mg.L-1.h,CL(0.23±0.05)L.h-1.kg-1,V1(11.6±2.8)L/kg;参比药物:t1/2β(52.8±0.9)h,AUC(19.6±2.2)mg.L-1.h,CL(0.22±0.03)L.h-1.kg-1,V1(10.6±2.9)L/kg。结论:对上述参数以SAS统计软件进行双侧t检验,结果表明给予受试及参比药物后犬主要药代动力学参数差异无统计学意义(P>0.05)。对各时间点主要脏器的药物浓度进行比较,差异无统计学意义(P>0.05)。 展开更多
关键词 两性霉素B 脂质体 HPLC 药代动力学
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中药方剂Bingdeling体外对临床常见4种细菌的抑菌作用 被引量：2
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作者 钱红 肖农 +4 位作者 秦志峰 刘彦军 沈毅君 王一 许青 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期212-214,共3页
目的研究中药方剂Bingdeling体外对金黄色葡萄球菌等细菌的抑制作用。方法采用菌落形成计数方法,观察Bingdeling对临床常见4种细菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门菌、铜绿假单胞菌)体外抑菌作用;采用液体培养基连续稀释法测定Bingdel... 目的研究中药方剂Bingdeling体外对金黄色葡萄球菌等细菌的抑制作用。方法采用菌落形成计数方法,观察Bingdeling对临床常见4种细菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门菌、铜绿假单胞菌)体外抑菌作用;采用液体培养基连续稀释法测定Bingdeling体外对金黄色葡萄球菌生长的最小抑菌浓度(MIC);采用纸片扩散法进行中药方剂Bingdeling联合青霉素以及β-内酰胺类抗生素(阿莫西林)、氨基糖苷类抗生素(庆大霉素)、大环内酯类抗生素(罗红霉素)等抗菌药体外对金黄色葡萄球菌的药敏试验。结果体外抑菌实验结果表明,中药方剂Bingdeling体外对金黄色葡萄球菌的生长具有非常明显的抑制作用;Bingdeling体外对金黄色葡萄球菌生长的MIC是原液的0.016倍;体外Bingdeling联合青霉素、阿莫西林、庆大霉素、罗红霉素应用,对金黄色葡萄球菌有协同增强抗菌作用。结论Bingdeling体外对金黄色葡萄球菌有明显的抑菌作用,且与阿莫西林等抗菌药有协同抑菌作用,具有潜在的临床应用价值。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 最小抑菌浓度 中药方剂
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荞麦手性肌醇提取及其降糖功能研究 被引量：17
5
作者 曹文明 张燕群 苏勇 《粮食与油脂》 2006年第1期22-24,共3页
该文报道Gr+3催导苦荞(Fagopyrium tartarian)仁发芽,整粒抽提种子中手性肌醇(D-chiro- inositol,D-CI)工艺方法;并使用SPSS软件评价D-CI抽提物对糖尿病ICR小鼠具有显著降低空 腹血糖(FBG)(P<0．05),及对糖尿病患者具有显著降低空腹... 该文报道Gr+3催导苦荞(Fagopyrium tartarian)仁发芽,整粒抽提种子中手性肌醇(D-chiro- inositol,D-CI)工艺方法;并使用SPSS软件评价D-CI抽提物对糖尿病ICR小鼠具有显著降低空 腹血糖(FBG)(P<0．05),及对糖尿病患者具有显著降低空腹血糖(FBG)和极显著降低餐后血糖 (PG)作用(P<0．01)。 展开更多
关键词 手性肌醇 荞麦 糖尿病
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