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Lewisy抗原对人卵巢癌细胞RMG-I-H部分耐药相关蛋白基因表达的影响 被引量:4
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作者 刘晴 林蓓 +5 位作者 王朋丽 严丽梅 郝莹莹 李飞飞 朱连成 张淑兰 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期481-487,F0003,共8页
目的探讨细胞表面Lewisy抗原对人卵巢癌细胞系RMG-I-H细胞的部分耐药相关蛋白基因表达的影响。方法RT-PCR法检测转染α1,2-岩藻糖转移酶基因和未转染α1,2-岩藻糖转移酶基因的人卵巢癌细胞系RMG-I-H和RMG-I细胞中,以及10μg/ml抗Lewisy... 目的探讨细胞表面Lewisy抗原对人卵巢癌细胞系RMG-I-H细胞的部分耐药相关蛋白基因表达的影响。方法RT-PCR法检测转染α1,2-岩藻糖转移酶基因和未转染α1,2-岩藻糖转移酶基因的人卵巢癌细胞系RMG-I-H和RMG-I细胞中,以及10μg/ml抗Lewisy单克隆抗体处理及未处理的RMG-I-H细胞中部分耐药相关蛋白mRNA的表达量。免疫细胞化学方法检测RMG-I和RMG-I-H细胞中P-糖蛋白(P-gp)的表达;分别建立RMG-I和RMG-I-H细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,采取免疫组织化学方法检测移植瘤组织P-gp的表达。结果与RMG-I细胞比较,RMG-I-H细胞中蛋白激酶C-α(PKC-α)、拓扑异构酶Ⅰ(TopoⅠ)、多药耐药相关蛋白-1(MRP-1)及MRP-2基因mRNA的相对表达量均显著增高(0.46±0.02vs.0.27±0.05、0.82±0.08vs.0.52±0.04、0.66±0.07vs.0.34±0.12和0.44±0.08vs.0.23±0.05,均P<0.05),而多药耐药基因-1(MDR-1)mRNA的相对表达量显著降低(0.26±0.05vs.0.45±0.08,P<0.05)。免疫化学染色分析显示,不论体内还是体外,P-gp在RMG-I-H细胞中的表达量均显著高于RMG-I细胞中的表达量(均P<0.05)。经Lewisy单克隆抗体处理后,RMG-I-H细胞中MDR-1、MRP-1、MRP-2、PKC-α及TopoⅠ的mRNA相对表达量均呈时间依赖性下降(均P<0.05),而对照组以上基因mRNA的表达量不随时间的变化而变化(均P>0.05)。经Lewis y抗体处理6h的RMG-I-H细胞中MDR-1、MRP-1、MRP-2、PKC-α及TopoⅠ的mRNA相对表达量均显著低于对照组(均P<0.05),Lewis y单克隆抗体对上述基因表达的抑制率分别为48.55%、77.50%、70.18%、45.86%和46.13%。结论人卵巢癌细胞表面Lewisy抗原与部分耐药相关蛋白基因表达的调节密切相关。 展开更多
关键词 LEWIS y抗原 抗Lewis y单克隆抗体 卵巢癌 耐药相关蛋白
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α-L-岩藻糖苷酶对Lewis y抗原高表达卵巢癌细胞系的体外抑制作用 被引量:2
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作者 刘娟娟 林蓓 +7 位作者 齐跃 李飞飞 郝莹莹 刘大我 赵越 张帆 朱连成 张淑兰 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期321-324,共4页
目的探讨α-L-岩藻糖苷酶对Lewis y抗原高表达卵巢癌细胞系的体外增殖、黏附以及细胞膜通透性的影响。方法以α-L-岩藻糖苷酶处理α1,2-岩藻糖转移酶基因转染前、后卵巢癌细胞系作为实验组(RMG-I-H-A、RMG-I-A),以未经α-L-岩藻糖苷酶... 目的探讨α-L-岩藻糖苷酶对Lewis y抗原高表达卵巢癌细胞系的体外增殖、黏附以及细胞膜通透性的影响。方法以α-L-岩藻糖苷酶处理α1,2-岩藻糖转移酶基因转染前、后卵巢癌细胞系作为实验组(RMG-I-H-A、RMG-I-A),以未经α-L-岩藻糖苷酶处理的细胞作为对照组(RMG-I-H-C、RMG-I-C)。利用免疫细胞化学染色法检测4组细胞中Lewis y抗原的表达,利用细胞计数法、荧光分光光度计测定细胞的生物学特性。结果α-L-岩藻糖苷酶处理后的实验组RMG-I-H-A和RMG-I-A细胞黏附性差,生长速度减慢,细胞边缘整齐,呈椭圆型,无延伸生长,处于细胞分裂期的细胞个数少。实验组RMG-I-H-A和RMG-I-A细胞的膜通透性比对照组RMG-I-H细胞增加了4.4倍,比RMG-I细胞增加了2.3倍。结论 Lewis y抗原具有促进卵巢癌细胞系增殖,提高其生存能力的作用。 展开更多
关键词 Α-L-岩藻糖苷酶 LEWIS y抗原 卵巢癌
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Lewis y抗原及α1,2-岩藻糖转移酶基因在卵巢癌细胞系中的表达
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作者 梁秀云 林蓓 +5 位作者 刘娟娟 高利利 王燕燕 刘大我 严丽梅 张淑兰 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期289-292,296,共5页
目的探讨卵巢癌细胞系中Lewisy抗原及α1,2-岩藻糖转移酶(α1,2-FT)基因FUT1表达变化对卵巢癌细胞增殖、耐药和转移的影响。方法采用免疫细胞化学法、免疫细胞荧光法测定α1,2-FT基因FUT1转染前后的人卵巢癌细胞系RMG-I和RMG-I-H、人卵... 目的探讨卵巢癌细胞系中Lewisy抗原及α1,2-岩藻糖转移酶(α1,2-FT)基因FUT1表达变化对卵巢癌细胞增殖、耐药和转移的影响。方法采用免疫细胞化学法、免疫细胞荧光法测定α1,2-FT基因FUT1转染前后的人卵巢癌细胞系RMG-I和RMG-I-H、人卵巢癌高转移细胞系HO8910PM及亲本细胞系HO8910、人卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP及亲本细胞系COC1中Lewisy抗原的表达。利用RT-PCR法及real-time PCR法检测上述6种细胞中FUT1基因表达的变化。结果经免疫化学方法和免疫细胞荧光法分析,在RMG-I-H、HO8910PM及COC1/DDP细胞系中Lewisy表达强度分别为(53.90±4.33),(37.31±0.19)和(28.52±1.45),与相应的亲本细胞系RMG-I(32.18±0.64)、HO8910(14.96±0.61)及COC1(19.26±0.83)比较均明显升高(P均<0.05)。与RMG-I相比,RMG-I-H中的FUT1基因表达上调3.07倍,与HO8910相比,HO8910PM中的FUT1基因表达上调2.13倍,与COC1相比,COC1/DDP中的α1,2-FT基因表达上调2.42倍(P均<0.05)。结论人卵巢癌细胞表面Lewisy抗原与卵巢癌细胞的增殖、耐药及转移等生物学行为密切相关。 展开更多
关键词 LEWIS y抗原 α1 2-岩藻糖转移酶 FUT1 卵巢肿瘤
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卵巢癌细胞系RMG-Ⅰ Lewis(y)抗原含量变化对其卡铂耐药性的影响 被引量:10
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作者 赵越 林蓓 +4 位作者 郝莹莹 严丽梅 刘娟娟 朱连成 张淑兰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1175-1182,共8页
利用Lewis(y)抗原稳定高表达细胞株RMG-Ⅰ-H,研究细胞表面Lewis(y)抗原含量变化与细胞对卡铂耐药性的关系.利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同浓度卡铂作用后细胞系RMG-Ⅰ-H及其对照组RMG-Ⅰ、RMG-Ⅰ-C的细胞生长抑制率(IR);利用流式细... 利用Lewis(y)抗原稳定高表达细胞株RMG-Ⅰ-H,研究细胞表面Lewis(y)抗原含量变化与细胞对卡铂耐药性的关系.利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同浓度卡铂作用后细胞系RMG-Ⅰ-H及其对照组RMG-Ⅰ、RMG-Ⅰ-C的细胞生长抑制率(IR);利用流式细胞仪(FCM)分析细胞凋亡,同时检测药物作用后细胞的凋亡比率;利用荧光染色法和透射电镜进一步观察细胞凋亡状态.结果表明,RMG-Ⅰ-H的半数抑制浓度(IC50)为(58.07±2.42),明显高于对照组RMG-Ⅰ(28.83±3.57)和RMG-Ⅰ-C(25.71±8.24)的IC50(P<0.01),后两者间无统计学差异(P>0.05),流式细胞仪分析证实3组细胞均存在凋亡,经30mg/L、60mg/L卡铂处理后细胞再进行流式细胞仪检测,RMG-Ⅰ-H的相对凋亡率分别为(20.43±0.71)%和(38.11±0.33)%,为对照组的49%~63%,明显低于对照组(P<0.05),2个对照组间比较无统计学差异(P>0.05),荧光染色和透射电镜直接观察了细胞形态变化,每个浓度组RMG-Ⅰ-H的凋亡程度均低于RMG-Ⅰ和RMG-Ⅰ-C.说明细胞表面Lewis(y)抗原含量增加的同时,卵巢癌细胞对卡铂的耐药性增强. 展开更多
关键词 卵巢癌 Lewis(y)抗原 卡铂 耐药性
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Lewis y抗体对α1,2岩藻糖转移酶基因转染后卵巢癌细胞的体外抑制作用 被引量:7
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作者 李飞飞 林蓓 +3 位作者 郝莹莹 刘娟娟 张帆 张淑兰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期267-269,273,共4页
目的:探讨Lewis y单克隆抗体(mAb)对α1,2岩藻糖转移酶基因转染后高表达Lewis y抗原的卵巢癌细胞系RMG-I-H的体外增殖能力、黏附力以及侵袭力的抑制作用。方法:通过体外细胞增殖实验、细胞黏附实验、细胞体外侵袭实验,以羊抗人IgG抗体... 目的:探讨Lewis y单克隆抗体(mAb)对α1,2岩藻糖转移酶基因转染后高表达Lewis y抗原的卵巢癌细胞系RMG-I-H的体外增殖能力、黏附力以及侵袭力的抑制作用。方法:通过体外细胞增殖实验、细胞黏附实验、细胞体外侵袭实验,以羊抗人IgG抗体处理组或无抗体处理组为对照,检测Lewis y mAb处理前后RMG-I-H细胞增殖能力、黏附力及侵袭力的变化。结果:细胞增殖力与黏附力测定结果表明,实验组与对照组之间有统计学意义(P<0.05),且与对照组相比,第2~7天的生长抑制率分别为5.62%、19.75%、34.96%、46.51%、49.78%和33.33%。不同培养时间(15、30、60min)的黏附抑制率分别为47.59%、58.64%和13.85%。体外细胞侵袭实验显示不同浓度Lewisy抗体处理组与对照组比较均无统计学意义(P>0.05)。结论:抗Lewis y mAb能明显抑制体外RMG-I-H细胞的生长及增殖能力、降低体外培养的RMG-I-H细胞的黏附性,Lewis y抗原与卵巢癌细胞增殖、黏附的生物学行为有关,Lewis y抗体在肿瘤的治疗中显示出潜在的应用价值。 展开更多
关键词 LEWIS y抗原 抗Lewis y单克隆抗体 卵巢癌 抑制
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鼠源性抗雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体库的构建 被引量:3
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作者 王乃东 薛立群 +2 位作者 许道军 袁安文 邓治邦 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期344-351,共8页
利用雄鼠脾细胞免疫6-7周龄C57BL/6雌鼠,加强免疫后取脾细胞,TRIZOL法提取细胞总RNA,并逆转录合成cDNA第一条链。以其为模板,利用特异性Ig基因的引物PCR扩增出重链Fd片段和κ链基因,并将扩增出基因重组到噬质粒载体pComb3中,重组噬质粒... 利用雄鼠脾细胞免疫6-7周龄C57BL/6雌鼠,加强免疫后取脾细胞,TRIZOL法提取细胞总RNA,并逆转录合成cDNA第一条链。以其为模板,利用特异性Ig基因的引物PCR扩增出重链Fd片段和κ链基因,并将扩增出基因重组到噬质粒载体pComb3中,重组噬质粒转化大肠杆菌XL1-Blue中,分别构建κ链基因库和抗体Fab段基因库。分别经蓝白斑筛选,计算转化效率,通过PCR反应和双酶切反应鉴定抗体库的重组率,轻链、重链Fd段基因的重组率均为80%。抗体Fab段基因库经过辅助噬菌体VCSM13超感染,成功构建了鼠源性噬菌体Fab抗体库,并测定噬菌体抗体库的库容和滴度,结果分别为1.5×10^7,3.2×10^11pfu/mL。对噬菌体抗体库的18个克隆进行ELISA分析,结果显示以雄鼠脾细胞作为抗原时,有9个克隆含有雄性特异性的噬菌体抗体,而以雄鼠睾丸细胞作为抗原时,有8个克隆与睾丸细胞呈现结合活性。噬菌体抗体库的构建为雄性特异性抗原的鼠源性噬菌体抗体Fab片段的筛选及其应用、雄性特异性抗原和抗体功能性分子基础的研究奠定了坚实基础。 展开更多
关键词 小鼠 H—y抗原 噬菌体展示技术 抗体库
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生殖免疫技术在动物繁殖中的应用 被引量:2
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作者 阎萍 《中国草食动物》 2007年第3期52-54,共3页
根据近年来在生殖免疫方面取得的研究进展,介绍了激素免疫技术的应用,H-Y精子免疫法性别化精液技术、早期胚胎性别控制免疫技术等在提高动物繁殖力方面的重要作用。
关键词 生殖免疫 激素 H—y抗原 胚胎性别控制
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α1,2-岩藻糖转移酶基因转染对卵巢癌细胞RHG-I裸鼠移植瘤血管内皮生长因子的影响 被引量:2
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作者 李妍 林蓓 +5 位作者 郝莹莹 刘娟娟 严丽梅 张帆 朱连成 张淑兰 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期309-311,共3页
目的探讨α1,2-岩藻糖转移酶基因转染对卵巢癌细胞株RMG-I裸鼠移植瘤血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法利用已经建立的Lewis(y)抗原稳定高表达的卵巢癌细胞株RMG-I-H建立裸鼠移植瘤模型,利用免疫组织化学法测定基因转染前后裸鼠移植... 目的探讨α1,2-岩藻糖转移酶基因转染对卵巢癌细胞株RMG-I裸鼠移植瘤血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法利用已经建立的Lewis(y)抗原稳定高表达的卵巢癌细胞株RMG-I-H建立裸鼠移植瘤模型,利用免疫组织化学法测定基因转染前后裸鼠移植瘤组织Lewis(y)抗原及VEGF的表达。结果基因转染后的裸鼠移置瘤组织细胞表面Lewis(y)抗原及VEGF的表达明显增加。转染组与非转染组之间有统计学意义(P均<0.05)。结论α1,2-岩藻糖转移酶基因转染使卵巢癌细胞株RMG-I裸鼠移植瘤血管内皮生长因子VEGF的表达明显增加。 展开更多
关键词 Lewis(y)抗原 血管内皮长因子 卵巢癌
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