探讨信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)在体内是否存在相互作用,并观察其作用如何影响肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis...探讨信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)在体内是否存在相互作用,并观察其作用如何影响肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)的转录活性.采用聚合酶链反应技术,从人Flag-p38和Flag-细胞外信号蛋白调节激酶2(extracellular-signal regulated protein kinase 2,ERK2)中扩增出p38和ERK2基因,将其插入载体pcDNA3-HA中;用Westernblot方法在293T细胞中检测其表达后应用免疫共沉淀技术检测STAT3蛋白与p38/ERK2蛋白之间是否存在相互作用.然后应用报告基因技术检测这种相互作用如何影响TNF-α的转录表达,并在应用RNA干扰技术将STAT3通路抑制后,观察TNF-α启动子转录活性如何变化.酶切和测序结果表明,扩增的p38和ERK2基因序列正确,大小为1080bp,在293T细胞中正确表达大小约40ku的p38和ERK2蛋白.免疫共沉淀实验结果证实,p38和STAT3蛋白以及ERK2和STAT3蛋白在体内相互作用.下游基因TNF-α荧光素酶活性实验显示,p38和STAT3蛋白以及ERK2和STAT3蛋白复合物协同升高TNF-α的活性,应用STAT3的干扰RNA后其活性则明显下降.该研究表明,STAT3和p38/ERK2蛋白在体内存在相互作用,STAT3与p38、STAT3与ERK2均对TNF-α的表达发挥协同效应,在阻断STAT3通路后,STAT3与p38、STAT3与ERK2对TNF-α表达的协同效应将明显降低.展开更多
目的:研究Janus激酶(Janus kinase,JAK)抑制剂AG490对人视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞株体外抗增殖及细胞周期的作用,探讨其对JAK2/信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号通路蛋白表达...目的:研究Janus激酶(Janus kinase,JAK)抑制剂AG490对人视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞株体外抗增殖及细胞周期的作用,探讨其对JAK2/信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号通路蛋白表达的影响。方法:本实验分为实验组和对照组,实验组又根据不同浓度(6.25,12.50,25.00,50.00,100.00,200.00μmol/L)的AG490处理分为6个不同浓度的实验组。采用细胞的活力测定法检测各组细胞增殖状态。应用流式细胞术对各组中细胞凋亡及周期进行分析。采用Western印迹检测处理后STAT3,p-STAT3及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白的表达。结果:AG490处理HXO-RB44细胞株48 h后,随着药物浓度的增加,细胞抑制率增加,细胞存活率下降(均P<0.05)。除6.25μmol/L实验组外,其余5组与对照组两两比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。流式细胞术显示:随着AG490药物浓度的增加,细胞凋亡率呈逐渐增高趋势,与对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。其中,50.00和100.00μmol/L实验组G1期细胞比例显著增多,相应地处于S期的细胞比例减少。Western印迹显示:随着AG490药物浓度的增加,STAT3和p-STAT3蛋白的表达量逐渐下降,与对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05);VEGF表达量逐渐下降,与对照组相比,6.25和12.50μmol/L实验组的VEGF差异均无统计学意义(均P>0.05),其余各实验组差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:JAK抑制剂AG490能抑制HXORB44细胞株生长及增殖,促进细胞的凋亡增加;并通过阻断JAK2/STAT3信号通路而下调STAT3,p-STAT3和VEGF的表达,从而抑制HXO-RB44细胞株的增殖,加速其凋亡。展开更多
目的:检测信号转导及转录活化因子3(signal transducers and activators of transcription3,STAT3)、磷酸化信号转导及转录活化因子3(phosphor-STAT3,p-STAT3)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在鼻息肉组...目的:检测信号转导及转录活化因子3(signal transducers and activators of transcription3,STAT3)、磷酸化信号转导及转录活化因子3(phosphor-STAT3,p-STAT3)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在鼻息肉组织中的表达及分布,探讨他们在鼻息肉发病机制中的作用及其相关性。方法:选取符合纳入标准的鼻息肉患者手术切除标本30例,选取同期单纯行鼻中隔偏曲矫正术中切除的下鼻甲组织10例。采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测30例鼻息肉标本(鼻息肉组)与下鼻甲黏膜(对照组)中STAT3、p-STAT3及VEGF的表达。结果:STAT3在鼻息肉中粘膜上皮及腺体的表达的阳性率为66.67%,鼻息肉组STAT3表达明显高于下鼻甲组33.33%(P<0.01)。p-STAT3在鼻息肉中粘膜上皮及腺体的表达的阳性率为56.67%,鼻息肉组p-STAT3表达明显高于下鼻甲组43.33%(P<0.01)。VEGF在鼻息肉中粘膜上皮及腺体的表达的阳性率为76.67%,鼻息肉组VEGF表达明显高于下鼻甲组23.33%(P<0.01)。p-STAT3的表达与VEGF的表达之间呈正相关(r=0.48,P<0.01)。结论:鼻息肉组织中p-STAT3与VEGF表达呈正相关,提示VEGF基因可能由p-STAT3蛋白调节,STAT3、p-STAT3及VEGF的表达可能是鼻息肉发病机制中起重要作用的因素之一。展开更多
文摘探讨信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)在体内是否存在相互作用,并观察其作用如何影响肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)的转录活性.采用聚合酶链反应技术,从人Flag-p38和Flag-细胞外信号蛋白调节激酶2(extracellular-signal regulated protein kinase 2,ERK2)中扩增出p38和ERK2基因,将其插入载体pcDNA3-HA中;用Westernblot方法在293T细胞中检测其表达后应用免疫共沉淀技术检测STAT3蛋白与p38/ERK2蛋白之间是否存在相互作用.然后应用报告基因技术检测这种相互作用如何影响TNF-α的转录表达,并在应用RNA干扰技术将STAT3通路抑制后,观察TNF-α启动子转录活性如何变化.酶切和测序结果表明,扩增的p38和ERK2基因序列正确,大小为1080bp,在293T细胞中正确表达大小约40ku的p38和ERK2蛋白.免疫共沉淀实验结果证实,p38和STAT3蛋白以及ERK2和STAT3蛋白在体内相互作用.下游基因TNF-α荧光素酶活性实验显示,p38和STAT3蛋白以及ERK2和STAT3蛋白复合物协同升高TNF-α的活性,应用STAT3的干扰RNA后其活性则明显下降.该研究表明,STAT3和p38/ERK2蛋白在体内存在相互作用,STAT3与p38、STAT3与ERK2均对TNF-α的表达发挥协同效应,在阻断STAT3通路后,STAT3与p38、STAT3与ERK2对TNF-α表达的协同效应将明显降低.
文摘目的:检测信号转导及转录活化因子3(signal transducers and activators of transcription3,STAT3)、磷酸化信号转导及转录活化因子3(phosphor-STAT3,p-STAT3)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在鼻息肉组织中的表达及分布,探讨他们在鼻息肉发病机制中的作用及其相关性。方法:选取符合纳入标准的鼻息肉患者手术切除标本30例,选取同期单纯行鼻中隔偏曲矫正术中切除的下鼻甲组织10例。采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测30例鼻息肉标本(鼻息肉组)与下鼻甲黏膜(对照组)中STAT3、p-STAT3及VEGF的表达。结果:STAT3在鼻息肉中粘膜上皮及腺体的表达的阳性率为66.67%,鼻息肉组STAT3表达明显高于下鼻甲组33.33%(P<0.01)。p-STAT3在鼻息肉中粘膜上皮及腺体的表达的阳性率为56.67%,鼻息肉组p-STAT3表达明显高于下鼻甲组43.33%(P<0.01)。VEGF在鼻息肉中粘膜上皮及腺体的表达的阳性率为76.67%,鼻息肉组VEGF表达明显高于下鼻甲组23.33%(P<0.01)。p-STAT3的表达与VEGF的表达之间呈正相关(r=0.48,P<0.01)。结论:鼻息肉组织中p-STAT3与VEGF表达呈正相关,提示VEGF基因可能由p-STAT3蛋白调节,STAT3、p-STAT3及VEGF的表达可能是鼻息肉发病机制中起重要作用的因素之一。
