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FQ-PCR法痰结核杆菌DNA检测及其临床应用 被引量:2
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作者 宋予娟 《中国实用医药》 2014年第36期43-44,共2页
目的探讨荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)法痰结核杆菌DNA检测及其临床应用。方法分别以FQ-PCR,集菌培养和染色镜检检测入选患者的痰标本,比较各方法在结核病诊断中的作用。结果三种检测方法的敏感性为71.8%,39.0%,26.5%,显示FQ-PCR法... 目的探讨荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)法痰结核杆菌DNA检测及其临床应用。方法分别以FQ-PCR,集菌培养和染色镜检检测入选患者的痰标本,比较各方法在结核病诊断中的作用。结果三种检测方法的敏感性为71.8%,39.0%,26.5%,显示FQ-PCR法敏感度最高。结论FQ-PCR法具有简便、快捷、敏感、特异性高的特点,可以快速及时准确的为临床提供诊断依据。 展开更多
关键词 结核杆菌 荧光定量聚合酶链反应
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基于LNA-TaqMan探针实时荧光定量PCR检测技术的天山雪莲掺伪研究
2
作者 王多梅 杨建波 +6 位作者 杨乐 于新兰 李海芳 胡冲 陈灵丽 蒲婧哲 张亚中 《中国现代中药》 2025年第2期202-209,共8页
目的:采用锁核酸(LNA)-TaqMan实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术建立一种高效、快速鉴定天山雪莲中掺伪水母雪兔子、绵头雪兔子的方法。方法:基于LNA-TaqMan探针实时荧光定量PCR技术,利用天山雪莲及其常见易混伪品水母雪兔子、绵头... 目的:采用锁核酸(LNA)-TaqMan实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术建立一种高效、快速鉴定天山雪莲中掺伪水母雪兔子、绵头雪兔子的方法。方法:基于LNA-TaqMan探针实时荧光定量PCR技术,利用天山雪莲及其常见易混伪品水母雪兔子、绵头雪兔子的叶绿体基因组序列差异,根据伪品水母雪兔子、绵头雪兔子与天山雪莲的特异性差异位点设计筛选探针引物,并对引物及LNA-TaqMan探针的特异性进行验证,根据扩增曲线临界循环数(C)t值的差值计算掺伪比例。结果:基于LNA-TaqMan探针检测方法,通过出现特异性扩增曲线判定检测出水母雪兔子和绵头雪兔子,根据扩增曲线Ct值的差值能有效确定掺伪比例,且在掺伪1%时仍可稳定检出。结论:该方法用于天山雪莲中掺伪水母雪兔子和绵头雪兔子检测灵敏度高、特异性强,可有效解决天山雪莲混伪品难以鉴别的问题,为天山雪莲药材质量控制提供技术支持。 展开更多
关键词 天山雪莲 水母雪兔子 绵头雪兔子 锁核酸-TaqMan探针 实时荧光定量聚合酶链式反应 掺伪
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多重荧光定量聚合酶链式反应法检测水牛乳中黄牛源性成分
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作者 梁媛媛 赵娇 +1 位作者 崔生熠 刘鹏鹏 《现代食品》 2025年第1期150-154,159,共6页
目的:建立多重荧光定量聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)法同时检测水牛乳中水牛、黄牛这2种牛源性成分。方法:设计基于cytb基因的特异性引物和探针,通过优化反应体系的退火温度和循环参数,建立一种能在同一反应体系内快... 目的:建立多重荧光定量聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)法同时检测水牛乳中水牛、黄牛这2种牛源性成分。方法:设计基于cytb基因的特异性引物和探针,通过优化反应体系的退火温度和循环参数,建立一种能在同一反应体系内快速检测水牛和黄牛源性成分的多重荧光定量PCR方法。同时,对该方法进行特异性、灵敏度、重复性等方法学验证。结果:该方法特异性强,能特异性检出水牛、黄牛源性成分;该方法灵敏度可达核酸浓度1.0×10^(-4) ng·μL^(-1),且重复性较好。结论:该方法操作简单,具有通量高、特异性强、灵敏度高和重复性好等优点,适用于水牛乳样品中水牛、黄牛源性成分的掺假鉴别和快速检测。 展开更多
关键词 多重荧光定量聚合酶链式反应 水牛乳 牛源性成分 快速检测
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FQ-PCR联合ELISA在乙型肝炎检测中的应用价值 被引量:1
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作者 林爽 《中国实用医药》 2022年第8期93-95,共3页
目的探析实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)联合酶联免疫吸附试验(ELISA)在乙型肝炎检测中的临床价值。方法180例乙型肝炎患者,根据检测方法不同分为对照1组(59例)、对照2组(59例)及观察组(62例)。对照1组行FQ-PCR检测,对照2组行ELIS... 目的探析实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)联合酶联免疫吸附试验(ELISA)在乙型肝炎检测中的临床价值。方法180例乙型肝炎患者,根据检测方法不同分为对照1组(59例)、对照2组(59例)及观察组(62例)。对照1组行FQ-PCR检测,对照2组行ELISA检测,观察组行FQ-PCR+ELISA检测。对比三组检测结果。结果观察组诊断乙型肝炎的准确率为96.77%,对照1组诊断乙型肝炎的准确率为84.75%,对照2组诊断乙型肝炎的准确率为81.36%。观察组诊断乙型肝炎的准确率明显高于对照1组与对照2组,差异具有统计学意义(P<0.05)。对照1组与对照2组诊断乙型肝炎的准确率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论相对于单一检测手段,FQ-PCR联合ELISA在乙型肝炎检测时诊断准确率更高,可为临床治疗提供准确依据,具有临床应用价值。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附试验 实时荧光定量聚合酶链式反应 乙型肝炎
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SYBR GreenⅠ染料-实时荧光定量聚合酶链式反应法检测发酵乳中的霉菌和酵母含量 被引量:1
5
作者 张捷 李献 +4 位作者 张瑞 刘雨蒙 明若阳 陈佳 周巍 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第16期31-38,共8页
目的建立一种应用SYBR GreenⅠ染料的实时荧光定量聚合酶链式反应法快速检测发酵乳中的霉菌和酵母菌。方法本研究针对霉菌与酵母菌的保守序列设计引物,确定最优反应体系与反应条件。通过熔解曲线以及非目标菌株的检测验证该方法的特异性... 目的建立一种应用SYBR GreenⅠ染料的实时荧光定量聚合酶链式反应法快速检测发酵乳中的霉菌和酵母菌。方法本研究针对霉菌与酵母菌的保守序列设计引物,确定最优反应体系与反应条件。通过熔解曲线以及非目标菌株的检测验证该方法的特异性;通过菌悬液的梯度稀释检测确定该方法的灵敏度;通过菌悬液与发酵乳样品混合后进行检测,确定该方法的检出限,并得到标准曲线。结果该方法能够特异性的检测发酵乳中的霉菌、酵母菌,无交叉反应。该方法检测霉菌、酵母菌的灵敏度均为10^(2) CFU/mL,并且当菌悬液与发酵乳样品混合后,并没有降低该方法的检出限。在10^(2)~10^(6) CFU/mL浓度范围内,菌液浓度的对数值与循环阈值(cyclethreshold,Ct)具有良好的线性关系,可以在市售样品的检测中通过Ct值计算样品中目标菌的含量,更快的判断发酵乳是否被霉菌、酵母菌污染。结论该方法可用于发酵乳中霉菌和酵母菌的快速检测,为发酵乳的食品安全提供了技术保障。 展开更多
关键词 霉菌 酵母 SYBR GreenⅠ染料 检测 实时荧光定量聚合酶链式反应 发酵乳
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鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平快速定量方法的建立及应用
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作者 彭新凯 王娉 +5 位作者 武运 陈颖 曲天铭 王宇 赵晓美 郜忠川 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第7期167-174,共8页
目的应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR),建立鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平的快速定量检测方法。方法通过比对鼠李糖乳杆菌HN001的近缘菌株的基因组,筛选出鼠李糖乳杆... 目的应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR),建立鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平的快速定量检测方法。方法通过比对鼠李糖乳杆菌HN001的近缘菌株的基因组,筛选出鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平的特异基因,以菌株水平的特异基因为靶标设计引物及探针,优化反应体系和条件,建立鼠李糖乳杆菌HN001株水平的qPCR检测方法。对方法的特异性、灵敏度、检出限进行验证,并采用已建立的qPCR方法进行模拟添加样品和实际样品的检测。结果所建立的方法特异性强,与近缘菌株无交叉反应,鼠李糖乳杆菌HN001纯培养液检出限为10^(2)CFU/mL,灵敏度可达到650 copies/μL,可在2 h内完成样品检测。对模拟添加样品以及实际样品检测中qPCR和平板计数法结果的对数值进行显著性分析检验,两种方法的测定值结果均无显著性差异(P>0.05)。结论本研究建立的qPCR检测方法可有效应用于益生菌产品中鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平定量检测,具有快速、灵敏、准确的特点。 展开更多
关键词 实时荧光定量聚合酶链式反应 鼠李糖乳杆菌HN001 菌株水平定量检测 益生菌产品
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多重荧光定量聚合酶链反应法检测肉制品中的3种食源性致病菌 被引量:1
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作者 孙新城 李爽 +4 位作者 李侠颖 周杰 曹亚新 王宏伟 张晓根 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第9期37-43,共7页
目的建立多重荧光定量聚合酶链反应法(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)快速检测肉制品中沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157:H73种食源性致病菌的方法。方法根据沙门氏菌的invA基因、单增李斯特菌的hemolysin基因、大... 目的建立多重荧光定量聚合酶链反应法(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)快速检测肉制品中沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157:H73种食源性致病菌的方法。方法根据沙门氏菌的invA基因、单增李斯特菌的hemolysin基因、大肠杆菌O157:H7的rfbE基因序列分别设计特异性引物及探针,通过优化反应体系,测定其灵敏度、特异性和重复性,建立了可同时检测上述3种食源性致病菌多重qPCR方法。结果该方法只扩增3种靶细菌,对其他供试菌不扩增;沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157:H7的检出限分别为10^(1)、10^(2)、10^(2)拷贝数/μL,并且拥有良好的重复性和特异性。人工污染的猪肉样品经SLE培养基富集8 h后,分别可以检测到初始菌液浓度为1.56×10^(2)CFU/25 g的沙门氏菌,2.13×10^(2)CFU/25 g的单增李斯特菌,2.32×10^(2)CFU/25 g的大肠杆菌O157:H7。结论所建立的多重qPCR灵敏度高、特异性强、重复性好,可同时检测肉制品中沙门氏菌、单增李斯特菌和大肠杆菌O157:H73种食源性致病菌,在提高食品安全和保护人类健康方面有重要意义。 展开更多
关键词 沙门氏菌 单增李斯特菌 大肠杆菌O157:H7 多重荧光定量聚合酶链反应法
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市售食品21种动植物过敏原成分的检测分析 被引量:1
8
作者 何名扬 王鸣秋 +6 位作者 刘艳 李诗瑶 朱必婷 张涛 郭雅晴 周陶鸿 彭青枝 《中国酿造》 CAS 北大核心 2024年第5期255-260,共6页
为进一步明确市售食品动植物过敏原标注情况,该研究建立一种可同时检测21种动植物过敏原成分的多重连接依赖性探针扩增(MLPA)技术,并对其进行灵敏度实验,并结合实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-fqPCR)检测技术对38种市售预包装食品中动... 为进一步明确市售食品动植物过敏原标注情况,该研究建立一种可同时检测21种动植物过敏原成分的多重连接依赖性探针扩增(MLPA)技术,并对其进行灵敏度实验,并结合实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-fqPCR)检测技术对38种市售预包装食品中动植物过敏原成分进行比较分析。结果表明,采用MLPA检测技术可同时对21种动植物过敏原成分进行检测,扩增峰之间不存在交叉干扰,扩增峰实际大小和理论大小相差≤3 bp,检出最低脱氧核糖核酸(DNA)质量浓度为1 ng/μL;RT-fqPCR、MLPA技术检测标注过敏原成分食品的检出率分别为51.5%、44.1%,此外,MLPA检测法检出了6个标注可能含有过敏原成分样品中的过敏原成分,10个样品中未标记的过敏原成分。因此,采用MLPA技术检测21种动植物过敏原成分的灵敏度更高。 展开更多
关键词 动植物过敏原 多重连接依赖性探针扩增 实时荧光定量聚合酶链式反应 多重检测
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Taq Man探针实时荧光定量聚合酶链式反应检测低温酸乳中常见的霉菌和酵母 被引量:1
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作者 张捷 陈勃旭 +4 位作者 杜海宽 张子仑 严陶陶 陈佳 周巍 《乳业科学与技术》 2024年第5期20-24,共5页
为提高低温酸乳中霉菌和酵母菌检测效率,根据保守基因延伸因子1α(elongation factor 1α,EF-1α)序列分别针对霉菌与酵母菌设计引物与探针,利用实时荧光定量聚合酶链式反应,基于TaqMan探针分别建立霉菌和酵母菌检测方法。以低温酸乳中... 为提高低温酸乳中霉菌和酵母菌检测效率,根据保守基因延伸因子1α(elongation factor 1α,EF-1α)序列分别针对霉菌与酵母菌设计引物与探针,利用实时荧光定量聚合酶链式反应,基于TaqMan探针分别建立霉菌和酵母菌检测方法。以低温酸乳中常见真菌与乳酸菌基因组DNA为扩增模板进行特异性检验,并对方法灵敏度与重复性进行检验,同时构建标准曲线。结果表明:根据EF-1α基因设计的引物与探针特异性良好;所构建的标准曲线相关系数均大于0.99;该方法检测酵母菌的灵敏度为101 CFU/mL,检测霉菌的灵敏度为102 CFU/mL;重复性检验中组内与组间的变异系数均小于2%,表明方法具有良好的可靠性与稳定性,适用于低温酸乳中霉菌与酵母菌的快速检测。 展开更多
关键词 TAQMAN探针 霉菌 酵母 实时荧光定量聚合酶链式反应 低温酸乳
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鱼类产品中嗜水气单胞菌重组酶聚合酶扩增结合CRISPR/Cas12a快速检测及耐药性分析
10
作者 高子惠 曲心平 +7 位作者 凌莉 于海洋 张蕾 胡蝶 吴笛 何雨霏 郑秋月 曹际娟 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第11期90-97,共8页
目的建立重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)结合簇状规则间隔短链重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated protein,CRISPR-Cas)新方法,检测鱼类产品中... 目的建立重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)结合簇状规则间隔短链重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated protein,CRISPR-Cas)新方法,检测鱼类产品中嗜水气单胞菌,并分析其耐药性。方法采用基于最新的CRISPR基因编辑技术建立RPA结合CRISPR/Cas12a新方法,快速检测嗜水气单胞菌,同时采用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法比对两种方法的检出率。筛查嗜水气单胞菌分离株的耐药性,采用纸片扩散法测定耐药表型,采用荧光染料(SYBR green,SYBG)实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR)测定耐药基因,分析耐药表型与耐药基因结果的一致性。结果在74例鱼类样品中,基于RPA-CRISPR/Cas12a和LAMP同时检测出6例嗜水气单胞菌。分析耐药性测试结果发现,分离株对5大类10种抗生素的耐药情况差异较大,耐药表型与耐药基因结果一致性较高。结论所建立的RPA-CRISPR/Cas12a方法适用于嗜水气单胞菌快速检测。而细菌耐药性的产生机制比较复杂,耐药表型的产生在一定程度上受耐药基因调控。研究结果为水产品中嗜水气单胞菌快速检测和耐药性筛查提供新思路和方法。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 重组酶聚合酶扩增 簇状规则间隔短链重复序列及其相关蛋白 环介导等温扩增 实时荧光定量聚合酶链式反应 耐药表型 耐药基因
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乙型肝炎病毒DNA荧光定量PCR的建立与应用 被引量:38
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作者 陶志华 陈晓东 +2 位作者 王忠永 周武 袁谦 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期282-284,共3页
目的 建立血浆 (血清 )HBVDNA荧光定量PCR检测方法 ,探讨其临床应用价值。方法 用PUCm T载体和PCR纯化产物连接 ,转染DH5α菌 ,筛选阳性菌落 ,提取质粒 ,制作外标准品 ;在HBV基因组S区设计一对引物和TaqMan探针 ,严格优化反应物的组... 目的 建立血浆 (血清 )HBVDNA荧光定量PCR检测方法 ,探讨其临床应用价值。方法 用PUCm T载体和PCR纯化产物连接 ,转染DH5α菌 ,筛选阳性菌落 ,提取质粒 ,制作外标准品 ;在HBV基因组S区设计一对引物和TaqMan探针 ,严格优化反应物的组成和扩增条件 ,并对该方法进行评价。结果 建立的HBVDNA荧光定量PCR最低可检出 80 0拷贝 /ml;批内误差为 1 8%~ 6 5% ,批间误差为 2 6 %~ 9 1 % ;在 1 0 4 ~ 1 0 11拷贝 /ml之间与Ct值具有很好的线性 (Ct =- 1 .391 1ln(X) +4 1 .6 5,r =- 0 .9958) ;外周血HBVDNA临床定量检测发现 ,HBeAg阳性的 1 30例中 ,HBVDNA阳性率为 1 0 0 % ,含量为1 0 6 89± 1.6 9拷贝 /ml,抗HBe阳性的 96例中HBVDNA阳性率为 55 2 % ( 53/ 96 ) ,含量为 1 0 4 .0 9± 1.19拷贝 /ml;6 2例献血员未检出HBVDNA。乙肝临床治疗监测发现 ,外周血中HBVDNA含量检测可有效反映治疗效果 ,指导临床用药。结论 荧光定量PCR检测方法是一种相对准确、灵敏度高、特异性较强和较简便的HBVDNA定量检测技术 ,对乙肝诊断。 展开更多
关键词 荧光定量 聚合酶链反应 乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸
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单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌双重荧光定量PCR检测方法建立 被引量:21
12
作者 邵美丽 董鑫 +2 位作者 赵燕丽 孔保华 刘思国 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第16期169-172,共4页
根据GenBank公布的单增李斯特菌的hlyA基因序列和金黄色葡萄球菌的nuc基因序列各设计一对引物和一条探针,建立基于TaqMan探针的单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌双重荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测方法。该方法对所有目标菌株均产生特异... 根据GenBank公布的单增李斯特菌的hlyA基因序列和金黄色葡萄球菌的nuc基因序列各设计一对引物和一条探针,建立基于TaqMan探针的单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌双重荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测方法。该方法对所有目标菌株均产生特异性扩增曲线,其他非目标菌均不产生扩增曲线,具有较强的特异性。且该法对阳性重组质粒pMD18-hlyA和pMD18-nuc同时定量扩增的敏感度分别为19.5拷贝/μL和18.7拷贝/μL。同步检测人工染菌肉样中单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌的最低检出限均为102CFU/g。 展开更多
关键词 TAQMAN探针 单增李斯特菌hlyA基因 金黄色葡萄球菌nuc基因 荧光定量聚合酶链式反应
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实时荧光定量PCR法测定发酵乳中双歧杆菌 被引量:17
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作者 吴燕涛 刘晓莉 +1 位作者 曹悦 王立平 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第8期172-175,共4页
对实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测发酵乳中双歧杆菌的DNA提取方法、PCR扩增效率、标准曲线绘制进行探讨,通过比较分析碱式提取法、玻璃珠破碎法和酶解法3种提取方法对发酵乳中总DNA提取效率、4种不同参考菌株的PCR扩增效率以... 对实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测发酵乳中双歧杆菌的DNA提取方法、PCR扩增效率、标准曲线绘制进行探讨,通过比较分析碱式提取法、玻璃珠破碎法和酶解法3种提取方法对发酵乳中总DNA提取效率、4种不同参考菌株的PCR扩增效率以及单一菌株标准曲线与混合菌株标准曲线的计数结果,建立实时荧光定量PCR快速测定发酵乳制品中双歧杆菌数量方法。结果表明:酶解法提取发酵乳中总DNA效果最好,OD260/280比值基本接近1.80,且提取的质量浓度含量最高;不同菌株的PCR扩增效率不同,其中参考菌株1.2213的Ct值与其他3菌株的Ct值存在显著性差异;根据单一菌株绘制标准曲线与混合菌株绘制标准曲线计数结果无显著性差异,后者计数结果更客观、准确。采用酶解法获取样品中的菌体细胞,基于混合菌液绘制标准曲线,采用实时荧光定量PCR技术确定发酵乳中双歧杆菌种属数量,可快速、准确地测定发酵乳中双歧杆菌的数量。 展开更多
关键词 发酵乳 双歧杆菌 实时荧光定量聚合酶链式反应
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植物乳杆菌FS5-5在盐胁迫下的转录组学分析 被引量:10
14
作者 宋雪飞 郭晶晶 +3 位作者 姜静 唐筱扬 张颖 乌日娜 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第6期20-26,共7页
以分离自东北自然发酵大酱中的一株耐盐植物乳杆菌FS5-5(Lactobacillus plantarum FS5-5)为实验对象,在转录水平上对该菌株盐胁迫相关基因表达进行了研究。结果表明:在对数生长期,表达显著下调的共29个基因,分别为参与碳水化合物转运和... 以分离自东北自然发酵大酱中的一株耐盐植物乳杆菌FS5-5(Lactobacillus plantarum FS5-5)为实验对象,在转录水平上对该菌株盐胁迫相关基因表达进行了研究。结果表明:在对数生长期,表达显著下调的共29个基因,分别为参与碳水化合物转运和代谢的4个基因,氨基酸转运和代谢的9个基因,维生素代谢的3个基因,核苷酸代谢的6个基因,遗传信息翻译、核糖体结构和形成的7个基因;表达显著上调的有参与碳水化合物转运和代谢的4个基因。这些变化可能与L.plantarum FS5-5的盐胁迫机制密切相关。选取参与维生素代谢的3个基因和核苷酸代谢的1个基因,通过实时定量聚合酶链式反应对转录组学结果进行验证,结果表明两种方法中基因表达趋势一致。实验对L.plantarum FS5-5的盐胁迫反应进行了比较全面的分析,为提高工业生产中菌株的耐受性提供了理论依据。 展开更多
关键词 植物乳杆菌 盐胁迫 实时定量聚合酶链式反应 转录组学
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荧光定量PCR在大肠杆菌O157:H7检测中的应用研究进展 被引量:8
15
作者 王力均 许恒毅 +1 位作者 熊勇华 李萍 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第11期358-362,共5页
荧光定量PCR技术因具有较高的灵敏度、较好的重复性以及较强的特异性而在大肠杆菌O157:H7检测中广泛应用。本文对荧光定量PCR技术进行简介,并综述近年来其在大肠杆菌O157:H7检测中的应用概况,为基于荧光定量PCR方法检测大肠杆菌O157:H7... 荧光定量PCR技术因具有较高的灵敏度、较好的重复性以及较强的特异性而在大肠杆菌O157:H7检测中广泛应用。本文对荧光定量PCR技术进行简介,并综述近年来其在大肠杆菌O157:H7检测中的应用概况,为基于荧光定量PCR方法检测大肠杆菌O157:H7提供一定的参考。 展开更多
关键词 荧光定量PCR 大肠杆菌O157 H7 检测 研究进展
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益生菌Lactobacillus paracasei LC01对小鼠肠道菌群的调节作用 被引量:12
16
作者 陆文伟 杨震南 +3 位作者 丁历伟 叶佳蓉 田丰伟 陈卫 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第23期230-235,共6页
探讨益生菌Lactobacillus paracasei LC01对小鼠肠道菌群的调节作用。将32只Balb/c小鼠随机分成4组,分别作为对照组、灌胃LC01灭活菌组、灌胃LC01活菌组和活菌定殖组。干预2周后,通过Mi Seq高通量测序手段,分析不同处理条件下小鼠肠道... 探讨益生菌Lactobacillus paracasei LC01对小鼠肠道菌群的调节作用。将32只Balb/c小鼠随机分成4组,分别作为对照组、灌胃LC01灭活菌组、灌胃LC01活菌组和活菌定殖组。干预2周后,通过Mi Seq高通量测序手段,分析不同处理条件下小鼠肠道菌群变化。结果表明:相对于对照组和灌胃灭活菌组,灌胃LC01活菌可以显著提高小鼠肠道内Lactobacillus属、Ruminococcaceae_UCG014属、Alistpes属的相对含量。进一步通过荧光定量聚合酶链式反应和群落聚类分析发现,灌胃LC01活菌不但可以显著提高小鼠肠道内乳酸菌LC01的相对含量,同时可以促进小鼠肠道中格氏乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和唾液乳杆菌的增殖。在活菌定殖组中,停止灌胃2周后,小鼠粪便中不能检测到菌株LC01,说明菌株LC01不能在小鼠肠道内长期定殖。以上结果表明菌株LC01对肠道小鼠菌群结构具有一定的调节作用,具有潜在的益生作用和应用价值。 展开更多
关键词 益生菌 副干酪乳杆菌 高通量测序 肠道菌群
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内参基因对TYR、MITF和ASIP基因在白绒乌骨鸡各组织表达水平的影响 被引量:6
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作者 郑嫩珠 李丽 +5 位作者 辛清武 缪中纬 朱志明 刘凤辉 吴俭飞 卢立志 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期732-740,共9页
以健康白绒乌骨鸡肌肉、肾、肝、肌胃和皮肤为试验素材,应用实时荧光定量聚合酶链反应技术探讨β-肌动蛋白(beta-actin,ACTB)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)和18S核糖体RNA(18Sribosomal RNA,18... 以健康白绒乌骨鸡肌肉、肾、肝、肌胃和皮肤为试验素材,应用实时荧光定量聚合酶链反应技术探讨β-肌动蛋白(beta-actin,ACTB)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)和18S核糖体RNA(18Sribosomal RNA,18SrRNA)3个内参基因的组织表达稳定性及其对酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)、小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)和刺鼠信号蛋白(agouti signaling protein,ASIP)等目的基因在白绒乌骨鸡各组织表达水平的影响,并采用紫外分光光度法分析各组织黑色素沉积规律,从中筛选出理想的内参基因。geNorm和NormFinder软件分析结果显示,内参基因GAPDH在白绒乌骨鸡各组织表达稳定性最高,ACTB表达稳定性最低。相对定量和黑色素沉积结果表明,GAPDH作为内参基因时,各组织MITF、TYR基因的相对表达量与黑色素沉积规律基本一致,表现为皮肤>肾>肌胃>肝>肌肉;ASIP基因的相对表达量与黑色素沉积规律正好相反,表现为肌肉>肝>肌胃>肾>皮肤,这与各目的基因对黑色素沉积的调控功能相符,即MITF和TYR基因高表达有利于黑色素沉积,ASIP基因高表达则抑制黑色素沉积。而18SrRNA和ACTB作为内参基因时,各目的基因表达量未表现出上述规律,与其各自对黑色素沉积的调控功能不相吻合,没有达到理想的校正效果。表明GAPDH基因稳定性最好,且能真正体现目的基因对黑色素沉积的表达调控,是校正目的基因在白绒乌骨鸡不同组织中mRNA表达量的最优内参基因。 展开更多
关键词 白绒乌骨鸡 内参基因 基因表达 实时荧光定量聚合酶链反应 黑色素沉积
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副干酪乳杆菌SMN-LBK在乙醇胁迫下的转录组分析 被引量:6
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作者 郭金凤 杨婕 +8 位作者 李宝坤 金丹 黎旭 卢士玲 王庆玲 姬华 董娟 李应彪 蒋彩虹 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第6期116-122,共7页
以分离自新疆塔城地区传统马奶酒中的1株副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK为研究对象,分别以4%、6%、8%、10%(体积分数)乙醇对其进行胁迫处理,其存活率依次为25.84%、18.39%、10.86%、1.67%;以10%乙醇胁迫对其进行转录组分... 以分离自新疆塔城地区传统马奶酒中的1株副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)SMN-LBK为研究对象,分别以4%、6%、8%、10%(体积分数)乙醇对其进行胁迫处理,其存活率依次为25.84%、18.39%、10.86%、1.67%;以10%乙醇胁迫对其进行转录组分析,研究其在乙醇胁迫下差异基因在转录水平的表达情况。转录组分析表明:表达显著下调基因有50个,分别为参与丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢1个基因,脂肪酸生物合成2个基因,ATP结合盒式蛋白转运体8个基因,磷酸转移酶系统3个基因,其余基因全为假定蛋白;表达显著上调基因28个,4个参与丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,其余基因全为假定蛋白。选取6个差异基因进行实时荧光定量聚合酶链式反应验证转录组测序结果,两种方法的基因在表达水平上具有一致趋势。这些基因与细胞壁主要成分肽聚糖、磷壁酸的生物合成相关,其通过提高这些基因表达抵御乙醇对自身的损害。这些基因可能与副干酪乳杆菌SMN-LBK的乙醇胁迫机制密切相关。本研究为进一步阐明乳酸杆菌的耐乙醇机制提供了理论依据。 展开更多
关键词 副干酪乳杆菌 乙醇胁迫 转录组学 实时荧光定量聚合酶链式反应
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食品中桃仁和杏仁过敏原成分的检测 被引量:5
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作者 张霞 张海英 +3 位作者 高旗利 刘培 张宏伟 郑文杰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第18期220-223,共4页
目的:建立检测食品中桃仁、杏仁过敏原成分的荧光PCR方法,比较国外3种ELISA试剂盒效果。方法:针对杏仁Prudu1基因设计引物及探针,建立荧光PCR方法。利用杏仁过敏原参考物质对3个品牌的ELISA试剂盒的回收率进行比较。结果:建立的荧光PCR... 目的:建立检测食品中桃仁、杏仁过敏原成分的荧光PCR方法,比较国外3种ELISA试剂盒效果。方法:针对杏仁Prudu1基因设计引物及探针,建立荧光PCR方法。利用杏仁过敏原参考物质对3个品牌的ELISA试剂盒的回收率进行比较。结果:建立的荧光PCR方法,具有很好的特异性;灵敏度为10mg/kg。结论:桃仁及杏仁过敏原成分荧光PCR检测方法特异性好、灵敏度高,对食品中过敏原的检测有重要的实际意义。 展开更多
关键词 杏仁 Prudu1基因 荧光定量PCR
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支气管肺泡灌洗液荧光定量PCR检测大叶性肺炎患儿肺炎支原体的效果 被引量:13
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作者 章伟 李姗姗 +1 位作者 谷强 张丽 《中国医药导报》 CAS 2014年第33期91-93,98,共4页
目的 探讨大叶性肺炎患儿肺炎支原体感染的早期诊断方法.方法 选择2013年1月~2014年5月于石河子大学医学院第一附属医院儿科诊治的60例大叶性肺炎患儿,采用荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)中支原体DNA (MP-... 目的 探讨大叶性肺炎患儿肺炎支原体感染的早期诊断方法.方法 选择2013年1月~2014年5月于石河子大学医学院第一附属医院儿科诊治的60例大叶性肺炎患儿,采用荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)中支原体DNA (MP-DNA),并与酶联免疫吸附法(ELISA)血清MP特异性抗体(MP-IgM)检测结果比较.结果 FQ-PCR检测BALF MP-DNA阳性55例(91.6%),血清MP-IgM阳性29例(48.3%),BALFMP-DNA阳性率明显高于血清MP-IgM阳性率,其差异有统计学意义(P<0.05);随着病程增加,ELISA法检测血清MP-IgM检测的阳性率增加(P< 0.05);BALF荧光定量PCR检测MP-DNA的阳性率不随病程变化(P>0.05).结论 FQ-PCR检测BALF中MP-DNA是诊断早期支原体肺炎的可靠方法,优于血清MP抗体检测. 展开更多
关键词 大叶性肺炎 肺炎支原体 荧光定量PCR 支气管肺泡灌洗液 儿童
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