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尼美舒利诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡并下调HSP70基因表达 被引量:4
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作者 殷国志 涂康生 +3 位作者 韩少山 王军 刘青光 姚英民 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期933-936,共4页
目的:探讨尼美舒利诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用及其机制。方法:以不同浓度的尼美舒利处理体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR和/或Western blot法检测caspase-9和PARP的剪切情况... 目的:探讨尼美舒利诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用及其机制。方法:以不同浓度的尼美舒利处理体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR和/或Western blot法检测caspase-9和PARP的剪切情况及HSP70的表达水平;通过RNAi技术沉默HSP70基因表达,观察其对细胞凋亡的影响。结果:尼美舒利可抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长,诱导细胞凋亡,导致caspase-9和PARP的剪切活化及HSP70的mRNA和蛋白表达下调;在人肝癌SMMC-7721细胞中转染靶向HSP70的siRNA可沉默HSP70表达、剪切活化caspase-9和PARP,进而显著促进细胞凋亡。结论:尼美舒利可诱导人肝癌SMMC7721细胞凋亡,这一作用可能与抑制HSP70表达有关。 展开更多
关键词 尼美舒利 肝癌 热休克蛋白70 细胞凋亡
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人肝癌细胞膜上HSP70的表达 被引量:3
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作者 郭建巍 蔡美英 +2 位作者 邵宝妹 赵燕 魏大鹏 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2001年第2期105-106,共2页
用流式细胞仪和Cell-ELISA检测了 4株人肝癌细胞膜上HSP70的表达。结果表明正常情况下人肝癌细胞膜上HSP70的表达较低 ,经热处理后表达增加 (P <0 0 1)并显示出细胞之间的差异 (P <0 0 1)。推测其低表达可能与肝癌细胞逃逸机体... 用流式细胞仪和Cell-ELISA检测了 4株人肝癌细胞膜上HSP70的表达。结果表明正常情况下人肝癌细胞膜上HSP70的表达较低 ,经热处理后表达增加 (P <0 0 1)并显示出细胞之间的差异 (P <0 0 1)。推测其低表达可能与肝癌细胞逃逸机体免疫监视有关 ,对制定肝癌的防治对策有重要的指导意义。 展开更多
关键词 肝癌细胞 热休克蛋白70 HSP70 Cell-ELISA 流式细胞仪
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快速蛋白液相色谱系统纯化和分析小鼠肝癌细胞热休克蛋白70的研究 被引量:2
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作者 马萍 孟凡东 +3 位作者 傅庆国 陈冬 李莉 刘杰 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期243-244,共2页
目的 :应用快速蛋白液相色谱 (FRLC)系统建立分离和纯化 615系小鼠肝癌细胞系Hcaf细胞膜上热休克蛋白 (HSP70 )的分离方法。方法 :用经 4 3℃热处理 8h的Hcaf细胞制备裂解液 ,用ConA Sepharose 4B和MonoQ柱进行连续分离 ,所得蛋白经电泳... 目的 :应用快速蛋白液相色谱 (FRLC)系统建立分离和纯化 615系小鼠肝癌细胞系Hcaf细胞膜上热休克蛋白 (HSP70 )的分离方法。方法 :用经 4 3℃热处理 8h的Hcaf细胞制备裂解液 ,用ConA Sepharose 4B和MonoQ柱进行连续分离 ,所得蛋白经电泳及Western blot进行蛋白分子量及性质鉴定。结果 :纯化蛋白经鉴定为分子量70 0 0 0的HSP70。结论 :用此层析法经FRLP可分离纯度较高的HSP70。 展开更多
关键词 快速蛋白液相色谱 肝癌细胞 热休克蛋白70
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人肝癌细胞BEL-7402中热休克蛋白70相伴甲胎蛋白的实验研究 被引量:1
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作者 王小平 王巧侠 +1 位作者 董丽娜 张立洁 《生物学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期18-21,共4页
为研究人肝癌细胞BEL-7402中热休克蛋白70(HSP70)与甲胎蛋白(AFP)的相互作用,采用免疫化学和免疫荧光检测HSP70和AFP在肝癌细胞中的表达和定位。HSP70与AFP的相互关系通过免疫共沉淀和蛋白印迹杂交进行分析。结果免疫化学显示人肝癌细胞... 为研究人肝癌细胞BEL-7402中热休克蛋白70(HSP70)与甲胎蛋白(AFP)的相互作用,采用免疫化学和免疫荧光检测HSP70和AFP在肝癌细胞中的表达和定位。HSP70与AFP的相互关系通过免疫共沉淀和蛋白印迹杂交进行分析。结果免疫化学显示人肝癌细胞BEL-7402中存在高水平的HSP70和AFP共表达,均定位于细胞浆。AFP存在于HSP70单抗的免疫沉淀中,而HSP70则存在于AFP单抗的免疫沉淀中。结果表明人肝癌细胞BEL-7402中HSP70与AFP相伴。两者之间的相互关系研究将成为探讨肝癌的发生和免疫治疗的新途径。 展开更多
关键词 热休克蛋白70(HSP70) 甲胎蛋白(AFP) 肝细胞癌
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甲胎蛋白与热休克蛋白70基因融合载体的构建及表达
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作者 兰英华 唐俐 +2 位作者 陈敏 彭明利 任红 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2004年第6期734-737,741,共5页
目的 :构建分泌性小鼠甲胎蛋白 (α -Fetoprotein ,AFP)与结核杆菌热休克蛋白 70 (mycobacteriumtuberculosisheatshockprotein 70 ,Mt.HSP70 )基因融合载体 ,并研究其在真核细胞中的表达情况。方法 :以 pSecTag2 B为基本单位构建AFP及... 目的 :构建分泌性小鼠甲胎蛋白 (α -Fetoprotein ,AFP)与结核杆菌热休克蛋白 70 (mycobacteriumtuberculosisheatshockprotein 70 ,Mt.HSP70 )基因融合载体 ,并研究其在真核细胞中的表达情况。方法 :以 pSecTag2 B为基本单位构建AFP及与HSP70的融合表达载体 ,融合基因以G -S -G -G -S连接子连接 ;用脂质体将系列载体导入COS - 7细胞 ,4 8h后以免疫化学方法检测其表达 ,抽提总RNA作RT -PCR测其在转录水平的表达。结果 :构建的AFP和HSP70的单独及融合表达载体导入COS - 7细胞 4 8h后经细胞免疫化学染色为阳性 ,RT -PCR可扩增出特异性条带。结论 :AFP和HSP70的单独及融合表达载体构建成功 ,能在真核细胞中表达。 展开更多
关键词 甲胎蛋白 热休克蛋白70 肝细胞 融合
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原发性肝癌射频治疗后局部免疫功能的变化及其临床意义 被引量:15
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作者 王艳滨 陈敏华 +2 位作者 严昆 张晖 霍苓 《中国微创外科杂志》 CSCD 2006年第10期803-806,共4页
目的对原发性肝癌(hepatocellu lar carc inom a,HCC)射频消融治疗(rad iofrequency ab lation,RFA)前后肿瘤内部及边缘热休克蛋白70(heat shock prote in,HSP70)的表达、CD8+T细胞数量的变化以及RFA治疗后,肿瘤边缘HSP70表达与肿瘤边缘... 目的对原发性肝癌(hepatocellu lar carc inom a,HCC)射频消融治疗(rad iofrequency ab lation,RFA)前后肿瘤内部及边缘热休克蛋白70(heat shock prote in,HSP70)的表达、CD8+T细胞数量的变化以及RFA治疗后,肿瘤边缘HSP70表达与肿瘤边缘CD8+T细胞数量之间的关系进行观察,探讨RFA治疗对原发性肝癌局部免疫功能状态的影响及其可能的临床意义。方法对17例HCC分别在RFA治疗前、后1个月,于肿瘤内部和肿瘤边缘超声引导下穿刺活检取样;采用PowerV isionTM二步染色法进行免疫组化分析,测定HSP70的表达、CD8+T细胞的数量;随访HCC复发/新生情况。结果RFA治疗后肿瘤边缘组织HSP70表达增强(Z=3.337,P=0.001)、CD8+T细胞数量增多(Z=1.996,P=0.049);RFA治疗后,≤4 cm肿瘤组的占位边缘CD8+T细胞数量高于>4 cm肿瘤组(Z=1.966,P=0.048)。RFA治疗后,边缘组织HSP70表达与CD8+T细胞数量之间呈正相关关系(r=0.489,P=0.046);RFA治疗后,无复发或新生组的占位边缘组织HSP70表达和CD8+T细胞数量分别高于复发或新生组(Z=2.009,P=0.045;Z=2.007,P=0.045)。结论RFA治疗后边缘HSP70表达增强、CD8+T细胞数量增多,显示RFA治疗后局部免疫原性提高,抗肿瘤效应细胞浸润增加。 展开更多
关键词 原发性肝癌 射频消融 免疫组化 热休克蛋白70 肿瘤浸润淋巴细胞
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热休克蛋白27在转移潜能不同人肝癌细胞系中的表达及机制研究 被引量:9
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作者 郭坤 刘银坤 +6 位作者 周海君 代智 陈洁 孙瑞霞 孙强玲 卢雯静 康晓楠 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第7期738-745,共8页
利用不同转移潜能肝癌细胞系探讨热休克蛋白27(HSP27)参与肝癌细胞转移潜能形成的可能分子机制.细胞免疫荧光技术、RT-PCR和免疫印迹技术显示,HSP27在转移潜能不同的肝癌细胞Hep3B、MHCC97L和MHCC97H中定位于细胞浆,亦可见于细胞核,HSP2... 利用不同转移潜能肝癌细胞系探讨热休克蛋白27(HSP27)参与肝癌细胞转移潜能形成的可能分子机制.细胞免疫荧光技术、RT-PCR和免疫印迹技术显示,HSP27在转移潜能不同的肝癌细胞Hep3B、MHCC97L和MHCC97H中定位于细胞浆,亦可见于细胞核,HSP27 mRNA和蛋白质的表达水平与肝癌细胞转移潜能呈正相关.高转移潜能肝癌细胞系MHCC97H的HSP27 RNA干扰试验结果显示,HSP27 RNA干扰后MHCC97H的侵袭(MHCC97H组:21.36±2.92;对照RNAi组:19.88±2.23;RNAi组:11.40±2.05)、运动能力(MHCC97H组:26.35±3.29;对照RNAi组:24.43±3.17;RNAi组:10.92±2.27)明显减弱,细胞凋亡显著增加(MHCC97H组:15.12%;对照RNAi组:17.56%;RNAi组:27.64%).同时进行信号转导基因芯片检测发现,HSP27干扰后核因子κB(NF-κB)通路抑制,并且免疫印迹显示细胞核内活化的NF-κBp65减少,细胞内磷酸化IκBα降低.另外,免疫共沉淀检测发现,在肝癌细胞内HSP27可与IKKβ、IκBα共沉淀,且在HSP27RNA干扰后IKKβ与IKKα结合能力下降.这些结果提示,HSP27可能通过参与细胞内NF-κB通路的激活,影响细胞凋亡和细胞运动,在肝癌细胞侵袭转移过程中发挥作用. 展开更多
关键词 肝细胞性肝癌细胞 热休克蛋白27 信号转导 核因子κB(NF-κB) 肿瘤转移 凋亡 RNA干扰
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