mRNA差异显示反转录PCR技术的发展及其在神经科学中的应用 被引量：1

1

作者 胡震 杨树源 《现代神经疾病杂志》 2003年第5期286-290,共5页

关键词 mrna差异显示反转录pcr技术 神经科学 差别性表达 功能基因组

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用差异显示反转录PCR银染技术研究植物基因表达的差异 被引量：7

2

作者 毛爱军 王台 宋艳茹 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第5期736-739,共4页

通过调整差异显示反转录PCR (DDRT PCR)中总RNA、锚定引物、随机引物、cDNA和dNTP等关键试剂的用量 ,优化了适用于银染检测的DDRT PCR方法 .PCR扩增产物经 6 %变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳分离后 ,银染能检测到多而清晰的条带 .泳道中的... 通过调整差异显示反转录PCR (DDRT PCR)中总RNA、锚定引物、随机引物、cDNA和dNTP等关键试剂的用量 ,优化了适用于银染检测的DDRT PCR方法 .PCR扩增产物经 6 %变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳分离后 ,银染能检测到多而清晰的条带 .泳道中的条带数最少为 40个 ,最多达 80个 ,平均为 6 0个 ,条带大小分布在 10 0～ 90 0bp范围 ,灵敏度为 5pg/mm2 .此方法操作简便快速 ,灵敏度高 ,重复性好 .采用这个改良的方法 ,分析了拟南芥野生型和ast突变型基因表达的差异 .从 16 0 0 0个cDNA扩增产物条带中筛选出 2 8个差异条带 .二次PCR扩增后 ,进一步筛选出 13个差异条带 ,其中 7个是野生型特异表达的 ,6个是突变型特异表达的 。 展开更多

关键词 差异显示反转录pcr 银染 拟南芥 ast突变型 植物 基因表达

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反转录差异显示技术及其方法的改进 被引量：6

3

作者 朱靖 杜立新 《动物医学进展》 CSCD 2005年第1期19-21,共3页

运用mRNA反转录差异显示技术可以了解不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下的基因表达状况 ,为研究生命活动过程提供重要信息。文章对差异显示反转录聚合酶链式反应技术的基本原理 ,优点与缺点 ,以及近年来对该技术涉及的R... 运用mRNA反转录差异显示技术可以了解不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下的基因表达状况 ,为研究生命活动过程提供重要信息。文章对差异显示反转录聚合酶链式反应技术的基本原理 ,优点与缺点 ,以及近年来对该技术涉及的RT PCR方法、引物设计、PCR反应参数、电泳及差异条带的显示方法以及杂交方式进行了论述和评价 ,并对其应用前景进行了简单分析。 展开更多

关键词 反转录差异显示pcr 反向northern印迹 银染

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苏太猪肌内脂肪沉积相关基因SRC-1的差异显示反转录PCR鉴定 被引量：1

4

作者 薛春阳 汪秀星 +4 位作者 王晓娜 刘红林 徐银学 程占军 陈杰 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期126-129,共4页

采取90头180日龄去势苏太猪的背最长肌组织测定肌内脂肪含量,从中选取肌内脂肪含量差异极显著(P<0.01)的最高和最低各6头组成RNA池,采用差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)鉴定两组间差异表达的基因,结果共获得14条表达序列标签(expressed ... 采取90头180日龄去势苏太猪的背最长肌组织测定肌内脂肪含量,从中选取肌内脂肪含量差异极显著(P<0.01)的最高和最低各6头组成RNA池,采用差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)鉴定两组间差异表达的基因,结果共获得14条表达序列标签(expressed sequence tags),即EST序列,通过GenBank比对发现其中3条为已知序列。为进一步验证这3个已知基因与肌内脂肪之间的关系,从90个个体中选取肌内脂肪最高和最低各15个个体进行实时定量PCR检测。结果表明,细胞核受体共激活因子1基因(SRC-1)mRNA表达水平与肌内脂肪含量存在负相关关系(r=-0.38,P<0.05)。提示:SRC-1蛋白有可能参与了肌内脂肪沉积的调节。 展开更多

关键词 差异显示反转录pcr 肌内脂肪 实时荧光定量pcr 细胞核受体共激活因子1基因(SRC-1) 苏太猪

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mRNA差异显示技术、PCR技术及其在动物营养研究中的运用 被引量：3

5

作者 李宏 周庆安 刘文刚 《饲料工业》 2005年第12期39-41,共3页

21世纪将是生命科学的世纪。当前,世界各国都将分子生物学纳入本国科技发展的重点。分子生物学技术的迅速发展为营养科学探索必需营养缺陷的分子基础提供了强有力的实验工具。本文旨在对mRNA差异显示技术、PCR技术等两种最常用的生物技... 21世纪将是生命科学的世纪。当前,世界各国都将分子生物学纳入本国科技发展的重点。分子生物学技术的迅速发展为营养科学探索必需营养缺陷的分子基础提供了强有力的实验工具。本文旨在对mRNA差异显示技术、PCR技术等两种最常用的生物技术手段的原理、特点及其在动物营养研究中的应用作一综述。 展开更多

关键词 mrna差异显示技术 pcr技术 动物营养学 技术原理 现代生物技术

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mRNA差异显示技术的研究进展 被引量：7

6

作者 陈永华 严钦泉 +1 位作者 余建蒲 肖国樱 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期9-12,43,共5页

针对mRNA差异显示技术中的假阳性高和放射性污染等缺陷,文章从改进引物设计、应用非放射性标记、优化PCR参数、假阳性鉴定等方面进行了综述。1采用4种兼并或单碱基引物作锚定引物;用特异和长序列(≥20bp)专一性引物作为随机引物,可增加... 针对mRNA差异显示技术中的假阳性高和放射性污染等缺陷,文章从改进引物设计、应用非放射性标记、优化PCR参数、假阳性鉴定等方面进行了综述。1采用4种兼并或单碱基引物作锚定引物;用特异和长序列(≥20bp)专一性引物作为随机引物,可增加特异性;在锚定引物之前加上了一段T7启动子序列,在随机引物前加上一段M13重复序列,可使DDRT—PCR的体系的扩增特异性更一致。2针对放射性同位素检测法的缺点,文章提出并比较了几种常用的非放射性同位素标记方法。3保证起始(模板)mRNA质量和浓度,降低dNTP浓度,选择最适的反转录和PCR退火温度,可优化PCR参数。4用两种不同的反转录酶进行反转录平行实验,很容易区分出RNA制备过程中造成的假阳性,目前假阳性鉴定大多还是以Northern印迹为基础,再作些适当的改进。 展开更多

关键词 mrna差异显示技术 研究进展 Northern 非放射性同位素 非放射性标记 dNTP浓度 锚定引物 随机引物 放射性污染 启动子序列 假阳性 重复序列 标记方法 退火温度 平行实验 反转录酶 制备过程 R参数 特异性 pcr 单碱基 专一性

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mRNA差异显示PCR的研究进展 被引量：4

7

作者 安健 汪明 +2 位作者 王黎霞 杨静 夏茂华 《北京农学院学报》 2005年第2期64-68,共5页

mRNA差异显示PCR技术是在基因转录水平上研究差异表达和性状差异的有效方法之一,该方法在生物的发育、性状和对各种生物、理化因子作用时应答过程基因表达的研究中应用十分广泛,笔者简述了mRNA差异显示PCR技术的基本原理、技术改进以及... mRNA差异显示PCR技术是在基因转录水平上研究差异表达和性状差异的有效方法之一,该方法在生物的发育、性状和对各种生物、理化因子作用时应答过程基因表达的研究中应用十分广泛,笔者简述了mRNA差异显示PCR技术的基本原理、技术改进以及此技术在球虫抗药性研究中的应用。 展开更多

关键词 mrna差异显示pcr技术 球虫 抗药性 技术原理

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mRNA差异显示技术的研究进展 被引量：2

8

作者 陈永华 严钦泉 《江西农业学报》 CAS 2005年第1期66-69,共4页

对mRNA差异显示技术中引物设计、应用非放射性标记、优化PCR参数、假阳性鉴定的方法等方面进行了概述。

关键词 mrna差异显示技术 放射性标记 研究进展 术中 假阳性 引物设计 pcr 鉴定 应用

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mRNA差异显示技术及其在动物遗传研究中的应用 被引量：3

9

作者 褚晓红 胡锦平 翁经强 《黄牛杂志》 2004年第1期34-35,50,共3页

mRNA表达水平的变化决定细胞的功能状态,mRNA差异显示技术是在转录水平上研究基因表达的有效方法,本文综述了mRNA差异显示技术的基本原理方法、PCR引物设计及其循环参数优化、克服假阳性方法的建立,以及其在动物遗传研究中的应用现状,... mRNA表达水平的变化决定细胞的功能状态,mRNA差异显示技术是在转录水平上研究基因表达的有效方法,本文综述了mRNA差异显示技术的基本原理方法、PCR引物设计及其循环参数优化、克服假阳性方法的建立,以及其在动物遗传研究中的应用现状,并对其前景进行了展望。 展开更多

关键词 mrna差异显示技术 动物 遗传 pcr引物设计 假阳性 凝胶显示方法 全基因序列

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施氏假单胞菌75 mRNA差异显示PCR方法的建立

10

作者 颜穗 冉雪琴 +1 位作者 王嘉福 齐芬芳 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2013年第7期129-131,共3页

为丰富原核生物基因表达差异的研究方法,将应用于真核生物中的差异显示PCR方法应用于原核生物基因差异表达的研究,以1株有机磷农药乐果的降解菌施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzer)75为研究材料,以5′末端依赖性的RNA外切酶(Terminator E... 为丰富原核生物基因表达差异的研究方法,将应用于真核生物中的差异显示PCR方法应用于原核生物基因差异表达的研究,以1株有机磷农药乐果的降解菌施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzer)75为研究材料,以5′末端依赖性的RNA外切酶(Terminator Exonuclease)降解其中的16S rRNA和tRNA,并用随机引物替代锚定引物,改良真核生物差异显示PCR,建立原核生物mRNA差异显示PCR的试验体系。以LB培养基培养的菌株为对照组,以无机盐培养基(乐果为唯一碳源)为试验组。结果表明:提取总RNA,通过5′-磷酸基团依赖的核酸外切酶降解法获得mRNA,经逆转录,用双随机引物扩增获得253个差异基因,16S rRNA、tRNA的污染较少,其中之一为硫酸盐运输蛋白基因。 展开更多

关键词 施氏假单胞菌 mrna差异显示pcr技术 mrna纯化

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人胎脑mRNA的差异显示分析及脑表达新ESTs的分离 被引量：4

11

作者 潘美辉 袁建刚 +4 位作者 陈斌 周彦 方鸣武 梁植权 强伯勤 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期93-99,共7页

应用mRNA差异显示技术分析人胎脑组织不同发育阶段及不同部位基因表达的差异并研究其特异表达的基因。以3个锚定引物Oligo（dT）12M（M=A，G，C）及20个随机引物，对脑组织mRNA进行了近50次差异显示分析，共分离出上百个差示产物。对其... 应用mRNA差异显示技术分析人胎脑组织不同发育阶段及不同部位基因表达的差异并研究其特异表达的基因。以3个锚定引物Oligo（dT）12M（M=A，G，C）及20个随机引物，对脑组织mRNA进行了近50次差异显示分析，共分离出上百个差示产物。对其中部分产物进行克隆、测序获得了39个CDNA序列，长度为100～500bp。其中34个已被Genbank接受并给予新序列编号。 展开更多

关键词 差异显示反转录 pcr 人胎脑 表达序列标签

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差异基因的高通量筛选研究 被引量：1

12

作者 刘岩 王海龙 孟智启 《浙江农业科学》 2009年第3期611-613,共3页

随着多个生物体全基因组序列的公布,研究重点更多地转移到基因功能分析上,基于生物品质改良、基因诊断及疾病治疗等考虑,分离并克隆生命体生长发育等过程的时空特异性差异表达基因也越来越受到关注。论文围绕近年来较具代表性的5种分析... 随着多个生物体全基因组序列的公布,研究重点更多地转移到基因功能分析上,基于生物品质改良、基因诊断及疾病治疗等考虑,分离并克隆生命体生长发育等过程的时空特异性差异表达基因也越来越受到关注。论文围绕近年来较具代表性的5种分析方法,即表达序列标签、差异显示反转录PCR、抑制消减杂交、基因表达系列分析和微阵列技术,分析各方法的原理及优缺点,以期对今后开展研究时的选择起到参考作用。 展开更多

关键词 差异基因 表达序列标签 差异显示反转录pcr 抑制消减杂交 基因表达系列分析 微阵列技术

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人类逆转录病毒的长末段重复序列(HRTVLTR)的表达与肺癌转移的关系

13

作者 连祺周 庄建良 +1 位作者 路刚 夏建川 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期1123-1128,共6页

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一 .肺腺癌很容易发生转移 .实验以 17例肺癌 (5例肺腺癌、1例腺鳞癌、7例肺鳞癌及 4例小细胞末分化癌 )的原发灶、癌旁正常组织及转移淋巴结为材料 ,采用PCR及非放射性标记的 RNA斑点杂交分析 L TR在基因组的... 肺癌是最常见的恶性肿瘤之一 .肺腺癌很容易发生转移 .实验以 17例肺癌 (5例肺腺癌、1例腺鳞癌、7例肺鳞癌及 4例小细胞末分化癌 )的原发灶、癌旁正常组织及转移淋巴结为材料 ,采用PCR及非放射性标记的 RNA斑点杂交分析 L TR在基因组的存在及其表达情况 .研究结果发现 :LTR序列在 17例肺癌病人的正常组织及肿瘤组织的基因组中普遍存在 ,L TR致肺癌转移与其插入基因组中无关 ;L TR致肺癌转移与其表达增高有关 ,而且其高表达与小细胞肺癌的转移无关 ,而与非小细胞肺癌的转移密切相关 .提示 L TR参与了非小细胞肺癌的转移过程 . 展开更多

关键词 逆转录病毒 长末段重复序列 基因表达 肺癌转移 肺腺癌 mrna差异显示技术

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花生果种皮特异表达基因候选片段的分离

14

作者 蔡宁波 张君诚 +3 位作者 兰岚 庄伟建 赵永莉 李毓 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第6期596-598,共3页

应用改良的琼脂糖凝胶电泳展示DDRT-PCR产物的方法分离花生果种皮特异表达基因,共分离出24条差异表达片段.经测序后排除重复,最终得到8条差异片段.其中1条为花生上已知基因片段,余下7条均为花生上尚未报道过的基因.此7个片段序列已登录G... 应用改良的琼脂糖凝胶电泳展示DDRT-PCR产物的方法分离花生果种皮特异表达基因,共分离出24条差异表达片段.经测序后排除重复,最终得到8条差异片段.其中1条为花生上已知基因片段,余下7条均为花生上尚未报道过的基因.此7个片段序列已登录Genbank,其登录号分别为DQ450065、DQ450066、DQ450067、DQ450068、DQ450069、DQ450070、DQ450071.同时本研究还对应用琼脂糖电泳分离DD-PCR产物的方法进行了探讨. 展开更多

关键词 花生 果种皮 特异基因 反转录差异显示技术

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TNF-α致脂肪细胞胰岛素抵抗相关基因的克隆和鉴定

15

作者 童国玉 李果 +2 位作者 李纪平 刘嫕 张宏利 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第12期997-1000,共4页

目的分离和克隆肿瘤坏死因子α(TNF α)致 3T3 L1脂肪细胞胰岛素抵抗 (IR)的相关基因。方法分化成熟的 3T3 L1脂肪细胞用TNF α处理 4 8h后抽提总RNA ,采用mRNA差异显示技术分离和克隆TNF α引起脂肪细胞IR的基因 ,再通过半定量RT PCR... 目的分离和克隆肿瘤坏死因子α(TNF α)致 3T3 L1脂肪细胞胰岛素抵抗 (IR)的相关基因。方法分化成熟的 3T3 L1脂肪细胞用TNF α处理 4 8h后抽提总RNA ,采用mRNA差异显示技术分离和克隆TNF α引起脂肪细胞IR的基因 ,再通过半定量RT PCR证实。结果经mRNA差异显示技术分离和克隆到 10个已知基因的cDNA ,3个已知表达序列标签 (ESTs)片段和1个新的EST片段。半定量RT PCR证实TNF α上调 3T3 L1脂肪细胞Synip基因和血浆淀粉样蛋白A3(SAA3)基因的表达。结论Synip基因和SAA3基因的表达升高可能与TNF α致 3T3 L1脂肪细胞IR和相关的心血管并发症有关。 展开更多

关键词 TNF—α 3T3-L1脂肪细胞 胰岛素抵抗 相关基因 克隆和鉴定 P基因 IR mrna差异显示技术 表达序列标签 RT—pcr

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功能基因组学研究进展 被引量：2

16

作者 庄金秋 贾杏林 《动物医学进展》 CSCD 2004年第4期32-36,共5页

2 1世纪是生物时代和信息时代 ,基因组学的研究已从结构基因组学转向功能基因组学 ,对于基因功能的研究也由单一基因转向大规模、批量分析。文章对功能基因组学及相关学科的概念作了概述 ,介绍了功能基因组学的研究内容与研究方法 ,主... 2 1世纪是生物时代和信息时代 ,基因组学的研究已从结构基因组学转向功能基因组学 ,对于基因功能的研究也由单一基因转向大规模、批量分析。文章对功能基因组学及相关学科的概念作了概述 ,介绍了功能基因组学的研究内容与研究方法 ,主要包括应用差异显示反转录 PCR、基因表达序列分析 (SAGE)、微点阵、蛋白质组学和生物信息学等研究基因组表达概况、基因组多样性和模式生物学等。 展开更多

关键词 功能基因组学 差异显示反转录pcr 基因表达 序列分析 微点阵 蛋白质组学 生物信息学

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