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利用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)研究大豆抗疫霉根腐病的分子机制 被引量:4
1
作者 叶楠 李永刚 文景芝 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第9期6-9,共4页
文章以中国优良大豆品种东农46及大豆疫霉优势生理小种1号菌株为材料,利用mRNA差异显示技术研究东农46与大豆疫霉根腐病菌非亲和互作中前后基因表达的差异,寻找并分离出与大豆疫霉根腐病抗病性相关的9条cDNA片段,通过这些差异片段的序... 文章以中国优良大豆品种东农46及大豆疫霉优势生理小种1号菌株为材料,利用mRNA差异显示技术研究东农46与大豆疫霉根腐病菌非亲和互作中前后基因表达的差异,寻找并分离出与大豆疫霉根腐病抗病性相关的9条cDNA片段,通过这些差异片段的序列分析进一步阐述大豆对疫霉根腐病菌的分子抗病机制。 展开更多
关键词 大豆疫霉根腐病 mrna差异显示技术 抗病基因
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单个植入前胚胎mRNA差异显示方法的建立 被引量:21
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作者 郁卫东 杨立新 +2 位作者 李文雍 刘桂生 陈清轩 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第2期308-313,共6页
在已有的研究基础上 ,优化和建立了单个植入前胚胎的mRNA差异显示 (singlepreimplantationembryodifferentialdisplaypolymerasechainraction ,SPEDDRT PCR) .以小鼠单个成熟的卵母细胞和单个的 2细胞期胚胎作为起始材料 ,比较二者之间... 在已有的研究基础上 ,优化和建立了单个植入前胚胎的mRNA差异显示 (singlepreimplantationembryodifferentialdisplaypolymerasechainraction ,SPEDDRT PCR) .以小鼠单个成熟的卵母细胞和单个的 2细胞期胚胎作为起始材料 ,比较二者之间基因的表达差异 .选择在卵母细胞中不表达而在 2细胞期表达的差异片段 .进行GenBank检索和表达序列标签 (EST)库电子克隆 .与多胚研究方法一样 ,由线粒体编码的和 2细胞特异表达的NADH脱氢酶亚单位 2和ATPase 6证实了SPEDDRT PCR方法是可行而且可靠的 ,是一种需要材料极少。 展开更多
关键词 植入前胚胎 mrna 差异显示 早期胚胎发育
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降低mRNA差异显示技术假阳性率的一种方法 被引量:24
3
作者 郝纯毅 赵敏 +3 位作者 李勇 邢宝才 吕有勇 黄信孚 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期110-114,共5页
为了探讨降低mRNA差异显示技术假阳性率的方法 ,进一步提高此技术的可靠性 ,提取了手术切除肝癌及非癌肝组织成对标本的总RNA ,逆转录获得cDNA片段 ,以mRNA差异显示方法筛选差异表达基因 ,选取较明显的一条差异表达条带 ,行进一步PCR扩... 为了探讨降低mRNA差异显示技术假阳性率的方法 ,进一步提高此技术的可靠性 ,提取了手术切除肝癌及非癌肝组织成对标本的总RNA ,逆转录获得cDNA片段 ,以mRNA差异显示方法筛选差异表达基因 ,选取较明显的一条差异表达条带 ,行进一步PCR扩增 .分别对PCR产物及其经TA克隆后随机挑选的 6个单克隆质粒DNA进行序列分析 ,并通过GenBank BLAST数据库进行序列的同源性比较 ,以Northern杂交予以来源确认 .自 72 0余条扩增条带中共选出 2 8条差异条带 .序列分析及同源性比较表明 ,所选择条带的PCR产物为一可能的新基因片段 ;而随机选择的 6个TA克隆质粒DNA中 ,有 4个为同一已知基因片段 ,一个为另一已知基因片段 ,一个为一可能的新基因片段 .同源性比较表明 ,PCR产物直接测序所得序列与TA克隆质粒DNA的 6个片段不具同源性 .结果表明 ,mRNA差异显示条带可能由 1条以上分子量相似的片段构成 ,直接对PCR产物行序列分析并以其为探针进行Northern杂交 ,是导致出现假阳性片段的原因之一 .将PCR产物进行TA克隆 ,对单克隆质粒DNA进行序列分析并以其为探针进行Northern杂交 ,可能是解决此问题的一种较好方法 . 展开更多
关键词 mrna差异显示 基因表达 假阳性率
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mRNA差异显示技术中差异条带的回收与再扩增 被引量:16
4
作者 王宏 李春海 +3 位作者 陈高明 王尧河 夏贞彪 杨毅 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期350-351,共2页
目的:对来源于两种或两种以上组织的RNA经反转录和PCR后进行比较。方法:采用mRNA差异显示过程中差异条带的回收与再扩增的方法。结果:直接将切下的凝胶条简单洗涤和碾碎后制备的再扩增模板比传统的糖原沉淀法简单有效。结... 目的:对来源于两种或两种以上组织的RNA经反转录和PCR后进行比较。方法:采用mRNA差异显示过程中差异条带的回收与再扩增的方法。结果:直接将切下的凝胶条简单洗涤和碾碎后制备的再扩增模板比传统的糖原沉淀法简单有效。结论:再扩增过程中将30循环的低退火温度的DDPCR和20循环的严格条件的PCR结合,能获得较高的再扩增效率。 展开更多
关键词 mrna差异显示 差异条带回收 再扩增 肿瘤
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用mRNA差异显示技术分离盐胁迫下小麦耐盐相关cDNA 被引量:7
5
作者 刘永军 景建洲 +3 位作者 贾敬芬 李振勇 郝建国 陈刚 《西北大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期89-92,共4页
目的用mRNA差异显示技术分离小麦盐胁迫应答cDNA,为进一步研究小麦耐盐机理奠定基础。方法将小麦(Triticum aesticum L.)耐盐品系宝丰7228r种子分别置于含NaC l 0‰和12‰的Hoagland培养液中生长,7d后分别取叶片,提取总RNA并分离出其中... 目的用mRNA差异显示技术分离小麦盐胁迫应答cDNA,为进一步研究小麦耐盐机理奠定基础。方法将小麦(Triticum aesticum L.)耐盐品系宝丰7228r种子分别置于含NaC l 0‰和12‰的Hoagland培养液中生长,7d后分别取叶片,提取总RNA并分离出其中的mRNA,通过锚锭引物O ligo dT10GC反转录和9个10核苷酸随机引物进行PCR扩增。结果DDRT-PCR结果显示,有4个差异DNA片段只在盐胁迫的小麦耐盐品系基因组中表达,而在对照中没有出现。这4个差异cDNA片段分别命名为ts01(260 bp),ts02(330 bp),ts03(420 bp),ts04(600 bp)。4个差异cD-NA片段的RNA杂交结果显示,只有ts04存在明显差异,在盐胁迫条件下有杂交斑点而在对照中没有杂交斑点,其余3个cDNA片段在盐胁迫和对照中都没有杂交斑点。进一步将ts04克隆并进行DNA序列测定及同源性分析。结论ts04可能是耐盐相关cDNA片段,该片段核酸序列与麦属抗性相关的肌动蛋白基因有23%同源。 展开更多
关键词 小麦 mrna差异显示 耐盐性
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mRNA差异显示法分离水稻抗稻瘟病相关cDNA克隆 被引量:17
6
作者 黄旭 龚蓁蓁 +1 位作者 徐竹筠 唐锡华 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2000年第2期124-126,共3页
关键词 mrna差异显示 抗稻瘟病相关cDNA克隆 水稻
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用mRNA差异显示技术分析中华绒螯蟹早期发育的基因表达 被引量:7
7
作者 张晓军 崔朝霞 +1 位作者 樊拥军 相建海 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期34-37,共4页
用中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)未受精卵、受精卵、二细胞胚、囊胚、原肠胚为材料 ,提取总RNA ,分别用OligodT12GA、GC、AC3种锚定引物合成以上5种材料的cDNA第一链 ,然后以此cDNA为模板用30种随机引物进行PCR扩增 ,琼脂糖凝胶电泳分... 用中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)未受精卵、受精卵、二细胞胚、囊胚、原肠胚为材料 ,提取总RNA ,分别用OligodT12GA、GC、AC3种锚定引物合成以上5种材料的cDNA第一链 ,然后以此cDNA为模板用30种随机引物进行PCR扩增 ,琼脂糖凝胶电泳分析。得到了5个早期发育的特异表达片段。结果表明 ,未受精卵、受精卵、二细胞胚之间的差异不大 ,都表现为母型调控 ,囊胚期有新mRNA的转录 ,开始进入合子型调控。 展开更多
关键词 mrna差异显示 中华绒螯蟹 早期发育 基因表达
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mRNA差异显示阳性cDNA克隆的快速筛选与鉴定 被引量:21
8
作者 李子银 陈受宜 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1999年第8期44-48,共5页
建立了一种快速筛选差异显示阳性cDNA 克隆的方法, 该方法利用两轮Reverse Northern 杂交,结合质粒酶切图谱分析,从30个DDRT差异cDNA片段中筛选鉴定出两个阳性cDNA克隆, 对其中一个克隆进行的N... 建立了一种快速筛选差异显示阳性cDNA 克隆的方法, 该方法利用两轮Reverse Northern 杂交,结合质粒酶切图谱分析,从30个DDRT差异cDNA片段中筛选鉴定出两个阳性cDNA克隆, 对其中一个克隆进行的Northern 分析证实了筛选方法的可靠性。 展开更多
关键词 差异显示 阳性克隆 mrna CDNA
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银染mRNA差异显示法的建立及其应用 被引量:4
9
作者 陈瑞川 蔡克瑕 +3 位作者 马胜平 陈福 付永贵 曾寰 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期1138-1144,共7页
以银染 m RNA差异显示方法对原发及转移灶胃癌标本总 RNA为研究对象进行银染差示分析和回收差异条带 ,从中获得系列差异表达片段 .随机选取 5个从原发性胃癌样品回收的表达条带 ,以取自体外培养胃癌细胞株的 RNA进行点杂交验证 ,均被证... 以银染 m RNA差异显示方法对原发及转移灶胃癌标本总 RNA为研究对象进行银染差示分析和回收差异条带 ,从中获得系列差异表达片段 .随机选取 5个从原发性胃癌样品回收的表达条带 ,以取自体外培养胃癌细胞株的 RNA进行点杂交验证 ,均被证实为真实带 .对 2个差异表达片段进行分析、测序和 Gen Bank同源比较结果表明 :MGD1片段与肿瘤转移相关基因 MTA1完全同源 ,属胃癌转移相关基因 ;PGD2与胃癌转移抑制相关 ,并与细胞周期抑制蛋白 p2 7/ Kip1具 99%的同源性 .结果表明 ,银染差异显示法具有快速、直观、假阳性率低等优点 。 展开更多
关键词 银染差示PCR 胃癌 转移相关基因 银染mrna差异显示 肿瘤转移 差异表达片段
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小麦T型细胞质雄性不育系、保持系mRNA差异显示及育性相关基因的研究 被引量:7
10
作者 朱昀 赵宝存 +2 位作者 葛荣朝 沈银柱 黄占景 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期398-400,共3页
关键词 小麦 T型细胞质雄性不育系 保持系 mrna差异显示 育性相关基因
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mRNA差异显示技术及其在植物生理研究中的应用 被引量:7
11
作者 王西平 刘振中 +1 位作者 秦宝福 赵明德 《西北农业大学学报》 CSCD 北大核心 2000年第6期197-202,共6页
简述了 m RNA差异显示技术的基本原理及其在基因表达差异、基因的鉴定与克隆、激素调控机理、抗逆性机理等方面的应用 。
关键词 mrna差异显示 基因表达差异 基因克隆 植物生理
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mRNA差异显示技术的研究进展及其在植物研究中的应用 被引量:5
12
作者 贺滉 郭安平 +1 位作者 孔华 贺立卡 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第5期1307-1309,1321,共4页
综述了mRNA差异显示技术的原理、技术路线、优缺点以及差异显示技术的改进过程,并对其在植物发育、植物抗性机理、植物杂种优势机理以及植物激素诱导的基因表达等植物研究领域中的应用作了简要的介绍。
关键词 mrna差异显示 进展 植物研究 应用
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运用银染mRNA差异显示方法分析杂交水稻红莲优6号基因表达差异 被引量:7
13
作者 张义平 陈学峰 熊建华 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 2003年第4期493-497,共5页
运用非同位素银染mRNA差异显示方法 ,分析红莲型杂交水稻组合基因表达差异。以杂交水稻及其亲本三系 (YTA、YTB、93 1 1 )三叶一心期叶片RNA为模板采用锚定引物 5′dT1 2MN 3′和随机引物组合 ,进行反转录差异显示PCR。经 5 .6%测序胶... 运用非同位素银染mRNA差异显示方法 ,分析红莲型杂交水稻组合基因表达差异。以杂交水稻及其亲本三系 (YTA、YTB、93 1 1 )三叶一心期叶片RNA为模板采用锚定引物 5′dT1 2MN 3′和随机引物组合 ,进行反转录差异显示PCR。经 5 .6%测序胶电泳分离后用银染方法显示差异DNA条带 ,在直观下 ,从凝胶中回收差异条带并进行再扩增 ,2 %琼脂糖电泳得到了DNA的单一带型。 展开更多
关键词 杂交水稻 红莲优6号品种 银染mrna 差异显示 基因表达
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银染mRNA差异显示方法的建立和吗啡诱导基因的克隆 被引量:12
14
作者 徐国恒 凌雁 +4 位作者 梁德勇 崔巍 王晓民 万有 韩济生 《北京医科大学学报》 CSCD 1998年第5期385-388,共4页
目的:建立非同位素银染mRNA差异显示方法,分离吗啡相关基因。方法:以吗啡处理的SHSY5Y细胞中提取的总RNA为模板,用5’dT12MG锚定引物和两条随机引物组合进行DDRTPCR扩增。经测序凝胶电泳分离后,用... 目的:建立非同位素银染mRNA差异显示方法,分离吗啡相关基因。方法:以吗啡处理的SHSY5Y细胞中提取的总RNA为模板,用5’dT12MG锚定引物和两条随机引物组合进行DDRTPCR扩增。经测序凝胶电泳分离后,用银染方法显示差异DNA条带,在直视下从凝胶中回收差异条带并进行再扩增,扩增产物克隆入pGEMT载体。结果:建立了非同位素的银染mRNA差异显示方法,分离和克隆了一些吗啡诱导的差异表达基因。 展开更多
关键词 差异显示 吗啡诱导基因 银染色法 基因扩增 mrna
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mRNA差异显示技术在植物学领域的应用 被引量:5
15
作者 王新超 梅菊芬 杨亚军 《浙江农业学报》 CSCD 2008年第2期144-148,共5页
概述了近年来在克隆差异表达基因方面应用比较广泛的mRNA差异显示技术的原理、优缺点及操作过程中应注意的事项。并对最近几年该技术在植物生长发育基因、逆境胁迫基因、雄性不育机理和杂交优势机理、激素调控应答基因等方面的研究现状... 概述了近年来在克隆差异表达基因方面应用比较广泛的mRNA差异显示技术的原理、优缺点及操作过程中应注意的事项。并对最近几年该技术在植物生长发育基因、逆境胁迫基因、雄性不育机理和杂交优势机理、激素调控应答基因等方面的研究现状做了综述,还提出了该技术在未来植物学研究上的应用前景。 展开更多
关键词 mrna差异显示 RT-PCR 植物基因 克隆
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用mRNA差异显示法分离水稻抗白叶枯病相关基因 被引量:4
16
作者 王洁 王春连 +3 位作者 樊金娟 章琦 孔繁玲 赵开军 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1373-1376,共4页
关键词 水稻白叶枯病 抗病相关基因 mrna差异显示 抗白叶枯病 分离 白叶枯病抗性 防卫基因 调控基因 白叶枯病菌
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mRNA差异显示研究胃癌相关基因 被引量:2
17
作者 肖冰 尤涵 +2 位作者 崔大祥 时永全 樊代明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1998年第2期110-112,共3页
为了克隆与胃癌发病相关的新基因,我们以正常胃粘膜细胞GES和胃癌细胞系7901为对比材料,利用mRNA差异显示技术,得到两个cDNA片段。经分析发现,分别与Trk基因及白血病病毒基因有80%和30%的同源性及较好的读... 为了克隆与胃癌发病相关的新基因,我们以正常胃粘膜细胞GES和胃癌细胞系7901为对比材料,利用mRNA差异显示技术,得到两个cDNA片段。经分析发现,分别与Trk基因及白血病病毒基因有80%和30%的同源性及较好的读框,有可能为胃癌相关的新基因片段,已在GenBank中登录:176116,176385。 展开更多
关键词 胃肿瘤 mrna差异显示 相关基因
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mRNA差异显示法筛选大肠癌相关基因 被引量:3
18
作者 南清振 高蕾 +4 位作者 杨希山 肖冰 周京旭 张亚历 施理 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第4期258-260,共3页
目的 分离并克隆大肠癌相关基因。方法分别提取大肠癌与正常大肠粘膜的组织总RNA,用mRNA差异显示法 (Differential display polymerase chain reaction,DD-PCR)筛选大肠癌特异性表达产物的cDNA片段,对其进行克隆、... 目的 分离并克隆大肠癌相关基因。方法分别提取大肠癌与正常大肠粘膜的组织总RNA,用mRNA差异显示法 (Differential display polymerase chain reaction,DD-PCR)筛选大肠癌特异性表达产物的cDNA片段,对其进行克隆、测 序、序列分析以及斑点杂交初步鉴定。结果获得了2个在大肠癌高表达而在正常大肠粘膜组织低表达的新基因片段。 结论这2条差异显示新基因片段很可能是与大肠癌相关的致癌基因。 展开更多
关键词 大肠肿瘤 基因表达 DNA变异分析 mrna 差异显示
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一种快速mRNA差异显示技术及用于分离辐射诱导转录子 被引量:8
19
作者 周平坤 孙国敬 +1 位作者 隋建丽 孙志贤 《生物化学杂志》 CSCD 1997年第6期622-625,共4页
介绍一种从不同类型细胞或不同生长状态细胞中分离差异表达基因的快速mRNA差异显示技术.其特点是不用同位素标记,操作简便,在普通琼脂糖凝胶电泳中就能分辨差异显示的cDNA带,便于DNA回收和进一步重组克隆.用此方法成功... 介绍一种从不同类型细胞或不同生长状态细胞中分离差异表达基因的快速mRNA差异显示技术.其特点是不用同位素标记,操作简便,在普通琼脂糖凝胶电泳中就能分辨差异显示的cDNA带,便于DNA回收和进一步重组克隆.用此方法成功地分离到电离辐射诱导转录子. 展开更多
关键词 mrna差异显示 转录子 分离辐射诱导
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库尔勒香梨mRNA差异显示技术体系的建立 被引量:3
20
作者 张飞 牛建新 +3 位作者 叶春秀 刘娜 高静涛 朱天丁 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2011年第2期173-178,共6页
为了研究库尔勒香梨萼片脱落与宿存的本质,试验以库尔勒香梨盛花前期的同一时间同一棵树同一花序的第2位序花和第4序位花为试验材料,采用mRNA差异显示的方法进行研究。扩增体系为20μL:cDNA 2.0μL,10μmol/L锚定引物2.0μL,10μmol/L... 为了研究库尔勒香梨萼片脱落与宿存的本质,试验以库尔勒香梨盛花前期的同一时间同一棵树同一花序的第2位序花和第4序位花为试验材料,采用mRNA差异显示的方法进行研究。扩增体系为20μL:cDNA 2.0μL,10μmol/L锚定引物2.0μL,10μmol/L随机引物2.0μL,2.5 mmol/L dNTPs 2.0μL,5 U/μL Taq 0.25μL,10×PCR buffer 2.5μL,ddH2O 9.25μL。结果显示,扩增产物经6%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染,获得了比较清晰的差异条带,回收并克隆差异条带,分离得到一些差异表达的片段,优化了库尔勒香梨mRNA差异显示技术,为克隆差异表达基因的全长cDNA奠定了良好基础。 展开更多
关键词 库尔勒香梨 萼片 体系 mrna差异显示
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