通过型固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定中华鳖中8种抗病毒药物及2种代谢物

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作者 王亚琴 王坤 +3 位作者 柯庆青 谭羽翀 王鼎南 李诗言 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期1164-1172,共9页

本研究以中华鳖中8种抗病毒药物(antiviral drugs,ATVs)及2种代谢物为研究对象,采用Wallelut Lipoclean磷脂去除小柱净化样品,建立了通过型固相萃取净化模式与超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)相结合的快速检测方法。样品在37℃... 本研究以中华鳖中8种抗病毒药物(antiviral drugs,ATVs)及2种代谢物为研究对象,采用Wallelut Lipoclean磷脂去除小柱净化样品,建立了通过型固相萃取净化模式与超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)相结合的快速检测方法。样品在37℃下经酸性磷酸酯酶酶解,1%乙酸乙腈提取,通过型固相萃取小柱净化,40℃下氮吹浓缩后采用UHPLC-MS/MS检测,多反应监测(MRM)模式采集数据,内标法定量。针对不同ATVs之间极性差异大的特点,实验优化了仪器参数和前处理条件,重点对色谱柱进行了筛选并排除了生物内源性物质尿苷对利巴韦林的分析干扰,同时讨论了前处理过程中提取液和净化小柱选择对提取效率和净化效果的影响。在最优实验条件下,10种目标物在一定质量浓度范围内线性关系良好,相关系数(r 2)为0.994~0.998,方法检出限(MDL)为0.05~1.1μg/kg,方法定量限(MQL)为0.18~3.8μg/kg。在低、中、高3个添加水平下10种目标物的平均回收率范围为82.5%~103%,相对标准偏差(RSD)为3.11%~12.1%。该方法操作简便、快速、灵敏,重复性好,可用于大批量样品的同时快速检测,并成功应用于省级水产品质量安全风险监测工作。 展开更多

关键词 通过型固相萃取 亲水作用色谱 超高效液相色谱-串联质谱 抗病毒药物 代谢物 中华鳖

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高效液相色谱-质谱技术在蛋白质组学中的应用 被引量：1

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作者 刘威 翁凌霄 +1 位作者 高明霞 张祥民 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期601-612,共12页

蛋白质组学研究在生物医学领域发挥了重要作用,然而研究面临的主要难点在于其研究对象的复杂性和多样性。随着质谱技术的快速发展,高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)分离分析复杂生物样品已经成为蛋白质组学研究的基础工具。蛋白质组学的研究... 蛋白质组学研究在生物医学领域发挥了重要作用,然而研究面临的主要难点在于其研究对象的复杂性和多样性。随着质谱技术的快速发展,高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)分离分析复杂生物样品已经成为蛋白质组学研究的基础工具。蛋白质组学的研究从肽段分离,延伸到蛋白质和蛋白质复合物的分离,随着分析物的分子质量不断增大,其结构和组成复杂性也持续增加,分子特性也发生改变。面对不同的蛋白质组学研究对象,选择不同的分离模式、分离条件以及固定相参数是进行深度蛋白质组学研究的关键。本文综述了实验室常用的液相色谱分离模式,包括反相色谱(RPLC)、亲水相互作用色谱(HILIC)、疏水相互作用色谱(HIC)、离子交换色谱(IEC)和体积排阻色谱(SEC),以及其不同的组合模式与质谱联用在自下而上(bottom-up)分析、自上而下(top-down)分析、蛋白-蛋白相互作用分析中应用的研究。具体分析了色谱流动相与被分析对象之间的兼容性问题、色谱流动相与质谱兼容性问题,以及多维色谱中不同色谱模式之间流动相的兼容性问题。重点关注存在不兼容问题时研究者所提出的解决方案。此外,本文还评述了HPLC-MS结合样本前处理的方法在外泌体和单细胞蛋白质组学中的应用研究。总之,文章聚焦于近年来HPLC-MS技术在蛋白质组学中的研究进展,旨在为未来蛋白质组学领域的研究提供参考。 展开更多

关键词 高效液相色谱 反相液相色谱 亲水相互作用色谱 疏水作用色谱 离子交换色谱 体积排阻色谱 蛋白质组学

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生物样品中5种CYP450酶底物分析方法的建立

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作者 母磊鑫 刘湉 +3 位作者 柯彩依 白延婷 马群 陈昭 《中国医药导报》 CAS 2024年第25期41-45,共5页

目的 采用HPLC法建立生物样品中测定CYP450酶底物的分析方法。方法 通过钙沉淀法制备肝微粒体,采用探针底物与大鼠肝微粒体体外温孵法进行孵育反应,以氢溴酸右美沙芬、奥美拉唑、非那西丁、硝苯地平、甲苯磺丁脲分别作为CYP2D6、CYP2C19... 目的 采用HPLC法建立生物样品中测定CYP450酶底物的分析方法。方法 通过钙沉淀法制备肝微粒体,采用探针底物与大鼠肝微粒体体外温孵法进行孵育反应,以氢溴酸右美沙芬、奥美拉唑、非那西丁、硝苯地平、甲苯磺丁脲分别作为CYP2D6、CYP2C19、CYP1A2、CYP3A4、CYP2C9的探针药物,并以大鼠肝微粒体为基质,通过系统考察建立了HPLC法测定5种探针药物的方法。结果 该方法专属性好,空白肝微粒体及内标无干扰,右美沙芬线性回归方程为Y=0.001 6X+0.003 7(r=0.994 8),奥美拉唑回归方程为Y=0.005 3 X+0.016 2(r=0.996 3),非那西丁的线性回归方程为Y=0.008 1X+0.019 9(r=0.995 0),硝苯地平的回归方程为Y=0.009 3X+0.011 8(r=0.991 7),甲苯磺丁脲的回归方程为Y=0.008 1X+0.022 0(r=0.995 1)。日内精密度和日间精密度良好,RSD≤8.75%,样本在4、12、24 h稳定性良好,RSD≤14.31%,提取回收率均>71.36%,且RSD≤6.98%,以上结果均符合样本含量测定要求。结论 本论文建立的探针方法可用于体外快速评价药物对CYP450亚型酶活性的影响,为临床药物-药物相互作用研究提供可靠的检测方法。 展开更多

关键词 高效液相色谱法 细胞色素P450 方法学考察 药物-药物相互作用

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高效液相色谱法测定蛋白粉中异麦芽酮糖含量

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作者 刘春丽 杨静 +3 位作者 胡杰 卢迪勋 陈汉峰 黎俊威 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第24期71-76,共6页

目的建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定蛋白粉中异麦芽酮糖含量。方法样品经50%乙腈超声萃取,离心后取上清液,经0.45μm微孔滤膜过滤后用亲水作用色谱(hydrophilic interaction liquid chromatograp... 目的建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定蛋白粉中异麦芽酮糖含量。方法样品经50%乙腈超声萃取,离心后取上清液,经0.45μm微孔滤膜过滤后用亲水作用色谱(hydrophilic interaction liquid chromatography column,HILIC)分离,高效液相色谱仪-示差检测器分析。选用色谱柱Waters XBridge HILIC(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相:乙腈:水=85:15(V:V);检测器温度为40℃;流速为1.0 mL/min;进样体积为5μL;柱温为40℃;运行时间为10 min。结果异麦芽酮糖在1.96~9.80 mg/mL范围内线性关系良好,相关系数(r^(2))为0.9999,回收率均大于90%(n=9),相对标准偏差为0.65%。本方法检出限为0.01 g/100 g,定量限为0.04 g/100 g。结论本方法前处理方法简单,检测灵敏度高,稳定性好,适用于蛋白粉样品中异麦芽酮糖含量的检测。样品使用50%乙腈水溶解样品能较好地除去部分杂质,同时采用Xbridge HILIC柱,有较好的极性保留,检测时间短,分离效果好,可以避免其他糖成分带来的干扰。 展开更多

关键词 高效液相色谱法 异麦芽酮糖 蛋白粉 亲水作用色谱

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计算机模拟在高效液相色谱中的应用进展

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作者 刘晨阳 刘亚军 +3 位作者 李建涛 李思纯 王锋利 刘江涛 《化学分析计量》 CAS 2024年第12期134-140,共7页

综述了计算机模拟在高效液相色谱中的应用进展。对计算机模拟技术在高效液相色谱(HPLC)中的应用进行了简介,重点阐述了利用计算机模拟技术辅助HPLC方法开发以及分离机理探究的研究进展。在信息化背景下,通过计算机技术辅助HPLC方法开发... 综述了计算机模拟在高效液相色谱中的应用进展。对计算机模拟技术在高效液相色谱(HPLC)中的应用进行了简介,重点阐述了利用计算机模拟技术辅助HPLC方法开发以及分离机理探究的研究进展。在信息化背景下,通过计算机技术辅助HPLC方法开发和分离机理研究,不仅拓宽了复杂化合物的方法开发途径,而且提高了HPLC方法开发和色谱柱结构设计的效率,同时大大减少有机溶剂的损耗,符合绿色化学的发展理念。计算机模拟技术和HPLC技术的有机结合是未来色谱工作者的主要研究方向,该综述可为HPLC分析技术和计算机模拟技术的发展与应用转化提供指导。 展开更多

关键词 高效液相色谱 计算机模拟 色谱方法 作用机理

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基于TiO_(2)/KCC-1固相萃取的亲水作用超高效液相色谱-串联质谱法测定南极磷虾磷脂

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作者 张欣彤 唐光治 +7 位作者 沈清 雷敏 谭舒萍 林碧玲 周瑞淇 梁秀碧 郭莲仙 李林秋 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第15期168-177,共10页

以自制钛基树枝状纤维形SiO_(2)(TiO_(2)/KCC-1)纳米材料作为固相萃取(solid phase extraction,SPE)填料对南极磷虾中的磷脂进行纯化,采用亲水色谱柱结合超高效液相色谱串联质谱法进行磷脂组学分析。选取南极磷虾中最主要的4类磷脂(磷... 以自制钛基树枝状纤维形SiO_(2)(TiO_(2)/KCC-1)纳米材料作为固相萃取(solid phase extraction,SPE)填料对南极磷虾中的磷脂进行纯化,采用亲水色谱柱结合超高效液相色谱串联质谱法进行磷脂组学分析。选取南极磷虾中最主要的4类磷脂(磷脂酰胆碱(phosphatidylcholines,PC)、磷脂酰乙醇胺(phosphatidyl ethanolamine,PE)、磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)、磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol,PI))作为研究对象。结果显示,在最优条件下共检测到291种磷脂,比已报道的方法多近1倍。在这些磷脂中,含有单不饱和脂肪酸链的磷脂占总磷脂含量的54.73%,含有多不饱和脂肪酸链的磷脂占总磷脂含量的26.17%。南极磷虾中共检出PC 75种、PE 120种、PI 54种、PS 42种。其中PC(40:6)(41.63%)、PE(36:0)(39.77%)、PI(38:3)(80.05%)、PS(36:1)(81.62%)在4类磷脂中的含量最高。多元统计分析结果显示,SPE处理前后磷脂种类有明显差异,Ti O_(2)/KCC-1材料对磷脂的富集效果显著,特别是对PC(18:0/18:0)、PE(16:0/18:1)、PI(16:0/18:2)等富集作用明显。PC、PE和PS的检出限均为0.05μg/g,PI的检出限为0.01μg/g,4种磷脂的相对标准偏差在0.89%~5.05%之间,回收率在87%~112%之间。该方法专一性强、提取效率高、灵敏度和精密度高、准确度好,在生物样本中磷脂的提取、纯化及其检测方面具有广阔的应用前景。 展开更多

关键词 钛基树枝状纤维形SiO_(2) 固相萃取 亲水作用超高效液相色谱-串联质谱法 南极磷虾 磷脂

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胍变及脲变α-淀粉酶的研究 Ⅰ.用高效疏水色谱法研究变性机理和复性效率 被引量：7

7

作者 白泉 卫引茂 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期284-287,共4页

用疏水性强弱不同的两种色谱柱对７．０ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍及８．０ｍｏｌ／Ｌ脲变性的α－淀粉酶变体和在疏水色谱介质表面上折叠的中间体进行了分离和复性。通过研究和比较发现，两者的变性机理和形成折叠中间体的个数以及复性效率均不... 用疏水性强弱不同的两种色谱柱对７．０ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍及８．０ｍｏｌ／Ｌ脲变性的α－淀粉酶变体和在疏水色谱介质表面上折叠的中间体进行了分离和复性。通过研究和比较发现，两者的变性机理和形成折叠中间体的个数以及复性效率均不相同。在用疏水性较弱的疏水色谱柱对脲变α－淀粉酶的折叠中间体进行分离时，得到了疏水性接近连续的、数目很多的中间体。用疏水性较强的疏水色谱柱对胍变α－淀粉酶进行复性的效果较好。还研究了柱温变化对其折叠、分离效果和复性效率的影响。 展开更多

关键词 高效疏水色谱 蛋白折叠 Α-淀粉酶 胍变 脲变

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人唾液蛋白的高效疏水色谱分离纯化 被引量：3

8

作者 景娟 侯铁舟 +3 位作者 赵东方 王强 阮梅生 侯建霞 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期82-84,共3页

目的　探讨高效疏水色谱分离、纯化人全唾液蛋白、腮腺液蛋白及颌 /舌下腺液蛋白的最佳分离条件和临床意义。方法　将收集的唾液样品经低温离心 ,过滤 ,冻干 ,低温保存备用。以不同浓度的 (NH4 ) 2 SO4 、KH2 PO4 溶液分别为A、B流动相 ... 目的　探讨高效疏水色谱分离、纯化人全唾液蛋白、腮腺液蛋白及颌 /舌下腺液蛋白的最佳分离条件和临床意义。方法　将收集的唾液样品经低温离心 ,过滤 ,冻干 ,低温保存备用。以不同浓度的 (NH4 ) 2 SO4 、KH2 PO4 溶液分别为A、B流动相 ,梯度分离 ,收集各个组分峰 ,通过生化方法对蛋白进行定性。结果　全唾液蛋白被分离为 12个峰组分 ,腮腺液被分离为 6个峰组分 ,颌 /舌下腺液被分为 8个峰组分。经统计学处理 ,平均出峰时间标准差小 ,个体间重复性好。目前能初步定性的唾液蛋白为富含脯氨酸蛋白、半胱氨酸蛋白、富酪蛋白和富组蛋白及α 淀粉酶。结论　疏水色谱可用于人全唾液蛋白、腮腺液蛋白及颌 展开更多

关键词 高效疏水色谱(hphic) 全唾液 腮腺液 颌/舌下腺液 分离 纯化 唾液蛋白

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蛋白质疏水性测定方法的相关性及适用性 被引量：21

9

作者 曾茂茂 王霄 陈洁 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第15期117-120,共4页

针对蛋白质的疏水性,以食品中常用的蛋白质如大豆分离蛋白(SPI)及其水解物和乳清蛋白为对象,研究不同疏水性测定方法的相关性及适用性。结果表明:ANS荧光探针法对各种蛋白质及其水解物(DH<23)疏水性的测定均比较合适;CPA荧光探针法... 针对蛋白质的疏水性,以食品中常用的蛋白质如大豆分离蛋白(SPI)及其水解物和乳清蛋白为对象,研究不同疏水性测定方法的相关性及适用性。结果表明:ANS荧光探针法对各种蛋白质及其水解物(DH<23)疏水性的测定均比较合适;CPA荧光探针法不适合于测定疏水性较弱的蛋白质;反相高效液相色谱法较适合测定疏水性适中及较强的蛋白质;表面张力法中如采用气液界面参数进行表征,则其线性存在一定的缺陷。 展开更多

关键词 蛋白质 疏水性 荧光探针法 高效液相色谱(HPLC) 表面张力

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重组人干扰素-γ的制备与鉴定 被引量：3

10

作者 吴丹 高栋 +1 位作者 白泉 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期206-211,共6页

用聚乙二醇200疏水相互作用色谱固定相(PEG200-STHIC)分别在色谱柱和色谱饼上完成了一步复性并同时纯化来源于大肠杆菌(E.coli)表达的重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)。为了能使色谱分离方法用于不同来源的rhIFN-γ的纯化,对rhIFN-γ在反相... 用聚乙二醇200疏水相互作用色谱固定相(PEG200-STHIC)分别在色谱柱和色谱饼上完成了一步复性并同时纯化来源于大肠杆菌(E.coli)表达的重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)。为了能使色谱分离方法用于不同来源的rhIFN-γ的纯化,对rhIFN-γ在反相色谱、离子交换色谱、固定化镍离子亲和色谱上的保留行为也进行了研究。色谱柱纯化的rhIFN-γ收集液经排阻色谱除盐和冷冻干燥得到rhIFN-γ干粉。用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对rhIFN-γ干粉进行了测定,rhIFN-γ单体的相对分子质量为17184.0,二聚体的相对分子质量为34204.4。用细胞病变抑制法(CPEI)测定rhIFN-γ干粉的比活性为9.5×108IU/mg。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定rhIFN-γ干粉的纯度高于95%。用色谱柱复性并同时纯化rhIFN-γ的质量回收率达到93.7%,纯度高于95%,比活性为4.3×107IU/mg。结果表明,采用PEG200-STHIC色谱柱复性并同时纯化rhIFN-γ是一种十分高效的方法。 展开更多

关键词 重组人干扰素-γ 蛋白折叠液相色谱法 高效疏水色谱 复性 纯化

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磺酸盐表面活性剂与疏水缔合聚合物作用的热力学 被引量：6

11

作者 梁晓静 孙焕泉 +3 位作者 李振泉 宋新旺 祝仰文 蒋生祥 《油田化学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期226-230,239,共6页

采取物理涂敷的方式将疏水缔合聚合物(HAWP)直接涂敷到硅胶表面制备了HAWP涂敷硅胶固定相。对该固定相的元素分析结果表明HAWP被成功的涂敷到了硅胶表面。分别用蒸馏水、不同矿化度的试液作流动相,测定了不同碳数的单链苯磺酸盐、萘磺... 采取物理涂敷的方式将疏水缔合聚合物(HAWP)直接涂敷到硅胶表面制备了HAWP涂敷硅胶固定相。对该固定相的元素分析结果表明HAWP被成功的涂敷到了硅胶表面。分别用蒸馏水、不同矿化度的试液作流动相,测定了不同碳数的单链苯磺酸盐、萘磺酸盐和双链苯磺酸盐在该固定相上的色谱保留参数,并对不同种类磺酸盐类表面活性剂和固载疏水缔合聚合物间的相互作用进行了热力学研究。结果表明,在蒸馏水溶液中,疏水缔合聚合物处于舒展状态,与磺酸盐表面活性剂之间的相互作用主要表现为疏水效应和位阻效应的竞争;在盐水溶液中,疏水缔合聚合物处于收缩状态,与磺酸盐表面活性剂之间的相互作用主要表现为疏水效应,且盐水的矿化度越高,HAWP收缩越严重,与磺酸盐之间的疏水效应也就越小。 展开更多

关键词 疏水缔合聚合物 磺酸盐表面活性剂 高效液相色谱 固定相 热力学

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混合模式色谱分离材料的研究及其应用进展 被引量：12

12

作者 董雪芳 蔡晓明 +3 位作者 沈爱金 魏杰 郭志谋 梁鑫淼 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期297-302,共6页

近年来混合模式色谱以其独特的分离特性受到人们越来越多的关注。混合模式色谱的种类主要集中在反相/离子交换混合模式色谱(reversed-phase/ion-exchange mixed-mode chromatography,RPLC/IEX),亲水作用/离子交换混合模式色谱(hydrophil... 近年来混合模式色谱以其独特的分离特性受到人们越来越多的关注。混合模式色谱的种类主要集中在反相/离子交换混合模式色谱(reversed-phase/ion-exchange mixed-mode chromatography,RPLC/IEX),亲水作用/离子交换混合模式色谱(hydrophilic interaction/ion-exchange mixed-mode chromatography,HILIC/IEX),反相/亲水作用混合模式色谱(reversed-phase/hydrophilic interaction mixed-mode chromatography,RPLC/HILIC)等混合模式。两种或多种机理混合使用,往往在分离选择性和色谱峰形等方面能得到不同于单一模式操作所得到的效果,分离选择性以及色谱峰形等都能得到极大的改善与提高,这使得混合模式色谱渐渐进入研究者们的视野。混合模式色谱的研究多数集中在色谱填料的设计。混合模式色谱填料的应用主要针对生物样品的分离分析。该文综述了近年来混合模式色谱的研究及其应用进展,并展望了混合模式色谱的发展。 展开更多

关键词 高效液相色谱 混合模式色谱 色谱填料 亲水作用 离子交换混合模式色谱 反相 亲水作用混合模式色谱 反相 离子交换混合模式色谱

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高效液相色谱-串联质谱法检测河豚毒素的方法研究 被引量：10

13

作者 吴佳俊 黄文雯 +3 位作者 肖陈贵 岳振峰 林群声 陈荔 《食品安全质量检测学报》 CAS 2014年第11期3529-3536,共8页

目的建立了一种河豚中河豚毒素(TTX)的高效液相色谱-串联质谱检测方法。方法取适量样品,在0.03 mol/L乙酸溶液中均质后超声提取样品中的河豚毒素。粗提液低速离心,取上清液加入等量甲醇充分混匀后进行高速离心。高速离心后上清液过0.22... 目的建立了一种河豚中河豚毒素(TTX)的高效液相色谱-串联质谱检测方法。方法取适量样品,在0.03 mol/L乙酸溶液中均质后超声提取样品中的河豚毒素。粗提液低速离心,取上清液加入等量甲醇充分混匀后进行高速离心。高速离心后上清液过0.22μm滤膜后待测。采用Waters ACQUITY UPLC BEH Amide(2.1mm×100 mm,1.7μm)色谱分析柱,含0.1%甲酸的Milli Q水及乙腈溶液为流动相,电喷雾正离子模式进行分析。结果河豚毒素在5~1000 ng/m L的范围内线性关系良好,相对回收率为83.3%~93.2%,绝对回收率为47.8%~48.9%,检出限为5μg/kg,定量限为2 0μg/kg。结论 与以往检测TTX的LC-MS/MS方法相比,新建方法操作简单、快速、准确、灵敏并且实验成本低,为河豚中TTX的定量检测提供了有效的实用技术手段。 展开更多

关键词 高效液相色谱-串联质谱法 河豚毒素 河豚 亲水性色谱分析柱

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采用不同疏水相互作用色谱柱从包涵体中快速制备重组人干细胞因子(英文) 被引量：2

14

作者 王骊丽 王超展 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期36-41,共6页

为了提高重组人干细胞因子(rhSCF)的复性效率,改进了高效疏水相互作用色谱(HPHIC)纯化和复性rhSCF的方法。首先将目标蛋白溶解于8.0mol/L脲中,然后将rhSCF包涵体的提取液直接进样到不同规格的HPHIC柱进行纯化和复性。优化了固定相配基... 为了提高重组人干细胞因子(rhSCF)的复性效率,改进了高效疏水相互作用色谱(HPHIC)纯化和复性rhSCF的方法。首先将目标蛋白溶解于8.0mol/L脲中,然后将rhSCF包涵体的提取液直接进样到不同规格的HPHIC柱进行纯化和复性。优化了固定相配基结构和流动相组成等实验条件,结果表明,本方法可以快速地获得高质量回收率和高生物活性的rhSCF,rhSCF在40min内即可完成复性与纯化,目标蛋白的纯度在95.5%以上,质量回收率高于49.6%。通过体积排阻色谱和基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)的分析,确认rh-SCF以单体存在。结果进一步证明HPHIC法是同时复性和纯化重组蛋白的有效工具。 展开更多

关键词 高效疏水相互作用色谱 重组人干细胞因子 包涵体

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蛋白折叠液相色谱法中流动相对重组人干扰素-γ质量回收率的影响 被引量：2

15

作者 吴丹 王超展 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期197-202,共6页

蛋白折叠液相色谱法(PFLC)用于变性蛋白质复性并同时纯化时对流动相组成及其洗脱条件的要求远较通常的液相色谱法高。用端基为PEG-200的高效疏水作用色谱固定相对重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)进行纯化并同时复性,详细研究了流动相组成、... 蛋白折叠液相色谱法(PFLC)用于变性蛋白质复性并同时纯化时对流动相组成及其洗脱条件的要求远较通常的液相色谱法高。用端基为PEG-200的高效疏水作用色谱固定相对重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)进行纯化并同时复性,详细研究了流动相组成、梯度洗脱模式和流速对rhIFN-γ质量回收率和活性的影响。分别以3.0mol/L(NH4)2SO4+0.05mol/L KH2PO4(pH7.0)和0.05mol/L KH2PO4(pH7.0)为流动相A和B,采用35min非线性梯度洗脱时,所得rhIFN-γ的质量回收率最高。 展开更多

关键词 高效疏水作用色谱法 流动相组成 梯度洗脱模式 纯化 复性 质量回收率 重组人干扰素-γ

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高效疏水作用色谱法对还原变性溶菌酶的折叠研究 被引量：3

16

作者 王彦 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期218-221,共4页

首次用高效疏水相互作用色谱(HPHIC)研究了还原变性溶菌酶(Lys)的复性。对还原变性Lys在3种疏水性不同的色谱柱上的复性情况进行了考察,发现还原变性Lys在疏水性最弱的XDM GM1型色谱柱上的复性效率最高,当Lys质量浓度为2 0g/L时,其复性... 首次用高效疏水相互作用色谱(HPHIC)研究了还原变性溶菌酶(Lys)的复性。对还原变性Lys在3种疏水性不同的色谱柱上的复性情况进行了考察,发现还原变性Lys在疏水性最弱的XDM GM1型色谱柱上的复性效率最高,当Lys质量浓度为2 0g/L时,其复性效率可达到94 6%。 展开更多

关键词 高效疏水相互作用色谱 还原变性 溶菌酶 蛋白质 折叠 复性

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高效液相色谱-串联质谱法测定油条中羧甲基赖氨酸 被引量：8

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作者 孙晓华 赖克强 +3 位作者 黄轶群 王婧 吴轶 肖竹青 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期298-301,323,共5页

建立了利用高效液相色谱-串联质谱法（HILIC-HPLC-MS/MS）测定油条中羧甲基赖氨酸（CML）含量的检测方法。样品经硼氢化钠还原、盐酸水解,过混合型阳离子交换小柱萃取净化,样品溶液在HILIC色谱柱中以甲醇-水（均含2mmol/L乙酸铵和0.1%... 建立了利用高效液相色谱-串联质谱法（HILIC-HPLC-MS/MS）测定油条中羧甲基赖氨酸（CML）含量的检测方法。样品经硼氢化钠还原、盐酸水解,过混合型阳离子交换小柱萃取净化,样品溶液在HILIC色谱柱中以甲醇-水（均含2mmol/L乙酸铵和0.1%甲酸）为流动相进行梯度洗脱,CML被保留并与样品基质分离。选用电喷雾正离子（ESI＋）模式电离,多反应监测模式（MRM）进行串联质谱分析。以内标法定量,D4-CML为内标物,分析时间为12min。本方法添加回收率范围89.5%~99.1%,相对标准偏差范围2.1%~2.6%,仪器检出限为1μg/L,定量限为3μg/L。应用该方法测得15种不同来源的油条中CML含量为69.3±8.2~182.2±3.1mg/（kg蛋白质）,5.3±0.5~15.4±0.3mg/（kg样品）。本方法操作简便、快速、灵敏度高、精密度好,为进一步研究食品中CML的产生机理提供了有效的检测方法。 展开更多

关键词 羧甲基赖氨酸 亲水作用色谱 高效液相色谱-串联质谱 油条

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亲水作用色谱柱-高效液相色谱法测定鸡蛋中氨丙啉的残留量 被引量：3

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作者 李丹 吴翠玲 +5 位作者 张聪聪 张玉洁 沈昕 朱馨乐 李倩 王鹤佳 《食品安全质量检测学报》 CAS 2019年第17期5648-5652,共5页

目的建立亲水作用色谱柱-高效液相色谱法检测鸡蛋中氨丙啉残留的分析方法。方法样品加入10 mL5%三氯乙酸水溶液进行提取,离心后取一半上清液过HLB柱净化。色谱柱为Poroshell 120 HILIC-Z (100 mm×3.0 mm, 2.7μm),流动相为5 mmol/... 目的建立亲水作用色谱柱-高效液相色谱法检测鸡蛋中氨丙啉残留的分析方法。方法样品加入10 mL5%三氯乙酸水溶液进行提取,离心后取一半上清液过HLB柱净化。色谱柱为Poroshell 120 HILIC-Z (100 mm×3.0 mm, 2.7μm),流动相为5 mmol/L乙酸铵-0.1%甲酸水溶液和乙腈,等度洗脱, 5 mmol/L乙酸铵-0.1%甲酸水溶液:乙腈=20:80(V:V),流速为0.4 mL/min,进样量为20μL,检测波长267 nm。结果氨丙啉在0.35~10.0μg/mL呈良好的线性关系, r大于0.999。方法的最低定量限为250μg/kg。氨丙啉在250~2000μg/kg的浓度添加水平上,其回收率在85.0%~96.7%,批内、批间的相对标准偏差小于6%。结论该方法具有简便快捷、灵敏度高等特点,适用于鸡蛋中氨丙啉的残留检测。 展开更多

关键词 亲水作用色谱柱-高效液相色谱法 氨丙啉 残留 鸡蛋

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高效疏水作用色谱填料的合成及其在重组人干扰素纯化中的应用 被引量：2

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作者 郭立安 朱宝泉 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1997年第9期1462-1464,共3页

The synthesis of packing of oxygen-ethane as end-ligand bonded to silica andseparation for recombinant human interferons(rhIFN) in high-performance hydrophobicinteraction chromatography has been studied in this paper.... The synthesis of packing of oxygen-ethane as end-ligand bonded to silica andseparation for recombinant human interferons(rhIFN) in high-performance hydrophobicinteraction chromatography has been studied in this paper. It was showed that the packingsynthesized was not only suitable for separating standard proteins, but also for different rhIFNs,i. e., rhIFN-αA expressed in yeast, rhIFN-αA and rh1FN-γ in E. colt. The purify of threerhIFNs purified by one-step HPHIC, which rhIFN-γ expressed in E. colt was recognized as80%, rhIFN-αA expressed in yeast as 70%, and rhIFN-αA expressed in E. colt as 30%, wasmore than that of other chromatography besides affinity chromatography. 展开更多

关键词 高效 疏水作用色谱 干扰素 hphic 填料 人干扰素

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亲水作用色谱法快速筛查食品馅料中违法添加的二氧化硫脲 被引量：4

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作者 汪辉 彭新凯 +3 位作者 夏立新 章建辉 李莎 周探春 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期804-809,共6页

建立了亲水作用色谱快速筛查食品馅料中违法添加的二氧化硫脲的分析方法。采用0．05％醋酸溶液冰水浴超声提取二氧化硫脲，离心后经0．45μm微孔滤膜过滤后上机测试。采用亲水型色谱柱Venusil HILIC（4．6mm×250mm，5μm）分离，... 建立了亲水作用色谱快速筛查食品馅料中违法添加的二氧化硫脲的分析方法。采用0．05％醋酸溶液冰水浴超声提取二氧化硫脲，离心后经0．45μm微孔滤膜过滤后上机测试。采用亲水型色谱柱Venusil HILIC（4．6mm×250mm，5μm）分离，柱温为25℃，以0．02mol／L醋酸铵（冰醋酸调至pH4．5）和乙腈为流动相，梯度洗脱，经二极管阵列检测器分析，检测波长为275nm。二氧化硫脲在6．0～200mg／L范围内线性关系良好，检出限（LOD）和定量下限（LOQ）分别为22．5mg／kg和75．0mg／kg，方法回收率为92．7％～107％，相对标准偏差（RSD，n=6）为0．53％～3．8％。方法快速、准确、重现性好，适用于食品馅料中二氧化硫脲的快速筛查。 展开更多

关键词 亲水作用 高效液相色谱(HPLC) 食品馅料 二氧化硫脲

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