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脂质体LTX介导高效转染山羊胎儿成纤维细胞(gFFCs)条件的优化被引量：3: 1; 作者丰秀静曹少先 +4 位作者孟春花王慧利钱勇王锋成勇《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第3期561-565,共5页; 探讨获得外源基因高效转染山羊胎儿成纤维细胞(gFFCs)的方法,为筛选出体细胞核移植的供核细胞,制备转基因山羊提供技术基础。该研究以绿色荧光蛋白基因(GFP)为报告基因,采用脂质体LipofectaminTM LTX+PLUSTMReagent介导,对细胞接种量、... 展开更多; 关键词山羊胎儿成纤维细胞转染效率脂质体绿色荧光蛋白; 在线阅读下载PDF 职称材料

IGF-1毛囊特异表达载体的构建以及转染绒山羊胎儿成纤维细胞的研究被引量：13: 2; 作者郭旭东尹俊 +3 位作者杨东山毛舒燕宝明涛旭日干《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1460-1467,共8页; 本研究旨在构建绵羊胰岛素样生长因子l(IGF-1)毛囊特异表达载体pCDsR-KI,并转染绒山羊胎儿成纤维细胞,最终获得稳定表达红色荧光并可用于核移植的转基因细胞克隆。通过RT-PCR方法获得IGF-1 cDNA,其与KAP6-1基因启动子片段以及红色荧光... 展开更多; 关键词绒山羊胰岛素样生长因子l 红色荧光蛋白毛囊细胞胎儿成纤维细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

体细胞核移植法获得转人乳铁蛋白基因克隆山羊妊娠的研究被引量：8: 3; 作者刘凤军张玉玲 +4 位作者杨自军陈兴启孙达权王国华张涌《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第29期12720-12723,共4页; [目的]探讨供体细胞类型、移植胚胎发育阶段、数量及部位对山羊转基因克隆效率的影响。[方法]利用体细胞核移植技术将转染人乳铁蛋白基因hLF的山羊胎儿成纤维细胞（GFF）和乳腺上皮细胞（GMGE）移植到MII期去核卵母细胞内，经电融合、... 展开更多; 关键词体细胞核移植转基因人乳铁蛋白基因山羊胎儿成纤维细胞乳腺上皮细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

绿色荧光蛋白基因在山羊胎儿成纤维细胞中的表达被引量：1: 4; 作者楚秋霞王二耀 +8 位作者吴姣陈付英王治方辛晓玲施巧婷冯亚杰李文军魏成斌徐照学《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2013年第10期142-145,共4页; 为建立稳定表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的山羊胎儿成纤维细胞(gFFC)株,采用组织块贴壁法培养gFFC,QIAGEN转染试剂介导转染gFFC,用G418梯度法筛选阳性细胞株。结果显示:培养的gFFC生长形态正常;24孔培养板中细胞汇合度达70%～80%时... 展开更多; 关键词山羊胎儿成纤维细胞转染 EGFP基因表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

陕北白绒山羊Lhx2毛囊表达载体构建及转染成纤维细胞的研究: 5; 作者白丁平陈静 +2 位作者谢璐娜刘敏陈玉林《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2013年第6期633-637,共5页; 以陕北白绒山羊毛囊生长期皮肤组织cDNA为模板,扩增出Lhx2基因的CDS区,成功构建了以KAP6.1为启动子表达Lhx2基因的绿色荧光表达载体pIRES2-KAP-LHX-EGFP.并利用脂质体介导转染绒山羊胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得了稳定转染的细胞系,... 展开更多; 关键词绒山羊 Lhx2 毛囊特异表达胎儿成纤维细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

敲除山羊胎儿成纤维细胞中的抗体重链基因被引量：2: 6; 作者李蓓俞慧清 +3 位作者朱采红谢发展陈建泉成国祥《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第8期899-904,共6页; 在针对大动物的精确基因修饰研究中,基于体细胞的同源重组是唯一可行与有效的方法.其中,沉默基因位点的重组尤为困难.为获得抗体基因功能缺失的山羊用于人源化抗体的研究,通过体细胞同源重组技术,首次成功地获得了抗体基因敲除的山羊胎... 展开更多; 关键词基因敲除体细胞基因打靶山羊胎儿成纤维细胞抗体重链基因(IgH) 沉默基因; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名脂质体LTX介导高效转染山羊胎儿成纤维细胞(gFFCs)条件的优化被引量：3: 1; 作者丰秀静曹少先孟春花王慧利钱勇王锋成勇; 机构江苏省农业科学院畜牧研究所南京农业大学动物科技学院扬州大学兽医学院; 出处《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第3期561-565,共5页; 基金转基因生物新品种培育重大专项(2009ZX08008-009B); 文摘探讨获得外源基因高效转染山羊胎儿成纤维细胞(gFFCs)的方法,为筛选出体细胞核移植的供核细胞,制备转基因山羊提供技术基础。该研究以绿色荧光蛋白基因(GFP)为报告基因,采用脂质体LipofectaminTM LTX+PLUSTMReagent介导,对细胞接种量、质粒DNA用量、脂质体与质粒DNA比例、脂质体-DNA复合物与细胞作用时间进行优化,荧光显微镜下统计转染后24 h的转染效率。结果显示:在24孔培养板中,每孔接种细胞6×104个,24 h后进行转染,质粒DNA每孔0.6μg,脂质体与质粒DNA比例为4.5∶1.0,脂质体-DNA复合物与细胞作用时间为6 h时,转染效率最高,达到81.2%。; 关键词山羊胎儿成纤维细胞转染效率脂质体绿色荧光蛋白; Keywords goat fetal fibroblast cell transfection efficiency liposome green fluorescence protein; 分类号 Q785 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名IGF-1毛囊特异表达载体的构建以及转染绒山羊胎儿成纤维细胞的研究被引量：13: 2; 作者郭旭东尹俊杨东山毛舒燕宝明涛旭日干; 机构内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室内蒙古农业大学生物工程学院中国科学院广州生物医药与健康研究院; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1460-1467,共8页; 基金国家863计划(2002AA242061) 内蒙古自然科学基金(200607010405) 内蒙古自治区高等学校科学研究项目(NJ06055)资助; 文摘本研究旨在构建绵羊胰岛素样生长因子l(IGF-1)毛囊特异表达载体pCDsR-KI,并转染绒山羊胎儿成纤维细胞,最终获得稳定表达红色荧光并可用于核移植的转基因细胞克隆。通过RT-PCR方法获得IGF-1 cDNA,其与KAP6-1基因启动子片段以及红色荧光蛋白表达元件连接构成IGF-1毛囊特异表达载体pCDsR-KI(大小7.4 kb)。以组织块贴附法分离和培养绒山羊胎儿成纤维细胞,外源性表达载体以lipofectamineTM2000介导转染所培养的第2代成纤维细胞,在DMEM/F12+10%FBS、37℃、5%CO2中培养,并添加G418筛选,获得了表达红色荧光蛋白的细胞克隆。经PCR法鉴定证实外源基因已经整合在细胞基因组中。通过分析转基因体细胞的生长曲线和染色体核型证明转基因细胞的生长状态良好、各项参数趋于正常。为下一步通过体细胞核移植技术获得转基因克隆绒山羊准备了核供体细胞。; 关键词绒山羊胰岛素样生长因子l 红色荧光蛋白毛囊细胞胎儿成纤维细胞; Keywords cashmere goat insulin like growth factor 1 red fluorescent protein hair follicle cells fetal fibroblast cells; 分类号 S827 [农业科学—畜牧学] Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名体细胞核移植法获得转人乳铁蛋白基因克隆山羊妊娠的研究被引量：8: 3; 作者刘凤军张玉玲杨自军陈兴启孙达权王国华张涌; 机构河南科技大学动物科技学院西北农林科技大学生物工程研究所; 出处《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第29期12720-12723,共4页; 基金国家高技术研究与发展计划(863)项目(2004AA213072) 河南科技大学博士基金项目资助; 文摘 [目的]探讨供体细胞类型、移植胚胎发育阶段、数量及部位对山羊转基因克隆效率的影响。[方法]利用体细胞核移植技术将转染人乳铁蛋白基因hLF的山羊胎儿成纤维细胞（GFF）和乳腺上皮细胞（GMGE）移植到MII期去核卵母细胞内，经电融合、激活、体外培养后，2-8细胞期克隆胚被移植到同期发情山羊的输卵管内，囊胚被移植到子宫角内。[结果]GFF与GMGE的妊娠率相近（输卵管移植妊娠率分别为26.47%及20.00%）；在GFF，输卵管移植的妊娠率与子宫角内移植妊娠率接近（分别为26.47%及25.00%），输卵管移植胚胎平均数为21.2组的妊娠率显著高于5.93组和9.64组（40.00%及26.67%，21.43%）。[结论]供体细胞类型、移植胚胎的发育阶段及移植部位对山羊转基因克隆效率的影响不大，但对于输卵管移植，受体羊移植胚胎数量对妊娠率有明显的影响。此外，该研究还提示了利用成年羊乳腺上皮细胞制作转基因动物的可行性。; 关键词体细胞核移植转基因人乳铁蛋白基因山羊胎儿成纤维细胞乳腺上皮细胞; Keywords Somatic cell nuclear transfer Transgene Human lactoferrin goat fetal fibroblasts Mammary gland epithelial cells; 分类号 S827 [农业科学—畜牧学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名绿色荧光蛋白基因在山羊胎儿成纤维细胞中的表达被引量：1: 4; 作者楚秋霞王二耀吴姣陈付英王治方辛晓玲施巧婷冯亚杰李文军魏成斌徐照学; 机构河南省农业科学院畜牧兽医研究所河南农业大学牧医工程学院; 出处《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2013年第10期142-145,共4页; 基金河南省农业科学院基础研究专项资金项目国家转基因肉羊新品种培育专项(2013ZX08008003-002); 文摘为建立稳定表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的山羊胎儿成纤维细胞(gFFC)株,采用组织块贴壁法培养gFFC,QIAGEN转染试剂介导转染gFFC,用G418梯度法筛选阳性细胞株。结果显示:培养的gFFC生长形态正常;24孔培养板中细胞汇合度达70%～80%时,每60μL转染液内含DNA量0.4μg和QIAGEN转染试剂3μL,每孔内加入40μL转染液时能获得最佳转染效果,在G418筛选1个月后获得抗性阳性细胞株。表明EGFP基因在gFFC中成功表达。; 关键词山羊胎儿成纤维细胞转染 EGFP基因表达; Keywords goat fetal fibroblasts cell （gffc） transfection EGFP gene expression; 分类号 Q813.11 [生物学—生物工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名陕北白绒山羊Lhx2毛囊表达载体构建及转染成纤维细胞的研究: 5; 作者白丁平陈静谢璐娜刘敏陈玉林; 机构福建农林大学动物科学学院西北农林科技大学动物科技学院; 出处《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2013年第6期633-637,共5页; 基金国家转基因生物新品种培育重大专项课题研究计划(2008ZX08008-002)资助; 文摘以陕北白绒山羊毛囊生长期皮肤组织cDNA为模板,扩增出Lhx2基因的CDS区,成功构建了以KAP6.1为启动子表达Lhx2基因的绿色荧光表达载体pIRES2-KAP-LHX-EGFP.并利用脂质体介导转染绒山羊胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得了稳定转染的细胞系,经PCR检测显示外源基因已整合到细胞基因中.研究结果为进一步开展Lhx2基因对绒山羊毛囊发育的影响和转Lhx2基因绒山羊的生产提供了前期研究基础.; 关键词绒山羊 Lhx2 毛囊特异表达胎儿成纤维细胞; Keywords Cashmere goat Lhx2 follicle-cell-specific expression fetal fibroblast cells; 分类号 S827 [农业科学—畜牧学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名敲除山羊胎儿成纤维细胞中的抗体重链基因被引量：2: 6; 作者李蓓俞慧清朱采红谢发展陈建泉成国祥; 机构同济大学生命科学与技术学院上海转基因研究中心; 出处《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第8期899-904,共6页; 基金上海市科委国际合作计划资助项目(055407033)~~; 文摘在针对大动物的精确基因修饰研究中,基于体细胞的同源重组是唯一可行与有效的方法.其中,沉默基因位点的重组尤为困难.为获得抗体基因功能缺失的山羊用于人源化抗体的研究,通过体细胞同源重组技术,首次成功地获得了抗体基因敲除的山羊胎儿成纤维细胞株,该细胞株可用于体细胞克隆制备抗体基因功能缺失的转基因山羊.以35日龄的山羊胎儿成纤维细胞(GEF88)基因组DNA为模板,扩增山羊抗体重链J-Cμ基因作为同源臂,构建了同基因型的正负筛选打靶载体GTIgH.将此打靶载体经电穿孔的方法转染GEF88细胞,并通过0.8mg/L的嘌呤霉素进行药物筛选,获得了362个抗性细胞克隆,PCR、测序及DNA印迹鉴定结果显示,其中的GT211抗性细胞克隆为中靶细胞,该细胞克隆中的抗体重链基因的一条等位基因已被成功敲除.; 关键词基因敲除体细胞基因打靶山羊胎儿成纤维细胞抗体重链基因(IgH) 沉默基因; Keywords gene knockout, gene targeting in somatic cell, goat fetal fibroblast, immunoglobulin heavy chain gene（IgH）, silent gene; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学] Q75 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	脂质体LTX介导高效转染山羊胎儿成纤维细胞(gFFCs)条件的优化	丰秀静曹少先孟春花王慧利钱勇王锋成勇	《江苏农业学报》 CSCD 北大核心	2011	3	在线阅读下载PDF 职称材料
2	IGF-1毛囊特异表达载体的构建以及转染绒山羊胎儿成纤维细胞的研究	郭旭东尹俊杨东山毛舒燕宝明涛旭日干	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2009	13	在线阅读下载PDF 职称材料
3	体细胞核移植法获得转人乳铁蛋白基因克隆山羊妊娠的研究	刘凤军张玉玲杨自军陈兴启孙达权王国华张涌	《安徽农业科学》 CAS 北大核心	2008	8	在线阅读下载PDF 职称材料
4	绿色荧光蛋白基因在山羊胎儿成纤维细胞中的表达	楚秋霞王二耀吴姣陈付英王治方辛晓玲施巧婷冯亚杰李文军魏成斌徐照学	《河南农业科学》 CSCD 北大核心	2013	1	在线阅读下载PDF 职称材料
5	陕北白绒山羊Lhx2毛囊表达载体构建及转染成纤维细胞的研究	白丁平陈静谢璐娜刘敏陈玉林	《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心	2013	0	在线阅读下载PDF 职称材料
6	敲除山羊胎儿成纤维细胞中的抗体重链基因	李蓓俞慧清朱采红谢发展陈建泉成国祥	《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心	2008	2	在线阅读下载PDF 职称材料