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不同发育阶段绒山羊皮肤中FGF5基因mRNA表达的RT-PCR检测 被引量：12
1
作者 高爱琴 李宁 +1 位作者 李金泉 张燕军 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第1期36-37,共2页
为深入研究成纤维细胞生长因子5对毛囊生长发育的生物学功能提供理论依据。在10月左右和1月左右,即皮肤毛囊处于生长旺期和退行期时采集了12只内蒙古阿尔巴斯白绒山羊皮样,利用TRIZOL试剂盒提取皮肤总RNA(一步法),利用RT-PCR方法检测FGF... 为深入研究成纤维细胞生长因子5对毛囊生长发育的生物学功能提供理论依据。在10月左右和1月左右,即皮肤毛囊处于生长旺期和退行期时采集了12只内蒙古阿尔巴斯白绒山羊皮样,利用TRIZOL试剂盒提取皮肤总RNA(一步法),利用RT-PCR方法检测FGF5基因在绒山羊绒毛周期性生长不同阶段皮肤中的表达分布情况,试验结果表明,FGF5基因mRNA在绒山羊毛囊生长旺期和退行期均有表达,却只得到了一种剪切形式的表达,经测序是长片段,而缺失外显子2的短片段形式没有检测到。 展开更多
关键词 绒山羊皮肤 纤维细胞生长因子5 MRNA表达
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内蒙古白绒山羊FGF5基因克隆及其靶向shRNA表达载体的构建和鉴定 被引量：1
2
作者 鲍文蕾 其布日 +4 位作者 姚睿原 郭志新 朝格图 王彦凤 王志钢 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1793-1798,共6页
旨在构建内蒙古白绒山羊成纤维细胞生长因子Ⅴ(Fibroblast growth factor 5,FGF5)基因shRNA真核表达载体(pRNAT-shRNA)。以内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞总RNA为模板,PCR扩增FGF5基因。设计并合成3条FGF5基因的靶向shRNA序列,分别插入pR... 旨在构建内蒙古白绒山羊成纤维细胞生长因子Ⅴ(Fibroblast growth factor 5,FGF5)基因shRNA真核表达载体(pRNAT-shRNA)。以内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞总RNA为模板,PCR扩增FGF5基因。设计并合成3条FGF5基因的靶向shRNA序列,分别插入pRNAT-U6.1/Neo载体中,构建重组干扰质粒载体pRNATshRNA1、pRNAT-shRNA2和pRNAT-shRNA3,用脂质体LipofectamineTM2000将各重组干扰质粒转染内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞,Real time PCR检测FGF5mRNA表达量。结果表明:克隆获得813bp的目的基因,包含了完整的ORF,编码270个氨基酸。核苷酸序列及推导的氨基酸序列与绵羊FGF5基因(NM_001246263.1)及氨基酸序列同源性均为99%。FGF5基因shRNA重组质粒经测序鉴定证明构建成功。重组表达质粒转染绒山羊胎儿成纤维细胞48h后可见绿色荧光表达;pRNAT-shRNA1组、pRNAT-shRNA2组和pRNAT-shRNA3组FGF5的mRNA表达水平均低于干扰空载体对照组(P<0.01),pRNAT-shRNA2对FGF5的表达具有最佳的抑制效应。综上表明,成功构建pRNAT-U6.1/Neo-FGF5表达载体,为探讨FGF5在毛囊生长中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 内蒙古白绒山羊 成纤维细胞生长因子Ⅴ(fgf5) 短发夹RNA 荧光定量PCR 载体构建
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FGF5在青年羊驼背部和耳部皮肤中的表达和定位 被引量：4
3
作者 刘丹丹 张志宇 +6 位作者 赫晓燕 董彦君 朱芷葳 白瑞 张杰 郝欢庆 邢海权 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期473-479,共7页
羊驼是毛用型经济动物,其耳部和背部的毛发品质和生长周期存在差异.据研究成纤维细胞生长因子5(fibroblast growth factor 5,FGF5)在多种哺乳动物中影响毛发长度.FGF5基因的突变导致小鼠、狗和猫隐性的长发表型,其也参与了家兔绒毛长度... 羊驼是毛用型经济动物,其耳部和背部的毛发品质和生长周期存在差异.据研究成纤维细胞生长因子5(fibroblast growth factor 5,FGF5)在多种哺乳动物中影响毛发长度.FGF5基因的突变导致小鼠、狗和猫隐性的长发表型,其也参与了家兔绒毛长度的变异.本实验旨在研究FGF5在青年羊驼皮肤中的表达和定位,以及在羊驼背部和耳部皮肤中的差异比较,探讨其在羊驼毛发生长发育过程中的作用及其相关机制.实验采用实时荧光定量PCR、Western印迹和免疫组织化学等技术,对FGF5在青年羊驼背部和耳部皮肤中的mRNA、蛋白表达水平和定位进行了研究.实时荧光定量PCR结果显示,FGF5在青年羊驼耳部皮肤组织中相对基因表达量是羊驼背部皮肤组织的2.5265倍(P<0.01);Western印迹结果显示,羊驼皮肤组织粗蛋白提取物中存在与兔抗FGF5多克隆抗体发生免疫阳性反应的蛋白条带,羊驼耳部皮肤平均蛋白表达量显著高于背部;免疫组织化学结果显示,FGF5在羊驼皮肤的毛根鞘,毛母质细胞和毛髓质等部位均表达,根据光密度值得出,该蛋白在羊驼背部和耳部皮肤中的表达差异极显著(P<0.01).试验结果提示FGF5可能抑制了羊驼毛发的生长. 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子5 羊驼 实时荧光定量PCR WESTERN印迹 免疫组织化学
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绵羊胚胎FGF5基因单碱基突变体系的建立 被引量：1
4
作者 蒙亚琦 姚旭东 +5 位作者 任秀美奥 郭延华 唐红 张译元 王立民 周平 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第10期3533-3544,共12页
研究旨在利用单碱基编辑技术定点修饰绵羊(Ovis aries)成纤维细胞生长因子5(fibroblast growth factor 5,FGF5)基因第1外显子以引入终止密码子,获得定点编辑类型的绵羊胚胎,为培育具有长毛性状的绵羊提供试验材料。首先设计合成4个单导... 研究旨在利用单碱基编辑技术定点修饰绵羊(Ovis aries)成纤维细胞生长因子5(fibroblast growth factor 5,FGF5)基因第1外显子以引入终止密码子,获得定点编辑类型的绵羊胚胎,为培育具有长毛性状的绵羊提供试验材料。首先设计合成4个单导向RNA(single guide RNA,sgRNA)寡核苷酸链(sgRNA-T1~sgRNA-T4),构建4组不同的重组表达载体;将构建好的pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin和pCMV-AncBE4max-P2A-GFP质粒以共转染的方法分别转入4组绵羊成纤维细胞,随后用CruiserTM酶对转染的细胞进行活性检测并在胚胎水平进行测序验证。结果显示,sgRNA-T1和sgRNA-T4组细胞的PCR产物可被CruiserTM酶酶切,且测序结果表明都具有靶向效果,编辑效率分别为68.75%和47.37%。利用显微注射技术将不同浓度的AncBE4max mRNA与有效sgRNA混合注射到绵羊孤雌激活胚胎中,并检测胚胎卵裂率、囊胚率和编辑效率,结果显示,胚胎水平的最佳注射浓度组合为AncBE4max(ng/μL)∶sgRNA(ng/μL)=100∶50,从该浓度组中随机挑选的单枚胚胎测序结果显示,引入终止密码子的编辑效率为80%。而sgRNA-T1在不同浓度组合的注射胚胎中均未检测到编辑。本研究针对FGF5基因的第1外显子,通过在成纤维细胞转染表达载体,成功筛选到高效靶向绵羊FGF5基因的2个sgRNA(T1、T4);通过显微注射绵羊孤雌激活胚胎,成功在胚胎上实现FGF5基因第1外显子打靶位点C→T的转变,为后期FGF5基因定点编辑羊的生产奠定基础。 展开更多
关键词 绵羊 成纤维细胞生长因子5(fgf5) 单碱基编辑
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IGFBP5增龄性表达促进胸腺上皮细胞线粒体自噬和凋亡 被引量：2
5
作者 陈禧禅 曾继涛 +2 位作者 瞿思铭 高维武 吴玉章 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期567-577,共11页
目的 探讨在胸腺上皮细胞中随年龄增长而上调表达的胰岛素样生长因子结合蛋白5(Insulin Like Growth Factor Binding Protein 5,IGFBP5)在胸腺衰退中的作用和机制。方法 使用基因差异表达分析方法从已发表人胸腺基质细胞单细胞数据集(GS... 目的 探讨在胸腺上皮细胞中随年龄增长而上调表达的胰岛素样生长因子结合蛋白5(Insulin Like Growth Factor Binding Protein 5,IGFBP5)在胸腺衰退中的作用和机制。方法 使用基因差异表达分析方法从已发表人胸腺基质细胞单细胞数据集(GSE147520)中筛选出随年龄增长表达上调程度最高的基因IGFBP5;Mfuzz趋势分析筛选出与IGFBP5具有相同表达趋势的基因;富集分析注释与IGFBP5共趋势基因集;使用蛋白序列比对工具研究IGFBP5蛋白氨基酸序列的人鼠同源性;使用NIH基因数据库研究IGFBP5在人鼠器官组织中表达模式;免疫组化研究IGFBP5在不同年龄C57/BL6小鼠胸腺中的表达模式;构建IGFBP5过表达胸腺上皮细胞系;透射电镜观察IGFBP5过表达胸腺上皮细胞系中线粒体的形态变化;免疫蛋白印记(Western Blot, WB)对线粒体及全细胞组分线粒体自噬标志物微管相关蛋白1B(Microtubule Associated Protein 1 Light Chain 3 Beta, LC3B)、PTEN诱导激酶1(Pten Induced Kinase 1, PINK1)、Parkin泛素蛋白连接酶(Parkin Rbr E3 Ubiquitin Protein Ligase, Parkin)、BCL2互作蛋白3(BCL2 Interacting Protein 3, BNIP3),细胞凋亡标记物活化型胱天蛋白酶3 (Cleaved-Caspase3)表达水平进行检测;细胞双重免疫荧光对线粒体标志物与线粒体探针(MitoTracker)胞内定位进行检测;使用流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)对细胞系凋亡水平进行检测。结果 IGFBP5是人胸腺上皮细胞中随年龄增长表达上调程度最大的基因,与其具有共同表达模式的基因集显著富集在线粒体相关通路上。人与小鼠IGFBP5蛋白序列高度保守,其在人、小鼠多器官组织中表达模式相近,且IGFBP5在人、小鼠胸腺中均呈现中等表达水平;此外,IGFBP5在人和小鼠胸腺上皮中随年龄增长表达升高;在IGFBP5过表达小鼠胸腺上皮细胞系中,透射电镜结果表明线粒体自噬体增多,WB结果表明线粒体组分和细胞组分LC3B、PINK1、Parkin蛋白表达水平上调,BNIP3无明显差异;细胞双重免疫荧光结果表明LC3B、PINK1、Parkin蛋白胞质表达增多且与线粒体共定位;WB表明IGFBP5过表达鼠胸腺上皮细胞系中细胞凋亡标志物Cleaved-Caspase3水平升高;FCM表明IGFBP5过表达细胞系凋亡细胞比例增加。结论 人、小鼠胸腺上皮细胞中随年龄增长而表达升高的IGFBP5促进线粒体自噬和细胞凋亡,从而导致胸腺上皮细胞减少和胸腺功能衰退,因此,IGFBP5可成为干预胸腺衰老、重构人体免疫力的潜在靶标。 展开更多
关键词 胸腺上皮细胞 胰岛素样生长因子结合蛋白5 线粒体自噬 凋亡 胸腺衰退
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生长分化因子5与代谢性疾病 被引量：1
6
作者 王天幕 任无竞 田振军 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2024年第3期564-574,共11页
生长分化因子5(growth/differentiation factor-5,GDF-5)属于转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)家族,在骨、软骨、心脏、大脑、肾脏、骨骼肌和肌腱、肝脏以及脂肪等多个器官组织中表达。GDF-5与其受体BMPR-I/BMPR-I... 生长分化因子5(growth/differentiation factor-5,GDF-5)属于转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)家族,在骨、软骨、心脏、大脑、肾脏、骨骼肌和肌腱、肝脏以及脂肪等多个器官组织中表达。GDF-5与其受体BMPR-I/BMPR-II结合,激活Smad1/5/8、PI3K/Akt、p38-MAPK等信号,发挥促进细胞增殖分化、减少氧化应激损伤、细胞凋亡和组织纤维化等生物学功能。目前针对GDF-5的研究多聚焦在骨、软骨与肌腱的生长和修复等方面,而在其他器官中的生物学作用鲜有报道。因此,本文通过梳理和总结近年来GDF-5与代谢性疾病的研究进展,为GDF-5在改善代谢性疾病防治提供新的见解和理论依据。 展开更多
关键词 代谢性疾病 生长分化因子5 BMP-14 炎症 氧化应激
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小陷胸汤对5-氟尿嘧啶介导的小鼠肠黏膜损伤的保护作用研究 被引量：1
7
作者 秦美洁 叶倩倩 +1 位作者 丁芮 黄金玲 《海南医学院学报》 CAS 北大核心 2024年第19期1441-1450,共10页
目的:探究小陷胸汤对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)介导的小鼠肠黏膜损伤的保护作用。方法:将100只SPF级雄性ICR小鼠随机分为正常对照组、模型组、小陷胸汤低、中、高剂量(8.3、16.6、33.2g/kg)组。除正常对照组外,其余各组采用5-FU(... 目的:探究小陷胸汤对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)介导的小鼠肠黏膜损伤的保护作用。方法:将100只SPF级雄性ICR小鼠随机分为正常对照组、模型组、小陷胸汤低、中、高剂量(8.3、16.6、33.2g/kg)组。除正常对照组外,其余各组采用5-FU(30 mg/kg,ip,7 d)诱导肠黏膜损伤小鼠模型。小陷胸汤给药组造模同时按照设定剂量以10 mL·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,正常对照组和模型组给予等量蒸馏水,连续处理7 d。采用苏木素-伊红染色法(HE)观察小肠的病理形态学变化并测定肠绒毛高度/隐窝深度(VH:CD)比值;采用阿利新蓝染色法(AB)测定小肠黏膜杯状细胞数量;采用分光光度法检测血清内毒素(ET)、D-乳酸(D-LA)及小肠组织二胺氧化酶(DAO)水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测小肠组织IL-6、信号转导和转录激活因子3(STAT3)和表皮生长因子受体(EGFR)mRNA表达;采用Western blot法检测小肠组织IL-6、STAT3及EGFR蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型组小鼠体质量显著降低,腹泻评分、粪便质量、粪便含水量及小肠推进率明显升高(P<0.01),小肠黏膜VH:CD比值和杯状细胞数量降低(P<0.01),血清ET和D-LA水平升高,小肠组织DAO水平降低(P<0.05),脾指数和胸腺指数降低(P<0.01),血清IL-6、TNF-α水平升高(P<0.05),小肠组织IL-6、STAT3 mRNA表达升高,EGFR mRNA表达降低(P<0.01);小肠组织IL-6、STAT3蛋白表达升高,EGFR蛋白表达降低(P<0.01)。与模型组相比,小陷胸汤能够明显改善上述指标(P<0.05)。结论:小陷胸汤对5-FU介导的肠黏膜损伤具有保护作用,其作用机制可能与小陷胸汤激活EGFR信号转导,下调IL-6/STAT3信号通路,减轻5-FU诱导的肠黏膜炎症反应,改善免疫功能有关。 展开更多
关键词 小陷胸汤 5-氟尿嘧啶(5-FU) 肠黏膜损伤 表皮生长因子受体(EGFR) 白细胞介素6(IL-6)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路
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TALENs编辑绵羊成纤维细胞FGF 5基因 被引量：3
8
作者 皮文辉 周平 +5 位作者 王立民 唐红 郭延华 张译元 刘守仁 王新华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期704-710,共7页
类转录激活因子效应物(Transcription activator-like effector,TALE)已经成为基因组编辑和基因转录调控的有效工具,在多个物种的基因组中实现特定位点的删除、插入和突变。针对绵羊成纤维细胞生长因子5(Fibroblast growth factor 5,FG... 类转录激活因子效应物(Transcription activator-like effector,TALE)已经成为基因组编辑和基因转录调控的有效工具,在多个物种的基因组中实现特定位点的删除、插入和突变。针对绵羊成纤维细胞生长因子5(Fibroblast growth factor 5,FGF5)基因起始密码子ATG位点,设计构建TALENs(Transcription activator-like effector nucleases,TALENs)。通过比较分析正常培养和基因组编辑处理的绵羊成纤维细胞,电转TALENs组合,Surveyor突变检测,筛选获得1对有效的TALENs。有限稀释细胞传代培养,PCR扩增FGF5基因片段,经PAGE检测筛选发生突变的细胞,测序确认FGF5基因ATG位点产生缺失突变细胞。获得具有编辑活性的TALENs,为该基因的定点编辑奠定基础。Surveyor检测和测序结果表明,在绵羊FGF5基因ATG起始密码子上游104碱基位点,存在1个G/C单核苷酸多态。 展开更多
关键词 类转录激活因子效应物核酸酶 基因组编辑 成纤维细胞生长因子5基因 单核苷酸多态 绵羊
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二次生长法中ZSM-5型沸石分子筛膜合成规律的研究 被引量：6
9
作者 成岳 王连军 +2 位作者 李健生 孙秀云 刘晓东 《膜科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期39-43,共5页
采用正交试验法,考察了ZSM-5沸石膜合成过程中,制膜液碱量、膜板剂的用量、晶种的引入方式等对成膜的影响;确定了采用浸涂法引入晶种,晶化液摩尔组成为n(Na2O)∶n(Al2O3)∶n(SiO2)∶n(TPABr)∶n(H2O)=15∶1∶100∶20∶10 000,在180℃,晶... 采用正交试验法,考察了ZSM-5沸石膜合成过程中,制膜液碱量、膜板剂的用量、晶种的引入方式等对成膜的影响;确定了采用浸涂法引入晶种,晶化液摩尔组成为n(Na2O)∶n(Al2O3)∶n(SiO2)∶n(TPABr)∶n(H2O)=15∶1∶100∶20∶10 000,在180℃,晶化48 h,可在多孔α-Al2O3陶瓷管支撑体外表面合成了ZSM-5沸石分子筛膜.用XRD,SEM和单组分气体的渗透对膜进行了表征.结果表明,所合成的沸石膜是典型的ZSM-5沸石膜,膜表面晶粒生长发育较完整,排列紧密,无较大裂缺;H2,N2在膜内的渗透率分别为4.51×10-6,1.34×10-6mol/(m2.s.Pa);膜的H2/N2理想分离因数为3.37. 展开更多
关键词 ZSM-5沸石膜 二次生长法 渗透率 分离因数
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不同病理类型结直肠息肉中5-LOX与PlGF的表达及意义 被引量：5
10
作者 方海明 杨姣 +2 位作者 李芳群 程启闰 章礼久 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第11期1638-1641,共4页
目的探讨5-脂氧合酶(5-LOX)、胎盘生长因子(PlGF)及血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)在不同病理类型结直肠息肉组织中的表达及意义。方法采用免疫组化法检测30例增生性息肉、30例结直肠腺瘤(15例高级别上皮内瘤变、15例低级别上皮... 目的探讨5-脂氧合酶(5-LOX)、胎盘生长因子(PlGF)及血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)在不同病理类型结直肠息肉组织中的表达及意义。方法采用免疫组化法检测30例增生性息肉、30例结直肠腺瘤(15例高级别上皮内瘤变、15例低级别上皮内瘤变)、30例结肠癌及15例正常结肠黏膜中5-LOX、PlGF的表达情况,并采用ELISA法检测外周血SOD和MDA活性。结果与正常结肠黏膜组织比较,5-LOX、PlGF在增生性息肉、低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变及结直肠癌中表达均显著增加,呈递增趋势(P<0.05);与增生性息肉比较,低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变及结直肠癌之间差异有统计学意义。血清SOD活性显著降低,呈递减趋势(P<0.05),而MDA活性显著增强,呈递增趋势(P<0.05)。结论结直肠腺瘤性息肉向腺癌恶性转化过程中5-LOX、PlGF表达水平增加,呈递增趋势,可能是早期分子事件。 展开更多
关键词 结直肠息肉 5-脂氧合酶 胎盘生长因子
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IGF-Ⅰ、IGFBP-4和IGFBP-5在特发性肺纤维化患者支气管肺泡灌洗液和血清中的表达及意义 被引量：8
11
作者 吴倩 孔灵菲 +1 位作者 李振华 康健 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期255-259,263,共6页
目的检测特发性肺纤维化(IPF)患者支气管肺泡灌洗液(BALF)和血清中胰岛素样生长因子1(IGF-Ⅰ)、胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)、胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP-5)的表达水平,探讨其在IPF患者的诊治及病情评估方面的临床意义。... 目的检测特发性肺纤维化(IPF)患者支气管肺泡灌洗液(BALF)和血清中胰岛素样生长因子1(IGF-Ⅰ)、胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)、胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP-5)的表达水平,探讨其在IPF患者的诊治及病情评估方面的临床意义。方法选择2012年2月至2013年3月就诊于中国医科大学附属第一医院的IPF患者22例作为IPF组,另选择Ⅰ期肺结节病患者16例作为对照非纤维化组,检测并比较2组BALF和血清中IGF-Ⅰ、IGFBP-4、IGFBP-5表达水平的差异,分析三者的浓度与细胞学计数、肺功能、血气分析、肺HRCT评分的相关性。结果 IPF组患者BALF中IGF-Ⅰ、IGFBP-4水平高于对照组,血清中IGFBP-5水平高于对照组。IPF组BALF和血清中的IGFBP-5水平均与巨噬细胞百分比呈正相关。IPF组血清中IGF-Ⅰ水平与用力肺活量(FVC%)、一氧化碳弥散量(DLCO%)呈正相关,BALF中IGFBP-4水平与第一秒用力呼气容积(FEV1%)、FVC%呈负相关,血清中IGFBP-4水平与FEV1%呈正相关。IPF组BALF和血清中IGF-Ⅰ、IGFBP-4、IGFBP-5水平与氧分压(Pa O2)无相关性。IPF组BALF中IGF-Ⅰ、IGFBP-4水平与肺高分辨率CT(HRCT)评分呈正相关。结论 IPF患者体内IGF-Ⅰ、IGFBP-4、IGFBP-5表达水平升高,这3项指标可作为IPF患者病情监测、疗效判断乃至靶向治疗的客观指标。 展开更多
关键词 特发性肺纤维化 支气管肺泡灌洗液 胰岛素样生长因子 胰岛素样生长因子结合蛋白 胰岛素样生长因子结合蛋白5
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缺氧对5-氟尿嘧啶干预的胃癌细胞中HIF-1α/MDR1/VEGF表达的影响 被引量：7
12
作者 王璐 邢玮 +3 位作者 齐进 陆泳言 向林彪 周雅丽 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1629-1636,共8页
目的:5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)是胃癌的经典化学治疗药物,但是越来越严重的耐药性限制了其临床应用。本研究旨在探索缺氧微环境是否影响胃癌对5-FU的耐药性,讨论缺氧环境下与耐药性直接相关的基因和蛋白质的变化情况。方法:分... 目的:5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)是胃癌的经典化学治疗药物,但是越来越严重的耐药性限制了其临床应用。本研究旨在探索缺氧微环境是否影响胃癌对5-FU的耐药性,讨论缺氧环境下与耐药性直接相关的基因和蛋白质的变化情况。方法:分别在缺氧(缺氧组)及常氧(常氧组)环境下用5-FU干预胃癌细胞。应用流式细胞术Annexin V/PI双染法检测凋亡,实时反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription-polymerase chain reaction,RTPCR)和蛋白质印迹法检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α),与5-FU耐药相关的多药耐药(multidrug resistance,MDR1)基因、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)以及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达水平,分析缺氧对5-FU治疗胃癌效果的影响。结果:与常氧组相比,缺氧组的胃癌细胞接受5-FU干预后凋亡明显减少,凋亡启动蛋白caspase 8的表达下降。与常氧组相比,缺氧组HIF-1αmRNA表达水平显著升高(P<0.05),MDR1、P-gp、VEGF的蛋白质表达水平均显著升高(均P<0.05)。MDR1、P-gp、VEGF的表达水平升高与HIF-1α的表达趋势相同。结论:缺氧是导致胃癌细胞对5-FU耐药性的直接因素。为了克服胃癌对5-FU的耐药性,改善胃癌局部缺氧微环境可能是一个新思路。 展开更多
关键词 5-氟尿嘧啶 耐药性 缺氧 P-糖蛋白 血管内皮生长因子
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生长分化因子5单核苷酸多态性与大骨节病的相关性 被引量：7
13
作者 高晓云 周玉玲 +4 位作者 于敏 屠千千 武林楠 赖江华 郭雄 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期501-504,共4页
目的探讨生长分化因子5(GDF5)基因3个单核苷酸多态性(SNP)位点多态性与大骨节病的关系。方法用限制性核酸内切酶酶切方法对103例大骨节病患者和91例健康人的GDF5基因上的3个SNP位点进行基因分型,计算相应人群中3个位点的基因型频率,比... 目的探讨生长分化因子5(GDF5)基因3个单核苷酸多态性(SNP)位点多态性与大骨节病的关系。方法用限制性核酸内切酶酶切方法对103例大骨节病患者和91例健康人的GDF5基因上的3个SNP位点进行基因分型,计算相应人群中3个位点的基因型频率,比较各组间基因型频率的差异。结果单倍型重构分析显示单倍型AT、TGC和TAT在大骨节病患者和健康人群之间存在差异,但3个位点单位点关联分析未显示与大骨节病具有相关性。结论单倍型TGC与大骨节病具有相关性。 展开更多
关键词 单核苷酸多态性 大骨节病 生长分化因子5
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全反式维甲酸联合5-氟尿嘧啶对Eca109细胞增殖、迁移和VEGF表达的影响 被引量：6
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作者 李珊珊 罗忠民 +4 位作者 崔会娟 王珍珍 彭湃 李娜 路太英 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2015年第1期1-5,共5页
目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)、5-氟尿嘧啶(5-FU)单独或联合作用对Eca109细胞增殖、迁移和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:将常规传代的Eca109细胞分为4组:ATRA组、5-FU组、ATRA+5-FU组和对照组,采用MTT法检测各组细胞的增殖情... 目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)、5-氟尿嘧啶(5-FU)单独或联合作用对Eca109细胞增殖、迁移和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:将常规传代的Eca109细胞分为4组:ATRA组、5-FU组、ATRA+5-FU组和对照组,采用MTT法检测各组细胞的增殖情况,通过划痕实验测定各组细胞的迁移能力,采用RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测各组细胞VEGF mRNA和蛋白的表达情况。结果:作用24、48和72 h后,ATRA+5-FU组的细胞生长抑制率均高于其他2组(F=23.432、13.605、73.369,P均<0.05);作用24 h后,ATRA+5-FU组的迁移率均低于其他3组(P均<0.001);作用48 h后,ATRA+5-FU组细胞VEGF mRNA和蛋白的相对表达量均低于其他3组(P均<0.05)。结论:ATRA、5-FU均能抑制食管癌细胞的增殖,且联合用药效果更为显著,可能与其抑制肿瘤血管生成有关。 展开更多
关键词 全反式维甲酸 5-氟尿嘧啶 ECA109细胞 肿瘤血管生成 血管内皮生长因子
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醒神启闭针刺法对脑卒中后抑郁的疗效及5-HT、NGF、IL-23的影响 被引量：42
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作者 王波 王天磊 +2 位作者 谭春凤 黄建福 徐琼 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2020年第12期84-86,共3页
目的分析醒神启闭针刺法对脑卒中后抑郁的疗效及患者5-羟色胺(5-HT)、神经生长因子(NGF)、白细胞介素-23(IL-23)的影响。方法选取医院2017年7月—2018年12月收治的脑卒中后抑郁患者90例,按照入院顺序分为两组。对照组给予度洛西汀治疗,... 目的分析醒神启闭针刺法对脑卒中后抑郁的疗效及患者5-羟色胺(5-HT)、神经生长因子(NGF)、白细胞介素-23(IL-23)的影响。方法选取医院2017年7月—2018年12月收治的脑卒中后抑郁患者90例,按照入院顺序分为两组。对照组给予度洛西汀治疗,观察组给予醒神启闭针刺法治疗,分析两组患者治疗后的临床效果。结果两组治疗前汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分、美国国立卫生院脑卒中量表(NIHSS)评分组间比较,差异不具有统计学意义(P>0.05)。观察组治疗后HAMD评分(12.04±2.16)分、NIHSS评分(6.12±1.21)分低于对照组(P<0.05)。两组治疗前神经细胞因子、IL-23、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)水平组间比较,差异不具有统计学意义(P>0.05)。观察组治疗后5-HT(46.85±6.02)ng/mL、脑源性神经营养因子(BDNF)(42.98±5.97)ng/mL、NGF(12.77±1.30)ng/L水平高于对照组,IL-23(69.58±9.53)ng/L、IL-1β(18.15±2.14)ng/L、IL-2(42.63±8.15)pg/mL水平低于对照组(P<0.05)。结论醒神启闭针刺法可改善脑卒中后抑郁患者神经功能,减轻抑郁症状,降低炎症反应,提高神经细胞因子的表达。 展开更多
关键词 醒神启闭针刺法 脑卒中后抑郁 5-羟色胺 神经生长因子 白细胞介素-23
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生长分化因子5对血管内皮细胞增殖和运动的影响 被引量：3
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作者 李博 吴慧颖 +1 位作者 朴虎林 柳克祥 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1062-1064,1177,共4页
目的:探讨生长分化因子5(GDF5)对心肌梗死后血管修复的作用,阐明其修复的机制。方法:体外培养血管内皮细胞,分别以不同浓度(10、50及100μg·L-1)的GDF5作用于细胞,同时设正常对照组,CCK8法和立体培养法检测血管内皮细胞的增殖抑制... 目的:探讨生长分化因子5(GDF5)对心肌梗死后血管修复的作用,阐明其修复的机制。方法:体外培养血管内皮细胞,分别以不同浓度(10、50及100μg·L-1)的GDF5作用于细胞,同时设正常对照组,CCK8法和立体培养法检测血管内皮细胞的增殖抑制率和细胞迁移。结果:CCK8实验法,GDF5对血管内皮细胞的增殖有抑制作用,随着GDF5剂量的增加,抑制率也相应地增加达2倍以上,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。立体培养法检测,GDF5对血管内皮细胞的运动有明显促进作用,随着GDF5剂量的增加,细胞运动明显增快,不同浓度GDF5组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:GDF5对血管内皮细胞增殖起到抑制作用,对血管内皮细胞的迁移起到促进作用。 展开更多
关键词 生长分化因子5 血管内皮细胞 细胞增殖 细胞迁移
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康复新液对转化生长因子-β1诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5纤维化模型的干预作用 被引量：3
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作者 徐秋颖 刘伟伟 +2 位作者 王宝家 马秀英 高永翔 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期432-437,共6页
为探讨康复新液对人胚肺成纤维细胞纤维化模型的干预作用,以转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5构建细胞纤维化模型,并运用CCK-8(cell counting kit-8)法检测康复新液对MRC-5细胞的毒性.以测... 为探讨康复新液对人胚肺成纤维细胞纤维化模型的干预作用,以转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5构建细胞纤维化模型,并运用CCK-8(cell counting kit-8)法检测康复新液对MRC-5细胞的毒性.以测得的最高不致死给药浓度(80倍稀释)的康复新液干预TGF-β1诱导的MRC-5细胞模型,进而通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹(WB)检测细胞纤维化指标的mRNA及蛋白质表达水平变化.结果显示:10ng/mL TGF-β1可成功诱导MRC-5细胞发生纤维化,且细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、层黏连蛋白(laminin,LN)、纤维连结蛋白(fibronectin,FN)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ)的mRNA表达水平均显著升高;以80倍稀释的康复新液为最高不致死给药浓度,对MRC-5细胞纤维化模型进行干预,上述纤维化指标的mRNA及蛋白质表达水平均出现显著下降,与地塞米松(Dexamethasone,DXM)的干预效果相当.综上,康复新液可改善由TGF-β1诱导MRC-5细胞纤维化的表型,有望被应用于肺纤维化的治疗. 展开更多
关键词 康复新液 肺纤维化 转化生长因子-Β1 MRC-5细胞
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磷酸二酯酶5抑制剂促进大鼠脑缺血再灌注后神经及血管再生的研究 被引量：5
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作者 范秉林 周东 +1 位作者 田林郁 甘靖 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2012年第12期1312-1315,共4页
目的探讨磷酸二酯酶5抑制剂西地那非对大鼠脑缺血再灌注后海马神经前体细胞标记物微管相关蛋白增殖及血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响。方法雄性SD大鼠75只,随机分为假手术组5只,局灶性脑缺血再灌注组(单纯缺血组)35只及局灶性脑... 目的探讨磷酸二酯酶5抑制剂西地那非对大鼠脑缺血再灌注后海马神经前体细胞标记物微管相关蛋白增殖及血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响。方法雄性SD大鼠75只,随机分为假手术组5只,局灶性脑缺血再灌注组(单纯缺血组)35只及局灶性脑缺血+西地那非组(西地那非组)35只。西地那非组在大脑中动脉局灶缺血模型再灌注后2 h喂服西地那非3 d。单纯缺血组和西地那非组在术后2 h、1 d、3 d、5 d、7 d、10 d和14 d检测神经功能缺损评分。免疫组织化学方法检测各时间点海马神经前体细胞标记物微管相关蛋白阳性细胞及梗死灶周围VEGF的吸光度值。结果假手术组几乎无微管相关蛋白表达。与单纯缺血组比较,西地那非组7 d、10 d、14 d神经功能缺损评分明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);西地那非组5 d、7 d、10 d、14 d微管相关蛋白明显高于单纯缺血组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);西地那非组3 d、5 d、7 d、10 d VEGF明显高于单纯缺血组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论西地那非能够促进大鼠脑缺血再灌注后急性期神经及血管再生,改善神经功能。 展开更多
关键词 环核苷酸磷酸二酯酶类 5型 磷酸二酯酶抑制剂 脑缺血 血管内皮生长因子类 再灌注 海马
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神经生长因子和白血病抑制因子上调哮喘大鼠脾淋巴细胞IL-4、IL-5的表达 被引量：3
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作者 汤彦 林敏娟 邹威凤 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期865-870,共6页
目的:探讨神经生长因子(NGF)、白血病抑制因子(LIF)对哮喘大鼠脾淋巴细胞IL-4、IL-5表达的影响。方法:16只大鼠随机分为对照组(A组)8只,哮喘组(B组)8只,采用卵蛋白和氢氧化铝腹腔内注射致敏,2周后给予1%卵蛋白雾化吸入激发哮喘。(1%卵蛋... 目的:探讨神经生长因子(NGF)、白血病抑制因子(LIF)对哮喘大鼠脾淋巴细胞IL-4、IL-5表达的影响。方法:16只大鼠随机分为对照组(A组)8只,哮喘组(B组)8只,采用卵蛋白和氢氧化铝腹腔内注射致敏,2周后给予1%卵蛋白雾化吸入激发哮喘。(1%卵蛋白/生理盐水)雾化吸入2周后,24h内体外分离培养对照组大鼠和哮喘组大鼠脾淋巴细胞;通过RT-PCR半定量法和ELISA法测定2组大鼠脾淋巴细胞表达Th2细胞因子IL-4、IL-5mRNA转录水平和分泌蛋白的基础水平,观察外源性NGF和LIF体外干预后淋巴细胞IL-4和IL-5表达随干预浓度的变化。结果:(1)哮喘组IL-4、IL-5mRNA表达及蛋白水平明显高于对照组(P<0.05);(2)在外源性不同浓度的NGF、LIF干预下,IL-4、IL-5mRNA和蛋白表达量分别比前一梯度低浓度干预组有显著升高(P<0.05),NGF、LIF上调IL-4、IL-5mRNA和蛋白表达呈浓度依赖性。结论:在哮喘大鼠中,NGF、LIF可能通过上调Th2类细胞因子IL-4、IL-5mRNA表达和蛋白分泌,参与促进和放大Th2类细胞因子免疫失衡效应。 展开更多
关键词 哮喘 神经生长因子 白血病抑制因子 白细胞介素4 白细胞介素5
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5-氮杂-2-脱氧胞苷对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的影响 被引量：3
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作者 杨娥 张恒术 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期244-247,共4页
目的:探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷对人瘢痕疙瘩成纤维细胞生长的抑制作用及对人瘢痕疙瘩成纤维细胞相关因子的影响。方法:收集人瘢痕疙瘩以及周围正常皮肤标本原代培养成纤维细胞,分为瘢痕疙瘩成纤维细胞5-氮杂-2-脱氧胞苷药... 目的:探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷对人瘢痕疙瘩成纤维细胞生长的抑制作用及对人瘢痕疙瘩成纤维细胞相关因子的影响。方法:收集人瘢痕疙瘩以及周围正常皮肤标本原代培养成纤维细胞,分为瘢痕疙瘩成纤维细胞5-氮杂-2-脱氧胞苷药物干预组、瘢痕疙瘩成纤维细胞对照组、正常皮肤成纤维细胞5-氮杂-2-脱氧胞苷药物干预组及正常皮肤成纤维细胞对照组4组,用RT-PCR检测各组转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)mRNA、Smad7mRNA的表达,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测各组细胞的周期及凋亡。结果:人瘢痕疙瘩成纤维细胞较正常皮肤成纤维细胞TGF-β1mRNA表达增高(P=0.001),Smad7mRNA表达降低(P=0.001),细胞周期停滞于G0/G1期(P=0.035)及细胞凋亡(P=0.006)比例降低;5-氮杂-2-脱氧胞苷干预人瘢痕疙瘩成纤维细胞后,TGF-β1mRNA表达降低(P=0.003),Smad7mRNA回升(P=0.000),FCM显示瘢痕疙瘩成纤维细胞停滞于G0/G1期比例增加(P=0.000)并且细胞凋亡率增加(P=0.047),而正常皮肤成纤维细胞组无明显变化(P均>0.05)。结论:甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷可影响瘢痕疙瘩形成相关因子的表达并且可抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及促进其凋亡,而对正常皮肤的成纤维细胞无明显影响。瘢痕疙瘩的发病可能与相关基因甲基化有关,5-氮杂-2-脱氧胞苷可能成为瘢痕疙瘩治疗的新选择。 展开更多
关键词 瘢痕疙瘩 成纤维细胞 5-氮杂-2-脱氧胞苷 转化生长因子-Β1 SMAD7
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