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应用DNA测序技术检测血友病B患者FⅨ基因突变 被引量:12
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作者 张媛 杨林花 +4 位作者 陆晔玲 丁秋兰 王学锋 刘秀娥 侯丽虹 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第2期476-478,共3页
为了研究3名中国汉族非亲缘系血友病B患者凝血因子Ⅸ(FⅨ)基因突变的类型,常规检测患者血浆APTT及FⅨ∶C,进行表型诊断;抽提患者外周血白细胞基因组DNA,应用PCR技术分8段扩增FⅨ基因外显子序列,用双脱氧终止法检测核酸序列。结果表明:... 为了研究3名中国汉族非亲缘系血友病B患者凝血因子Ⅸ(FⅨ)基因突变的类型,常规检测患者血浆APTT及FⅨ∶C,进行表型诊断;抽提患者外周血白细胞基因组DNA,应用PCR技术分8段扩增FⅨ基因外显子序列,用双脱氧终止法检测核酸序列。结果表明:与正常对照者相比,HB患者APTT测定值明显升高,FⅨ∶C测定值明显降低,PT测定值正常。测序结果显示3例HB患者均有相应的基因序列改变,患者1有外显子6G22119A点突变,患者2有外显子1G7932C点突变,患者3有外显子T32685C点突变。结论:3例HB患者均检测到相应的基因序列改变,这为HB患者基因缺陷的分子机制提供了证据。 展开更多
关键词 血友病B 凝血因子 基因突变 DNA测序技术
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应用荧光原位杂交检测人凝血因子Ⅸ在转基因小鼠染色体上的整合 被引量:12
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作者 肖艳萍 奚鹰 +1 位作者 黄文英 黄英 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期232-236,共5页
应用荧光原位杂交 (FISH)技术检测两个转基因小鼠家系从F1到F4 代的整合情况。阳性转基因小鼠 98%~ 10 0 %的中期分裂相 ,85 %~ 94%的间期核出现杂交信号 ;阴性对照小鼠 10 0 %的中期分裂相、95 %~ 96 %的间期核未出现杂交信号。结... 应用荧光原位杂交 (FISH)技术检测两个转基因小鼠家系从F1到F4 代的整合情况。阳性转基因小鼠 98%~ 10 0 %的中期分裂相 ,85 %~ 94%的间期核出现杂交信号 ;阴性对照小鼠 10 0 %的中期分裂相、95 %~ 96 %的间期核未出现杂交信号。结果表明 ,该FISH实验条件能对转基因整合位点进行高效特异检测。本文分析的两家系转基因小鼠均为单位点整合 ,但整合位点不同。各家系内F1到F4 代的转基因小鼠均可检出整合染色体 ,且整合位点相同 ,表明外源基因稳定整合并遗传给后代。 展开更多
关键词 荧光原位杂交 检测 人凝血因子 转基因小鼠 染色体 整合位点
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逆转录病毒载体转染的人凝血因子Ⅸ基因在人脐带组织源间充质干细胞中的表达 被引量:3
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作者 陈晓梨 董春兰 +8 位作者 冯小明 陈振萍 周泽平 许显辉 赵钦军 邱志勇 任倩 张蕾 韩忠朝 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第1期184-187,共4页
为了研究逆转录病毒(pLEGFP-N1)转染的人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)基因在人脐带间充质干细胞中的表达,应用DNA重组技术将hFⅨcDNA构建入pLEGFP-N1载体,转导入包装细胞系Pheonix细胞,应用病毒上清感染人脐带组织源间充质干细胞(hUCT-MSCs),经G41... 为了研究逆转录病毒(pLEGFP-N1)转染的人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)基因在人脐带间充质干细胞中的表达,应用DNA重组技术将hFⅨcDNA构建入pLEGFP-N1载体,转导入包装细胞系Pheonix细胞,应用病毒上清感染人脐带组织源间充质干细胞(hUCT-MSCs),经G418筛选10天后获得全部的转染阳性细胞,从蛋白质水平和其功能活性上检测hFⅨ的表达。结果显示:配养上清液中可检测到hFⅨ的表达,每24小时分泌量达2.68±0.36μg/106细胞。Western blot检测表明,转导hFⅨ的hUCT-MSCs能分泌预期分子大小的hFⅨ入上清。功能性凝集测定实验表明了转导FⅨ的hUCT-MSCs2天培养上清中hFⅨ的活性为100%-130%。结论:pLEGFP-N1-hFⅨ能有效地转导hUCT-MSCs,并在其子代细胞中表达具有凝血活性的hFⅨ,这为hUCT-MSCs成为血友病B基因治疗的细胞载体研究奠定了基础。 展开更多
关键词 逆转录病毒 人凝血因子 人脐带组织源间充质干细胞 基因治疗 血友病B
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小鼠胚胎干细胞凝血因子Ⅸ基因的定向敲除 被引量:5
4
作者 戴旭明 薛红 +3 位作者 杨桦 胡以平 傅继梁 陈竺 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期1-4,共4页
目的:将小鼠胚胎干细胞中凝血因子Ⅸ(mFⅨ)基因定向敲除,为建立血友病B的转基因小鼠模型奠定基础;摸索建立ES细胞基因打靶技术体系。方法:将线性化的针对小鼠mFⅨ基因组的基因打靶置换型载体(pMFⅨDEL)DNA用电... 目的:将小鼠胚胎干细胞中凝血因子Ⅸ(mFⅨ)基因定向敲除,为建立血友病B的转基因小鼠模型奠定基础;摸索建立ES细胞基因打靶技术体系。方法:将线性化的针对小鼠mFⅨ基因组的基因打靶置换型载体(pMFⅨDEL)DNA用电穿孔法转入小鼠ES细胞,经过G418和GANC分组药物选择,用PCR和基因组Southern杂交两种方法,鉴定药物抗性细胞中发生同源重组的情况。结果:(1)从药物抗性细胞克隆中鉴定获得了4个发生了按所设计的方式进行了同源重组的ES细胞克隆;(2)观察到在ES细胞中,pMFⅨDEL载体DNA与内源mFⅨ基因发生同源重组的频率平均为1.67×10-6。结论:得到了4个mFⅨ基因已被敲除的ES细胞克隆;建立了ES细胞基因打靶的技术体系。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 基因敲除 凝血因子 血友病B
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人源载体pHrnF9介导的凝血因子Ⅸ基因在肠上皮sw480细胞中的表达 被引量:2
5
作者 杜建伟 陈方平 +2 位作者 夏昆 文路 宋永平 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第4期878-882,共5页
本研究探索肠上皮细胞和人源载体pHrnFⅨ用于血友病B基因治疗的可能性。用含人凝血因子Ⅸ(human coagulation factorⅨ,hFⅨ)基因的人源载体质粒pHrnF9转染肠上皮细胞sw480,用RT-PCR检测mRNA的转录,荧光显微镜观察转染效率,ELISA和一期... 本研究探索肠上皮细胞和人源载体pHrnFⅨ用于血友病B基因治疗的可能性。用含人凝血因子Ⅸ(human coagulation factorⅨ,hFⅨ)基因的人源载体质粒pHrnF9转染肠上皮细胞sw480,用RT-PCR检测mRNA的转录,荧光显微镜观察转染效率,ELISA和一期法检测蛋白表达及凝血活性。结果表明:转染后的细胞中有hFⅨmRNA的转录;荧光显微镜观察到48小时转染效率最高;ELISA法测得转染后24小时细胞上清中的hFⅨ蛋白量为(11.34±0.23)ng/(106cells.24h),第48小时hFⅨ蛋白量最高,达(29.34±1.00)ng/(106cells.24h),转染后72小时降为(12.45±0.15)ng)/(106cells.24h)。一期法结果显示转染pHrnF9的sw480细胞分泌的FⅨ有凝血活性,48小时达峰值(6.07±0.17)%/106cells,第72小时降至(1.81±0.06)%/106cells。结论:肠上皮细胞sw480转染pHrnF9质粒后可表达有凝血活性的hFⅨ,肠上皮细胞有望成为血友病B基因治疗的靶细胞。 展开更多
关键词 肠上皮细胞sw480 人源载体pHrnF9 凝血因子 基因治疗
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逆转录病毒载体中正向插入内含子片段对表达人凝血因子Ⅸ的作用 被引量:3
6
作者 王健民 侯军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期971-974,共4页
目的 :探讨人凝血因子 (F )内含子 1片段正向插入逆转录病毒载体对骨骼肌细胞表达 F 的影响。 方法 :将含F 内含子 1片段的 F 微小基因 m 1和 m 2正向插入 L SN逆转录病毒载体的 Bam H 位点 ,取代 F c DNA,获得 m 1SN和 L m 2 SN载... 目的 :探讨人凝血因子 (F )内含子 1片段正向插入逆转录病毒载体对骨骼肌细胞表达 F 的影响。 方法 :将含F 内含子 1片段的 F 微小基因 m 1和 m 2正向插入 L SN逆转录病毒载体的 Bam H 位点 ,取代 F c DNA,获得 m 1SN和 L m 2 SN载体 ,在小鼠成肌细胞进行瞬时和稳定表达试验。结果 :L m 1SN的 m 2 SN载体的病毒滴度、在成肌细胞中瞬时表达和稳定表达 F 的水平 ,均比不含内含子的 L SN增高 1~ 2倍 ,小部分病毒 RNA中的内含子在包装细胞中未被剪接去除而转入了靶细胞。结论 :人 F 内含子 1片段正向插入逆转录病毒载体对提高病毒滴度和 F 的表达水平有一定作用。 展开更多
关键词 因子 逆转录病毒科 内含子 转染
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结肠灌注重组腺相关病毒2/人凝血因子Ⅸ基因载体治疗血友病B的安全性研究 被引量:1
7
作者 彭捷 王华 +2 位作者 陈方平 王光平 彭建强 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期487-489,共3页
目的分析结肠灌注重组腺相关病毒2/人凝血因子Ⅸ(rAAV2/CMV-hFⅨ)基因载体治疗血友病B小鼠的安全性。方法将rAAV2/CMV-hFⅨ(剂量为1×1013 v.g/kg)结肠灌注血友病B模型小鼠,分别检测抗重组腺相关病毒2(rAAV2)抗体和抗人凝血因子Ⅸ(h... 目的分析结肠灌注重组腺相关病毒2/人凝血因子Ⅸ(rAAV2/CMV-hFⅨ)基因载体治疗血友病B小鼠的安全性。方法将rAAV2/CMV-hFⅨ(剂量为1×1013 v.g/kg)结肠灌注血友病B模型小鼠,分别检测抗重组腺相关病毒2(rAAV2)抗体和抗人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)抗体,并通过组织病理学、免疫组化和PCR技术分析病毒和hFⅨ的组织分布。结果灌注后,在小鼠体内能够检测到抗rAAV2抗体和抗hFⅨ抗体;组织病理学、免疫组化和PCR技术分析结果显示灌注部位肠组织无明显病理改变,rAAV2以及hFⅨ基因仅仅在灌注的肠上皮。结论结肠灌注重组腺相关病毒基因治疗血友病B小鼠,在所观测时间内是安全的。 展开更多
关键词 重组腺相关病毒 血友病B 凝血因子 基因治疗 结肠灌注 安全性
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机采血小板悬液在保存过程中凝血因子Ⅷ、Ⅸ生物活性的变化 被引量:3
8
作者 杨江存 李凤琴 +1 位作者 李芒会 任健康 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期162-164,共3页
为了研究机采血小板悬液22℃振荡保存不同时间的凝血因子Ⅷ、Ⅸ生物活性的变化,采用SYSMEXCA-1500型全自动血凝仪对用CS-3000plus血细胞分离机采集的18份血小板悬液于22℃振荡保存条件下,测定0、12、24、48、72、96、120小时7个时间段的... 为了研究机采血小板悬液22℃振荡保存不同时间的凝血因子Ⅷ、Ⅸ生物活性的变化,采用SYSMEXCA-1500型全自动血凝仪对用CS-3000plus血细胞分离机采集的18份血小板悬液于22℃振荡保存条件下,测定0、12、24、48、72、96、120小时7个时间段的FⅧ∶C和FⅨ∶C的活性。结果表明:机采血小板FⅧ∶C在0时活性为(100.51±44.02)%,保存12-120小时,其活性衰减了10%-40%;FⅨ∶C在0时活性为(120.93±20.50)%,保存24-120小时,其活性衰减了10%-35%。结论:机采血小板悬液于22℃振荡保存时凝血因子Ⅷ、Ⅸ仍保持有较高的生物学活性。 展开更多
关键词 机采血小板 凝血因子 凝血因子Ⅷ 凝血因子
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携带人Ⅸ因子基因逆转录病毒载体的构建及其在小鼠骨髓细胞中的表达
9
作者 杨建民 卢大儒 +4 位作者 王健民 于敏 薛京伦 邱信芳 孟沛霖 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1998年第2期133-136,共4页
构建携带人Ⅸ因子。cDNA的逆转录病毒载体MFGⅨ,并观察其在造血细胞中的表达。应用DNA重组技术将人Ⅸ因子cDNA构建入MFG载体,转导入包装细胞系PA317细胞,应用病毒上清转染造血细胞,并用PCR,ELISA及免疫组化方法检测其表达。研究结果表明... 构建携带人Ⅸ因子。cDNA的逆转录病毒载体MFGⅨ,并观察其在造血细胞中的表达。应用DNA重组技术将人Ⅸ因子cDNA构建入MFG载体,转导入包装细胞系PA317细胞,应用病毒上清转染造血细胞,并用PCR,ELISA及免疫组化方法检测其表达。研究结果表明,酶切鉴定成功构建MFGⅣ逆转录病毒载体,转入HT1080细胞系及小鼠骨髓细胞后,用PCR,ELISA及免疫荧光染色和免疫细胞化学染色证实Ⅸ因子的表达,且ELISA结果显示应用MFGⅨ转染Ⅸ因子蛋白及活性均高于LNCⅨ。结论提示MFGⅨ载体能较好转染造血细胞。 展开更多
关键词 因子 逆转录病毒载体 MFG 造血细胞 骨髓细胞
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人凝血因子Ⅸ基因(pKG_5-Ⅸ)直接注入小鼠骨骼肌中瞬间表达的研究
10
作者 谭骏 王燕 +4 位作者 纪贤文 刘昕 朱锡华 薛京伦 邱信芳 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第2期96-98,共3页
我们将带凝血Ⅸ因子基因cDNA的pKG_5-Ⅸ裸DNA直接注入小鼠骨骼肌内,注射后第14天取小鼠血分离血清进行研究。结果显示:十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析中能清晰地看到一与凝血因子ⅨcDN... 我们将带凝血Ⅸ因子基因cDNA的pKG_5-Ⅸ裸DNA直接注入小鼠骨骼肌内,注射后第14天取小鼠血分离血清进行研究。结果显示:十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析中能清晰地看到一与凝血因子ⅨcDNA表达相关的特定蛋白带,进一步的实验WesternBlot、ELISA及一期法有力地证实了SDS-PAGE结果,人FⅨ基因转移小鼠出现55kD特异带与人FⅨ相符,即证明它确系人FⅨ。 展开更多
关键词 凝血因子 基因表达 血友病B
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凝血因子Ⅸ复合物制品在鼠非停滞模型上的潜在致血栓性的评价
11
作者 余蓉 邬杨斌 +1 位作者 杜俊蓉 李晓红 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期206-210,共5页
目的 评价两种凝血因子Ⅸ复合物的潜在致血栓危险性。方法 采用鼠非停滞模型 ,动态监测可溶性纤维蛋白单体复合物、纤维蛋白降解产物、D 二聚体、组织纤溶酶原激活剂等指标的变化。结果 采用国产DEAE 琼脂糖快胶离子交换层析和Ca3(PO... 目的 评价两种凝血因子Ⅸ复合物的潜在致血栓危险性。方法 采用鼠非停滞模型 ,动态监测可溶性纤维蛋白单体复合物、纤维蛋白降解产物、D 二聚体、组织纤溶酶原激活剂等指标的变化。结果 采用国产DEAE 琼脂糖快胶离子交换层析和Ca3(PO4 ) 2 吸附法相结合的层析工艺制备的凝血因子Ⅸ复合物引起的上述指标的变化均明显低于改良凝胶吸附法制备的凝血因子Ⅸ复合物。结论 用国产DEAE 琼脂糖快胶离子交换层析和Ca3(PO4 ) 2 吸附法相结合的层析工艺可明显减少凝血因子活化 。 展开更多
关键词 凝血因子复合物 制品 非停滞模型 评价 大鼠 血栓栓塞
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凝血因子Ⅸ/凝血因子Ⅹ结合蛋白家族的研究进展
12
作者 徐小龙 刘清亮 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第6期589-592,共4页
凝血因子Ⅸ /Ⅹ结合蛋白家族是近来发现的C型动物凝集素超家族中一个亚家族 .它们存在于蝰科蛇毒中 ,不具有酶活性 ,通过与凝血因子Ⅸ或凝血因子Ⅹ结合来延长凝血时间 .在钙离子存在下结合在凝血因子Ⅸ /Ⅹ分子中γ 羧基谷氨酸区域 .它... 凝血因子Ⅸ /Ⅹ结合蛋白家族是近来发现的C型动物凝集素超家族中一个亚家族 .它们存在于蝰科蛇毒中 ,不具有酶活性 ,通过与凝血因子Ⅸ或凝血因子Ⅹ结合来延长凝血时间 .在钙离子存在下结合在凝血因子Ⅸ /Ⅹ分子中γ 羧基谷氨酸区域 .它们彼此之间具有很高的序列同源性 ,都是由两条同源的肽链通过一对二硫键相连 .两条肽链都具有C型糖识别区的二硫键构型 ,各含一个钙离子结合位点 .其中habu凝血因子Ⅸ /Ⅹ结合蛋白的晶体结构已经测定 ,除掉相互交叠的中心环外 。 展开更多
关键词 抗凝剂 凝血因子/Ⅹ结合蛋白 蛇毒 钙离子
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中国汉族人群凝血因子Ⅸ基因限制性片段长度多态性的研究 被引量:4
13
作者 毕作木 华宝来 +3 位作者 杨仁池 王鸿艳 武文杰 钱林生 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第3期247-250,共4页
为探讨中国人群中凝血因子Ⅸ ( FⅨ )基因SalⅠ ,NruⅠ和MseⅠ酶切位点的限制性片段长度多态性(RFLP) ,采用聚合酶链反应 (PCR)方法 ,以三代内相互间无亲缘关系的正常汉族人为研究对象 ,对其 FⅨ基因内含子 1第 192位以及 5′端 - 793... 为探讨中国人群中凝血因子Ⅸ ( FⅨ )基因SalⅠ ,NruⅠ和MseⅠ酶切位点的限制性片段长度多态性(RFLP) ,采用聚合酶链反应 (PCR)方法 ,以三代内相互间无亲缘关系的正常汉族人为研究对象 ,对其 FⅨ基因内含子 1第 192位以及 5′端 - 793位核苷酸A和G的频率和 5′端 - 6 98位核苷酸T和C的频率进行了分析 ,其中对FⅨ - 192共分析了 2 14条X染色体 ,对 FⅨ - 793共分析了 2 10条X染色体 ,对 FⅨ - 6 98共分析了 2 0 6条X染色体。结果表明 :FⅨ基因内含子 1第 192位A和G的频率分别为 0 .878和 0 .12 2 ,杂合体频率为 0 .2 13;- 793位核苷酸A和G的频率分别为 0 .5 5 2和 0 .4 4 8,杂合体频率为 0 .4 94 ;FⅨ - 6 98位核苷酸T和C的频率分别为 0 .311和 0 .6 89,杂合体频率为 0 .4 2 9。结论提示 :FⅨ基因SalⅠ。 展开更多
关键词 中国 汉族人 凝血因子基因 限制性片段长度多态性 血友病B 聚合酶链反应
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凝血因子Ⅸ无义突变真核表达载体的构建及其在COS-7细胞的表达 被引量:1
14
作者 聂欣 杨林花 +4 位作者 柴宝峰 申泉 张媛 张耀方 陈剑芳 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第3期749-752,共4页
本研究以含有fⅨ cDNA的pcDNA3.1质粒为模板构建4种包含不同类型无义突变的fⅨ真核表达载体并进行鉴定,实现其在COS-7细胞中的表达。采用以PCR为基础的定点突变法体外构建fⅨ基因无义突变体,并通过DNA序列分析进一步鉴定证实;应用脂质... 本研究以含有fⅨ cDNA的pcDNA3.1质粒为模板构建4种包含不同类型无义突变的fⅨ真核表达载体并进行鉴定,实现其在COS-7细胞中的表达。采用以PCR为基础的定点突变法体外构建fⅨ基因无义突变体,并通过DNA序列分析进一步鉴定证实;应用脂质体转化技术将野生型、突变型fⅨ表达载体分别瞬时转染COS-7细胞,采用实时定量PCR鉴定fⅨ mRNA在各组的相对表达水平。结果表明,4个突变型质粒除相应位点的无义突变外,未见其它突变,提示无义突变载体构建成功。实时定量PCR鉴定表明,各突变组真核表达载体已成功转染COS-7细胞株并能转录为mRNA。结论:采用以PCR为基础的定点突变法可在体外构建fⅨ真核表达载体,并可在COS-7细胞中表达,其转录过程中不引发mRNA降解,这为进一步研究无义突变引起FⅨ功能丧失及表达量降低的机制和治疗研究提供了物质基础。 展开更多
关键词 凝血因子IX 真核表达载体 血友病B 提前终止翻译密码子
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基因打靶置换型载体的构建和应用研究 被引量:6
15
作者 戴旭明 薛红 +2 位作者 杨桦 胡以平 傅继梁 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期5-8,共4页
目的:构建针对小鼠凝血因子Ⅸ(mFⅨ)基因的基因打靶置换型载体,并用于小鼠胚胎干细胞基因打靶研究。方法:在用噬斑原位杂交法克隆mFⅨ基因组DNA并完成结构分析的基础上,利用常规的分子克隆技术,设计并构建置换型载体,经... 目的:构建针对小鼠凝血因子Ⅸ(mFⅨ)基因的基因打靶置换型载体,并用于小鼠胚胎干细胞基因打靶研究。方法:在用噬斑原位杂交法克隆mFⅨ基因组DNA并完成结构分析的基础上,利用常规的分子克隆技术,设计并构建置换型载体,经过限制性内切酶酶切鉴定和PCR鉴定其结构正确后,用电穿孔法对体外培养的小鼠胚胎干细胞R1株进行基因转移,经G418/GANC(Gancyclovir)分组药物选择,进行pMFⅣDEL载体的应用研究。结果:构建获得包括正负双向选择基因的表达元件、长短同源臂等在内的基因打靶置换型载体pMFⅨDEL,在胚胎干细胞中能有效地发生重组,正负双向选择系统的应用对同源重组事件富集效率提高了24倍。结论:本研究构建获得了针对mFⅨ基因的置换型载体,在胚胎干细胞基因打靶中得到有效的应用。 展开更多
关键词 基因打靶 置换型 载体 胚胎干细胞 凝血因子
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原代小鼠骨骼肌细胞和C 2C 12细胞转人凝血因子IX基因后高效表达及分泌功能 被引量:4
16
作者 王健民 侯军 KurachiK 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第9期593-597,共5页
目的:研究骨骼肌细胞作为基因治疗靶细胞,其合成、加工和分泌外源性蛋白质的功能。方法:应用骨骼肌细胞特异性和非特异性表达载体(pd L Me4b AhⅨm 和 LⅨ S N)转染联合免疫缺陷( S C I D)小鼠原代成肌细胞( ... 目的:研究骨骼肌细胞作为基因治疗靶细胞,其合成、加工和分泌外源性蛋白质的功能。方法:应用骨骼肌细胞特异性和非特异性表达载体(pd L Me4b AhⅨm 和 LⅨ S N)转染联合免疫缺陷( S C I D)小鼠原代成肌细胞( S C I D M B)和 C2 C12 成肌细胞系,观察这两种细胞在合成、加工和分泌人凝血因子Ⅸ( FⅨ)蛋白质方面的异同。结果:在 S C I D M B中,pd L Me4b AhⅨm可表达的 FⅨ 达2 000 ng·10- 6 ·(24 h)- 1 ,凝血活性达 95% ~103% 。比较细胞内和培养上清液中的 FⅨ蛋白及细胞内 FⅨm R N A 丰度变化表明, C2 C12 细胞分泌 FⅨ的功能不如 S C I D M B,而合成、加工 FⅨ的能力与 S C I D M B相似。结论:原代小鼠骨骼肌细胞可高效表达、加工和分泌外源性基因产物;在以骨骼肌细胞作为靶细胞进行基因治疗研究时,应尽量应用原代细胞。本研究为临床应用骨骼肌细胞作为基因治疗靶细胞奠定了实验基础。 展开更多
关键词 骨骼肌成肌细胞 凝血因子 基因治疗 血友病B
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血友病B家系的基因测序与高危胎儿的产前诊断 被引量:1
17
作者 吴庆华 史惠蓉 +3 位作者 鲁宁 江淼 赵振华 孔祥东 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2012年第5期639-642,共4页
目的:对3个血友病B家系进行凝血因子Ⅸ(F9)基因突变分析,并对家系中的4个高危胎儿行产前诊断。方法:采用PCR反应和扩增后DNA直接测序技术对3个家系先证者及其家系成员F9基因的8个外显子进行序列分析,确定先证者及携带者的基因型后取羊... 目的:对3个血友病B家系进行凝血因子Ⅸ(F9)基因突变分析,并对家系中的4个高危胎儿行产前诊断。方法:采用PCR反应和扩增后DNA直接测序技术对3个家系先证者及其家系成员F9基因的8个外显子进行序列分析,确定先证者及携带者的基因型后取羊水或绒毛进行产前诊断。结果:3个家系患者中均检出了F9基因突变,分别为G79R(c.10487G>A)、17788DelG、IVS2+4A>T(c.6493A>T)突变,其中,17788DelG为国内外首次报道的突变。女性携带者中检测出上述位点的杂合突变。家系1和家系2中行产前诊断的男性胎儿未携带F9基因突变,家系3中女性胎儿携带有IVS2+4A>T杂合突变,出生后随访均证实产前诊断的结果。结论:F9基因G79R、17788DelG、IVS2+4A>T是3个血友病B家系的致病性突变,应用基因测序技术可以对血友病B家系行有效的基因和产前诊断。 展开更多
关键词 血友病B 凝血因子基因 突变 产前诊断
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人凝血因子IX突变型研究现状 被引量:5
18
作者 颜景斌 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期833-838,共6页
血友病B是一种性连锁隐性遗传病,其发病机制是位于X染色体上的人凝血因子IX(hFIX)基因发生了突变,导致血浆中hFIX含量或活性大幅下降,从而使得内源性凝血途径受到阻碍,无法进行正常的凝血。文章综述了hFIX基因及其编码蛋白质的结构和功... 血友病B是一种性连锁隐性遗传病,其发病机制是位于X染色体上的人凝血因子IX(hFIX)基因发生了突变,导致血浆中hFIX含量或活性大幅下降,从而使得内源性凝血途径受到阻碍,无法进行正常的凝血。文章综述了hFIX基因及其编码蛋白质的结构和功能,并分类详细论述了血友病B中发现的几种主要突变类型。其中包括奠基者效应造成的突变、调控区的突变、编码区的突变、内含子剪切位点的突变及另外两种较为特殊的突变,同时介绍了这些突变所造成的生物学效应。最后还简要介绍了一种能提高hFIX蛋白凝血活性的突变类型(第338位Arg→Ala),并对其应用作了展望。 展开更多
关键词 血友病B 人凝血因子 突变 凝血活性
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