目的:探讨RNA干扰沉默果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog2,EZH2)基因与卵巢癌细胞A2780顺铂敏感性的关系。方法:获得稳定表达EZH2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的人卵巢癌细胞A2780-shEZH2,实时定量PCR(Rea...目的:探讨RNA干扰沉默果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog2,EZH2)基因与卵巢癌细胞A2780顺铂敏感性的关系。方法:获得稳定表达EZH2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的人卵巢癌细胞A2780-shEZH2,实时定量PCR(Real time RT-PCR)法和免疫印记法检测转染株的EZH2基因表达,MTT法检测细胞对顺铂的耐药性,流式细胞学检测细胞凋亡。结果:以未转染组A2780细胞EZH2的表达水平为100%,EZH2-shRNA转染组A2780-shEZH2细胞EZH2的mRNA及蛋白水平分别下降90.20±1.66%和76.54±8.92%,与未转染组比较差异均有高度统计学意义(P<0.01)。EZH2-shRNA转染组A2780-shEZH2细胞对顺铂的IC50与未转染组A2780细胞IC50值和空质粒转染组A2780-shVector细胞IC50值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。EZH2-shEZH2转染组的细胞凋亡率与空质粒转染组凋亡率及未转染细胞凋亡率相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:EZH2基因与卵巢癌原发性顺铂耐药无关。展开更多
目的构建依赖辅助病毒和宿主细胞内合成病毒核糖核蛋白复合体(vRNPs)的反向遗传学系统,利用上述两系统表达绿色荧光蛋白(EGFP)。方法将EGFP cDNA精确插入人RNA聚合酶I启动子和小鼠终止子序列之间,构建RNA POLI系统,此系统被克隆入pBlues...目的构建依赖辅助病毒和宿主细胞内合成病毒核糖核蛋白复合体(vRNPs)的反向遗传学系统,利用上述两系统表达绿色荧光蛋白(EGFP)。方法将EGFP cDNA精确插入人RNA聚合酶I启动子和小鼠终止子序列之间,构建RNA POLI系统,此系统被克隆入pBluescript II sk(+),获得重组质粒pBluescript II sk(+)-tI-EGFP-PIh;基于辅助病毒H1N1,pBluescript II sk(+)-tI-EGFP-PIh转染MDCK细胞,观察荧光。来源于甲型流感病毒H1N1分离株A/Puerto Rico/8/34的PB2、PB1、PA、NP 4个基因片段cDNA克隆入载体pcDNA3.1(+),获得pcDNA3.1-PB2、pcDNA3.1-PB1、pcDNA3.1-PA、pcDNA3.1-NP,将pBluescript II sk(+)-tI-EGFP-PIh与4个表达质粒共转染293T细胞,观察荧光。结果所构建的载体均经菌液PCR及测序验证正确;两种转染体系均可观察到绿色荧光。结论所构建的依赖辅助病毒和宿主细胞内合成vRNPs的反向遗传学系统均可使绿色荧光蛋白表达。展开更多
文摘目的:探讨RNA干扰沉默果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog2,EZH2)基因与卵巢癌细胞A2780顺铂敏感性的关系。方法:获得稳定表达EZH2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的人卵巢癌细胞A2780-shEZH2,实时定量PCR(Real time RT-PCR)法和免疫印记法检测转染株的EZH2基因表达,MTT法检测细胞对顺铂的耐药性,流式细胞学检测细胞凋亡。结果:以未转染组A2780细胞EZH2的表达水平为100%,EZH2-shRNA转染组A2780-shEZH2细胞EZH2的mRNA及蛋白水平分别下降90.20±1.66%和76.54±8.92%,与未转染组比较差异均有高度统计学意义(P<0.01)。EZH2-shRNA转染组A2780-shEZH2细胞对顺铂的IC50与未转染组A2780细胞IC50值和空质粒转染组A2780-shVector细胞IC50值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。EZH2-shEZH2转染组的细胞凋亡率与空质粒转染组凋亡率及未转染细胞凋亡率相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:EZH2基因与卵巢癌原发性顺铂耐药无关。
文摘目的构建依赖辅助病毒和宿主细胞内合成病毒核糖核蛋白复合体(vRNPs)的反向遗传学系统,利用上述两系统表达绿色荧光蛋白(EGFP)。方法将EGFP cDNA精确插入人RNA聚合酶I启动子和小鼠终止子序列之间,构建RNA POLI系统,此系统被克隆入pBluescript II sk(+),获得重组质粒pBluescript II sk(+)-tI-EGFP-PIh;基于辅助病毒H1N1,pBluescript II sk(+)-tI-EGFP-PIh转染MDCK细胞,观察荧光。来源于甲型流感病毒H1N1分离株A/Puerto Rico/8/34的PB2、PB1、PA、NP 4个基因片段cDNA克隆入载体pcDNA3.1(+),获得pcDNA3.1-PB2、pcDNA3.1-PB1、pcDNA3.1-PA、pcDNA3.1-NP,将pBluescript II sk(+)-tI-EGFP-PIh与4个表达质粒共转染293T细胞,观察荧光。结果所构建的载体均经菌液PCR及测序验证正确;两种转染体系均可观察到绿色荧光。结论所构建的依赖辅助病毒和宿主细胞内合成vRNPs的反向遗传学系统均可使绿色荧光蛋白表达。
