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昆虫中纳米颗粒介导的RNA干扰:研究进展与展望 被引量:1
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作者 刘吉升 林显锋 陈伟健 《昆虫学报》 北大核心 2025年第6期849-861,共13页
RNA干扰(RNA interference,RNAi)由于其高度保守、特异性强、操作简单和沉默高效等优点,已广泛应用于昆虫的基因功能研究和选择性控制农业害虫的新生物策略开发中。但是RNAi在害虫防治的实际应用中也面临了挑战,其中RNAi效率是最主要的... RNA干扰(RNA interference,RNAi)由于其高度保守、特异性强、操作简单和沉默高效等优点,已广泛应用于昆虫的基因功能研究和选择性控制农业害虫的新生物策略开发中。但是RNAi在害虫防治的实际应用中也面临了挑战,其中RNAi效率是最主要的制约因素。本综述对RNAi分子机制的3个主要通路、核酸酶对双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)稳定性和RNAi效率的影响以及利用纳米颗粒材料包裹与递送dsRNA的研究进展进行了归纳与探讨,对通过抑制昆虫体内核酸酶活性并结合目标基因的dsRNA来进一步提高RNAi效率进行了展望,以期为基于纳米颗粒的害虫生物防治和绿色杀虫剂开发提供参考。dsRNA的稳定性是限制昆虫中RNAi效率的主要因素之一,将dsRNA与不同纳米颗粒结合形成聚合物,可增加dsRNA在昆虫体内的稳定性,提高RNAi效率。在RNAi应用中,不同纳米颗粒为RNAi提供了多种dsRNA递送方式。纳米颗粒以其安全、低毒、成本低廉、生物相容性好和RNAi效率高等优点,已经成为国内外研究的热点,被越来越多地应用于昆虫的RNAi研究中,在害虫防治与绿色杀虫剂开发中展现出巨大的潜力和价值。今后,应加强纳米材料功能化设计、低成本生产工艺研发及生态风险评估体系构建,以推动RNAi技术在农业中的实际应用与可持续发展。 展开更多
关键词 昆虫 基因沉默 rna干扰 双链rna 纳米颗粒 害虫防治
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原核表达dsRNA-StPPO发酵工艺优化及应用 被引量:1
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作者 余金兰 何倩 +2 位作者 李欣茹 谭红晓 路来风 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第2期59-67,共9页
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象,引发细胞内同源靶基因特异性抑制或沉默。RNAi技术已应用在害虫防治、抑菌、抗病毒等多个领域,但在控制农产品品质劣变中... RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象,引发细胞内同源靶基因特异性抑制或沉默。RNAi技术已应用在害虫防治、抑菌、抗病毒等多个领域,但在控制农产品品质劣变中应用较少。该研究以大肠杆菌RNaseⅢ缺陷型菌株HT115(DE3)为发酵平台,以L4440载体为骨架构建重组载体,进行马铃薯多酚氧化酶StPPO编码基因的dsRNA表达与发酵条件优化,并进行dsRNA-StPPO生物学功能验证。结果表明,异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl thiogalactoside,IPTG)诱导剂浓度为0.6 mmol/L,诱导时间为6 h,外加酵母浸粉0.48%,温度为39℃,装瓶量为45 mL/250 mL,转速为189 r/min时,目标dsRNA的产量最高,达3.95μg/mL。浸泡dsRNA-StPPO溶液后,处理组鲜切马铃薯较对照组有较高的L、较低的a和褐变指数,且组织中的多酚氧化酶酶活力较低,说明施用dsRNA-StPPO可以抑制马铃薯polyphenol oxidase StPPO基因表达有效控制鲜切褐变现象。 展开更多
关键词 大肠杆菌 双链rna 外源施用 鲜切褐变 多酚氧化酶
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水稻干尖线虫海藻糖6-磷酸合成酶基因双链RNA细菌表达体系构建
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作者 崔苗苗 杨行洲 +5 位作者 宋海艳 魏利辉 顾爱国 乐秀虎 李东霞 冯辉 《江苏农业学报》 北大核心 2025年第5期867-874,共8页
外源双链RNA(dsRNA)可通过RNA干扰(RNAi)影响植物线虫的基因表达,达到杀虫防病的目的。利用细菌表达系统进行dsRNA制备,生产效率高、成本低,是dsRNA规模化制备的优选策略。为探索基于RNAi技术的细菌表达dsRNA在水稻干尖线虫(Aphelechoid... 外源双链RNA(dsRNA)可通过RNA干扰(RNAi)影响植物线虫的基因表达,达到杀虫防病的目的。利用细菌表达系统进行dsRNA制备,生产效率高、成本低,是dsRNA规模化制备的优选策略。为探索基于RNAi技术的细菌表达dsRNA在水稻干尖线虫(Aphelechoides besseyi)防治中的作用,本研究以水稻干尖线虫海藻糖6-磷酸合成酶基因AbTPS1和AbTPS2为靶标基因,设计构建细菌表达双链RNA(dsAbTPS1、dsAbTPS2)载体并转化大肠杆菌HT115(DE3),优化dsRNA诱导表达条件和提取方法,并利用荧光定量PCR测定细菌表达的dsRNA对靶标基因的沉默效率,评估其对水稻干尖线虫的防治效果。结果表明,当异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度为0.5 mmol/L、诱导时间为6 h,本研究构建的携带AbTPS-L4440表达载体HT115菌株的dsRNA产量达到最大。利用Trizol法和甲酰胺法从表达菌株中提取的dsRNA产量显著高于乙醇-氯化钠法。用dsAbTPS1和dsAbTPS2处理水稻干尖线虫后,靶基因AbTPS1和AbTPS2表达水平下调,在4℃低温、40℃高温及脱水干燥环境中水稻干尖线虫存活率均显著低于M9缓冲液处理和dsGFP处理。本研究成功构建了水稻干尖线虫AbTPS1、AbTPS2基因的dsRNA细菌表达体系,获得的dsRNA具有明显的RNAi效应,为利用RNA农药防治水稻干尖线虫提供了技术支撑。 展开更多
关键词 水稻干尖线虫 海藻糖-6磷酸合成酶基因 双链rna rna干扰
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RNA干扰在植物功能基因组学和遗传改良中的应用研究进展
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作者 黄雯婧 任思潮 +2 位作者 林俐 王幼平 吴健 《生物技术通报》 北大核心 2025年第9期1-21,共21页
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)介导,具有序列特异性的基因沉默机制,广泛存在于真核生物中。其分子机制主要包括dsRNA的加工、小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)或微RNA(microRNA,miR... RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)介导,具有序列特异性的基因沉默机制,广泛存在于真核生物中。其分子机制主要包括dsRNA的加工、小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)或微RNA(microRNA,miRNA)的生成,以及RNA诱导沉默复合体介导的靶mRNA的特异性降解或翻译抑制。基于该机制的RNAi技术已成为植物功能基因组学研究的强大工具,并在作物抗病虫遗传改良与绿色防控领域展现出巨大潜力。本文系统综述了RNAi的发现历程、分子机制及其应用,重点探讨其三大核心应用:病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)利用工程化病毒载体实现寄主基因的瞬时沉默,为植物基因功能研究提供了高效手段;寄主诱导基因沉默(host-induced gene silencing,HIGS)通过植物体内表达的RNAi分子靶向沉默病原体或者害虫的关键基因,旨在培育具有对真菌、病毒及害虫持久抗性的转基因作物;喷雾诱导基因沉默(spray-induced gene silencing,SIGS)作为一种非转基因策略,通过喷施设计的靶向dsRNA,经靶标病原体或害虫摄取后抑制其关键基因表达,从而干扰其侵染/为害过程,为病虫害防控提供了一种环境友好的新型策略。未来,RNAi技术的进一步发展有望得益于合成生物学、人工智能与纳米递送系统的深度融合,以优化靶标设计、提升沉默效率并降低脱靶风险。随着关键技术的突破与应用瓶颈的克服,RNAi在推动植物科学研究和实现可持续农业发展方面具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 rna干扰 病毒诱导基因沉默 寄主诱导基因沉默 喷雾诱导基因沉默 跨界rnai 基因沉默 双链rna 病虫害防治
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RNA生物农药防控植物病害研究进展
5
作者 吴浩雨 田呈明 熊典广 《中国森林病虫》 北大核心 2025年第5期39-45,共7页
RNA生物农药是以RNA干扰技术为核心,通过抑制靶基因表达,达到防控病害目的的新型防治手段。然而,其应用效果受环境因素影响较大,喷洒后易降解失效,严重限制RNA生物农药的广泛应用。基于纳米材料开发的双链RNA(double‑stranded RNA,dsRNA... RNA生物农药是以RNA干扰技术为核心,通过抑制靶基因表达,达到防控病害目的的新型防治手段。然而,其应用效果受环境因素影响较大,喷洒后易降解失效,严重限制RNA生物农药的广泛应用。基于纳米材料开发的双链RNA(double‑stranded RNA,dsRNA)递送系统通过纳米材料负载dsRNA,精准靶向病害关键功能基因,达到减害增效的目标,为现代化农林业高效生产和可持续发展提供强有力支撑。系统阐述RNAi技术防治植物病害的形式、RNA生物农药研发及纳米化在植物病害防控领域的研究成果与进展,可为植物病害防控提供新思路和新方法。 展开更多
关键词 rna生物农药 rna干扰 纳米材料 双链rna 植物病害防控
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Construction Strategy and Affecting Factors of Positive-Strand RNA Virus Infectious Clone
6
作者 SHEN Shichuan YUE Kuizhong 《Journal of Northeast Agricultural University(English Edition)》 CAS 2008年第4期80-87,共8页
Construction of infectious clones by full-length cDNA is basic and key for recovering RNA virus and is core of reverse genetics.In this article,basic consideration and key technology were viewed and factors affecting ... Construction of infectious clones by full-length cDNA is basic and key for recovering RNA virus and is core of reverse genetics.In this article,basic consideration and key technology were viewed and factors affecting infectivity of clones were also summarized.Some research advances were briefly introduced about positive-strand RNA viruses infectious clones.Finally,this article also reviewed the application of infectious clones. 展开更多
关键词 positive-strand rna virus infectious clone affecting factors APPLICATION
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dsRNA纳米融合制剂研制及对烟草普通花叶病毒和烟草脉带花叶病毒的抑制效果
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作者 张盼 郭玉双 +4 位作者 汪汉成 尹国英 曹领改 贾蒙骜 余永旭 《农药学学报》 北大核心 2025年第3期473-483,399,共12页
由烟草普通花叶病毒(TMV)和烟草脉带花叶病毒(TVBMV)所致花叶病是烟草上的主要病害,严重威胁烟叶产业的可持续发展。纳米材料介导的RNA干扰(RNAi)是一种新型的绿色、安全、高效防治技术,在植物病毒病防治中有着巨大的应用潜力。本研究... 由烟草普通花叶病毒(TMV)和烟草脉带花叶病毒(TVBMV)所致花叶病是烟草上的主要病害,严重威胁烟叶产业的可持续发展。纳米材料介导的RNA干扰(RNAi)是一种新型的绿色、安全、高效防治技术,在植物病毒病防治中有着巨大的应用潜力。本研究旨在筛选出对TMV和TVBMV病毒抑制效果最佳的靶标序列,并通过双链RNA(dsRNA)纳米材料递送体系解析其对TMV和TVBMV的抑制效果。基于TMV基因组的外壳蛋白(CP)和P126基因,以及TVBMV基因组的CP和HC Pro基因设计靶标片段,结合病毒诱导基因沉默(VIGS)试验,明确不同片段对TMV和TVBMV的抑制效果,筛选最佳靶标片段。体外合成dsRNA,并分别与3种纳米材料壳聚糖(CS)、碳量子点(CQD)和石墨烯量子点(GQD)融合,筛选最佳融合比例并制备得到纳米材料-dsRNA制剂,通过激光粒度仪、Zeta电位测试仪和透射电镜对3种纳米制剂进行了表征,验证了3种制剂对TMV和TVBMV的抑制效果。结果表明:VIGS注射P126对TMV的抑制效果较好,平均抑制率为53.96%;VIGS注射V-HC对TVBMV的抑制效果较好,平均抑制率为61.22%;表明P126和HC Pro基因片段为TMV和TVBMV的最佳靶标。dsRNA和纳米材料的融合试验表明,dsRNA和CS的最佳融合质量比为1∶1,dsRNA和CQD的最佳融合质量比为1∶10;dsRNA和GQD的最佳融合质量比为1∶7。纳米制剂的表征结果证明,dsRNA被成功负载在纳米材料上。纳米材料-dsRNA制剂对TMV和TVBMV的病毒抑制验证试验表明,纳米制剂显著提高了dsRNA对TMV和TVBMV的抑制效果,且GQDdsRNA和CQD-dsRNA组合的抑制效果最佳。 展开更多
关键词 烟草普通花叶病毒 烟草脉带花叶病毒 rna干扰 双链rna 抑制效果 纳米材料
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LncRNA GUSBP11通过miR-339-5p/MDM2轴调节胃癌细胞的恶性生物学行为
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作者 黄星华 吕微风 +2 位作者 林蔚 陈家钖 何娴 《中国肿瘤生物治疗杂志》 北大核心 2025年第5期476-483,共8页
目的:探究长链非编码RNA葡萄糖醛酸酶β假基因11(GUSBP11)调节miR-339-5p/小鼠双分钟同源物2(MDM2)轴对胃癌细胞AGS增殖、迁移和侵袭的影响。方法:收集2023年12月至2024年6月期间在广州中医药大学附属佛山中医院手术治疗的25例胃癌患者... 目的:探究长链非编码RNA葡萄糖醛酸酶β假基因11(GUSBP11)调节miR-339-5p/小鼠双分钟同源物2(MDM2)轴对胃癌细胞AGS增殖、迁移和侵袭的影响。方法:收集2023年12月至2024年6月期间在广州中医药大学附属佛山中医院手术治疗的25例胃癌患者的癌旁组织及癌组织。常规培养胃癌细胞AGS和正常胃黏膜上皮细胞GES-1,用转染试剂将对照质粒和敲减质粒转染AGS细胞,分为Ctrl组、sh-NC、sh-GUSBP11、sh-GUSBP11+anti-NC、sh-GUSBP11+anti-miR-339-5p。qPCR法检测胃癌组织及各组细胞中GUSBP11、miR-339-5p和MDM2 mRNA的表达;双萤光素酶报告基因实验检测GUSBP11或MDM2与miR-339-5p间的靶向关系;EdU法检、Transwell小室实验、划痕愈合实验和WB法分别检测各组AGS的增殖、迁移和侵袭能力和细胞中CDK1、MMP-2、MMP-9蛋白的表达;AGS细胞移植瘤实验检测敲减GUSBP11对移植瘤生长的影响。结果:胃癌组织和细胞中GUSBP11、MDM2 mRNA均呈高表达(均P<0.05),miR-339-5p呈低表达(P<0.05)。GUSBP11与miR-339-5p和MDM2与miR-339-5p间存在靶向关系。在AGS细胞中敲减GUSBP11可明显抑制MDM2蛋白、促进miR-339-5p的表达而抑制miR-339-5p则可促进MDM2蛋白表达。敲减GUSBP11可抑制AGS细胞的增殖、迁移和侵袭能力而抑制miR-339-5p则可逆转此作用。敲减GUSBP11可明显抑制CDK1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达而抑制miR-339-5p则可逆转此作用。敲减GUSBP11可明显抑制AGS细胞移植瘤的生长。结论:GUSBP11在胃癌组织和细胞中呈高表达,敲减GUSBP11表达可能通过调控miR-339-5p/MDM2轴抑制胃癌细胞的恶性生物学行为。 展开更多
关键词 胃癌 长链非编码rna葡萄糖醛酸酶β假基因11 miR-339-5p 小鼠双分钟同源物2 增殖 迁移 侵袭
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RNAi技术在昆虫功能基因研究中的应用进展 被引量:18
9
作者 杨中侠 文礼章 +3 位作者 吴青君 王少丽 徐宝云 张友军 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1077-1082,共6页
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指外源或内源的双链RNA(dsRNA)特异性地引起基因表达沉默的现象,它作为一种有效的工具用来产生转录后沉默,从而抑制特定基因的表达,成为基因功能研究的一种新方法,除了在模式昆虫如果蝇Drosophila中广... RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指外源或内源的双链RNA(dsRNA)特异性地引起基因表达沉默的现象,它作为一种有效的工具用来产生转录后沉默,从而抑制特定基因的表达,成为基因功能研究的一种新方法,除了在模式昆虫如果蝇Drosophila中广泛应用之外,也在非模式昆虫中得到成功应用。近年来,RNAi技术在导入方法和基因功能分析方面都取得了飞速发展,且与转基因技术相结合成功应用于害虫防治领域。本文综述了RNAi技术在导入方法、昆虫功能基因组功能分析及害虫防治等领域新近的研究成果,并展望了该技术的应用前景。 展开更多
关键词 rna干扰(rnaI) 双链rna(dsrna) 昆虫 基因功能 应用
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双链RNA干涉技术(RNAi)在不同生物中应用的研究进展 被引量:18
10
作者 韩蓓 王秀敏 顾学范 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期200-202,共3页
双链RNA(double~strandedRNAdsRNA )干涉技术可通过降解靶基因的mRNA进行基因干涉 ,是研究多种生物基因功能的有效手段 ,目前已在拟南芥、秀丽新小杆线虫、黑腹果蝇、斑马鱼和小鼠等生物中应用 。
关键词 双链rna 基因干涉 基因功能 生物 植物 动物 应用 研究进展
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dsRNA对家蚕核型多角体病毒复制增殖的抑制效果 被引量:11
11
作者 夏定国 张国政 +5 位作者 王文兵 赵巧玲 沈兴家 唐顺明 张业顺 韦亚东 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期206-210,共5页
以家蚕核型多角体病毒(BmNPV)复制必需的极早期基因ie-1和细胞释放型病毒CRV入侵关键基因gp64为靶序列,分别人工设计并体外转录出dsRNA I1(438 bp)和dsRNA G1(337 bp),用家蚕培养细胞BmN研究目标dsRNA对BmNPV复制、增殖的抑制效果。结... 以家蚕核型多角体病毒(BmNPV)复制必需的极早期基因ie-1和细胞释放型病毒CRV入侵关键基因gp64为靶序列,分别人工设计并体外转录出dsRNA I1(438 bp)和dsRNA G1(337 bp),用家蚕培养细胞BmN研究目标dsRNA对BmNPV复制、增殖的抑制效果。结果表明:dsRNA I1能有效地抑制BmNPV在BmN细胞中的增殖,最大抑制效果使培养液中的病毒滴度(TC ID50)比对照降低了104.30倍;dsRNA G1能显著地抑制新形成的病毒粒子的细胞侵染能力,最高可使培养液中的病毒滴度降低103.17倍。 展开更多
关键词 双链rna rna干扰 家蚕核型多角体病毒 复制 增殖
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RNA干涉与基因沉默 被引量:39
12
作者 汤富酬 薛友纺 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期167-172,共6页
:双链RNA介导的遗传干涉的机制是1998年发现的。它通过双链RNA的介导特异性地降解相应序列的mRNA,从而导致转录后水平的基因沉默。到目前为止在真菌、拟南芥、线虫、锥虫、水螅、涡虫、果蝇、斑马鱼、小鼠等真核生物中都发现存在这一... :双链RNA介导的遗传干涉的机制是1998年发现的。它通过双链RNA的介导特异性地降解相应序列的mRNA,从而导致转录后水平的基因沉默。到目前为止在真菌、拟南芥、线虫、锥虫、水螅、涡虫、果蝇、斑马鱼、小鼠等真核生物中都发现存在这一基因沉默机制。目前的研究表明,RNA干涉与植物中的共抑制(cosuppression)、真菌中的基因压制(quelling)很可能具有共同的基本分子机制。这也说明,很可能在进化的很早期阶段,生物就获得了这种机制。RNA干涉对于抵抗病毒入侵、抑制转座子活动等具有重要作用,对于生物体的发育和基因调控可能也有重要作用。 展开更多
关键词 rna干涉 双链rna 基因沉默 遗传干涉
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RNA沉默—新型的植物病毒病害防治策略 被引量:8
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作者 牛颜冰 郭失迷 +2 位作者 宋艳波 雷万钧 申林炎 《中国生态农业学报》 CAS CSCD 2005年第2期47-50,共4页
植物RNA沉默(RNAsilencing)是植物本身固有的一种抗病毒防御系统,是对病毒在复制过程中形成双链RNA(dsRNA)的特殊反应。RNA沉默介导的dsRNA干涉病毒侵染转基因抗病毒有其不足,几种体外生产dsRNA的抗病毒体系能弥补这一不足,它们与转基... 植物RNA沉默(RNAsilencing)是植物本身固有的一种抗病毒防御系统,是对病毒在复制过程中形成双链RNA(dsRNA)的特殊反应。RNA沉默介导的dsRNA干涉病毒侵染转基因抗病毒有其不足,几种体外生产dsRNA的抗病毒体系能弥补这一不足,它们与转基因表达病原RNA不同,但仍然依赖RNA沉默机制来获取病原抗性。综述了近年来发展起来的各种启动RNA沉默的dsRNA产生策略。 展开更多
关键词 rna沉默 双链rna 抗病毒
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RNA干涉与基因功能研究进展 被引量:5
14
作者 牛宝龙 翁宏飚 +1 位作者 孟智启 吕顺霖 《浙江农业学报》 CSCD 2003年第4期263-267,共5页
RNA干涉是通过双链RNA的介导,在基因的转录后水平上,特异性抑制具有相应序列的基因表达,即通过双链RNA的介导特异性降解相应序列的mRNA,从而导致转录后水平的基因沉默。迄今,在真菌、植物、动物等真核生物中都发现存在这一基因沉默机制... RNA干涉是通过双链RNA的介导,在基因的转录后水平上,特异性抑制具有相应序列的基因表达,即通过双链RNA的介导特异性降解相应序列的mRNA,从而导致转录后水平的基因沉默。迄今,在真菌、植物、动物等真核生物中都发现存在这一基因沉默机制。RNA干涉对于抵抗病毒入侵、抑制转座子活动、生物体的发育和基因表达调控都有重要作用;它也为基因功能的研究开辟了一条新途径。文章综述了RNA干涉的机制及其在基因功能研究方面的最新进展。 展开更多
关键词 rna干涉 双链rna 基因功能
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转基因小鼠中应用RNAi的初步探讨 被引量:3
15
作者 陈志宝 王东旭 +3 位作者 万家余 潘朋朋 李莎 高宏伟 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第5期74-77,共4页
RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是通过双链RNA介导,特异性地降解相应序列的mRNA,从而导致转录后水平的基因沉默。近年来,利用小分子RNA(small interfering RNA,si RNA)介导的RNAi技术已越来越多的应用于哺乳动物细胞中。同时,在活体中利... RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是通过双链RNA介导,特异性地降解相应序列的mRNA,从而导致转录后水平的基因沉默。近年来,利用小分子RNA(small interfering RNA,si RNA)介导的RNAi技术已越来越多的应用于哺乳动物细胞中。同时,在活体中利用RNAi研究多种生物基因功能也成为一种有效的手段。文章旨在介绍在转基因小鼠中RNAi的应用。 展开更多
关键词 rna干扰 rna双链 转基因小鼠
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日本血吸虫小热休克蛋白Sjp40的RNA干扰效应 被引量:3
16
作者 陈敏芳 麦荣嘉 +1 位作者 莫倩珍 周晓红 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期456-461,共6页
目的研究日本血吸虫小热休克蛋白(sHSP)Sjp40基因的RNA干扰效应及其干扰后日本血吸虫HSP60、HSP70、HSP90基因在mRNA水平出现的协同效应,观察各期虫体Sjp40、SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90基因mRNA表达水平。方法以双链RNA(dsRNA)实现RNA... 目的研究日本血吸虫小热休克蛋白(sHSP)Sjp40基因的RNA干扰效应及其干扰后日本血吸虫HSP60、HSP70、HSP90基因在mRNA水平出现的协同效应,观察各期虫体Sjp40、SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90基因mRNA表达水平。方法以双链RNA(dsRNA)实现RNA干扰。体外转录合成dsRNA,将Sjp40的dsRNA(dsSjp40)及阴性对照GFP的dsRNA(dsGFP)通过浸泡法转染到日本血吸虫成虫中,体外培养7 d后用TRIZOL法提取其总RNA及总蛋白,实时荧光定量PCR(qPCR)检测Sjp40基因及SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90基因mRNA的表达,Western blot检测Sjp40蛋白表达产物。提取各期虫体总RNA,qPCR检测Sjp40、SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90基因的mRNA表达。结果转染后Sjp40 dsRNA转染组目的基因的转录水平较阴性对照GFP dsRNA转染组下降了80%左右;蛋白质水平较空白对照及阴性对照组(dsGFP)出现明显降低,qPCR结果显示在Sjp40基因RNA干扰后SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90基因的mRNA表达水平未发现明显变化。此四种HSPs在日本血吸虫生活史不同时期mRNA表达存在明显差异,Sjp40基因在虫卵期mRAN水平表达相对其他HSPs基因高。结论 dsSjp40 RNAi可特异性抑制Sjp40的表达,但对SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90基因mRNA的表达没有明显的影响。 展开更多
关键词 日本血吸虫 小热休克蛋白 rna干扰 DSrna
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白背飞虱体内RNA干扰技术体系的建立 被引量:3
17
作者 贾东升 任堂雨 +2 位作者 陈红燕 魏太云 谢联辉 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2013年第6期579-583,共5页
应用双链RNA(dsRNA)诱导的RNA干扰(RNAi)技术原理,将体外合成的源于白背飞虱肌动蛋白(Actin)基因的dsRNA通过膜饲喂法饲喂其2龄若虫.通过优化人工饲料、dsRNA浓度和饲喂时间,成功地干扰了白背飞虱Actin基因的表达,并引发白背飞虱的死亡... 应用双链RNA(dsRNA)诱导的RNA干扰(RNAi)技术原理,将体外合成的源于白背飞虱肌动蛋白(Actin)基因的dsRNA通过膜饲喂法饲喂其2龄若虫.通过优化人工饲料、dsRNA浓度和饲喂时间,成功地干扰了白背飞虱Actin基因的表达,并引发白背飞虱的死亡,从而建立了白背飞虱体内的RNAi体系. 展开更多
关键词 白背飞虱 rna干扰 ACTIN基因 双链rna 膜饲喂法
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双链RNA在基因沉默中的作用 被引量:2
18
作者 汤富酬 李成建 薛友纺 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期659-663,共5页
介绍依赖于同源识别的基因沉默 .依赖于同源识别的基因沉默 ,是指向生物体内导入外源核酸时引起相应序列的内源基因的表达被特异性抑制的一种基因调控现象 .基因沉默分为转录基因沉默和转录后基因沉默 ,二者都通过双链RNA介导 .它们是... 介绍依赖于同源识别的基因沉默 .依赖于同源识别的基因沉默 ,是指向生物体内导入外源核酸时引起相应序列的内源基因的表达被特异性抑制的一种基因调控现象 .基因沉默分为转录基因沉默和转录后基因沉默 ,二者都通过双链RNA介导 .它们是真核生物中普遍存在的抵抗病毒入侵、抑制转座子活动、调控基因表达的监控机制 .这些机制具有巨大的应用前景 . 展开更多
关键词 小干涉rna 甲基化 双链rna 基因沉默 作用
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双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)的克隆表达及其对丙型肝炎病毒蛋白合成的抑制作用 被引量:3
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作者 贾因棠 魏来 +2 位作者 蒋栋 丛旭 费然 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期24-30,共7页
α干扰素为治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的主要药物,但部分患者呈干扰素耐受而不能获得持久的病毒阴转,其可能的原因之一是病毒通过其编码的蛋白(NS5A及E2)抑制干扰素诱导的抗病毒效应分子———双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)的活性.而关于... α干扰素为治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的主要药物,但部分患者呈干扰素耐受而不能获得持久的病毒阴转,其可能的原因之一是病毒通过其编码的蛋白(NS5A及E2)抑制干扰素诱导的抗病毒效应分子———双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)的活性.而关于PKR是否在IFN-α抗HCV的机理中起抑制作用目前仍有争议.为研究PKR对HCV蛋白合成环节是否有抑制作用,通过构建野生型PKR真核表达载体(pPKRwt)及主要起负性调节作用的缺失突变PKR真核表达载体(pPKRΔ6),并将pPKRwt/pPKRΔ6与HCV复制子RNA同时转染Huh7细胞进行共表达,用Western印迹检测HCV IRES下游的NPTⅡ蛋白表达水平,与转染空载体的对照细胞及单用IFN-α处理的细胞相比较.结果显示:表达PKRwt的细胞中NPTⅡ蛋白水平低于转染空载体的对照细胞,但高于经IFN-α单独处理的细胞;表达PKRΔ6的细胞中NPTⅡ蛋白水平与对照细胞无明显差别,但PKRΔ能部分抵消IFN-α的抑制作用,说明在IFN-α抑制HCV IRES指导的蛋白合成中,PKR有一定的抑制作用,但可能还有其它的PKR非依赖机制参与. 展开更多
关键词 双链rna依赖的蛋白激酶 丙型肝炎病毒 复制子 Α干扰素 内部核糖体进入位点
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反向遗传学技术及在RNA病毒研究中的应用 被引量:6
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作者 张英 李莉 +2 位作者 李旭 韩松 鲁会军 《动物医学进展》 CSCD 2008年第3期60-63,共4页
RNA病毒的反向遗传学技术是指由病毒的cDNA克隆获取RNA病毒的一项技术,该技术通过人为加入DNA基因片段,实现了在DNA水平上对RNA病毒基因组的人工操作。反向遗传系统可以对RNA病毒直接进行遗传操作,为RNA病毒的分子生物学研究提供了一种... RNA病毒的反向遗传学技术是指由病毒的cDNA克隆获取RNA病毒的一项技术,该技术通过人为加入DNA基因片段,实现了在DNA水平上对RNA病毒基因组的人工操作。反向遗传系统可以对RNA病毒直接进行遗传操作,为RNA病毒的分子生物学研究提供了一种强大的工具。自20世纪70年代后期第一例RNA病毒感染性克隆构建成功以来,RNA病毒的分子生物学研究取得了长足的进展,这在很大程度上归功于各种RNA病毒反向遗传系统的建立。文章介绍了反向遗传学技术的基本特点、技术方法及其在正、负链RNA病毒的基因功能、致病机制及新型病毒载体等方面的研究及应用情况。 展开更多
关键词 反向遗传学技术 正链rna病毒 负链rna病毒 感染性克隆
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