鲤春病毒血症病毒(spring viremia of carp virus,SVCV)是一种高致病性病原,对鲤科鱼类造成巨大危害,被世界动物卫生组织列为必须通报疫病。2002年,鲤春病毒血症(spring viremia of carp,SVC)在中国首次检出后,迅速在全国蔓延,给我国鲤...鲤春病毒血症病毒(spring viremia of carp virus,SVCV)是一种高致病性病原,对鲤科鱼类造成巨大危害,被世界动物卫生组织列为必须通报疫病。2002年,鲤春病毒血症(spring viremia of carp,SVC)在中国首次检出后,迅速在全国蔓延,给我国鲤鱼养殖业造成巨大威胁。因此,我国农业农村部将其列为二类动物疫病。迄今为止,早期、快速、准确的诊断仍然是控制其传播和流行的重要手段。本研究基于CRISPR/Cas13a系统结合重组酶介导等温核酸扩增技术(recombinase-aided amplification,RAA),通过对GenBank上登录的SVCV全基因序列比对,针对SVCV聚合酶L基因高度保守的区域设计了一组RAA扩增引物和相应crRNA;建立了一种可用于SVCV现场快速检测的RAA-CRISPR/Cas13a的方法,可以覆盖SVCV的4种不同基因型(Ia、Ib、Ic和Id)。按照世界动物卫生组织推荐的检测方法验证程序,经实验验证该检测方法有较好的重复性,最低检出限为115 copies/μL,与其他病原之间不发生交叉反应。通过对实验室分离保存的60份来自进出境水生动物疫病监测、国内重大水生动物疫病监测以及攻毒实验的样本进行检测,RAA-CRISPR/Cas13a检测结果与实时荧光定量PCR、套式RT-PCR和病毒分离培养结果完全一致,诊断灵敏度和诊断特异性均达到100%。采用本研究建立的方法在4个不同实验室开展比对,在相同条件下对20份样本进行检测,4个实验室的检测结果一致。结果表明,本研究建立的方法重现性良好,为首次采用CRISPR-Cas13a系统进行SVCV检测的研究,对SVCV快速诊断和防控具有重要现实意义。展开更多
文摘鲤春病毒血症病毒(spring viremia of carp virus,SVCV)是一种高致病性病原,对鲤科鱼类造成巨大危害,被世界动物卫生组织列为必须通报疫病。2002年,鲤春病毒血症(spring viremia of carp,SVC)在中国首次检出后,迅速在全国蔓延,给我国鲤鱼养殖业造成巨大威胁。因此,我国农业农村部将其列为二类动物疫病。迄今为止,早期、快速、准确的诊断仍然是控制其传播和流行的重要手段。本研究基于CRISPR/Cas13a系统结合重组酶介导等温核酸扩增技术(recombinase-aided amplification,RAA),通过对GenBank上登录的SVCV全基因序列比对,针对SVCV聚合酶L基因高度保守的区域设计了一组RAA扩增引物和相应crRNA;建立了一种可用于SVCV现场快速检测的RAA-CRISPR/Cas13a的方法,可以覆盖SVCV的4种不同基因型(Ia、Ib、Ic和Id)。按照世界动物卫生组织推荐的检测方法验证程序,经实验验证该检测方法有较好的重复性,最低检出限为115 copies/μL,与其他病原之间不发生交叉反应。通过对实验室分离保存的60份来自进出境水生动物疫病监测、国内重大水生动物疫病监测以及攻毒实验的样本进行检测,RAA-CRISPR/Cas13a检测结果与实时荧光定量PCR、套式RT-PCR和病毒分离培养结果完全一致,诊断灵敏度和诊断特异性均达到100%。采用本研究建立的方法在4个不同实验室开展比对,在相同条件下对20份样本进行检测,4个实验室的检测结果一致。结果表明,本研究建立的方法重现性良好,为首次采用CRISPR-Cas13a系统进行SVCV检测的研究,对SVCV快速诊断和防控具有重要现实意义。
