以中国对虾血液、眼柄、卵巢、雌虾头胸部、雄虾头胸部和三倍体对虾头胸部组织为材料，采用异硫氰酸胍一酸酚法提取总RNA；用磁珠法纯化mRNA；用UniZAPcDNA合成试剂盒合成双链cDNA并进行修饰，将cDNA定向连接在UniZAP载体上；经Gigapack...以中国对虾血液、眼柄、卵巢、雌虾头胸部、雄虾头胸部和三倍体对虾头胸部组织为材料，采用异硫氰酸胍一酸酚法提取总RNA；用磁珠法纯化mRNA；用UniZAPcDNA合成试剂盒合成双链cDNA并进行修饰，将cDNA定向连接在UniZAP载体上；经Gigapack GoldPackage包装试剂盒包装成为噬菌体颗粒，转染宿主XLl Blue MRF’菌株细胞，形成初级文库．初级文库经转染进一步扩增，形成稳定的cDNA文库．6个文库的库容在0．2×10^6～1．3×10^6之间，重组率都超过90％．从各文库随机取出6～10个清晰的噬菌斑进行PCR扩增，用琼脂糖凝胶电泳检测，其插入片段长度为500～2500bp．由初步功能基因克隆获得阳性结果．多项指标表明，所构建的对虾cDNA文库质量较高，为进一步筛选目的基因、EST测序和制作基因芯片提供了有效的工具．展开更多
为了获得国家二级保护植物品种菰的功能基因信息,并克隆功能基因片段,研究以SMART(switching mechanism at 5 end of RNA transcript)方式合成菰全长cDNA,结合DSN(duplex-specific nuclease)均一化技术,构建菰叶片组织的均一化全长cDNA...为了获得国家二级保护植物品种菰的功能基因信息,并克隆功能基因片段,研究以SMART(switching mechanism at 5 end of RNA transcript)方式合成菰全长cDNA,结合DSN(duplex-specific nuclease)均一化技术,构建菰叶片组织的均一化全长cDNA文库。该cDNA文库库容量大,达到了3.6×10~6 PFU/m L,插入片段平均长度为1 000 bp,重组率为97.9%。均一化全长cDNA文库能有效富集低丰度表达基因,降低冗余率,适用于目的基因的筛选,以及后续的基因、蛋白互作分析。展开更多
文摘以中国对虾血液、眼柄、卵巢、雌虾头胸部、雄虾头胸部和三倍体对虾头胸部组织为材料，采用异硫氰酸胍一酸酚法提取总RNA；用磁珠法纯化mRNA；用UniZAPcDNA合成试剂盒合成双链cDNA并进行修饰，将cDNA定向连接在UniZAP载体上；经Gigapack GoldPackage包装试剂盒包装成为噬菌体颗粒，转染宿主XLl Blue MRF’菌株细胞，形成初级文库．初级文库经转染进一步扩增，形成稳定的cDNA文库．6个文库的库容在0．2×10^6～1．3×10^6之间，重组率都超过90％．从各文库随机取出6～10个清晰的噬菌斑进行PCR扩增，用琼脂糖凝胶电泳检测，其插入片段长度为500～2500bp．由初步功能基因克隆获得阳性结果．多项指标表明，所构建的对虾cDNA文库质量较高，为进一步筛选目的基因、EST测序和制作基因芯片提供了有效的工具．
文摘为了获得国家二级保护植物品种菰的功能基因信息,并克隆功能基因片段,研究以SMART(switching mechanism at 5 end of RNA transcript)方式合成菰全长cDNA,结合DSN(duplex-specific nuclease)均一化技术,构建菰叶片组织的均一化全长cDNA文库。该cDNA文库库容量大,达到了3.6×10~6 PFU/m L,插入片段平均长度为1 000 bp,重组率为97.9%。均一化全长cDNA文库能有效富集低丰度表达基因,降低冗余率,适用于目的基因的筛选,以及后续的基因、蛋白互作分析。
