温肾通络止痛方经AMPK/mTOR信号通路调控自噬改善BMSCs细胞衰老

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作者 张天驰 田霖坤 +7 位作者 李沐哲 郭杨 王礼宁 吾米提·塔西 牛园园 高天乐 关钛元 马勇 《中国骨质疏松杂志》 北大核心 2025年第10期1428-1434,1465,共8页

目的探讨温肾通络止痛方(Wenshen Tongluo Zhitong Recipe,WTZR)经AMP依赖的蛋白激酶[Adenosine 5'-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK]/哺乳动物雷帕霉菌靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路调控... 目的探讨温肾通络止痛方(Wenshen Tongluo Zhitong Recipe,WTZR)经AMP依赖的蛋白激酶[Adenosine 5'-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK]/哺乳动物雷帕霉菌靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路调控自噬改善骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)衰老的机制研究。方法利用D-半乳糖制备衰老BMSCs模型并随机分为对照组、模型组、WTZR低剂量组、WTZR中剂量组、WTZR高剂量组。β-半乳糖苷酶染色检测WTZR干预后衰老BMSCs的衰老情况、Western blot与q PCR检测WTZR干预后衰老BMSCs中p16、p21和p53等衰老标志物的变化。ALP染色、茜素红染色及油红O染色观察WTZR干预后BMSCs成骨成脂分化的变化。Western blot及免疫荧光检测自噬相关指标微管相关蛋白1A/1B-轻链3B(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3B)和Beclin1的蛋白表达,评估WTZR对BMSCs自噬的改变。Western blot检测m TOR、p-mTOR、AMPK及p-AMPK的蛋白表达,检验WTZR对AMPK/m TOR信号通路的影响。结果与模型组相比,WTZR干预后,BMSCs衰老细胞数量降低,BMSCs中p16、p21和p53蛋白及mRNA含量显著减少(P<0.05,P<0.01,P<0.001,P<0.0001),WTZR干预后ALP阳性细胞数、茜素红阳性面积增加,油红O染色镜下脂滴数量减少。此外,WTZR可显著增加衰老BMSCs中自噬相关蛋白的含量(P<0.01,P<0.0001),同时温肾通络止痛方可显著提高p-AMPK/AMPK比值(P<0.05),并降低p-mTOR/m TOR的比值(P<0.0001)。结论WTZR可能通过AMPK/m TOR促进自噬从而发挥缓解BMSCs衰老的效果。 展开更多

关键词 骨质疏松 温肾通络止痛方 骨髓间充质干细胞 自噬 衰老

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西达本胺对骨髓增生异常综合征患者骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

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作者 赵思达 郭娟 +1 位作者 赵佑山 常春康 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期512-519,共8页

目的:探索西达本胺对骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓间充质干细胞(MSC)成骨分化的作用及机制。方法:分离培养正常对照者及MDS患者的骨髓MSC,CCK-8法检测西达本胺对MSC增殖活性的影响,组蛋白去乙酰化酶(HDAC)活性荧光检测试剂盒及Weste... 目的:探索西达本胺对骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓间充质干细胞(MSC)成骨分化的作用及机制。方法:分离培养正常对照者及MDS患者的骨髓MSC,CCK-8法检测西达本胺对MSC增殖活性的影响,组蛋白去乙酰化酶(HDAC)活性荧光检测试剂盒及Western blot检测西达本胺对MSC中HDAC的影响。对MSC成骨诱导分化,在d 3进行碱性磷酸酶活性检测,d 21进行茜素红染色观察钙结节形成情况,在d 7和21分别检测成骨相关早期及后期基因的mRNA表达变化。RT-PCR及Western blot分别检测西达本胺对MSC成骨关键转录因子Runt相关转录因子2(RUNX2)mRNA及蛋白表达的影响。结果:随着西达本胺浓度的增加,MSC增殖受到抑制,但低浓度(1μmol/L)西达本胺对MSC无显著的增殖抑制作用,但可显著抑制HDAC活性。在正常对照组及MDS患者的骨髓MSC中,西达本胺(1μmol/L)可以显著增加碱性磷酸酶活性、促进钙结节形成及上调成骨基因的mRNA表达,从而恢复MDS患者MSC较正常对照组MSC减弱的成骨分化能力。机制研究结果显示,西达本胺促成骨作用可能与RUNX2表达的上调有关。结论:西达本胺可以抑制MDS-MSC的HDAC活性,上调成骨转录因子RUNX2表达,促进MDS-MSC的成骨分化。 展开更多

关键词 西达本胺 骨髓增生异常综合征 骨髓间充质干细胞 成骨分化

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温肾通络止痛方抑制巨噬细胞衰老改善BMSC成骨分化和老年性骨质疏松模型小鼠骨丢失的研究 被引量：3

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作者 张天驰 李沐哲 +6 位作者 牛园园 郭杨 王礼宁 田霖坤 王遇珩 王泉荃 马勇 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期249-260,共12页

目的探讨温肾通络止痛方调控巨噬细胞衰老对老年性骨质疏松症(Senile osteoporosis,SOP)的干预作用。方法利用过氧化氢制备衰老巨噬细胞模型并随机分为对照组、模型组、含药血清低剂量组、含药血清高剂量组。β-半乳糖苷酶染色以及qPCR... 目的探讨温肾通络止痛方调控巨噬细胞衰老对老年性骨质疏松症(Senile osteoporosis,SOP)的干预作用。方法利用过氧化氢制备衰老巨噬细胞模型并随机分为对照组、模型组、含药血清低剂量组、含药血清高剂量组。β-半乳糖苷酶染色以及qPCR、Western blot检测衰老指标p21和p53的mRNA及蛋白表达水平,探讨含药血清对巨噬细胞衰老的影响。使用活性氧(Reactive oxygen species,ROS)染色和线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测巨噬细胞线粒体功能。qPCR检测巨噬细胞极化相关分子白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)、CD206、一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)的mRNA水平,免疫荧光检测巨噬细胞极化相关分子精氨酸酶(Arginase,ARG1)和iNOS的蛋白表达,评估含药血清对巨噬细胞极化的影响。qPCR检测成骨相关指标骨钙蛋白(Osteocalcin,OCN)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen typeⅠα1,Col1a1)、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)的mRNA水平以及ALP染色和茜素红染色,评估含药血清处理的巨噬细胞条件培养基对骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)成骨分化的影响。将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、温肾通络止痛方低剂量组、温肾通络止痛方高剂量组,D-半乳糖制备SOP小鼠模型。Micro-CT分析小鼠股骨微结构,HE染色检测小鼠股骨病理变化,Western blot检测小鼠胫骨衰老相关分子p21、p53和成骨相关指标OCN、Runx2蛋白表达水平,qPCR检测小鼠胫骨衰老相关分子p21、p53 mRNA和巨噬细胞极化相关分子IL-6、iNOS、CD206、IL-10 mRNA的表达水平,评估温肾通络止痛方对小鼠SOP模型的影响。结果与模型组相比,温肾通络止痛方含药血清干预后,衰老阳性细胞数量明显减少,p21和p53 mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。此外,含药血清可显著抑制H_(2)O_(2)诱导的巨噬细胞ROS的产生(P<0.05,P<0.001)、线粒体膜电位下降(P<0.05)。含药血清处理后,巨噬细胞M1相关基因iNOS的mRNA表达下调(P<0.01),M2相关基因CD163和CD206 mRNA表达上调(P<0.05),iNOS荧光强度显著降低(P<0.01),ARG1的荧光强度显著增加(P<0.05)。含药血清处理的巨噬细胞条件培养基可增加ALP阳性细胞数(P<0.01,P<0.001)、茜素红阳性面积(P<0.05),以及升高成骨相关基因Runx2、Col1a1和OCN mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。Micro-CT结果显示,与模型组相比,温肾通络止痛方组小鼠股骨BMD、BV/TV、Tb.N显著增加(P<0.05,P<0.01,P<0.001),Tb.Sp显著降低(P<0.05,P<0.01);HE结果显示,骨小梁明显改善,数量增多变宽。此外,温肾通络止痛方可显著抑制D-半乳糖诱导的小鼠胫骨衰老相关基因p21和p53 mRNA和蛋白上调(P<0.05,P<0.001,P<0.0001),促进成骨相关指标OCN、Runx2蛋白表达(P<0.01,P<0.0001),促进M1相关基因IL-6和iNOS下调(P<0.05),同时可促进M2相关基因IL-10和CD206表达(P<0.05,P<0.01)。结论温肾通络止痛方可能通过抑制巨噬细胞衰老,促进BMSC成骨分化,从而发挥抗骨质疏松效应。 展开更多

关键词 老年性骨质疏松 温肾通络止痛方 巨噬细胞 骨髓间充质干细胞 衰老

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Mage-D1对敲除小鼠骨髓间充质干细胞的矿化调控作用

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作者 陆明洁 袁洪燕 +5 位作者 徐丹 彭雪莲 邹续强 谢波 毛靖雯 温秀杰 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第18期2069-2080,共12页

目的探讨黑色素瘤相关抗原D1(melanoma associated antigen D1,Mage-D1)对小鼠股骨骨量和对大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stromal cells,BMSCs)矿化能力的影响及潜在分子机制。方法以雌性Mage-D1基因敲除杂合子小鼠和雄性野生... 目的探讨黑色素瘤相关抗原D1(melanoma associated antigen D1,Mage-D1)对小鼠股骨骨量和对大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stromal cells,BMSCs)矿化能力的影响及潜在分子机制。方法以雌性Mage-D1基因敲除杂合子小鼠和雄性野生型(wide type,WT)小鼠作为亲本小鼠,繁育Mage-D1基因敲除纯合子(Mage-D1 knock out,Mage-D1 KO)小鼠。PCR和琼脂糖凝胶电泳鉴定雄性Mage-D1基因敲除纯合子小鼠和同窝雄性野生型小鼠,micro-CT扫描用于分析小鼠股骨骨量,ELISA和化学法用于检测小鼠血清钙离子、磷离子、降钙素和甲状旁腺素水平。原代培养BMSCs并进行流式细胞术鉴定,免疫荧光染色观察Mage-D1在BMSCs中的表达。构建Mage-D1沉默慢病毒感染BMSCs,分为阴性对照组(sh-NC)和沉默组(sh-Mage-D1);细胞划痕实验检测BMSCs的迁移能力,流式细胞术和CCK-8检测BMSCs周期变化和增殖能力;矿化诱导后行碱性磷酸酶染色、茜素红染色;RT-qPCR和Western blot检测ALP、Runx2、Col1表达水平;RT-qPCR检测矿化相关基因p75NTR及MSX1以探讨潜在机制。结果与野生型小鼠相比,Mage-D1敲除纯合子小鼠股骨皮质骨厚度减小、皮质骨矿物含量降低、松质骨骨矿物含量降低、骨小梁数减少、松质骨骨表面密度降低、骨小梁分离度增大(P<0.05);敲除Mage-D1后,小鼠血钙、血磷、降钙素和甲状旁腺素水平无明显变化。Mage-D1表达于整个BMSCs内,在细胞核及胞核周围区域高表达。与sh-NC相比,sh-Mage-D1组细胞增殖能力降低(P<0.01),细胞迁移能力增强(P<0.01);矿化诱导后,sh-Mage-D1组ALP、Runx2、Col1基因(P<0.05)和蛋白(P<0.01)表达下降,碱性磷酸酶染色和茜素红染色更浅;sh-Mage-D1组细胞中p75NTR、Msx1表达水平比sh-NC组低。结论Mage-D1基因敲除可明显降低小鼠股骨骨量。Mage-D1可促进BMSCs增殖、抑制其迁移,正向调控其体外矿化,p75NTR-Dlx1/Msx1信号轴可能参与Mage-D1对骨代谢活动的调控。 展开更多

关键词 Mage-D1 骨髓间充质干细胞 基因敲除 矿化调控

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骨形态发生蛋白2/7异二聚体对人脂肪间充质干细胞成骨分化的促进作用 被引量：8

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作者 张晓 刘云松 +3 位作者 吕珑薇 陈彤 吴刚 周永胜 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期37-44,共8页

目的:探讨新型成骨诱导生长因子骨形态发生蛋白2/7异二聚体(bone morphogenetic protein 2/7heterodimer,BMP-2/7)在诱导人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived stem cells,h ASCs)成骨分化中的作用。方法:体外培养h ASCs,以成骨诱... 目的:探讨新型成骨诱导生长因子骨形态发生蛋白2/7异二聚体(bone morphogenetic protein 2/7heterodimer,BMP-2/7)在诱导人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived stem cells,h ASCs)成骨分化中的作用。方法:体外培养h ASCs,以成骨诱导培养基(osteogenic medium,OM)中添加150μg/L BMP-2/7为实验组,以单纯OM为阳性对照组(OM组),以常规增殖培养基(proliferation medium,PM)为阴性对照组(PM组)。体外诱导的第1、4和7天检测细胞DNA含量,第7和14天进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及定量检测,第21和28天进行茜素红染色及定量检测,第1、4、7和14天分别进行成骨相关基因的检测。体内实验使用6只裸鼠,于其背部正中做皮肤切口,向两侧分离出4个皮下植入腔,分别植入:(1)单纯β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)支架(支架对照组);(2)β-TCP支架+h ASCs(体外PM培养1周)(增殖细胞对照组);(3)β-TCP支架+h ASCs(体外OM培养1周)(诱导细胞对照组);(4)β-TCP支架+h ASCs(体外OM+150μg/L BMP-2/7培养1周)(实验组)。植入后4周进行取材,标本制成组织学切片,进行HE和Masson三色染色分析。结果:体外诱导后第1天,实验组细胞DNA含量与PM组差异没有统计学意义(P>0.05),第4天时实验组细胞DNA含量较PM组升高(P<0.05),第7天时组间DNA含量没有明显差异(P>0.05)。诱导7天和14天后,实验组的ALP染色及定量检测均高于OM组和PM组(P<0.05);第21和28天矿化结节染色及钙沉积定量检测均高于OM和PM组(P<0.05)。诱导第1天时实验组的成骨相关基因(Runx2、ALP、COL-1A1)的表达量即高于PM组(P<0.05),诱导第4天时骨钙素(osteocalcin,OC)基因表达量即开始升高,第4、7和14天的基因表达量较OM和PM组显著升高(P<0.05)。HE染色分析可见实验组和诱导细胞对照组的h ASCs能分泌出嗜酸性较强的均质细胞外基质,出现了强嗜酸性的类骨组织;与诱导细胞对照组相比,实验组的细胞外基质嗜酸性更强,类骨组织的面积更大,结构更加典型;其他两对照组均未见矿化基质和类骨组织生成。Masson三色染色分析可见实验组呈强阳性表现,细胞基质中充满绿染的胶原;诱导细胞对照组和增殖细胞对照组的细胞基质中有不同程度的阳性表现,但较之实验组,胶原的数量明显减少;单纯支架组未见胶原的表达。结论:BMP-2/7在h ASCs的成骨分化过程中发挥了重要作用,能够有效促进h ASCs的体外和体内成骨分化。 展开更多

关键词 脂肪组织 间充质干细胞 骨形态发生蛋白质类 细胞分化 异二聚体

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人骨髓间充质干细胞褪黑素受体的表达及其意义 被引量：10

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作者 李海波 邱勇 +3 位作者 李卫国 孙光权 黄爱兵 邱旭升 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 2008年第9期707-711,I0007,共6页

目的:检测体外培养的人骨髓间充质干细胞(bone mesenchymals stromal cells,BMSCs)褪黑素受体的表达,并探讨其意义。方法:10例12～18岁志愿者,分别从髂前上棘处穿刺抽取10ml骨髓,肝素抗凝。采用密度梯度离心法分离BMSCs,体外培养并传至P... 目的:检测体外培养的人骨髓间充质干细胞(bone mesenchymals stromal cells,BMSCs)褪黑素受体的表达,并探讨其意义。方法:10例12～18岁志愿者,分别从髂前上棘处穿刺抽取10ml骨髓,肝素抗凝。采用密度梯度离心法分离BMSCs,体外培养并传至P3代进行表型鉴定。抽提细胞总RNA,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测褪黑素受体MT1、MT2 mRNA的表达;同时应用免疫组化染色方法检测细胞MT1、MT2蛋白的表达。结果:分离的单个核细胞经培养至P3代,使用流式细胞仪进行细胞表型鉴定,体外培养细胞的表型与BMSCs的表面标志相符。细胞抽提总RNA以MT1和MT2两种受体的RT-PCR扩增产物电泳呈阳性条带;免疫组化结果显示细胞存在MT1和MT2蛋白的表达,主要分布在细胞膜和细胞浆,呈棕褐色阳性颗粒,而细胞核上未见阳性颗粒。结论:人BMSCs中存在褪黑素受体MT1、MT2的表达,它是褪黑素作用的靶细胞。这为进一步研究BMSCs褪黑素信号通路提供了实验基础。 展开更多

关键词 褪黑素 受体 骨髓间充质干细胞

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犬牙槽骨干细胞与髂骨骨髓干细胞体外成骨能力的比较 被引量：5

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作者 郑文龙 吴涛 +1 位作者 邹多宏 陈乔尔 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第9期1252-1257,共6页

目的比较犬牙槽骨来源干细胞(ABSC)和骨髓间充质干细胞(BMSC)的体外成骨能力,为骨组织工程的种子细胞选择提供新思路。方法取同一只犬的牙槽骨骨组织和髂骨骨髓作为ABSC和BMSC的来源。取第3代细胞进行一系列体外检测:MTT法检测两种细胞... 目的比较犬牙槽骨来源干细胞(ABSC)和骨髓间充质干细胞(BMSC)的体外成骨能力,为骨组织工程的种子细胞选择提供新思路。方法取同一只犬的牙槽骨骨组织和髂骨骨髓作为ABSC和BMSC的来源。取第3代细胞进行一系列体外检测:MTT法检测两种细胞的增殖能力;成骨诱导和常规培养条件下,不同时间点进行茜素红和碱性磷酸酶染色,观察钙盐沉积和碱性磷酸酶合成能力,同时对细胞内碱性磷酸酶活力进行半定量检测;成骨诱导后7、14、21 d利用RT-PCR法检测关键性成骨因子[Ⅰ型胶原(COL-1)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)]的表达情况。结果相较BMSC,ABSC增殖能力略高,钙结节和碱性磷酸酶的表达能力更强。COL-1早期在ABSC中的表达高于BMSC,并随着时间呈下降趋势。ALP在ABSC中的表达始终高于BMSC,且在14 d达到最高峰。OCN总体呈上升趋势,14 d和21 d有明显表达,且ABSC高于BMSC。结论犬ABSC的成骨能力与BMSC差别不大,提示犬ABSC可以成为骨组织工程优先选择的种子细胞之一。 展开更多

关键词 骨髓干细胞 牙槽骨干细胞 成骨分化

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脑胶质瘤细胞体外促进人骨髓间充质干细胞肿瘤相关基因表达 被引量：4

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作者 朱汝森 许成杰 +3 位作者 兰柳波 陈兴贵 梁远生 尹延庆 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期50-55,共6页

目的观察与人脑胶质瘤细胞共培养后的人骨髓间充质干细胞(human bone marrow-derived mesenchymal stromal cells,h MSCs)中肿瘤相关基因表达的变化,初步评估h MSCs在人脑胶质瘤环境中的生物安全性在致瘤性方面的风险。方法将h MSCs与... 目的观察与人脑胶质瘤细胞共培养后的人骨髓间充质干细胞(human bone marrow-derived mesenchymal stromal cells,h MSCs)中肿瘤相关基因表达的变化,初步评估h MSCs在人脑胶质瘤环境中的生物安全性在致瘤性方面的风险。方法将h MSCs与人脑胶质瘤细胞U251于体外共同培养5d后,通过肿瘤基因芯片、实时定量RT-PCR及Western-blot实验检测h MSCs中肿瘤相关基因表达水平的变化。结果基因芯片结果显示,与单独培养的h MSCs对比,与人脑胶质瘤细胞U251共同培养后的h MSCs中存在SPINT2、TK1、STC1、MMP1、CCND1、SORT1、SEPT6、CDC20、SHB、CDK5、RELA、XRCC4、KIT、CTPS、CAPNS1及ETV6等16个肿瘤相关基因的表达明显上调(3倍以上),而无一基因表达下调;实时定量RT-PCR结果显示癌基因KIT、CAPNS1、TK1、MMP1、CCND1、CDC20、RELA以及STC1在共培养组h MSCs中呈表达上调;Western-blot结果显示癌基因KIT、MMP1、CCND1以及RELA的蛋白水平在共培养组h MSCs中呈表达上调。结论 h MSCs在脑胶质瘤细胞的影响下可出现部分癌基因的高度表达,提示了对于h MSCs应用于对脑胶质瘤进行基因治疗的生物安全性在致瘤性方面的风险需引起关注及深入研究。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 脑胶质瘤基因治疗 致瘤性肿瘤相关基因 基因表达

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不同剂量BMSC尾静脉输注对小鼠肺组织纤维化的影响 被引量：5

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作者 徐佳波 李燕芹 +3 位作者 李莉 刘斌 熊剑飞 叶青 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1157-1162,共6页

目的研究经尾静脉输注不同剂量的骨髓间充质干细胞(BMSC)对小鼠肺纤维化的影响。方法体外培养雄性转红色荧光蛋白(RFP)基因FVB小鼠BMSC。将24只FVB雌性受体小鼠随机分为正常组、模型组、BMSC治疗1组(BMSC 1组)和BMSC治疗2组(BMSC 2组)(n... 目的研究经尾静脉输注不同剂量的骨髓间充质干细胞(BMSC)对小鼠肺纤维化的影响。方法体外培养雄性转红色荧光蛋白(RFP)基因FVB小鼠BMSC。将24只FVB雌性受体小鼠随机分为正常组、模型组、BMSC治疗1组(BMSC 1组)和BMSC治疗2组(BMSC 2组)(n=6)。模型组、BMSC 1组和BMSC 2组小鼠分别经气管内注射博莱霉素制备肺纤维化模型。建模24 h后,BMSC 1组和BMSCs 2组小鼠分别经尾静脉注射BMSC 1×106/只和2×106/只。于建模后第21天处死所有小鼠,制备小鼠肺组织标本。光学显微镜观察病理学变化;激光共聚焦显微镜和免疫组织化学法进行RFP(+)BMSC分布观察和RFP定量分析;免疫组织化学法检测肺表面活性物质蛋白A(SP-A)表达;碱水解法测定羟脯氨酸(Hyp)含量;Real-time PCR检测转化生长因子-β(TGF-β)和血小板衍生生长因子(PDGF)mRNA表达。结果小鼠肺组织纤维化程度,BMSC 1组较模型组显著减轻,而BMSC 2组较模型组明显加重。BMSC 2组在肺间质纤维化活跃区域可见大量RFP(+)BMSC且其形态类似成纤维细胞。SP-A表达,正常组>BMSC 1组>BMSC 2组和模型组(均P<0.05),而BMSC 2组与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。Hyp含量,正常组<BMSC 1组<模型组<BMSC 2组(P<0.01,P<0.05);TGF-β和PDGF mRNA表达,BMSC 2组>BMSC 1组>模型组>正常对照组(均P<0.05)。结论适量的BMSC尾静脉输注能有效减轻博来霉素诱导的小鼠肺纤维化,而过量的BMSC则可能使其病变加重。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 肺纤维化 量效关系 红色荧光蛋白 肺表面活性物质蛋白 羟脯氨酸 转化生长因子-β 血小板衍生生长因子

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辛伐他汀纳米脂质体对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响 被引量：1

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作者 徐璐 王超 +1 位作者 沈文文 祁荣 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期883-888,共6页

目的:通过对骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的表达进行测定,研究纳米脂质体剂型对辛伐他汀(simvastatin,SMV)在骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)形成骨过... 目的:通过对骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的表达进行测定,研究纳米脂质体剂型对辛伐他汀(simvastatin,SMV)在骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)形成骨过程中的促进作用。方法:采用全骨髓贴壁培养法体外培养小鼠原代BMSC。以SMV原料药处理组作为对照组,分别设SMV药物浓度1μmol/L和2μmol/L为SMV低剂量组(SMV low dosage group,S1)和SMV高剂量组(SMV high dosage group,S2);将辛伐他汀纳米脂质体(simvastatin nano-liposomes,SMV-liposome)处理组作为实验组,根据SMV药物包载浓度1μmol/L和2μmol/L分别设为SMV-liposome低剂量组(SMV-liposome low dosage group,SL1)和SMV-liposome高剂量组(SMV-liposome high dosage group,SL2);此外,实验中所有涉及到不做任何处理的组,都作为空白组(blank)。将SMV和SMV-liposome分别与BMSC共孵育48 h后,用碱性磷酸酶比色法测定其ALP比活性,用碱性磷酸酯酶显色试剂盒(BCIP/NBT alkaline phosphatase color development kit,BCIP/NBT Kit)检测其ALP蛋白表达量,用Western Blot检测其BMP-2蛋白的表达量。结果:细胞毒性实验结果显示,对照组与实验组在与BMSC共孵育48 h后,各组细胞生存率均高于84%,且组间差异无统计学差意义(P>0.05)。在给药浓度相同时,实验组ALP比活性显著高于对照组,其中S1组和SL1组ALP比活性分别为0.27±1.11和0.21±2.15(P<0.001),S2组和SL2组ALP比活性分别为0.63±1.64和0.72±2.88(P<0.05)。ALP BCIP/NBT染色结果表明,与对照组相比,实验组ALP染色更深,且组内呈现剂量依赖性。实验组BMP-2蛋白表达量显著高于对照组。同时,ALP比活性、ALP BCIP/NBT染色及BMP-2蛋白表达结果表明,对照组和实验组内均呈现剂量依赖性,即高剂量组结果优于低剂量组。结论:纳米脂质体剂型能显著提高SMV促进BMSC的成骨分化作用。 展开更多

关键词 辛伐他汀 间充质干细胞 脂质体 骨形态发生蛋白质类 碱性磷酸酶

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SDF-1表达升高促进骨髓间充质干细胞(BMSC)迁移减轻哮喘大鼠气道炎症 被引量：4

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作者 朱慧志 王坤 +2 位作者 朱舜之 王大伟 刘向国 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期213-219,共7页

目的 观察基质细胞衍生因子1(SDF-1)与骨髓间充质干细胞(BMSC)迁移及哮喘大鼠气道炎症的相关性。方法 取24只清洁级SD大鼠,随机均分为正常对照组、模型组、BMSC组;除对照组外,其余两组予卵清蛋白致敏激发制备哮喘模型,BMSC组于造模完成... 目的 观察基质细胞衍生因子1(SDF-1)与骨髓间充质干细胞(BMSC)迁移及哮喘大鼠气道炎症的相关性。方法 取24只清洁级SD大鼠,随机均分为正常对照组、模型组、BMSC组;除对照组外,其余两组予卵清蛋白致敏激发制备哮喘模型,BMSC组于造模完成当天由尾静脉注射1 mL 106个BMSC。采用HE染色观察肺组织病理形态变化;Wright-Giemsa染色,光镜下计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中各种炎细胞数量;ELISA检测BALF中白细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-13、IgE、IgG1、IgG2a含量;反转录PCR检测肺组织中SDF-1、信号转导子与转录激活子6(STAT6)的mRNA表达;免疫荧光细胞化学染色检测支气管上皮细胞中SDF-1的蛋白表达;Western blot法检测肺组织SDF-1、STAT6蛋白水平。结果 与对照组相比,模型组BALF中炎细胞计数及IL-4、IL-5、IL-13、IgE、IgG1、IgG2a含量显著升高;肺组织SDF-1、STAT6 mRNA和蛋白表达量显著升高;支气管上皮细胞SDF-1表达明显升高。与模型组相比,BMSC组BALF中炎细胞数目及炎性细胞因子含量均减少;肺组织STAT6 mRNA和蛋白表达降低,SDF-1基因表达量有所升高;支气管上皮细胞SDF-1蛋白表达增加。结论 哮喘炎症过程中,受损部位的趋化因子SDF-1的表达升高,并促进BMSC向哮喘大鼠肺组织迁移。BMSC通过归巢至受损肺组织发挥调节Th1细胞/Th2细胞免疫失衡的作用,从而抑制哮喘气道炎症。 展开更多

关键词 哮喘 骨髓间充质干细胞(BMSC) 基质细胞衍生因子1(SDF-1) 气道炎症

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17β-雌二醇通过上调CXCR4表达促进骨髓间充质干细胞的趋化迁移 被引量：4

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作者 孙欣慰 杨铧琦 徐惠成 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期664-668,共5页

目的研究17β-雌二醇(17β-estradiol,17β-E2)对体外骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)趋化因子受体CXCR4表达的影响及CXCR4表达变化对BMSCs趋化迁移的调控情况。方法全骨髓法+贴壁法分离、培养BMSCs,不同浓度(10-1... 目的研究17β-雌二醇(17β-estradiol,17β-E2)对体外骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)趋化因子受体CXCR4表达的影响及CXCR4表达变化对BMSCs趋化迁移的调控情况。方法全骨髓法+贴壁法分离、培养BMSCs,不同浓度(10-10、10-9、10-8、10-7、5×10-7、10-6mol/L)的17β-雌二醇诱导经雌激素受体拮抗剂ICI182780处理和未经处理的BMSCs后于不同时相点(24、48 h),用RT-PCR法和Western blot法分别检测细胞趋化因子受体CXCR4的表达情况,利用Transwell小室体外迁移体系观察10-7mol/L 17β-雌二醇诱导前后的BMSCs对于不同浓度基质细胞衍生因子SDF-1的定向迁移情况,及采用AMD3100阻断SDF-1特异性受体CXCR4后对雌激素诱导前后BMSCs定向迁移的影响。结果 BMSCs在不同浓度17β-雌二醇诱导24、48 h后,其CXCR4 mRNA的表达均有不同程度的升高,其中以24 h时10-7mol/L组升高最为明显(P<0.05)。CXCR4蛋白表达在24 h各浓度组以升高为主,24 h时5×10-7mol/L组升高最为明显,48 h各浓度组以降低为主。雌激素受体拮抗剂ICI 182780能够明显抑制17β-雌二醇对CXCR4表达的影响(P<0.05)。BMSCs对SDF-1的定向迁移有明显的浓度依赖性,且相同条件下17β-雌二醇诱导后的BMSCs迁移细胞数显著高于未经诱导的BMSCs,而CXCR4阻断剂AMD3100可明显抑制17β-雌二醇干预前后BMSCs的趋化迁移(P<0.05)。结论 17β-雌二醇在一定的诱导时间内可提高BMSCs CXCR4的表达,进而增强SDF-1对BMSCs的体外趋化作用。 展开更多

关键词 雌激素 骨髓间充质干细胞 SDF-1 CXCR4[迁移

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外周血多潜能间充质基质细胞在骨组织工程中的应用进展 被引量：3

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作者 韩雪 刘洪臣 《国际口腔医学杂志》 CAS 2011年第1期71-74,共4页

外周血来源的多潜能间充质基质细胞数量较少,它们表达骨髓来源的多潜能间充质基质细胞的大部分表面标记物,具有多样复杂的基因表达特征。虽然它们的起源和生理病理机制不清,但成人外周血间充质基质细胞的存在使其在组织工程领域备受争... 外周血来源的多潜能间充质基质细胞数量较少,它们表达骨髓来源的多潜能间充质基质细胞的大部分表面标记物,具有多样复杂的基因表达特征。虽然它们的起源和生理病理机制不清,但成人外周血间充质基质细胞的存在使其在组织工程领域备受争议和关注。本文就外周血来源的多潜能间充质基质细胞在骨组织工程中的应用作一综述。 展开更多

关键词 外周血 成纤维样集落形成单位 多潜能间充质基质细胞 骨组织工程

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骨髓基质干细胞分化为神经元样细胞迁移能力变化的研究

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作者 龚黎民 李士勇 +1 位作者 刘容容 王晔 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1092-1095,共4页

目的研究体外定向诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经元样细胞的方法,探讨其分化后迁移能力变化的分子机制。方法体外培养BMSCs,以β-巯基乙醇(BME)1 mmol·L-1诱导分化,于诱导后12 h、24 h分别观察细胞形态变化,RT-PCR鉴定神... 目的研究体外定向诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经元样细胞的方法,探讨其分化后迁移能力变化的分子机制。方法体外培养BMSCs,以β-巯基乙醇(BME)1 mmol·L-1诱导分化,于诱导后12 h、24 h分别观察细胞形态变化,RT-PCR鉴定神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(Neurofilament)、胶质纤维酸性蛋白(β-tubulinⅢ)mRNA的变化。Western blot检测CXCR4表达变化,细胞迁移实验检测BMSCs诱导前后迁移能力的变化。结果诱导后,BMSCs胞体收缩,突起伸出;RT-PCR发现诱导出的神经元样细胞的NSE、Neurofilament、β-tubulinⅢmRNA明显增加;Western blot结果表明神经元样细胞表面CXCR4的表达明显增加,细胞迁移实验发现神经元样细胞向SDF-1α的迁移能力明显增加。用CXCR4特异的抑制剂AMD3100处理后细胞迁移被明显抑制。结论在体外骨髓基质干细胞以BME为诱导剂可定向分化为神经元样细胞,且发现其迁移能力明显增加,其机制可能与其表面CXCR4表达上调有关。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 分化 神经元样细胞 迁移 SDF1 CXCR4

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基质细胞衍生因子和趋化因子受体在骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死中的作用

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作者 马莎 王玉璟 《中国心血管杂志》 2012年第6期474-476,共3页

胎儿和新生儿的心肌能够指导DNA合成和细胞分裂，然而到发育时期，它们的分裂能力逐渐减低。成年人和哺乳动物的心肌已被认为是终末期分化，不能增生，在产后心肌细胞也不可逆地离开了细胞周期。

关键词 基质细胞衍生因子 趋化因子受体 骨髓间 充质干细胞 心肌梗死

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小鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及其诱导分化为肺泡上皮细胞 被引量：3

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作者 陈钦桂 郑海崇 +1 位作者 何婉媚 曾勉 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2017年第12期1283-1288,共6页

目的小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离培养技术门槛高且重复成功率低,一定程度上制约了相关研究的顺利开展。文中尝试优化全骨髓贴壁法分离培养小鼠BMSCs并探索其诱导分化为肺泡上皮细胞的有效方法。方法采用全骨髓贴壁法培养C57BL/6... 目的小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离培养技术门槛高且重复成功率低,一定程度上制约了相关研究的顺利开展。文中尝试优化全骨髓贴壁法分离培养小鼠BMSCs并探索其诱导分化为肺泡上皮细胞的有效方法。方法采用全骨髓贴壁法培养C57BL/6小鼠胫、股骨骨髓内容物,根据克隆状细胞集落大小及数量,动态调整传代时机与比例进行传代培养。取第6代细胞,计数检测细胞增殖能力,流式细胞术检测相关表面标志物,使用小气道上皮细胞培养基(SAEpi CM)进行诱导分化。结果随着传代次数增加及BMSCs的纯度逐渐提高,第6代细胞增殖速度趋于稳定,流式细胞术分析显示,第6代细胞表达造血干细胞表面标志物CD117的表达率仅为0.008 2%,但高表达骨髓间充质干细胞表面标志物CD29和Sca-1(表达率分别为99.1%和88.5%)。经SAEpi CM培养的BMSCs呈上皮样改变,并表达肺泡细胞的特异表面标志物——肺表面活性物质相关蛋白C。结论根据克隆状细胞集落大小及数量调整传代时间与比例的全骨髓贴壁培养法可有效分离培养得到小鼠骨髓间充质干细胞,并具有分化为肺泡上皮细胞的潜能。 展开更多

关键词 间充质干细胞 骨髓 细胞分离 原代培养 肺泡上皮细胞

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同种异体骨髓间质干细胞移植联合VEGF基因转染治疗心肌梗死的实验研究 被引量：1

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作者 张家明 卢永昕 +3 位作者 曾秋棠 毛晓波 关思虞 王祥 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期652-655,T0001,共5页

目的:探讨同种异体骨髓间质干细胞(BMSCs)移植联合血管内皮生长因子(VEGF)基因转染对大鼠急性心肌梗死血管再生和心功能的影响。方法:体外分离、纯化、培养大鼠BMSCs,以BrdU标记细胞;制备、抽提、纯化质粒PAdTrack/VEGF165。结扎冠状动... 目的:探讨同种异体骨髓间质干细胞(BMSCs)移植联合血管内皮生长因子(VEGF)基因转染对大鼠急性心肌梗死血管再生和心功能的影响。方法:体外分离、纯化、培养大鼠BMSCs,以BrdU标记细胞;制备、抽提、纯化质粒PAdTrack/VEGF165。结扎冠状动脉建立急性心肌梗死模型2周后,随机将其分为4组(n=12),进行心肌内BMSCs移植和/或VEGF165转染,组Ⅰ:BMSCs移植+VEGF165转染;组Ⅱ:BMSCs移值;组Ⅲ:VEGF165转染;组Ⅳ:DMEM注射作为对照组。4周后行免疫组化和超声心动图检查。结果:组Ⅰ和组Ⅱ梗死及缺血心肌处可见大量BrdU标记的移植细胞,其中缺血心肌处部分移植细胞分化为血管内皮细胞并形成新生毛细血管。Ⅷ因子染色阳性的新生血管密度分布为组Ⅰ>组Ⅲ>组Ⅱ>组Ⅳ(P均<0.01)。细胞移植和基因转染治疗后室壁厚度和室壁运动幅度改善,EF值增加幅度(△EF)组Ⅰ>组Ⅱ>组Ⅲ>组Ⅳ(P均<0.01)。结论:同种异体骨髓间质干细胞移植联合VEGF基因转染能进一步增强大鼠梗死缺血区血管再生、改善室壁厚度和心功能,有利于心肌梗死后的康复。 展开更多

关键词 移植 骨髓间质干细胞 基因转染 血管内皮生长因子 心肌梗死 大鼠

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骨髓间充质干细胞膜片技术及应用的研究进展 被引量：3

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作者 秦浩 徐倩 《口腔医学研究》 CAS 北大核心 2017年第7期795-798,共4页

骨髓间充质干细胞易于获得,贴壁生长,具备优良的成膜特性,是现代组织工程学中理想的种子细胞。由于具有良好的分化能力,骨髓间充质干细胞膜片被广泛地应用于组织再生工程。常用的骨髓间充质干细胞膜片包括单层细胞膜片、共培养细胞膜片... 骨髓间充质干细胞易于获得,贴壁生长,具备优良的成膜特性,是现代组织工程学中理想的种子细胞。由于具有良好的分化能力,骨髓间充质干细胞膜片被广泛地应用于组织再生工程。常用的骨髓间充质干细胞膜片包括单层细胞膜片、共培养细胞膜片、多层细胞膜片、三维培养细胞膜片、细胞膜片片段等。本文就近年来利用骨髓间充质干细胞构建细胞膜片的方法及其应用做如下综述。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 细胞膜片技术 组织工程

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槲皮素对牙髓间充质细胞成骨能力及兔颅骨缺损修复的影响 被引量：8

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作者 胡韶光 刘珂珂 +3 位作者 汪芹芹 韩旭 桂双英 徐燕 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1536-1541,共6页

目的研究槲皮素对人牙髓间充质细胞(human dental pulp mesenchymal stromal cells,hDPSCs)体外及体内成骨能力的影响。方法通过对牙髓组织培养获得hDPSCs,流式鉴定特征性表面抗原;CCK-8检测细胞毒性;碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色检测... 目的研究槲皮素对人牙髓间充质细胞(human dental pulp mesenchymal stromal cells,hDPSCs)体外及体内成骨能力的影响。方法通过对牙髓组织培养获得hDPSCs,流式鉴定特征性表面抗原;CCK-8检测细胞毒性;碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色检测细胞体外成骨能力;qPCR检测成骨基因的表达;在10只雄性新西兰兔颅骨上造4个8 mm直径的圆形骨缺损,随机分为4组:A组含1μmol·L-1槲皮素的完全培养液培养的hDPSCs接种于Bio-Oss骨粉组,B组常规完全培养液培养的hDPSCs接种于Bio-Oss骨粉组,C组Bio-Oss组,D组空白组。术后4、8周取标本行Micro-CT三维重建,计算骨体积分数评估成骨效果。结果低浓度的槲皮素无细胞毒性且1μmol·L-1可促进细胞增殖;0.1、1μmol·L-1槲皮素可提高ALP的活性水平;ALP和茜素红染色结果进一步证实槲皮素后能够促进ALP和钙结节的形成;Micro-CT显示在术后4、8周A组新骨形成较B、C组多,D组成骨效果不明显。结论槲皮素可促进hDPSCs的增殖与体外及体内的成骨分化。 展开更多

关键词 槲皮素 间充质基质细胞 组织工程 成骨分化 颅骨缺损 骨移植

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SDF-1α复合Pluronic F-127的构建及其对BMSCs的体外生物效应研究 被引量：1

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作者 田甜 程继光 周健 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第8期1096-1099,共4页

目的构建装载基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)的Pluronic F-127新型复合材料,并研究其对骨髓间充质干细胞(BMSCs)的体外生物效应。方法构建装载不同浓度SDF-1α(200、50 ng/ml)的Pluronic F-127复合水凝胶,采用Transwell小室进行复合水... 目的构建装载基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)的Pluronic F-127新型复合材料,并研究其对骨髓间充质干细胞(BMSCs)的体外生物效应。方法构建装载不同浓度SDF-1α(200、50 ng/ml)的Pluronic F-127复合水凝胶,采用Transwell小室进行复合水凝胶对BMSCs的体外趋化实验。将BMSCs与复合材料均匀混合,加成骨细胞诱导液进行培养,并对其行碱性磷酸酶(AKP)活性测定及茜素红染色,由结果可观察到BMSCs的成骨诱导分化情况,并用MTT法检测复合培养后细胞的活性状况。结果趋化实验结果显示,含SDF-1α浓度为200 ng/ml的复合水凝胶对BMSCs的募集效果显著(P<0.05)。MTT法证实了Pluronic F-127对细胞增殖不产生影响(P>0.05)。BMSCs-复合材料、单纯BMSCs在成骨诱导培养条件下,两组细胞的AKP表达量均明显增高,并且都高于非成骨诱导组(P<0.05),同时诱导组镜下可见明显的钙结节形成。结论成功构建装载SDF-1α的Pluronic F-127新型复合材料,其在体外对BMSCs有明显的趋化作用,在细胞材料复合培养的三维支架中,BMSCs能够存活并被成功诱导分化为成骨细胞。 展开更多

关键词 基质细胞衍生因子-1Α PLURONIC F-127水凝胶 骨髓间充质干细胞 成骨诱导分化

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