活化T淋巴细胞核因子5在高盐诱导小鼠平滑肌细胞衰老中的作用及其机制

1

作者 仲威 戴芝银 +2 位作者 崔星钢 李波 姜瑜 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第3期567-575,共9页

目的:探讨活化T淋巴细胞核因子5 (NFAT5)抑制剂KRN5在高盐诱导小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)衰老中的作用,并阐明其作用机制。方法:30只8周龄雄性ApoE-/-小鼠分为正常组、衰老组和高盐处理衰老组,每组10只,衰老组和高盐处理衰老组构建小鼠... 目的:探讨活化T淋巴细胞核因子5 (NFAT5)抑制剂KRN5在高盐诱导小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)衰老中的作用,并阐明其作用机制。方法:30只8周龄雄性ApoE-/-小鼠分为正常组、衰老组和高盐处理衰老组,每组10只,衰老组和高盐处理衰老组构建小鼠自然衰老模型;分离培养小鼠VSMCs,将VSMCs分为正常组、衰老组、高盐处理衰老组和高盐处理衰老+KRN5组。采用β-半乳糖苷酶(Sa-β-gal)染色法检测各组小鼠主动脉组织和VSMCs衰老情况,免疫荧光法检测各组小鼠主动脉组织和VSMCs中NFAT5和磷酸化的组蛋白H2A变异体X (γ-H2AX)蛋白表达情况,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中NFAT5、 γ-H2AX、细胞周期依赖性激酶抑制剂2A(P16)和细胞周期依赖性激酶抑制剂1A (P21) mRNA表达水平,Western blotting法检测各组VSMCs中NFAT5、γ-H2AX、P16和P21蛋白表达水平。结果:Sa-β-gal染色法,与正常组比较,衰老组和高盐处理衰老组小鼠主动脉组织衰老阳性面积比例均明显增加(P<0.05),小鼠VSMCs衰老细胞阳性比例均明显增加(P<0.05)。与衰老组比较,高盐处理衰老组小鼠VSMCs衰老细胞阳性比例明显增加(P<0.05);与高盐处理衰老组比较,高盐处理衰老+KRN5组小鼠VSMCs衰老细胞阳性比例明显减少(P<0.01)。免疫荧光法,与正常组比较,衰老组小鼠VSMCs中γ-H2AX蛋白表达量明显增加(P<0.05);与衰老组比较,高盐处理衰老组小鼠主动脉组织中SA-β-gal染色和NFAT5蛋白表达量均明显增加(P<0.05);与正常组比较,衰老组和高盐处理衰老组小鼠VSMCs中NFAT5蛋白表达量明显增加(P<0.05);与衰老组比较,高盐处理衰老组小鼠VSMCs中NFAT5蛋白表达量明显增加(P<0.05)。RT-qPCR法,与正常组比较,衰老组和高盐处理衰老组小鼠VSMCs中NFAT5、γ-H2AX、P16及P21 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05);与衰老组比较,高盐处理衰老组小鼠VSMCs中NFAT5、γ-H2AX、P16和P21 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05);与衰老组比较,高盐处理衰老组和高盐处理衰老+KRN5组小鼠VSMCs中NFAT5、γ-H2AX、P16及P21mRNA表达水平均明显升高(P<0.05);与高盐处理衰老组比较,高盐处理衰老+KRN5组小鼠VSMCs中NFAT5、γ-H2AX、P16和P21 mRNA表达水平均明显降低(P<0.05)。Western blotting法,与正常组比较,衰老组和高盐处理衰老组小鼠VSMCs中NFAT5、γ-H2AX、P16及P21蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与衰老组比较,高盐处理衰老组小鼠VSMCs中NFAT5、γ-H2AX、P16和P21蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与衰老组比较,高盐处理衰老组和高盐处理衰老+KRN5组小鼠VSMCs中NFAT5、γ-H2AX、P16及P21蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与高盐处理衰老组比较,高盐处理衰老+KRN5组小鼠VSMCs中NFAT5、γ-H2AX、P16和P21蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:NFAT5对高盐诱导小鼠VSMCs衰老可能具有一定促进作用。 展开更多

关键词 血管衰老 活化T淋巴细胞核因子5 KRN5 血管平滑肌细胞 Β-半乳糖苷酶

在线阅读 下载PDF 职称材料

5-HT_(2C)R与EGFP-NFAT2共表达细胞株的构建

2

作者 王龙雨 李玉蕾 +1 位作者 周培岚 苏瑞斌 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第7期1391-1396,共6页

目的建立5-羟色胺2C受体(5-HT_(2C)receptor,5-HT_(2C)R)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)标记的活化T细胞核因子2(nuclear factor of activated T cells 2,NFAT2)共表达细胞株。方法人源5-HT_(2C)R质粒... 目的建立5-羟色胺2C受体(5-HT_(2C)receptor,5-HT_(2C)R)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)标记的活化T细胞核因子2(nuclear factor of activated T cells 2,NFAT2)共表达细胞株。方法人源5-HT_(2C)R质粒转染至U2OS-EGFP-NFAT2细胞,经潮霉素(Hygro)压力筛选到稳定表达5-HT_(2C)R的U2OS-EGFP-NFAT2-5-HT_(2C)R细胞。使用RT-qPCR和Western blot法检测该细胞株中5-HT_(2C)R的mRNA和蛋白表达水平;用核转位功能实验验证U2OS-EGFP-NFAT2-5-HT_(2C)R细胞受体功能的特异性;验证5-HT、LSD、DOM、DOI、赛洛西宾(PSI)和利舒脲(LIS)对5-HT_(2C)R的激活能力。结果筛选得到58号细胞为最强激活的U2OS-EGFP-NFAT2-5-HT_(2C)R单克隆细胞株。RT-qPCR和Western blot结果显示,1~15代内,U2OS-EGFP-NFAT2-5-HT_(2C)R细胞株稳定表达5-HT_(2C)R mRNA和蛋白。1~15代内,Vabicaserin对U2OS-EGFP-NFAT2-5-HT_(2C)R细胞株的激活能力稳定,5-HT_(2C)R特异性拮抗剂SB242084能够拮抗Vabicaserin的作用。5-HT、LIS、PSI能诱导U2OS-EGFP-NFAT2-5-HT_(2C)R细胞部分核转位,而LSD、DOM、DOI没有作用。结论成功构建了共表达5-HT_(2C)R和EGFP-NFAT2的U2OS-EGFP-NFAT2-5-HT_(2C)R细胞,可用于靶向5-HT_(2C)R的高活性小分子化合物筛选。 展开更多

关键词 5-羟色胺2C受体 活化T细胞核因子2 核转位 高内涵筛选系统 Vabicaserin 5-羟色胺

在线阅读 下载PDF 职称材料

用酵母双杂交系统筛选ATF5相互作用蛋白 被引量：3

3

作者 王鸿杰 张志文 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期160-164,共5页

转录激活因子5(activating transcription factor5,ATF5)最初是从人T淋巴细胞中分离出来,并在肿瘤发展中起重要作用.为研究ATF5的作用机理,以其C末端区域为诱饵蛋白,用酵母双杂交技术从人心脏cDNA文库中筛选出了包括热休克蛋白27和核糖... 转录激活因子5(activating transcription factor5,ATF5)最初是从人T淋巴细胞中分离出来,并在肿瘤发展中起重要作用.为研究ATF5的作用机理,以其C末端区域为诱饵蛋白,用酵母双杂交技术从人心脏cDNA文库中筛选出了包括热休克蛋白27和核糖体蛋白L18a等与肿瘤转移、预后密切相关的蛋白.免疫共沉淀实验表明,热休克蛋白27能够特异结合在ATF5C末端区域.由此推论,ATF5通过细胞内一些与肿瘤发展、转移及预后有关的蛋白相互作用,进而影响肿瘤的进展,为ATF5的功能研究提供了重要的线索. 展开更多

关键词 酵母双杂交 atf5 肿瘤 免疫共沉淀

在线阅读 下载PDF 职称材料

HCMV感染对恶性胶质瘤U87细胞增殖及ATF5表达的影响 被引量：2

4

作者 王桐梅 钱冬萌 +5 位作者 胡明 李玲 张丽 陈豪 杨瑞 王斌 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2014年第1期17-21,共5页

人巨细胞病毒(HCMV)能够诱导肿瘤细胞的恶性转化,但其分子机制尚有待进一步探索。探讨HCMV是否通过调控转录激活因子5(ATF5)的表达变化促进胶质瘤细胞的增殖。采用HCMV AD169株(MOI=5)感染神经胶质瘤U87细胞株,MTT方法观察HCMV感染0、12... 人巨细胞病毒(HCMV)能够诱导肿瘤细胞的恶性转化,但其分子机制尚有待进一步探索。探讨HCMV是否通过调控转录激活因子5(ATF5)的表达变化促进胶质瘤细胞的增殖。采用HCMV AD169株(MOI=5)感染神经胶质瘤U87细胞株,MTT方法观察HCMV感染0、12、24、48 h后细胞的增殖活性。Real-time PCR及Western-blot检测HCMV感染U87细胞后ATF5基因及蛋白的表达水平变化。以慢病毒为载体的靶向ATF5小干扰RNA构建载体,敲低ATF5表达水平后感染HCMV,MTT检测病毒感染细胞的增殖活性变化。HCMV感染神经胶质瘤U87细胞后,与未感染组比较,增值活性明显升高(P<0.05),ATF5表达水平上升,表明HCMV感染使胶质瘤细胞增殖活性提高,细胞抗凋亡能力增强。成功构建沉默ATF5细胞系siATF5 U87,HCMV感染siATF5 U87细胞后使细胞增殖活性减弱,抗凋亡能力下降。以上实验结果表明,HCMV感染上调胶质瘤U87细胞ATF5的表达水平,促进细胞的增殖。因此HCMV感染可能通过调控ATF5信号通路增加细胞恶性性状,为治疗胶质瘤提供一个新的思路。 展开更多

关键词 胶质瘤细胞U87 人巨细胞病毒 细胞增殖 转录激活因子5

在线阅读 下载PDF 职称材料

上皮性卵巢癌组织中ATF5基因的表达及其临床意义 被引量：2

5

作者 芦进荣 钱冬萌 +4 位作者 齐亚妮 丁朝霞 胡明 王斌 陈爱平 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期205-207,211,共4页

目的:探讨上皮性卵巢癌组织中ATF5(activating transcription faclor 5,ATF5)基因的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学染色法和逆转录酶聚合酶链反应(riverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法从蛋白和mRNA... 目的:探讨上皮性卵巢癌组织中ATF5(activating transcription faclor 5,ATF5)基因的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学染色法和逆转录酶聚合酶链反应(riverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法从蛋白和mRNA水平检测60例上皮性卵巢癌组织、15例良性卵巢肿瘤和9例正常卵巢组织标本中ATF5的表达差异。结果:上皮性卵巢癌组织中ATF5阳性表达率显著高于正常卵巢及卵巢良性肿瘤组织(P<0.05),且ATF5蛋白和mRNA表达强度与上皮性卵巢癌手术病理分期和组织分化程度有关。Ⅲ～Ⅳ期的阳性表达率及表达强度明显高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05);低分化组高于中分化及高分化组(P<0.05),但中分化及高分化组之间ATF5表达无显著性差异(P>0.05)。结论:ATF5在上皮性卵巢癌组织中呈高表达,其表达强度与临床分期和组织分化程度密切相关,为卵巢癌的治疗提供新的靶点。 展开更多

关键词 上皮性卵巢癌转录激活因子5逆转录酶聚合酶链反应免疫组化

在线阅读 下载PDF 职称材料

小陷胸汤对5-氟尿嘧啶介导的小鼠肠黏膜损伤的保护作用研究

6

作者 秦美洁 叶倩倩 +1 位作者 丁芮 黄金玲 《海南医学院学报》 CAS 北大核心 2024年第19期1441-1450,共10页

目的:探究小陷胸汤对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)介导的小鼠肠黏膜损伤的保护作用。方法:将100只SPF级雄性ICR小鼠随机分为正常对照组、模型组、小陷胸汤低、中、高剂量(8.3、16.6、33.2g/kg)组。除正常对照组外,其余各组采用5-FU(... 目的:探究小陷胸汤对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)介导的小鼠肠黏膜损伤的保护作用。方法:将100只SPF级雄性ICR小鼠随机分为正常对照组、模型组、小陷胸汤低、中、高剂量(8.3、16.6、33.2g/kg)组。除正常对照组外,其余各组采用5-FU(30 mg/kg,ip,7 d)诱导肠黏膜损伤小鼠模型。小陷胸汤给药组造模同时按照设定剂量以10 mL·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,正常对照组和模型组给予等量蒸馏水,连续处理7 d。采用苏木素-伊红染色法(HE)观察小肠的病理形态学变化并测定肠绒毛高度/隐窝深度(VH:CD)比值;采用阿利新蓝染色法(AB)测定小肠黏膜杯状细胞数量;采用分光光度法检测血清内毒素(ET)、D-乳酸(D-LA)及小肠组织二胺氧化酶(DAO)水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测小肠组织IL-6、信号转导和转录激活因子3(STAT3)和表皮生长因子受体(EGFR)mRNA表达;采用Western blot法检测小肠组织IL-6、STAT3及EGFR蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型组小鼠体质量显著降低,腹泻评分、粪便质量、粪便含水量及小肠推进率明显升高(P<0.01),小肠黏膜VH:CD比值和杯状细胞数量降低(P<0.01),血清ET和D-LA水平升高,小肠组织DAO水平降低(P<0.05),脾指数和胸腺指数降低(P<0.01),血清IL-6、TNF-α水平升高(P<0.05),小肠组织IL-6、STAT3 mRNA表达升高,EGFR mRNA表达降低(P<0.01);小肠组织IL-6、STAT3蛋白表达升高,EGFR蛋白表达降低(P<0.01)。与模型组相比,小陷胸汤能够明显改善上述指标(P<0.05)。结论:小陷胸汤对5-FU介导的肠黏膜损伤具有保护作用,其作用机制可能与小陷胸汤激活EGFR信号转导,下调IL-6/STAT3信号通路,减轻5-FU诱导的肠黏膜炎症反应,改善免疫功能有关。 展开更多

关键词 小陷胸汤 5-氟尿嘧啶(5-FU) 肠黏膜损伤 表皮生长因子受体(EGFR) 白细胞介素6(IL-6)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路

在线阅读 下载PDF 职称材料

神经胶质瘤细胞ATF5表达水平对HCMV复制的影响

7

作者 张雪 钱冬萌 +5 位作者 胡明 陈豪 李玲 张丽 宋旭霞 王斌 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第2期25-32,共8页

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)在神经胶质瘤细胞中的复制水平不一,其机制尚不清楚。本研究通过下调转录激活因子5(ATF5)在神经胶质瘤细胞中的表达,检测HCMV感染神经胶质瘤细胞后病毒复制水平的变化。首先用HCMV AD169(MOI=5... 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)在神经胶质瘤细胞中的复制水平不一,其机制尚不清楚。本研究通过下调转录激活因子5(ATF5)在神经胶质瘤细胞中的表达,检测HCMV感染神经胶质瘤细胞后病毒复制水平的变化。首先用HCMV AD169(MOI=5)分别感染U87、SY5Y及A172细胞,观察细胞形态变化,分别在24、48、72、96、120 h取各时间点上清液检测病毒滴度;Real-time PCR检测HCMV即刻早期基因(IE2)、早期基因(UL44)、晚期基因(UL99)及ATF5的表达情况;Western-blot检测病毒基因编码蛋白及ATF5表达的情况。结果显示HCMV在U87、SY5Y细胞中复制水平与病毒在A172细胞中复制水平相比,U87、SY5Y细胞组明显高于A172细胞组(P<0.05),ATF5表达在U87、SY5Y细胞组与A172细胞组相比,U87、SY5Y细胞组ATF5表达明显高于A172组(P<0.05);利用慢病毒介导的RNA干扰技术下调ATF5在U87、SY5Y细胞的表达,用HCMV感染细胞检测病毒基因及蛋白的表达,结果ATF5表达下调可抑制HCMV的复制(P<0.05)。以上结果表明,在胶质瘤细胞中下调ATF5表达水平可以抑制HCMV的复制水平。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 转录激活因子5 复制 人胶质瘤细胞 病毒基因

在线阅读 下载PDF 职称材料

小鼠肝星状细胞(HSC)中ATF5促进TRAIL基因的表达及其对同种异体胰岛移植物的保护作用 被引量：2

8

作者 黄文海 陈宗祐 +2 位作者 项建斌 李震洋 顾晓冬 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期781-787,共7页

目的探讨小鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)中转录激活因子5 (activating transcription factor 5,ATF5)促进肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)的表达及其对同... 目的探讨小鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)中转录激活因子5 (activating transcription factor 5,ATF5)促进肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)的表达及其对同种异体胰岛移植物的保护作用。方法半定量RT-PCR检测HSCs中ATF5 mRNA、TRAIL mRNA的表达水平,流式细胞术检测HSCs表面TRAIL蛋白质水平。慢病毒(LV-ATF5-RNAi)感染HSCs,针对ATF-5基因进行RNA干扰,半定量RT-PCR检测慢病毒感染的HSCs中ATF5 mRNA及TRAIL mRNA水平。单向混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)观察HSCs和慢病毒感染的HSCs对T细胞的增殖反应。分别将单纯胰岛、胰岛联合HSCs、胰岛联合慢病毒感染的HSCs移植到小鼠的肾包膜下,比较移植胰岛的存活时间。结果γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)上调HSCs中ATF5 mRNA和TRAIL mRNA水平(P<0.01),IFN-γ亦可上调HSCs表面TRAIL蛋白质水平。慢病毒(LV-ATF5-RNAi)感染HSCs后,HSCs中ATF5 mRNA水平明显下降(P<0.01),TRAIL mRNA水平亦下降(P<0.05)。IFN-γ作用于感染慢病毒的HSCs后,HSCs中ATF5 mRNA和TRAIL mRNA水平亦增加(P<0.01),但明显低于未被慢病毒感染的HSCs(P<0.01)。HSCs可明显抑制T细胞增殖反应(P<0.01),慢病毒感染的HSCs亦能抑制T细胞增殖反应(P<0.05),但抑制作用明显低于未被慢病毒感染的HSCs(P<0.01)。单纯胰岛移植组(A组)移植胰岛中位存活时间为11天;胰岛联合HSCs移植组(B组)移植胰岛中位存活时间为88天,B组胰岛移植物存活时间明显长于A组(P<0.01);胰岛联合慢病毒感染的HSCs移植组(C组)移植胰岛中位存活时间为18天,C组胰岛移植物存活时间长于A组(P<0.01),但明显短于B组(P<0.01)。结论小鼠HSCs中ATF5可促进TRAIL基因表达,表达TRAIL的HSCs可以抑制T细胞的增殖反应,此HSCs与胰岛细胞联合移植,明显延长小鼠同种异体胰岛移植物存活时间。 展开更多

关键词 肝星状细胞(HSC) 转录激活因子5(atf5) 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL) 胰岛移植 小鼠

在线阅读 下载PDF 职称材料

人参皂苷Rg1抑制白血病细胞K562增殖并诱导分化的分子机制 被引量：7

9

作者 柯大智 王红宁 +6 位作者 陈地龙 顾恒伟 王亚平 王建伟 龙轩 李春莉 罗春燕 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期125-129,共5页

目的研究人参皂苷的重要单体Rg1对人白血病细胞K562的增殖抑制作用并诱导其向成熟分化的分子机制。方法取对数生长期K562细胞,分设人参皂苷Rg1组和常规培养组,以流式细胞仪检测24、48、72 h Rg1对K562细胞增殖的影响;Wright’s染色测定... 目的研究人参皂苷的重要单体Rg1对人白血病细胞K562的增殖抑制作用并诱导其向成熟分化的分子机制。方法取对数生长期K562细胞,分设人参皂苷Rg1组和常规培养组,以流式细胞仪检测24、48、72 h Rg1对K562细胞增殖的影响;Wright’s染色测定细胞形态和酶标仪测定血红蛋白合成来观察Rg1作用24、48、72 h后K562细胞向成熟细胞分化的特征;激光共聚焦显微镜检测Rg1作用48 h对K562细胞STAT5蛋白分布的影响;Western blot法检测Rg1作用24、48、72 h对K562细胞STAT5蛋白表达的影响。结果流式细胞仪检测提示Rg1作用后K562细胞S期比例增加,48 h达高峰(P<0.05);酶标仪测定显示Rg1作用后,K562细胞合成血红蛋白(Hb)的量与对照组相比具有显著性提高(P<0.05);Wright’s染色显示经Rg1诱导后,K562细胞体积缩小,细胞核直径减小,细胞核和细胞质的比例降低,细胞向成熟方向分化;激光共聚焦显微镜观察显示经Rg1诱导后,K562细胞细胞质内的STAT5荧光强度增加,而细胞核内STAT5荧光强度减弱;Western blot法检测显示Rg1作用K562细胞后,细胞质内STAT5的表达水平增加,细胞核内STAT5的表达水平减少,作用48 h变化最明显。结论人参皂苷单体Rg1可抑制人白血病细胞K562增殖并诱导其向成熟方向分化;Rg1改变K562细胞内STAT5的分布和减少K562胞核中STAT5的表达,这可能是Rg1抑制K562细胞增殖并诱导其分化的作用机制之一。 展开更多

关键词 人参总皂苷单体Rg1 K562细胞 增殖抑制 诱导分化 STAT5

在线阅读 下载PDF 职称材料

蛇床子素对小鼠湿疹肥大细胞及其STAT5基因和蛋白表达的影响 被引量：11

10

作者 熊健 钟振东 +1 位作者 傅荣 熊巍 《医药导报》 CAS 2015年第12期1584-1587,共4页

目的探讨蛇床子素对小鼠湿疹肥大细胞及其信号转导和转录活化蛋白5(STAT5)基因和蛋白表达的影响。方法采用被动皮肤变态反应复制小鼠湿疹模型,致敏后分离腹腔肥大细胞,采用卵蛋白诱发肥大细胞过敏,致敏后的肥大细胞分为空白对照组、蛇... 目的探讨蛇床子素对小鼠湿疹肥大细胞及其信号转导和转录活化蛋白5(STAT5)基因和蛋白表达的影响。方法采用被动皮肤变态反应复制小鼠湿疹模型,致敏后分离腹腔肥大细胞,采用卵蛋白诱发肥大细胞过敏,致敏后的肥大细胞分为空白对照组、蛇床子素大剂量组及小剂量组。药物干预24 h后,采用免疫荧光法检测3组肥大细胞形态,噻唑蓝法检测药物对肥大细胞增殖的影响,RT-PCR及Western blot法检测各组细胞中STAT5基因及蛋白的表达水平。结果与空白对照组比较,给药组肥大细胞数量明显减少,细胞体积明显缩小,细胞核体积缩小,部分细胞凋亡;细胞抑制率随药物浓度显著上升(P<0.01);与空白对照组(2.16±0.57)比较,蛇床子素大剂量组(0.59±0.12)和小剂量组(0.82±0.13)STAT5基因表达水平均有极显著降低(P<0.01);与空白对照组比较,蛇床子素大剂量组及小剂量组STAT5蛋白表达水平均有极显著降低(P<0.01)。结论蛇床子素可抑制致敏肥大细胞的增殖,并下调STAT5基因和蛋白的表达。 展开更多

关键词 蛇床子素 湿疹 肥大细胞 信号转导和转录活化蛋白5

在线阅读 下载PDF 职称材料

5-脱氧杂氮胞苷抑制小鼠附植前的胚胎发育(英文) 被引量：3

11

作者 于建宁 李少华 +3 位作者 王丹秋 王蒙 林飞 刘红林 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第2期228-237,共10页

DNA甲基化在哺乳动物发育过程中有关键作用.在小鼠附植前胚胎发育过程中,DNA甲基化一直处于动态变化过程中.通过将体外受精胚在5-AZA-CdR中持续培养,研究5-AZA-CdR对小鼠附植前胚胎发育的影响,为附植前胚胎发育机理的研究及5-AZA-CdR的... DNA甲基化在哺乳动物发育过程中有关键作用.在小鼠附植前胚胎发育过程中,DNA甲基化一直处于动态变化过程中.通过将体外受精胚在5-AZA-CdR中持续培养,研究5-AZA-CdR对小鼠附植前胚胎发育的影响,为附植前胚胎发育机理的研究及5-AZA-CdR的毒副作用研究提供试验基础.从原核期加入不同浓度的5-AZA-CdR时,胚胎不能发育到桑椹胚(0.2和1.0μmol/L)和4-细胞胚(5.0μmol/L);从2-细胞期加入时,胚胎阻滞于未致密化的8-细胞(0.2和1.0μmol/L)和3/4-细胞期(5.0μmol/L);而当从4-细胞加入时,虽然胚胎能够发育到早期桑椹胚,但发育比例同对照相比显著降低(P<0.05).进一步检测凋亡、基因组DNA甲基化和整体转录活性,结果显示,高浓度的5-AZA-CdR导致8-细胞和早期桑椹胚发生早期凋亡,而低浓度的5-AZA-CdR引起8-细胞和早期桑椹胚基因组DNA甲基化的降低和转录活性的降低,并且这种降低呈浓度依赖性.所以加入低浓度的5-AZA-CdR时,胚胎的DNA甲基化降低,引起转录活性的降低,进而导致胚胎发育的停滞. 展开更多

关键词 5-AZA—CdR 凋亡 发育 DNA甲基化 转录活性

在线阅读 下载PDF 职称材料

81例单纯性先天性心脏病患者NKx 2.5基因突变筛查及关联研究 被引量：11

12

作者 韩增强 唐胤 +1 位作者 陈彧 胡大一 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2011年第6期461-464,共4页

目的:探讨NKx 2.5基因突变和单核苷酸多态性(SNP)与人类单纯性先天性心脏病(CHD)的关系。方法:应用聚合酶链反应结合脱氧核糖核酸(DNA)测序技术,对81例单纯性CHD患者(包括室间隔缺损组37例,房间隔缺损组17例,圆锥动脉干畸形组18例,动脉... 目的:探讨NKx 2.5基因突变和单核苷酸多态性(SNP)与人类单纯性先天性心脏病(CHD)的关系。方法:应用聚合酶链反应结合脱氧核糖核酸(DNA)测序技术,对81例单纯性CHD患者(包括室间隔缺损组37例,房间隔缺损组17例,圆锥动脉干畸形组18例,动脉导管未闭组5例,主动脉瓣二叶畸形组4例),74例患者一级亲属(一级亲属组)以及52例正常非CHD对照者(正常对照组)的NKx 2.5基因的所有外显子及其侧翼序列进行突变检测,并对SNP位点进行基因分型,分析单个位点的基因型和等位基因频率是否与CHD相关。结果:所有CHD患者、患者一级亲属基因编码均未发现突变,而在NKx 2.5基因外显子1区域内发现1个SNP位点,这个SNP位点位于上游63位碱基63A>G,导致第21位密码子由GAA转变为GAG,碱基替换后仍编码谷氨酸(Glu),属于同义突变(Glu21Glu)。基因型频率和等位基因频率的分布,在房间隔缺损组和正常对照组之间差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:NKx 2.5基因突变与我国单纯性CHD之间无明显相关,该基因上的63A>G SNP位点与先天性房间隔缺损之间可能存在相关性。 展开更多

关键词 先天性心脏病 转录因子 NKX 2.5基因 基因突变 单核苷酸多态性

在线阅读 下载PDF 职称材料

紫杉醇诱导的胰腺癌SW1990细胞凋亡过程中转录激活因子5和Bax表达水平的变化 被引量：3

13

作者 胡明 钱冬萌 +5 位作者 侯云 彭凯 李玲 宋旭霞 LIU David X 王斌 《医学研究生学报》 CAS 2010年第11期1127-1131,共5页

目的转录激活因子5(Activating transcription factor 5,ATF5)是一个新的与肿瘤细胞分化、增殖及凋亡密切相关的因子。文中检测胰腺癌SW1990细胞中ATF5的表达,并进一步研究紫杉醇(Paclitaxel,PTX)诱导的人胰腺癌SW1990细胞凋亡的水平,... 目的转录激活因子5(Activating transcription factor 5,ATF5)是一个新的与肿瘤细胞分化、增殖及凋亡密切相关的因子。文中检测胰腺癌SW1990细胞中ATF5的表达,并进一步研究紫杉醇(Paclitaxel,PTX)诱导的人胰腺癌SW1990细胞凋亡的水平,及其与ATF5、Bax表达水平的相关性。方法 RT-PCR检测未经药物处理的SW1990细胞中ATF5 mRNA表达水平;以不同浓度的紫杉醇(0、6.25、12.5、25、50、100、200 nmol/L)作用SW1990细胞不同时间(0、6、12、24、48 h),噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况;用100 nmol/L紫杉醇作用SW1990细胞不同时间(0、12、24、48 h)后,观察形态学变化并用Annexin V/7-AAD双染法,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;采用RT-PCR检测紫杉醇作用不同时间后ATF5、Bax的mRNA表达变化。结果胰腺癌SW1990细胞中表达ATF5。紫杉醇抑制胰腺癌SW1990细胞的增殖,并在一定范围内呈剂量、时间相关性。随着紫杉醇作用时间的增加,流式细胞仪检测凋亡率显著提高。半定量RT-PCR检测结果显示:ATF5、Bax mRNA表达均明显增强,且两者之间存在相关性(r=0.916,P<0.05)。结论 ATF5在胰腺癌SW1990细胞中高表达,并且在紫杉醇诱导的细胞凋亡过程中,表达量进一步上升,其变化趋势与Bax基因相似。提示ATF5参与紫杉醇诱导的细胞凋亡,并可能与Bax的凋亡途径存在相关性。 展开更多

关键词 转录激活因子5 紫杉醇 胰腺癌细胞SW1990 凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

TALENs编辑绵羊成纤维细胞FGF 5基因 被引量：3

14

作者 皮文辉 周平 +5 位作者 王立民 唐红 郭延华 张译元 刘守仁 王新华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期704-710,共7页

类转录激活因子效应物(Transcription activator-like effector,TALE)已经成为基因组编辑和基因转录调控的有效工具,在多个物种的基因组中实现特定位点的删除、插入和突变。针对绵羊成纤维细胞生长因子5(Fibroblast growth factor 5,FG... 类转录激活因子效应物(Transcription activator-like effector,TALE)已经成为基因组编辑和基因转录调控的有效工具,在多个物种的基因组中实现特定位点的删除、插入和突变。针对绵羊成纤维细胞生长因子5(Fibroblast growth factor 5,FGF5)基因起始密码子ATG位点,设计构建TALENs(Transcription activator-like effector nucleases,TALENs)。通过比较分析正常培养和基因组编辑处理的绵羊成纤维细胞,电转TALENs组合,Surveyor突变检测,筛选获得1对有效的TALENs。有限稀释细胞传代培养,PCR扩增FGF5基因片段,经PAGE检测筛选发生突变的细胞,测序确认FGF5基因ATG位点产生缺失突变细胞。获得具有编辑活性的TALENs,为该基因的定点编辑奠定基础。Surveyor检测和测序结果表明,在绵羊FGF5基因ATG起始密码子上游104碱基位点,存在1个G/C单核苷酸多态。 展开更多

关键词 类转录激活因子效应物核酸酶 基因组编辑 成纤维细胞生长因子5基因 单核苷酸多态 绵羊

在线阅读 下载PDF 职称材料

花生中FAR1-5转录因子的克隆和功能分析 被引量：3

15

作者 闫彩霞 李春娟 +5 位作者 孙全喜 张浩 王娟 苑翠玲 单世华 赵小波 《花生学报》 北大核心 2020年第2期16-20,共5页

FARl是一类起源于转座子酶的转录因子,在光敏色素A(phyA)信号通路启动、植物光形态建成中具有重要作用。本试验对抗旱花生品种J11的FAR1-5基因进行了克隆,通过序列比对进化分析,表明其与野生花生Arachis duranensis,A.ipaensis相关基因... FARl是一类起源于转座子酶的转录因子,在光敏色素A(phyA)信号通路启动、植物光形态建成中具有重要作用。本试验对抗旱花生品种J11的FAR1-5基因进行了克隆,通过序列比对进化分析,表明其与野生花生Arachis duranensis,A.ipaensis相关基因具有较高相似度。干旱胁迫状态下,转基因植株抗旱性强于野生型植株,抗氧化酶活性增强,表明该转录因子可积极响应花生抗旱胁迫。研究结果可为花生抗旱育种提供新的基因资源。 展开更多

关键词 FAR1-5转录因子 花生 过表达 干旱胁迫 基因克隆

在线阅读 下载PDF 职称材料

溃疡性结肠炎组织中5-LOX、PPARγ和NF-κB P65的表达及意义 被引量：2

16

作者 苗新普 欧阳钦 +1 位作者 韦红 黄咏东 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第10期1757-1759,共3页

目的:检测5-LOX、PPARγ和NF-kB P65在UC患者结肠黏膜的表达,探讨其在UC发病机制中的作用及相互关系。方法:采用免疫组化SP法检测32例UC内镜活检标本和26例正常对照组织中5-LOX、PPARγ和NF-kB P65的表达情况。结果:UC组织5-LOX、NF-κB... 目的:检测5-LOX、PPARγ和NF-kB P65在UC患者结肠黏膜的表达,探讨其在UC发病机制中的作用及相互关系。方法:采用免疫组化SP法检测32例UC内镜活检标本和26例正常对照组织中5-LOX、PPARγ和NF-kB P65的表达情况。结果:UC组织5-LOX、NF-κB P65蛋白表达高于正常对照(P<0.05);PPARγ在UC组织表达低于正常对照(P<0.05)。5-LOX、NF-kB P65表达与病理分级相关;PPARγ表达与病理分级负相关。5-LOX与NF-kB P65表达正相关,5-LOX、NF-kB P65与PPARγ蛋白表达负相关。结论:5-LOX可能通过作用于PPARγ-NF-κB p65信号通路影响UC炎症的发生发展,在UC治疗中具有重要意义。 展开更多

关键词 结肠炎 溃疡性 5-脂氧合酶 过氧化物酶增殖物激活受体Γ 核转录因子KB

在线阅读 下载PDF 职称材料

JAK2/STAT5通路在胰岛对妊娠适应中的作用 被引量：1

17

作者 陈焕珍 王晓 +4 位作者 李凤英 聂爱芳 刘赟 李果 罗敏 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期555-559,共5页

目的探讨妊娠中晚期SD大鼠胰岛功能增强的机制。方法以妊娠15 d的SD大鼠(实验组,n=24)和同批次未妊娠的雌性SD大鼠(对照组,n=24)作为实验对象。通过原位灌注胰岛分离的方法获得单个胰岛,用胰酶消化胰岛,形成单个细胞,原代分离的胰岛加入... 目的探讨妊娠中晚期SD大鼠胰岛功能增强的机制。方法以妊娠15 d的SD大鼠(实验组,n=24)和同批次未妊娠的雌性SD大鼠(对照组,n=24)作为实验对象。通过原位灌注胰岛分离的方法获得单个胰岛,用胰酶消化胰岛,形成单个细胞,原代分离的胰岛加入含5.6 mmol/L葡萄糖和15%FBS的DMEM培养基终止消化,用含2.8 mmol/L葡萄糖(对照)或5.6 mmol/L葡萄糖的KRB缓冲液培养1 h,利用全细胞膜片钳记录B细胞膜电压依赖型钾通道(Kv)电流。采用Real-Time PCR技术测定胰岛JAK2/STAT5通路的关键分子催乳素受体(PRLR)、Janus蛋白酪氨酸激酶(JAK2)、信号转导和转录激活子5(STAT5A和STAT5B)、葡萄糖代谢的关键分子葡萄糖转运体2(GLUT2)、葡萄糖激酶(GK),以及胰岛素分泌相关的分子ATP敏感性钾通道(KATP)、电压依赖性钙通道(VDCC)mRNA的表达。结果在10～60 mV膜电压条件下,实验组大鼠在5.6 mmol/L葡萄糖刺激下,胰岛单个B细胞细胞膜Kv电流显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组大鼠胰岛组织PRLR、JAK2、STAT5A、STAT5B、GLUT2、VDCC、KATPmRNA的相对表达量上调,分别为对照组的2.50、1.84、1.54、2.45、1.41、1.68、1.55倍(P<0.05或P<0.01),两组大鼠胰岛组织GK mRNA的相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论妊娠中晚期SD大鼠胰岛功能增强可能与催乳素促进JAK2/STAT5通路、葡萄糖代谢及胰岛素分泌相关分子的表达有关,为糖尿病的治疗提供了新的思路。 展开更多

关键词 糖尿病 妊娠 胰岛 分泌 蛋白酪氨酸激酶2/信号转导和转录激活子5通路

在线阅读 下载PDF 职称材料

信号转导与转录激活因子5的结构与功能研究进展 被引量：1

18

作者 付志玲 杨艳红 +6 位作者 李维 兰海楠 刘禹 郭风 赵雪 张辉 郑鑫 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第10期86-89,共4页

信号转导与转录激活子5(signal transducer and activator of transcription,STAT5)作为一种重要的信号转导与转录激活子,能被多种细胞因子和多肽类激素激活,引起靶基因的转录。参与调控细胞的增殖、分化及凋亡,并对生物体的生长、造血... 信号转导与转录激活子5(signal transducer and activator of transcription,STAT5)作为一种重要的信号转导与转录激活子,能被多种细胞因子和多肽类激素激活,引起靶基因的转录。参与调控细胞的增殖、分化及凋亡,并对生物体的生长、造血和免疫应答具有重要意义,其活性的高低与肿瘤的发生和发展关系密切。作者重点阐述了STAT5的结构和生物学功能。 展开更多

关键词 信号转导与转录激活子5 结构 生物功能

在线阅读 下载PDF 职称材料

山楂不同炮制方法对5-羟甲基糠醛含量及抗氧化活性的影响 被引量：10

19

作者 刘畅 宫瑞泽 +3 位作者 张磊 夏蕴实 华梅 孙印石 《特产研究》 2019年第4期29-35,共7页

探讨生山楂、炒山楂、焦山楂、山楂炭4种山楂炮制品中5-羟甲基糠醛(5-HMF)的产生、影响因素及提取物的抗氧化活性。采用高效液相色谱法测定山楂中5-HMF的含量,进一步对各炮制品中氨基酸、总糖、还原糖、总有机酸和总黄酮进行测定,分析... 探讨生山楂、炒山楂、焦山楂、山楂炭4种山楂炮制品中5-羟甲基糠醛(5-HMF)的产生、影响因素及提取物的抗氧化活性。采用高效液相色谱法测定山楂中5-HMF的含量,进一步对各炮制品中氨基酸、总糖、还原糖、总有机酸和总黄酮进行测定,分析上述物质的含量差异,探讨不同热加工程度的炮制品中5-HMF的含量变化以及氨基酸、总糖、还原糖、有机酸和总黄酮的含量变化对5-HMF产生的影响;应用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼法对山楂炮制品提取物进行抗氧化活性测定。结果表明,生山楂、炒山楂、焦山楂、山楂炭4种炮制品中,热加工程度越高,5-HMF的含量越高,而总糖、还原糖、氨基酸、有机酸和总黄酮含量越低;不同山楂炮制品提取物的抗氧化活性随着热加工程度的提高,呈现先降低后升高的趋势;5-HMF的产生主要消耗总糖中的还原糖和氨基酸中的碱性氨基酸。热加工程度的提高造成具有抗氧化活性的黄酮类、有机酸等物质的大量破坏,从而降低了山楂炮制品的抗氧化活性。 展开更多

关键词 山楂 炮制品 5-羟甲基糠醛 影响因素 抗氧化活性

在线阅读 下载PDF 职称材料

转录因子NKx2-5表达在大鼠右心室心肌重塑模型的变化 被引量：1

20

作者 钱小青 王大为 +1 位作者 张爱华 李军 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期367-370,共4页

目的:观察增加大鼠右心室压力负荷后,右心室心肌重塑与同源盒转录因子NKx2-5表达的变化。方法:注射野百合碱(MCT)制作大鼠肺动脉高压模型,测量大鼠不同时间点肺动脉压和右心室肥厚指数;采用RT-PCR法和Westernblot分析,分别测定右心室心... 目的:观察增加大鼠右心室压力负荷后,右心室心肌重塑与同源盒转录因子NKx2-5表达的变化。方法:注射野百合碱(MCT)制作大鼠肺动脉高压模型,测量大鼠不同时间点肺动脉压和右心室肥厚指数;采用RT-PCR法和Westernblot分析,分别测定右心室心肌NKx2-5及其下游基因心房利钠因子(ANF)的mRNA及蛋白表达。结果:注射MCT后第14天,右室心肌明显肥厚,NKx2-5与ANF的mRNA及蛋白表达亦明显增加,与其呈明显正相关。结论:右心室壁压力负荷增加可作为原发性刺激,使在心脏胚胎发育早期表达的心脏同源盒基因NKx2-5表达增加,NKx2-5在成熟心肌重塑中可能起作用。 展开更多

关键词 转录因子NKx2-5 心肌重塑 右室压力负荷

在线阅读 下载PDF 职称材料