植物UDP-糖基转移酶生化特性和功能研究进展 被引量：28

1

作者 姬向楠 何非 +1 位作者 段长青 王军 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第9期316-323,共8页

UDP-糖基转移酶催化糖基转移反应,将糖基从活化的供体分子转移到受体分子上,从而调节受体分子在细胞和机体内的活性,如生物活性、溶解性和转运性。糖苷化是植物次生代谢较为普遍的修饰反应,在调节植物体内激素平衡、解除外源毒素毒性以... UDP-糖基转移酶催化糖基转移反应,将糖基从活化的供体分子转移到受体分子上,从而调节受体分子在细胞和机体内的活性,如生物活性、溶解性和转运性。糖苷化是植物次生代谢较为普遍的修饰反应,在调节植物体内激素平衡、解除外源毒素毒性以及次生代谢产物的合成和贮存等方面发挥重要功能。本文就与植物次生代谢产物、植物激素及生物异源物质糖苷化相关的UDP-糖基转移酶的生化特性和功能研究进展进行综述,以期为本领域相关研究提供一定的参考。 展开更多

关键词 植物次生代谢 udp-糖基转移酶 生化及分子生物学

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环糊精葡糖基转移酶法改性甜菊糖的研究 被引量：3

2

作者 陈智 王莹 田景振 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期178-179,182,共3页

目的:优选环糊精葡糖基转移酶法对甜菊糖进行结构改变的工艺。方法:以甜菊苷酶改转移率为指标,通过对影响酶改性反应的pH、甜菊苷与淀粉的比例、反应温度、反应时间、酶的用量五个因素进行考察,首先确定pH以及甜菊苷与淀粉的比例对转化... 目的:优选环糊精葡糖基转移酶法对甜菊糖进行结构改变的工艺。方法:以甜菊苷酶改转移率为指标,通过对影响酶改性反应的pH、甜菊苷与淀粉的比例、反应温度、反应时间、酶的用量五个因素进行考察,首先确定pH以及甜菊苷与淀粉的比例对转化率的影响,对剩余三个因素采用正交设计考察,筛选了酶改性甜菊苷的最佳工艺。结果:最佳酶改工艺组合为:pH=6,淀粉与甜菊苷的比例为2∶1,反应温度40℃,反应时间24h,酶的用量为60u/g淀粉。结论:该方法能有效对甜菊苷进行酶改,工艺合理且操作简单。 展开更多

关键词 甜菊苷 环糊精葡糖基转移酶 正交实验

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重叠延伸PCR技术构建β-环糊精葡糖基转移酶基因的定点突变原核表达载体 被引量：2

3

作者 王华 文一 +4 位作者 于寒松 朴春红 王玉华 刘俊梅 胡耀辉 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第19期145-147,151,共4页

采用重叠延伸PCR技术对环糊精葡萄糖基转移酶基因序列中保守区域的二个氨基酸位点Y127,R254进行体外基因定点突变。将突变基因分别亚克隆进pUC-18,经PCR鉴定及序列分析,所转化的Escherichia coli BL21(DE3)中含有插入的突变基因重组质粒... 采用重叠延伸PCR技术对环糊精葡萄糖基转移酶基因序列中保守区域的二个氨基酸位点Y127,R254进行体外基因定点突变。将突变基因分别亚克隆进pUC-18,经PCR鉴定及序列分析,所转化的Escherichia coli BL21(DE3)中含有插入的突变基因重组质粒,结果表明成功构建了Y127F、R254F二个突变基因的重组表达载体。 展开更多

关键词 β-环糊精葡糖糖基转移酶 重叠延伸PCR 定点突变 原核表达载体 构建

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不同血清型变形链球菌产生葡糖基转移酶能力的比较研究 被引量：3

4

作者 于维先 宋印章 毛华伟 《口腔医学纵横》 CSCD 1995年第4期210-211,共2页

变形链球菌是引起龋病的主要病原菌。各变形链球菌致龋力有所不同。本文通过检测不同血清型变形链球菌所产生葡糖基转移酶能力来探讨不同变形链球菌致龋力的机制。结果表明，在相同条件下，远缘链球菌（血清型ｄ）产生葡糖基转移酶的能... 变形链球菌是引起龋病的主要病原菌。各变形链球菌致龋力有所不同。本文通过检测不同血清型变形链球菌所产生葡糖基转移酶能力来探讨不同变形链球菌致龋力的机制。结果表明，在相同条件下，远缘链球菌（血清型ｄ）产生葡糖基转移酶的能力较其它变形链球菌强。提示远缘链球菌（血清型ｄ）致龋力强与其产生葡糖基转移酶的能力强有关。 展开更多

关键词 变形链球菌 葡糖基转移酶 比较研究

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携带葡糖基转移酶基因链球菌－大肠杆菌穿梭质粒的构建 被引量：1

5

作者 边专 樊明文 +1 位作者 魏国贤 凌均启 《口腔医学纵横》 CSCD 1995年第4期199-201,共3页

作者从ｐＳＰ７３中分离出２２１ｈｐ多克隆区整合至ＰＭＷ１１９。从ｐＳＫ６和ｐＳＫ１６中分离出葡糖基转移酶基因ｇｔｆＢ和ｇｔｆＣ．并整合至这一重组质粒中，分别形成ｐＴＦ４１和ｐＴＦ４２。从ｐＶＡ８３８中分离出链球菌复制... 作者从ｐＳＰ７３中分离出２２１ｈｐ多克隆区整合至ＰＭＷ１１９。从ｐＳＫ６和ｐＳＫ１６中分离出葡糖基转移酶基因ｇｔｆＢ和ｇｔｆＣ．并整合至这一重组质粒中，分别形成ｐＴＦ４１和ｐＴＦ４２。从ｐＶＡ８３８中分离出链球菌复制子并整合至ｐＴＦ４１和ｐＴＦ４２的适当部位．分别构成重组质粒ｐＺＢ１和ｐＺＢ２。ｐＺＢ１和ｐＺＢ２为分别含ｇｔｆＢ或ｇｔｆＣ基因的链球菌－大肠杆菌穿梭质粒。 展开更多

关键词 葡糖基转移酶 基因 链球菌 大肠杆菌

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口腔链球菌菌体表面的葡糖基转移酶受体研究 被引量：1

6

作者 李鸣宇 刘正 《口腔医学纵横》 CSCD 1994年第3期141-142,共2页

本文采用体外实验的方法，观察脂磷壁酸抗血清以及溶菌酶等因素对葡糖基转移酶与口腔链球菌菌体结合的影响，结果提示菌体表面的脂磷壁酸和葡聚糖可能是葡糖基转移酶的受体。

关键词 葡糖基转移酶 受体 口腔链球菌

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葡糖基转移酶抗体含片防治儿童龋病疗效观察

7

作者 赵建 宋长征 +1 位作者 黄海南 张翠 《山东医药》 CAS 北大核心 2002年第13期71-71,共1页

关键词 葡糖基转移酶抗体含片 儿童 龋病 疗效观察 免疫学防治

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唾液细胞游离型葡糖基转移酶活性的实验研究

8

作者 魏国贤 凌均启 《口腔医学纵横》 CSCD 1992年第3期133-135,共3页

对人体口腔唾液中细胞游离型葡糖基转移酶(GTF)的测定结果表明,该酶能吸附到菌细胞及羟基磷灰石表面并保持酶活性,提示其在蔗糖依赖性附着和菌斑形成过程中的作用不容忽视。

关键词 唾液 葡糖基转移酶

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β-环糊精葡萄糖基转移酶突变基因的表达及突变酶酶学性质分析

9

作者 王华 李华 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第13期180-183,188,共5页

通过对已构建的β-CGTase质粒载体采用一步PCR法进行大片段基因的定点突变,得到三个带有突变位点的质粒载体,并将其进行转化得到突变菌株。分析突变酶的酶学性质并与β-环糊精葡萄糖基转移酶比较,结果表明突变酶酶活力提高到原酶活力的... 通过对已构建的β-CGTase质粒载体采用一步PCR法进行大片段基因的定点突变,得到三个带有突变位点的质粒载体,并将其进行转化得到突变菌株。分析突变酶的酶学性质并与β-环糊精葡萄糖基转移酶比较,结果表明突变酶酶活力提高到原酶活力的1.6倍以上,且突变酶作用的最适温度60℃、最适p H6.0、在60℃下和p H5~8范围内均非常稳定,经方差分析突变酶与原酶的酶学性质差异不显著（p〉0.05）,但是酶活力差异显著（p〈0.05）。 展开更多

关键词 β-环糊精葡糖糖基转移酶 定点突变 环化活性 温度 p H

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环糊精葡萄糖基转移酶合成AA-2G反应条件初探 被引量：1

10

作者 何亚妹 刘振杨 +2 位作者 郑婉 苏瑞阳 吴华伟 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2023年第15期203-212,共10页

为了探究重组菌株pET-28a(+)-cgt-T1/BL21(DE3)产生的环糊精葡萄糖基转移酶(Cyclodextrin glucosyltransferase,CGTase)催化合成2-O-α-D-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸(Ascorbic acid 2-glucoside,AA-2G)的效果,用LB发酵培养基表达重组蛋白C... 为了探究重组菌株pET-28a(+)-cgt-T1/BL21(DE3)产生的环糊精葡萄糖基转移酶(Cyclodextrin glucosyltransferase,CGTase)催化合成2-O-α-D-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸(Ascorbic acid 2-glucoside,AA-2G)的效果,用LB发酵培养基表达重组蛋白CGTase-T1,经亲和纯化柱纯化并浓缩后,测定其β-环化活性和歧化活性。以维生素C(Vitamin C,V_(C))和β-环糊精为底物,酶法合成AA-2G,并通过单因素优化实验,进一步探究了不同糖基供体、底物浓度、pH、温度、底物比例、蛋白浓度以及反应时间对AA-2G产量的影响,对酶合成AA-2G的动力学进行了分析。结果表明:此酶具有合成AA-2G的能力,未优化前AA-2G的产量为0.67 g/L。优化后,考虑到低成本和经济效益,选择可溶性淀粉和麦芽糊精为糖基供体,当糖基供体为可溶性淀粉时,底物浓度为70 g/L,反应pH4.5,反应温度37℃,底物比例3/3(VC/糖基供体),蛋白浓度5.0 mg/mL,反应时间为42 h时,该重组CGTase催化合成AA-2G的产量最高能达到12.68 g/L;当糖基供体为麦芽糊精时,底物浓度为30 g/L,反应pH5.0,反应温度37℃,底物比例4/2,蛋白浓度5.0 mg/mL,反应时间为30 h时,该重组CGTase催化合成AA-2G的产量最高能达到4.96 g/L。在最适条件下,AA-2G的产量分别是未优化反应条件下的18.93倍和7.40倍。经动力学分析发现可溶性淀粉作为糖基供体的催化效率高于麦芽糊精,因此,可溶性淀粉作为糖基供体比麦芽糊精更具有优势,合成得到AA-2G的产量更高。本研究成功将重组CGTase-T1用于AA-2G的合成,通过优化酶法合成的反应条件,使AA-2G的产量得到了大幅提高,为实现AA-2G的工业生产提供参考意义。 展开更多

关键词 环糊精葡萄糖基转移酶 2-O-α-D-吡喃葡糖基-L-抗坏血酸 生物酶法 β-环化活性 歧化活性

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RP-HPLC法测定人尿苷二磷酸葡醛酸转移酶UGT1A3转基因细胞中槲皮素

11

作者 姚艳 张霞 +3 位作者 刘瑶 余露山 蒋惠娣 曾苏 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期7-11,共5页

目的:建立反相高效液相色谱法测定人重组UGT1A3转基因细胞中槲皮素,并研究该酶对槲皮素的相关代谢及动力学参数测定。方法:Bac-to-Bac系统表达的人UGT1A3重组酶细胞破碎液与槲皮素共孵育之后,以乙腈沉淀蛋白,采用木犀草素为内标,以Pheno... 目的:建立反相高效液相色谱法测定人重组UGT1A3转基因细胞中槲皮素,并研究该酶对槲皮素的相关代谢及动力学参数测定。方法:Bac-to-Bac系统表达的人UGT1A3重组酶细胞破碎液与槲皮素共孵育之后,以乙腈沉淀蛋白,采用木犀草素为内标,以Phenomenex Luna C18柱为分析柱,甲醇(A)-0.1%甲酸溶液(B)为流动相梯度洗脱:0~25 min(30∶70-80∶20,A∶B),>25~25.5min(80∶20),>25.5~27 min(80∶20-30∶70),>27~30 min(30∶70);流速1.0 ml/min,紫外检测波长为368 nm。结果:槲皮素在5~200μmol/L内线性关系良好(r=0.9999),检测限为1.25μmol/L(S/N≥3),定量限为5μmol/L(S/N>10,RSD=6.99%),方法回收率达99.1%~103.5%,日内、日间RSD分别<2.5%和<8%。另测得UGT1A3催化槲皮素的Km为(62.95±13.16)μmol/L,Vmax为(284.50±24.35)nmol.min-1.g-1,清除率Vmax/Km为4.52 ml.min-1.g... 展开更多

关键词 槲皮素/分析 色谱法 高压液相 葡糖醛酸基转移酶/生物合成 重组酶类

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甜菊糖生物合成相关基因的研究进展 被引量：4

12

作者 倪洪涛 董花 周艳丽 《中国糖料》 2019年第3期70-76,共7页

甜菊糖(Steviol glycosides,SGs)中商用的蛇菊苷(Stevioside,STV)和莱鲍迪苷A(RebaudiosideA,Reb A),是经甲基赤藓糖醇(MEP)途径,由最初的物质丙酮酸和甘油醛-3-磷酸在各种酶的催化作用下,一步步先合成牻牛儿牻牛儿焦磷酸(GGPP),然后GGP... 甜菊糖(Steviol glycosides,SGs)中商用的蛇菊苷(Stevioside,STV)和莱鲍迪苷A(RebaudiosideA,Reb A),是经甲基赤藓糖醇(MEP)途径,由最初的物质丙酮酸和甘油醛-3-磷酸在各种酶的催化作用下,一步步先合成牻牛儿牻牛儿焦磷酸(GGPP),然后GGPP在几种酶基因作用下转化为甜菊醇(Steviol),之后在UDP-葡糖基转移酶(UGTs)基因的作用下形成STV和Reb A,整个过程共有15个酶基因参与。本文综述了甜叶菊中参与甜菊糖生物合成过程UDP-葡糖基转移酶等基因及其它基因的克隆、表达、调节等作用及不同外界环境条件下基因表达差异的研究进展。搞清这些酶基因的作用机理,可有意地、更好地调控甜菊糖的生产量和品质,为改善甜菊糖的生产提供参考。 展开更多

关键词 甜叶菊 甜菊糖 生物合成 基因 udp-葡糖基转移酶

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马铃薯sgt2基因启动子的克隆及其活性分析 被引量：4

13

作者 魏桂民 张金文 +3 位作者 王蒂 张俊莲 陆艳梅 高宜峰 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期41-47,53,共8页

糖苷生物碱(SGAs)是一类存在于茄科和百合科植物的重要次生代谢物,与植物的抗逆性和产品品质有密切关系.茄啶葡糖基转移酶(SGT2)是SGAs合成代谢途径的末端关键酶之一,研究其编码基因的启动子序列对于SGAs生物合成代谢调控有重要的作用... 糖苷生物碱(SGAs)是一类存在于茄科和百合科植物的重要次生代谢物,与植物的抗逆性和产品品质有密切关系.茄啶葡糖基转移酶(SGT2)是SGAs合成代谢途径的末端关键酶之一,研究其编码基因的启动子序列对于SGAs生物合成代谢调控有重要的作用和意义.本研究采用染色体步移技术,克隆到马铃薯茄啶葡糖基转移酶基因(sgt2)起始密码子上游2 098bp的启动子序列,已注册到GenBank(注册号:KC331038).构建该启动子驱动报告基因gfp∶∶gus的植物双元表达载体p1304sgt2p,采用农杆菌介导的烟草叶片瞬时表达,通过GUS组织化学染色分析sgt2p启动子的活性.结果表明:gus基因在转化烟草叶片中高效表达,克隆的启动子具有活性. 展开更多

关键词 马铃薯 糖苷生物碱 茄啶葡糖基转移酶 启动子克隆 瞬时表达

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茶多酚抗牙菌斑作用机理的体外研究 被引量：7

14

作者 卢林 刘天佳 郭丽娟 《口腔医学纵横》 CSCD 1998年第3期140-143,共4页

目的研究茶多酚对牙菌斑的影响。方法茶多酚用乙醇，乙酸乙酯从绿茶中提取，并用FeCl3及薄层层析法鉴定，S．sobrinus6715（g）的游离型和结合型GTF分别经硫酸铵和尿素处理获得，Somogyi法测GTF酶活性，染色法测蛋白质含量，葱酮法测葡... 目的研究茶多酚对牙菌斑的影响。方法茶多酚用乙醇，乙酸乙酯从绿茶中提取，并用FeCl3及薄层层析法鉴定，S．sobrinus6715（g）的游离型和结合型GTF分别经硫酸铵和尿素处理获得，Somogyi法测GTF酶活性，染色法测蛋白质含量，葱酮法测葡聚糖含量。通过红外光谱鉴定葡聚糖。结果茶多酚能抑制变链球茵的生长、GTF酶活性及酶产生的胞外多糖。结论茶多酚能有效控制菌斑。 展开更多

关键词 茶多酚 葡糖基转移酶 菌斑控制

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甜菊糖的酶法改性 被引量：20

15

作者 朱海霞 郑建仙 《中国食品添加剂》 CAS 2004年第1期54-60,共7页

甜菊糖是一种天然的强力甜味剂 ,它的二种组分———甜菊苷和甜菊双糖C苷有苦味和不愉快的后味 ,会显著影响甜菊糖的味质。通过酶改性法在甜菊苷、甜菊双糖C苷中引入一些糖基 ,可以改善甜质。目前酶改性甜菊糖的方法主要有 :环糊精葡糖... 甜菊糖是一种天然的强力甜味剂 ,它的二种组分———甜菊苷和甜菊双糖C苷有苦味和不愉快的后味 ,会显著影响甜菊糖的味质。通过酶改性法在甜菊苷、甜菊双糖C苷中引入一些糖基 ,可以改善甜质。目前酶改性甜菊糖的方法主要有 :环糊精葡糖基转移酶法、β -呋喃果糖苷酶法、半乳糖苷酶法和微生物糖基化法。本论文对这几种酶改性方法作一详细介绍。 展开更多

关键词 甜菊糖 强力甜味剂 酶法改性 环糊精葡糖基转移酶法 β-呋喃果糖苷酶法 半乳糖苷酶法

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远缘链球菌GTF催化活性蛋白及其多克隆抗体的制备和鉴定 被引量：2

16

作者 孙静华 牛玉梅 樊明文 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2007年第6期615-619,共5页

目的:在大肠杆菌中表达重组远缘链球菌葡糖基转移酶(glucosyltransferase,GTF)的催化活性区(catalytic region,CAT)蛋白并制备其多克隆抗体。方法:扩增远缘链球菌OMZ176基因组的CAT区的基因片段,克隆入pQE31载体诱导表达,鉴定表达产物... 目的:在大肠杆菌中表达重组远缘链球菌葡糖基转移酶(glucosyltransferase,GTF)的催化活性区(catalytic region,CAT)蛋白并制备其多克隆抗体。方法:扩增远缘链球菌OMZ176基因组的CAT区的基因片段,克隆入pQE31载体诱导表达,鉴定表达产物。重组蛋白纯化后免疫小鼠制备多克隆抗体,ELISA测定抗体的效价,West-ern blotting检测抗体的特异性和亲和性。结果:重组质粒成功在大肠杆菌中表达,经抗His tag单克隆抗体免疫印迹法检测,有阳性条带出现,证实重组蛋白有抗原特异性。ELISA测定免疫小鼠所得抗CAT多克隆抗体效价可达到1∶5000。Western blotting检测证明该抗体有较好的针对CAT蛋白的专一性。结论:GTF区CAT基因原核表达质粒构建成功,表达的融合蛋白具有良好的抗原性。抗CAT多克隆抗体特异性和效价良好,能够满足针对CAT免疫印迹和细胞免疫组化检测等实验要求,为深入研究同时包含变形链球菌和远缘链球菌两种致龋菌的主要抗原的新型防龋DNA疫苗奠定了必要的物质基础。 展开更多

关键词 远缘链球菌 葡糖基转移酶 原核表达

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甜菜色素合成关键基因的克隆及不同光质对其表达的影响 被引量：5

17

作者 马冰雪 代翠红 程大友 《中国糖料》 2020年第3期7-13,共7页

甜菜色素是红甜菜的次生代谢产物。为了研究这些含氮次生代谢产物合成过程中UDP-葡糖基转移酶基因(UGT)及酪氨酸酶基因(TYR)的功能及对不同光质的响应、表达机制,初步克隆了UGT、TYR基因并进行了相关生物信息学分析,测定其启动子序列。... 甜菜色素是红甜菜的次生代谢产物。为了研究这些含氮次生代谢产物合成过程中UDP-葡糖基转移酶基因(UGT)及酪氨酸酶基因(TYR)的功能及对不同光质的响应、表达机制,初步克隆了UGT、TYR基因并进行了相关生物信息学分析,测定其启动子序列。分析表明:UGT、TYR基因启动子序列中共有的主要元件为TATA-box和CAAT-box;调控有机酸的顺式作用元件W-box(TT⁃GACC)和ABRE;光响应元件ACE和G-Box等。由此推测甜菜UGT、TYR基因的表达对不同光质和有机酸类化学调节物质较为敏感。通过红光(RL)、绿光(GL)和蓝光(BL)不同光质处理发现,3种光均会对甜菜幼苗的生长产生抑制作用,RL处理的抑制作用最明显,GL与BL处理的抑制作用无显著差异。在BL处理下,甜菜幼苗色素含量明显上升,UGT和TYR基因的表达量均表现明显上调;在GL处理下,TYR基因的表达量表现明显上调,而UGT基因表现为先下调、后上调的特点;在RL处理下,TYR基因表达量表现为显著上调,而UGT基因表现为先上调后下调,中间平稳,后期上调的特点,甜菜幼苗色素含量明显下降。 展开更多

关键词 甜菜 色素 udp-葡糖基转移酶 酪氨酸酶 基因克隆 启动子 光质

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两种GTF氨基催化区改良防龋质粒免疫小鼠的实验研究

18

作者 孙静华 樊明文 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期89-92,96,共5页

目的:通过比较编码表兄链球菌葡糖基转移酶氨基催化区CAT不同形式基因序列的两种改良防龋质粒免疫BALB/c小鼠后激发的特异性抗体水平差异,初步评价不同形式CAT在DNA防龋疫苗中的应用潜力。方法:利用分子克隆技术构建两种改良防龋质粒,... 目的:通过比较编码表兄链球菌葡糖基转移酶氨基催化区CAT不同形式基因序列的两种改良防龋质粒免疫BALB/c小鼠后激发的特异性抗体水平差异,初步评价不同形式CAT在DNA防龋疫苗中的应用潜力。方法:利用分子克隆技术构建两种改良防龋质粒,在靶向防龋DNA疫苗pGJA-P/VAX中插入表兄链球菌OMZ176GTF-I CAT全基因序列构建pGJGAC/VAX;将基因公司合成的共计165bp的串联重复5次的GTF-I氨基催化区核心保守序列克隆到pGJA-P/VAX中构建pGJGA-5C/VAX。转染CHO细胞系,检测其表达。两种改良质粒经鼻腔滴注免疫BALB/c小鼠,检测血清和唾液中的特异性抗PAc,抗GLU和抗CAT抗体水平。结果:重组质粒的基因序列与预期相符。不同形式CAT基因序列的两种改良防龋质粒均可在真核细胞正确表达。pGJGAC/VAX和pGJGA-5C/VAX免疫动物后血清和唾液特异性抗PAc、抗GLU和抗CAT抗体均显著高于空载体pVAX1免疫组(P<0.05)。第10、12和14周,pGJGAC/VAX免疫组小鼠的血清特异性抗CAT抗体显著高于pGJGA-5C/VAX组(P<0.05)。两组间唾液特异性抗体未见显著性差异。pGJGA-5C/VAX在小鼠体内激发特异性抗体的速度较pGJGAC/VAX略快。结论:本实验构建的增加表兄链球菌GTF氨基催化区的两种改良防龋质粒,可在真核细胞中正确表达,两种质粒有效地诱导黏膜和系统体液免疫反应,pGJGAC/VAX和pGJGA-5C/VAX各有优势。 展开更多

关键词 龋齿 疫苗 DNA 表兄链球菌 葡糖基转移酶

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抗变异链球菌卵黄抗体对变异链球菌致龋毒力因子及菌斑生物膜的影响 被引量：4

19

作者 周莉莉 徐燕 +4 位作者 蒋鹏 徐涵颖 辛保见 沈继龙 程婷 《口腔医学研究》 CAS 北大核心 2019年第5期448-452,共5页

目的:制备并纯化抗变异链球菌卵黄抗体(抗S.mutans-IgY),观察其对变异链球菌(Streptococcus mutans,S.mutans)胞外多糖、葡糖基转移酶活性、生物膜形成及活性的影响。方法:将甲醛灭活的S.mutans免疫150日龄白航蛋鸡4次,每次间隔10 d,取... 目的:制备并纯化抗变异链球菌卵黄抗体(抗S.mutans-IgY),观察其对变异链球菌(Streptococcus mutans,S.mutans)胞外多糖、葡糖基转移酶活性、生物膜形成及活性的影响。方法:将甲醛灭活的S.mutans免疫150日龄白航蛋鸡4次,每次间隔10 d,取鸡蛋用两步硫酸铵沉淀法提取IgY,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测免疫后效价变化。蒽酮法测定水不溶性及水溶性胞外多糖;Neson-Somogyi法测定葡萄糖基转移酶活性;二甲氧唑黄[2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]-2H-tetrzo lium hydroxide,XTT]还原比色法研究IgY对生物膜总量的影响;采用激光共聚焦显微镜观察牙菌斑生物膜中死菌和活菌的构成。结果:经4次免疫后抗体最高效价为1∶256000,维持40 d;IgY对S.mutans合成水不溶性胞外多糖的能力较对照组有明显抑制(P<0.01);药物作用后S.mutans还原糖、酶活力均降低(P<0.01);XTT法结果显示IgY对S.mutans生物膜抑制率为17.02%～74.13%;激光共聚焦显微镜观察到随着药液浓度增加,绿色的活菌、团块结构减少,生物膜厚度明显减小。结论:一定浓度IgY能够抑制S.mutans的增殖,具有抗龋作用。 展开更多

关键词 变异链球菌 卵黄抗体 葡糖基转移酶 水不溶性多糖 菌斑生物膜

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小鼠胚胎干细胞衍生的肝组织微粒体Ⅱ相代谢酶表征 被引量：1

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作者 李彤 郭美媛 +4 位作者 马葵芬 杜悦 何良艳 朱丹雁 楼宜嘉 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期530-537,共8页

目的:观察小鼠胚胎干细胞定向分化肝组织过程中,肝组织微粒体Ⅱ相代谢酶尿苷-5'-二磷酸葡醛酰转移酶(UGT)1a1、1a6和微粒体谷胱甘肽S-转移酶1(mGST1)的表达及其催化活性。方法:利用拟胚体固有的三胚层结构,直接由中胚层心肌细胞产... 目的:观察小鼠胚胎干细胞定向分化肝组织过程中,肝组织微粒体Ⅱ相代谢酶尿苷-5'-二磷酸葡醛酰转移酶(UGT)1a1、1a6和微粒体谷胱甘肽S-转移酶1(mGST1)的表达及其催化活性。方法:利用拟胚体固有的三胚层结构,直接由中胚层心肌细胞产生成纤维细胞生长因子,自发诱导内胚层细胞发育,并由同步分化的内皮细胞支持肝细胞发育形成肝样组织。在不同分化阶段,基于mRNA表达情况,以Western blot法检测UGT1a1、UGT1a6和mGST1表达特征。至分化终点(第18天)以心肌细胞搏动区域附近表达肝特异性标记物白蛋白确定为肝细胞。超声法碎裂细胞,超速离心制备肝细胞微粒体,以HPLC检测UGTs代谢活性,以色谱法测定并计算mGST1酶催化活性。结果:至分化终点,小鼠胚胎干细胞衍生的肝组织表达UGT1a1、UGT1a6和mGST1,并具有UGT1a1、UGT1a6和mGST1的催化功能。其中分化第18天肝组织GST1催化活性为7.65 nmol·min-1·mg-1。结论:小鼠胚胎干细胞分化的肝组织具UGT1a1、UGT1a6和mGST1代谢功能,可望成为肝脏病理生理和药物Ⅱ相代谢研究的体外模型。 展开更多

关键词 胚胎干细胞 肝 解剖学和组织学 谷胱甘肽转移酶 微粒体 肝 葡糖醛酸基转移酶

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