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基于Tet-On系统构建Alb启动子调控猪uPA转基因表达的慢病毒载体 被引量:2
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作者 刘宇 陈恒伟 +3 位作者 温悦婷 贾俊双 林晓琳 肖东 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第5期23-28,共6页
目的应用Tet-On基因表达调控系统构建Alb启动子调控小型猪uPA (pig urokinase-type plasminogen activator,puPA)基因表达的慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-puPA-T2A-CopGFP(pLATTPUTG)。方法首先将pAlb-Cre-GH/BS作为模板,PCR扩增目的... 目的应用Tet-On基因表达调控系统构建Alb启动子调控小型猪uPA (pig urokinase-type plasminogen activator,puPA)基因表达的慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-puPA-T2A-CopGFP(pLATTPUTG)。方法首先将pAlb-Cre-GH/BS作为模板,PCR扩增目的基因Alb-enhancer/promoter,In-Fusion克隆至Xho I/Xba I双酶切的pLVX-TetOne中,获得Alb启动子替换pLVX-TetOne原有的PGK启动子的质粒pLVX-Alb-TetOne;接着以pCD823 A-1为模板,PCR扩增T2A-CopGFP,In-Fusion克隆至BamH I/Age I酶切的pLVX-Alb-TetOne中,获得pLVX-Alb-TetOne-TRE-T2A-CopGFP(pLATTTG);最后以H8803为模板,PCR扩增puPA(3′端含Flag标签),In-Fusion克隆至pLATTTG中,最终获得慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-puPA-T2A-CopGFP (pLATTPUTG);所构建的质粒均经酶切和测序鉴定。pLATTPUTG瞬转293T细胞,转染24 h后倒置荧光显微镜检测绿色荧光;随后六孔板内加入强力霉素(Dox),48 h后倒置荧光显微镜下检测CopGFP表达(包括未加Dox的孔),接着收集细胞以抽提总RNA和总蛋白,以用于qRT-PCR检测puPA和CopGFP表达及Western blot检测Flag表达。结果酶切鉴定和测序证实成功构建了慢病毒载体pLATTPUTG。pLATTPUTG转染293T细胞,24 h后倒置荧光显微镜下未见绿色荧光,而加入Dox 48 h后几乎所有细胞均发强的绿色荧光,而不加Dox的孔内仍然未见绿色荧光;加Dox的孔内细胞上puPA、CopGFP和Flag表达水平均显著升高,而不加Dox的孔内细胞上检测到上述基因极低表达;以上数据提示,应用该Tet-On基因表达调控系统实现了puPA基因在293T细胞上可诱导性表达。结论成功基于Tet-On基因表达调控系统构建Alb启动子调控puPA转基因表达的慢病毒载体pLATTPUTG,这为相关后续研究奠定了坚实基础。 展开更多
关键词 Alb启动子 小型猪uPA copGFP tet-on基因表达调控系统 慢病毒载体
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新型Tet-On系统大鼠GDNF和TH双基因的慢病毒载体的构建与表达 被引量:7
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作者 张阳 张志坚 +3 位作者 杨光华 俞晓岚 黄志新 吴秀丽 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1079-1084,共6页
目的采用改良的Tet-On四环素可调控系统,构建携带大鼠胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因和酪氨酸羟化酶(TH)双基因的慢病毒载体,观察四环素类抗生素对GDNF、TH基因的表达调控。方法 PCR方法获得大鼠GD-NF、TH基因,将其克隆至改良的Tet... 目的采用改良的Tet-On四环素可调控系统,构建携带大鼠胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因和酪氨酸羟化酶(TH)双基因的慢病毒载体,观察四环素类抗生素对GDNF、TH基因的表达调控。方法 PCR方法获得大鼠GD-NF、TH基因,将其克隆至改良的Tet-On四环素调控慢病毒载体。通过瞬间转染法包装出病毒上清,用实时荧光定量PCR鉴定滴度。将包装的慢病毒-TH-GDNF与rtTA2S-M2以相同感染复数(MOI)感染293T细胞,实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测强力霉素对GDNF、TH基因mRNA和蛋白的表达调控。结果实验成功构建重组慢病毒载体质粒;生产的病毒浓缩后滴度为2.1×1011TU·L-1;感染293T细胞实时荧光定量PCR和免疫印迹显示强力霉素阳性组可见GDNF、TH基因mRNA表达明显升高(P<0.01)和蛋白条带,阴性组未见。结论在改良的Tet-On调控系统的慢病毒载体上成功克隆大鼠GDNF、TH双基因,其表达受四环素类抗生素调控并未见背景效应。 展开更多
关键词 胶质细胞源性神经营养因子 酪氨酸羟化酶 慢病毒载体 基因克隆 tet-on系统 调控表达
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Tet-On基因表达系统定量调节荧光素酶基因在CHO细胞中的表达 被引量:3
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作者 伏爽 程康 +2 位作者 王申五 马大龙 王德炳 《北京医科大学学报》 CSCD 1998年第6期512-514,554,共4页
目的:应用TetOn基因表达系统建立CHOTetOn细胞株,通过强力霉素(Dox)调节荧光素酶基因的表达。方法:pTetOn质粒转染CHO细胞株,经G418筛选,得到稳定表达株CHOTetOn。pTRE... 目的:应用TetOn基因表达系统建立CHOTetOn细胞株,通过强力霉素(Dox)调节荧光素酶基因的表达。方法:pTetOn质粒转染CHO细胞株,经G418筛选,得到稳定表达株CHOTetOn。pTRELuc质粒瞬时转染CHOTetOn克隆1至30,培养基中加入2mg·L-1Dox或不加Dox,培养72h后检测荧光素酶活性。结果:克隆18、28、29当培养基中加入Dox(即“On”状态)时荧光素酶活性高,当培养基中不加Dox(即“Of”状态)时荧光素酶活性低,故选择克隆18、28、29作为高表达、低背景的CHOTetOn细胞株。结论:CHOTetOn细胞株的建立,可利用四环素及其衍生物调节多种外源基因的表达,有效调控基因表达的时间和水平,定量诱导毒性蛋白的表达,增加治疗的疗效和安全性,有望为基因治疗提供一条可控的安全途径。 展开更多
关键词 tet-on基因 基因表达调控 荧光素酶基因 CHO细胞
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前列腺素核受体系统信号转导及基因表达调控 被引量:1
4
作者 陈瑛 栾黎明 杨增明 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第3期209-212,共4页
脂肪酸和前列腺素等脂代谢的产物不仅通过膜受体起作用 ,也可以通过与核受体结合来调节基因表达 .前列腺素I2 (PGI2 )既可以与G蛋白偶联的细胞表面IP受体起作用 ,也可以通过核受体过氧化物酶体增殖因子活化受体 (PPARs)发挥生物学功能 ... 脂肪酸和前列腺素等脂代谢的产物不仅通过膜受体起作用 ,也可以通过与核受体结合来调节基因表达 .前列腺素I2 (PGI2 )既可以与G蛋白偶联的细胞表面IP受体起作用 ,也可以通过核受体过氧化物酶体增殖因子活化受体 (PPARs)发挥生物学功能 .前列腺素E2 (PGE2 )的受体 (EPs)不仅仅在质膜上有 ,最近在核膜上也发现了EPs受体 .前列腺素核受体介导的信号转导途径与膜受体介导的信号途径不同 ,对于基因转录的调控机制也不同 . 展开更多
关键词 前列腺素 核受体系统 信号转导 基因表达 生物学功能 调控机制 细胞
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反义RNA基因表达调控系统
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作者 贾洪涛 《生物学教学》 北大核心 2003年第7期1-3,共3页
本文概述了原核生物和真核生物反义RNA的研究进展,介绍了细胞内天然反义RNA基因表达调控系统及其可能的调控机制。
关键词 反义RNA 基因表达调控系统 原核生物 真核生物 反义基因
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基于核糖开关的新型基因表达调控系统的应用 被引量:1
6
作者 熊莹喆 曹苑青 +1 位作者 肖玲慧 李招发 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期41-46,共6页
核糖开关是能对细胞环境的改变做出反应的顺式作用元件,通过改变自身的构象实现对基因表达的调控。基于核糖开关调控方式简洁,无需蛋白质参与,响应迅速,且自身片段小,结构简单,易于设计和改造等特性使其在生物医学领域体现出诸多应用优... 核糖开关是能对细胞环境的改变做出反应的顺式作用元件,通过改变自身的构象实现对基因表达的调控。基于核糖开关调控方式简洁,无需蛋白质参与,响应迅速,且自身片段小,结构简单,易于设计和改造等特性使其在生物医学领域体现出诸多应用优势。对核糖开关的结构,调节机理以及这种新型基因表达调控系统在基因治疗、抗生素新靶点的开发、病毒疫苗的安全控制、新型核糖选择器和生物体内传感器的应用进行了综述,旨为启示我国核糖开关的新型应用。 展开更多
关键词 核糖开关 基因表达调控系统 机理
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Tet调控STGC3基因表达的CNE2细胞系裸鼠成瘤实验性研究 被引量:4
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作者 邱青朝 胡波 +4 位作者 贺修胜 罗桥 龙治峰 唐国华 廖银花 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第4期359-365,共7页
STGC3基因是一个新近克隆的肿瘤相关基因,前期的体外实验研究结果表明,STGC3基因在CNE2鼻咽癌细胞系高表达,可明显抑制CNE2的生长增殖.采用Tet/pTRE-STGC3/CNE2细胞系接种于裸鼠皮下,以强力霉素(Dox)诱导STGC3基因高表达,观测STGC3基因... STGC3基因是一个新近克隆的肿瘤相关基因,前期的体外实验研究结果表明,STGC3基因在CNE2鼻咽癌细胞系高表达,可明显抑制CNE2的生长增殖.采用Tet/pTRE-STGC3/CNE2细胞系接种于裸鼠皮下,以强力霉素(Dox)诱导STGC3基因高表达,观测STGC3基因高表达对CNE2裸鼠体内成瘤的影响,并探讨其可能作用机制.运用RT-PCR、蛋白质印迹及免疫组织化学方法,分别从mRNA和蛋白质水平,分析瘤组织中STGC3基因的表达;用流式细胞仪检测移植瘤组织内肿瘤细胞的凋亡情况;用免疫组织化学方法,检测移植瘤组织凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达.研究结果显示,STGC3蛋白表达主要定位于细胞核内,Dox诱导STGC3基因在Tet/pTRE-STGC3/CNE2细胞系高表达,Tet/pTRE-STGC3/CNE2细胞系裸鼠体内成瘤受到明显抑制,与对照组比较,移植瘤成瘤时间晚、生长慢、肿块小、细胞凋亡率高,Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减少,差异有显著性意义(P<0.01).此体内实验研究结果与前期体外实验结果一致,进一步证明STGC3基因对肿瘤细胞生长具有抑制作用. 展开更多
关键词 鼻咽癌 STGC3基因 裸鼠 tet-on调控表达系统
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在四环素调控系统下表达HA蛋白MDCK细胞系的建立
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作者 于海龙 许榜丰 +9 位作者 石晓娜 马天馨 闫婉婉 李雪松 杨健美 滕巧泱 刘芹防 苑纯秀 赵权 李泽君 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2021年第5期13-18,共6页
细胞培养流感病毒生产疫苗过程中细胞系的选择至关重要,本研究建立了可控表达H9N2亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白的MDCK细胞系,能有效支持H9N2流感病毒的扩增。本研究应用插入四环素调控元件和H9N2亚型禽流感病毒HA基因的重组质粒V2-H9,与... 细胞培养流感病毒生产疫苗过程中细胞系的选择至关重要,本研究建立了可控表达H9N2亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白的MDCK细胞系,能有效支持H9N2流感病毒的扩增。本研究应用插入四环素调控元件和H9N2亚型禽流感病毒HA基因的重组质粒V2-H9,与辅助质粒pMDSV、psPAX2共转染293T细胞包装慢病毒,将包装出的慢病毒感染MDCK细胞,通过添加嘌呤霉素筛选出阳性的单克隆细胞。再用PR8 SH441病毒感染筛选出来的MDCK单克隆细胞。结果显示,流感病毒在其中4株MDCK单克隆细胞的HA效价接近于8;生长曲线结果显示,流感病毒在第34株MDCK单克隆细胞中复制效果最好;间接免疫荧光(IFA)和Western blot检验结果显示,第34株MDCK单克隆细胞H9 HA的表达量最高;将第34株MDCK单克隆细胞驯化后进行悬浮培养,每隔24 h测定细胞密度,结果表明,第34株MDCK单克隆细胞可以悬浮培养,且流感病毒在第34株MDCK悬浮细胞中HA效价可达9log2。以上结果表明,本研究获得了一株可高效扩增H9亚型禽流感病毒的MDCK细胞株,为流感弱毒疫苗的研发提供了新的研究方法和实验基础。 展开更多
关键词 流感病毒 四环素调控系统 HA基因 诱导表达
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神经系统特异表达基因调控机理的研究进展
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作者 刘瑾 袁建刚 强伯勤 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第1期7-10,共4页
神经系统特异性基因正确的时空表达受细胞内外信号的调控 ,信号传导途径最终的靶位点是能结合特异转录因子的DNA序列 .目前发现的决定神经系统基因特异性表达的顺式作用元件既有增强子 ,也有沉默子 .它们可以特异性地增强基因在神经系... 神经系统特异性基因正确的时空表达受细胞内外信号的调控 ,信号传导途径最终的靶位点是能结合特异转录因子的DNA序列 .目前发现的决定神经系统基因特异性表达的顺式作用元件既有增强子 ,也有沉默子 .它们可以特异性地增强基因在神经系统的表达 ,或特异性抑制基因在非神经系统的表达 .顺式元件要发挥这些作用 ,依赖于与其结合的反式因子 ,而这些反式因子又能与其他蛋白质或DNA序列发生互动 ,通过协调作用 ,共同决定基因的时空表达顺序 . 展开更多
关键词 神经系统特异性表达 顺式元件 反式因子 调控机理
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5′UTR区的编辑降低大麦GBSSⅠ基因表达
10
作者 薛瑞莹 刘永菊 +5 位作者 姜燕燕 彭欣雅 曹东 李云 刘宝龙 包雪梅 《生物技术通报》 北大核心 2025年第3期83-89,共7页
【目的】大麦是第四大粮食作物,其籽粒总淀粉含量以及直链淀粉和支链淀粉的比例是决定大麦品质和特性的关键因素之一,直链淀粉含量的精细调控对于大麦面粉品质改良具有重要意义。【方法】本研究以大麦Cas9过表达株系为受体,通过BSMV-sg... 【目的】大麦是第四大粮食作物,其籽粒总淀粉含量以及直链淀粉和支链淀粉的比例是决定大麦品质和特性的关键因素之一,直链淀粉含量的精细调控对于大麦面粉品质改良具有重要意义。【方法】本研究以大麦Cas9过表达株系为受体,通过BSMV-sg介导的基因编辑系统,对GBSSⅠ基因的5′非编码区域(5′UTR)进行靶向编辑,实现GBSSⅠ基因表达的精细调控。【结果】14株M0代5′UTR植株的第5分蘖叶片均发生了体细胞编辑,编辑效率为1.22%-84.49%,收获体细胞编辑效率最高的第5分蘖的种子,并在其23株M1代单株中鉴定到6株编辑系,编辑植株比例达26.08%。RT-qPCR检测GBSSⅠ基因的表达,编辑系的表达量比对照下降了40%-82%。【结论】通过编辑5′UTR区可以调控GBSSⅠ基因的表达,为直链淀粉合成的精细调控提供新思路。 展开更多
关键词 基因编辑 BSMV-sg系统 5′UTR GBSSⅠ基因 表达调控 大麦
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大黄鱼细胞适用四环素调控系统的构建与验证
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作者 葛金鑫 颜廷鼎 +3 位作者 王克智 刘也 何志巧 申望 《浙江农业科学》 2024年第6期1285-1290,共6页
构建大黄鱼(Larimichthys crocea)细胞适用的四环素调控系统,为大黄鱼蛋白质功能研究提供可靠工具。以pEGFP-N1质粒的CMV增强子/启动子替换四环素调控载体pTRE3G-MCS-EGFP-3×FLAG-Tetone-Puro(简称pTRE3G)转录激活子(rtTA)的EF-1... 构建大黄鱼(Larimichthys crocea)细胞适用的四环素调控系统,为大黄鱼蛋白质功能研究提供可靠工具。以pEGFP-N1质粒的CMV增强子/启动子替换四环素调控载体pTRE3G-MCS-EGFP-3×FLAG-Tetone-Puro(简称pTRE3G)转录激活子(rtTA)的EF-1α启动子及其下游5′-长末端重复序列(5′-LTR),构建重组载体pTRE3G-CMV;转染大黄鱼头肾细胞系YCK-hk细胞,Dox诱导EGFP表达,验证pTRE3G-CMV在大黄鱼细胞中驱动外源基因表达的可靠性。成功构建四环素调控载体pTRE3G-CMV;pTRE3G-CMV质粒转染的大黄鱼YCK-hk细胞经Dox诱导表达EGFP,表明CMV增强子/启动子在YCK-hk细胞中正常驱动rtTA表达;pTRE3G-CMV质粒转染YCK-hk细胞效率低(<1%),经嘌呤霉素筛选后EGFP表达阳性细胞率上升至约30%,表明嘌呤霉素能有效筛选转染成功细胞,提示可结合单克隆筛选建立稳转细胞系。研究构建的四环素调控载体pTRE3G-CMV在大黄鱼细胞中正常表达外源基因,可用于大黄鱼蛋白质功能研究。 展开更多
关键词 四环素调控系统 大黄鱼 重组蛋白表达
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鸭补体调控因子H在昆虫杆状病毒中的表达
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作者 白红英 刘洋洋 曹嫚嫚 《甘肃畜牧兽医》 2024年第6期89-94,共6页
经昆虫杆状病毒进行鸭补体调控因子H(FH)的表达,为筛选出鸭源致病菌与FH互作的蛋白做好准备。本研究以从健康的鸭肝脏中获取的RNA逆转录得到的cDNA为模板,通过基因扩增获得鸭补体调控因子H基因的两段片段:FH1-7SCRs、FH8-20SCRs,构建重... 经昆虫杆状病毒进行鸭补体调控因子H(FH)的表达,为筛选出鸭源致病菌与FH互作的蛋白做好准备。本研究以从健康的鸭肝脏中获取的RNA逆转录得到的cDNA为模板,通过基因扩增获得鸭补体调控因子H基因的两段片段:FH1-7SCRs、FH8-20SCRs,构建重组质粒并进行同源重组,转染昆虫细胞收获重组杆状病毒,通过PCR扩增、间接免疫荧光试验及免疫印迹法等方法对重组病毒进行检测,最后优化蛋白表达条件,诱导目的蛋白大量表达,并进行纯化。结果表明:成功构建了2个真核表达载体,并成功获得具有生物学活性的鸭补体调控因子H,为进一步探索鸭源致病菌利用鸭补体调控因子H实现补体的捕获杀伤奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭补体调控因子H 补体系统 昆虫细胞 杆状病毒表达系统
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山梨酸改善猪的生长性能并调控胰岛素样生长因子系统基因表达
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《中国猪业》 2011年第9期67-67,共1页
山梨酸(SA)是一种具有共轭双键的多不饱和脂肪酸(PUFA)。共轭脂肪酸如共轭亚油酸(CLA),是一种多功能的具有生物活性的脂肪酸,其具有促进生长的作用。通过测定平均日增重(ADG,Averaged aily gain)、平均日采食量(ADFI,Avera... 山梨酸(SA)是一种具有共轭双键的多不饱和脂肪酸(PUFA)。共轭脂肪酸如共轭亚油酸(CLA),是一种多功能的具有生物活性的脂肪酸,其具有促进生长的作用。通过测定平均日增重(ADG,Averaged aily gain)、平均日采食量(ADFI,Average daily feed intake). 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子系统 山梨酸 基因表达 生长性能 多不饱和脂肪酸 平均日增重 调控 共轭双键
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Tet调控STGC3基因表达CNE2细胞系的建立及其功能初步研究 被引量:8
14
作者 邓敏 贺修胜 +3 位作者 罗桥 赵帅 曾超 李艳兰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第1期39-44,共6页
利用Tet-on调控系统,建立受强力霉素诱导STGC3基因表达的CNE2细胞系,为进一步研究STGC3的功能提供了一个理想的实验平台.先后将调控质粒pTet-on和反应质粒pTRE-STGC3转染入CNE2细胞,并用G418和潮霉素分别进行两轮筛选,运用RT-PCR选择对... 利用Tet-on调控系统,建立受强力霉素诱导STGC3基因表达的CNE2细胞系,为进一步研究STGC3的功能提供了一个理想的实验平台.先后将调控质粒pTet-on和反应质粒pTRE-STGC3转染入CNE2细胞,并用G418和潮霉素分别进行两轮筛选,运用RT-PCR选择对强力霉素诱导敏感的细胞克隆.用不同浓度强力霉素诱导CNE2/Tet/pTRE-STGC3细胞,RT-PCR检测STGC3的表达,确定强力霉素的最佳诱导浓度.采用此浓度的强力霉素分别诱导CNE2、CNE2/Tet/pTRE、CNE2/Tet/pTRE-STGC3三组细胞,测定细胞的生长曲线、克隆形成率和细胞周期分布.诱导STGC3基因高表达,CNE2细胞增殖速度显著减慢(P<0.05),克隆形成能力显著降低(P<0.01);流式细胞仪检测结果显示,瘤细胞群体中处于G0/G1期细胞数增加,细胞阻滞于G0/G1期.Tet调控STGC3基因表达CNE2细胞系的成功建立,为进一步研究STGC3基因的功能提供一个理想的细胞模型. 展开更多
关键词 鼻咽癌 STGC3基因 tet-on基因表达系统
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细菌几丁质酶基因的表达调控 被引量:6
15
作者 谢池楚 贾海云 陈月华 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1029-1038,共10页
几丁质酶可以降解几丁质,广泛存在于各类微生物中。几丁质的降解产物几丁寡糖在医药、食品及农业生防领域有很重要的应用价值及广泛的应用前景。细菌在利用几丁质时,需要先分泌几丁质酶,将几丁质降解成几丁寡糖或单体,再通过特异的转运... 几丁质酶可以降解几丁质,广泛存在于各类微生物中。几丁质的降解产物几丁寡糖在医药、食品及农业生防领域有很重要的应用价值及广泛的应用前景。细菌在利用几丁质时,需要先分泌几丁质酶,将几丁质降解成几丁寡糖或单体,再通过特异的转运系统送进细胞而被利用。胞内的几丁质降解产物作为特定的信号分子,可以激活或阻遏相应chi基因的转录,从而影响细菌几丁质酶的合成。在各种调节蛋白及应答元件的参与下,细菌几丁质酶的合成受到精密的控制。文章以链霉菌和大肠杆菌为代表综述了细菌在转运系统和基因表达两个层面上控制几丁质酶合成的最新研究进展。 展开更多
关键词 细菌 几丁质酶基因 转运系统 表达调控
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Tet调控的脑相对特异性新基因LRRC4表达细胞系的构建 被引量:1
16
作者 张秋红 王莉莉 +4 位作者 彭聪 曹利 王洁如 李小玲 李桂源 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第4期325-330,共6页
LRRC4是一个在脑相对特异性表达的富亮氨酸重复超家族新成员,在神经胶质瘤表达明显下调或缺失且具有抑制脑胶质瘤细胞生长的潜能. 利用Tet-on基因表达系统,经过两轮转染,先后将调控质粒pTet-on和表达质粒pTRE-2hyg-LRRC4转染U251细胞系... LRRC4是一个在脑相对特异性表达的富亮氨酸重复超家族新成员,在神经胶质瘤表达明显下调或缺失且具有抑制脑胶质瘤细胞生长的潜能. 利用Tet-on基因表达系统,经过两轮转染,先后将调控质粒pTet-on和表达质粒pTRE-2hyg-LRRC4转染U251细胞系,分别用G418和潮霉素Hygromycin进行两次筛选. 在第一轮挑取的80个克隆中,利用pTRE-2hyg-luciferase报告基因进行最佳的低背景高表达的pTet-on细胞克隆筛选,在通过量效关系和动力学检测筛选的最佳克隆基础上,再进行pTRE-2hyg-LRRC4的转染,并通过RT-PCR和RNA印迹检测,成功获得了两个具有良好诱导性Tet调控的LRRC4双稳定表达细胞系,为进一步阐明LRRC4在脑胶质瘤发生发展中的作用,提供有利的研究基础和理想的实验平台. 展开更多
关键词 LRRC4 tet-on基因表达系统 DOXYCYCLINE
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Cre/Loxp和四环素系统在基因可控表达中的应用 被引量:3
17
作者 张一 黎晓敏 +2 位作者 吕凤林 梁存军 宋容 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2007年第1期76-80,共5页
本文介绍了目前最常见的四环素调控系统和Cre/LoxP系统的基本原理、应用情况、近年来的研究进展总结,比较了两种系统的优缺点,介绍了两种系统联合应用的成果,并且提出了Cre/Loxp系统在HPV11全基因组定向表达中的应用,并由此提出利用Cre/... 本文介绍了目前最常见的四环素调控系统和Cre/LoxP系统的基本原理、应用情况、近年来的研究进展总结,比较了两种系统的优缺点,介绍了两种系统联合应用的成果,并且提出了Cre/Loxp系统在HPV11全基因组定向表达中的应用,并由此提出利用Cre/Loxp系统解决多个基因定向表达问题的设想。 展开更多
关键词 可控表达 基因表达调控 四环素系统 CRE/LOXP系统
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精氨酸酶Ⅰ及诱生性一氧化氮合酶在巨噬细胞中的分子表达调控 被引量:8
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作者 朱琳楠 侯玉柱 赵勇 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期748-753,共6页
关键词 诱生性一氧化氮合酶 巨噬细胞 表达调控 精氨酸酶 单核吞噬细胞系统 分子 单核细胞 组织重塑
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肝脏特异性可调控丙型肝炎病毒核心蛋白表达的转基因小鼠模型的建立 被引量:1
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作者 杨国柱 傅思莹 +5 位作者 黄冰 单于 肖东 马芸 邓新燕 陈系古 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期373-377,共5页
【目的】制备TRE-HCV-C转基因小鼠,为四环素调控系统的体内研究提供了反应部分的转基因小鼠,以便与本实验室同时建立的调控部分的小鼠共同作用,为进一步建立双转基因小鼠模型奠定基础,更为丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV-C)的发病机制的研究... 【目的】制备TRE-HCV-C转基因小鼠,为四环素调控系统的体内研究提供了反应部分的转基因小鼠,以便与本实验室同时建立的调控部分的小鼠共同作用,为进一步建立双转基因小鼠模型奠定基础,更为丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV-C)的发病机制的研究提供一个实用方便的模型。【方法】重组构建含有目的基因HCV-C、TRE序列和SV40 polyA的转基因载体pTRE-HCV-C,以显微注射的方法将1.153kb的转基因片段注入BALB/C母鼠的受精卵,出生动物及其后代经PCR初步筛选出阳性,再经Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本行进一步鉴定。用转基因阳性小鼠和整合有肝脏特异性启动子ApoE和rtTA基因的另一品系转基因小鼠杂交,得到子代F1小鼠,通过免疫组织化学来初步检测HCV-C在肝脏中特异性的可调控性的表达。【结果】产生了5只整合有TRE-HCV-C基因的首建鼠,以及它的子代也带有此基因。与基因组上整合有肝脏特异性启动子ApoE和rtTA基因的转基因小鼠杂交后,得到子代F1小鼠,特定时间与DOX作用后,小鼠肝脏的免疫组织化学结果表明,TRE-HCV-C小鼠为丙型肝炎病毒核心蛋白的发病机制研究提供了一个良好的动物模型工具。【结论】成功制备了HCV-C转基因小鼠,可利用四环素调控系统来研究HCV中的C基因对小鼠的作用,为进一步建立四环素调控系统调控下表达HCV-C基因双转基因小鼠模型奠定基础,也是HCV-C基因功能研究及与肝细胞癌的关系的机制研究的一个有用工具。 展开更多
关键词 HCV-C 丙型肝炎病毒核心蛋白 转基因小鼠模型 四环素调控系统 组织特异性表达
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枯草芽胞杆菌蛋白质表达分泌系统发展及展望 被引量:7
20
作者 张大伟 康倩 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2019年第1期1-10,共10页
枯草芽胞杆菌作为革兰阳性模式菌株是基础研究和工业应用的常用宿主细胞。介绍了枯草芽胞杆菌中蛋白合成和分泌过程中的重要步骤及重要调控位点。在枯草芽胞杆菌蛋白表达及分泌系统中,可以针对目标基因在体内的转录、翻译、折叠、转运... 枯草芽胞杆菌作为革兰阳性模式菌株是基础研究和工业应用的常用宿主细胞。介绍了枯草芽胞杆菌中蛋白合成和分泌过程中的重要步骤及重要调控位点。在枯草芽胞杆菌蛋白表达及分泌系统中,可以针对目标基因在体内的转录、翻译、折叠、转运和菌株改造等方面对表达分泌系统进行优化改良,针对不同的目标蛋白,可进行不同优化模块的组装和拼搭,以达到针对目标蛋白产物定制化地提高产量和分泌量的目的。在未来,随着基因编辑和合成生物技术的发展,菌株改良策略的不断优化,枯草芽胞杆菌将会在工业生产蛋白质制品领域发挥更大的应用价值。 展开更多
关键词 枯草芽胞杆菌 蛋白质表达和分泌 微生物应用 表达分泌系统调控 菌株改造策略
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