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人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达及对胰腺癌细胞增殖的抑制作用 被引量:2
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作者 王欢 刘琼琼 +8 位作者 唐小军 徐鑫 褚楚 熊四平 郑峰 童华 朱进 冯振卿 林红 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期863-869,882,共8页
目的:以人源抗TROP2抗体Fab基因为模板,构建人源抗TROP2全分子抗体IgG真核表达系统,观察人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌细胞增殖的抑制作用。方法:分别扩增抗TROP2抗体的重链和轻链基因,构建人源抗TROP2全分子抗体IgG的重组表达载体p... 目的:以人源抗TROP2抗体Fab基因为模板,构建人源抗TROP2全分子抗体IgG真核表达系统,观察人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌细胞增殖的抑制作用。方法:分别扩增抗TROP2抗体的重链和轻链基因,构建人源抗TROP2全分子抗体IgG的重组表达载体pWS-anti-TROP2,转染CHO dhfr-细胞,加MTX筛选抗体表达量高的单克隆株,Protein G亲和柱纯化,获得人源抗TROP2全分子抗体IgG。SDS-PAGE、Western blot、ELISA、免疫荧光和流式细胞术等方法鉴定人源抗TROP2全分子抗体IgG并分析其免疫学活性。MTT法分析人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌细胞BxPC-3的增殖抑制作用。结果:成功构建了人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达系统,表达并纯化人源抗TROP2全分子抗体IgG。经鉴定,抗体的轻链与重链大小与预期一致,可与TROP2蛋白特异性结合,效价可达1∶6 400。MTT检测结果表明,人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌BxPC3细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈时效、量效依赖关系。结论:本研究成功构建了人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达系统,并证明此抗体可特异性识别胰腺癌细胞表面的TROP2蛋白,且对胰腺癌细胞的增殖有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 trop2 真核表达系统 CHO dhfr-细胞 胰腺癌
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Trop2过表达对人胃黏膜上皮细胞GES-1迁移能力的影响及机制 被引量:2
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作者 饶月丽 沈定 +4 位作者 陈伟民 许冬亚 赵薇 丁贵鹏 严杰 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1300-1305,共6页
目的 :观察Trop2过表达对人胃黏膜上皮细胞GES-1迁移能力的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法 :realtime PCR和Western blot检测GES-1细胞中Trop2 m RNA和蛋白的表达水平;构建过表达Trop2质粒及空载对照质粒并转染GES-1细胞,检测... 目的 :观察Trop2过表达对人胃黏膜上皮细胞GES-1迁移能力的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法 :realtime PCR和Western blot检测GES-1细胞中Trop2 m RNA和蛋白的表达水平;构建过表达Trop2质粒及空载对照质粒并转染GES-1细胞,检测转染效率;细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测过表达Trop2后GES-1细胞迁移能力的变化情况;Western blot检测过表达Trop2后GES-1细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子[上皮细胞标志E-钙黏附蛋白(E-cadherin),间皮细胞标志纤维连接蛋白(fibronectin)、波形蛋白(vimentin)]的变化情况。结果:相比胃癌细胞株BGC823和MGC803,Trop2在GES-1细胞中的m RNA和蛋白表达水平均较低;过表达Trop2的质粒转染GES-1后,Trop2的m RNA表达水平与未转染组相比提高(6.18±0.52)倍,而空载对照组和未转染组相比无明显变化,蛋白水平的变化情况和m RNA相似;细胞划痕实验表明,转染72 h后,过表达组细胞迁移率达到95%,空载对照组细胞迁移率为50%,两组相比差异有统计学意义(P﹤0.05);Transwell迁移实验发现,转染24 h后,过表达组穿膜细胞数为(87±6)个,而空载对照组为(41±6)个,两组相比差异有统计学意义(P﹤0.05);Western blot检测过表达Trop2后,随着Trop2蛋白表达量增高,GES-1细胞E-cadherin表达下调,fibronectin和vimentin表达上调。结论 :Trop2过表达可以提高胃黏膜上皮细胞的迁移能力,其机制与Trop2促进胃黏膜上皮细胞EMT有关。 展开更多
关键词 trop2 GES-1 迁移 上皮-间质转化
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TROP2和VEGFR2在三阴性乳腺癌中的表达及与临床病理因素的相关性研究 被引量:10
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作者 张喆 贾立周 +4 位作者 唐奇 徐新宇 徐玮 朱淼琳 冯振卿 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1453-1458,1471,共7页
目的:观察人滋养层细胞表面抗原2(TROP2)和血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)在三阴性乳腺癌中的表达及与临床病理因素和预后的相关性。方法:应用免疫组化(两步法)检测151例三阴性乳腺癌、137例非三阴性乳腺癌、48例乳腺良性肿瘤以及48例... 目的:观察人滋养层细胞表面抗原2(TROP2)和血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)在三阴性乳腺癌中的表达及与临床病理因素和预后的相关性。方法:应用免疫组化(两步法)检测151例三阴性乳腺癌、137例非三阴性乳腺癌、48例乳腺良性肿瘤以及48例正常乳腺组织中TROP2和VEGFR2的蛋白表达情况,结合临床病理资料综合分析其临床意义和预后价值。结果:TROP2和VEGFR2分别在乳腺癌细胞的细胞膜和细胞质表达。TROP2和VEGFR2蛋白在三阴性乳腺癌中高表达,阳性率高于非三阴性乳腺癌、乳腺良性肿瘤和正常乳腺组织,并且TROP2和VEGFR2共同在三阴性乳腺癌高表达,高于非三阴性乳腺癌,差异有统计学意义。三阴性乳腺癌组织中TROP2阳性表达、VEGFR2阳性表达,以及TROP2和VEGFR 2在三阴性乳腺癌中的共同高表达与患者的组织学分级、临床分期、远处转移有相关性。TROP2和VEGFR2蛋白共同高表达是三阴性乳腺癌的独立预后指标。结论:TROP2和VEGFR2可以作为三阴性乳腺癌新的分子靶点,有望用于三阴性乳腺癌的预后评价和免疫靶向治疗。 展开更多
关键词 三阴性乳腺癌 trop2 VEGFR2 预后
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Trop2对胃癌细胞耐药性的影响及机制研究 被引量:4
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作者 蒯兴旺 黄骁辰 +8 位作者 唐奇 赵薇 章明炯 陈渊 贾立周 杨婷婷 仇镇宁 朱进 冯振卿 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期885-891,共7页
目的:探讨滋养层细胞表面抗原2(Trop2)对胃癌细胞化疗耐药的影响及机制。方法:应用慢病毒转染技术将Trop2 sh RNA转染至BGC823细胞株,通过嘌呤霉素筛选出稳定转染质粒的细胞株;q RT-PCR、Western blot和免疫荧光方法检测质粒干扰效率;CC... 目的:探讨滋养层细胞表面抗原2(Trop2)对胃癌细胞化疗耐药的影响及机制。方法:应用慢病毒转染技术将Trop2 sh RNA转染至BGC823细胞株,通过嘌呤霉素筛选出稳定转染质粒的细胞株;q RT-PCR、Western blot和免疫荧光方法检测质粒干扰效率;CCK-8细胞增殖试验和流式细胞术检测柔红霉素对BGC823细胞株增殖能力和细胞凋亡的影响;q RT-PCR、Western blot检测耐药相关基因TopoⅡα的m RNA和蛋白表达变化。结果:在稳定转染Trop2 sh RNA质粒的sh Trop2组中,Trop2 m RNA及蛋白表达水平较对照组(未处理)和sh NC组(转染空载体质粒)明显下调;在相同药物浓度下,柔红霉素对shTrop2组的增殖抑制率明显高于对照组和sh NC组,sh Trop2组半数抑制浓度低于对照组和sh NC组(P<0.05),sh Trop2组中柔红霉素诱导的细胞凋亡率显著高于对照组和sh NC组(P<0.05);稳定干扰Trop2表达后耐药相关基因TopoⅡα的表达显著上调。结论:Trop2通过抑制TopoⅡα的表达,可增强胃癌细胞对柔红霉素的耐药性。 展开更多
关键词 trop2 胃癌 耐药 柔红霉素 TopoⅡα
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三阴型乳腺癌中Trop2、β-catenin的表达与临床病理特征、预后的关系 被引量:1
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作者 王雅娟 王媛 任新瑜 《临床与实验病理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第11期1181-1187,共7页
目的探讨Trop2、β-catenin在三阴型乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)中的表达及其与临床病理特征、预后的关系。方法收集TNBC患者的临床资料,将TNBC按HER2-0、HER2-低表达(1+,2+FISH阴性)进一步分类。采用免疫组化法检测石... 目的探讨Trop2、β-catenin在三阴型乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)中的表达及其与临床病理特征、预后的关系。方法收集TNBC患者的临床资料,将TNBC按HER2-0、HER2-低表达(1+,2+FISH阴性)进一步分类。采用免疫组化法检测石蜡包埋组织中Trop2和β-catenin的表达,分析Trop2、β-catenin和HER2与临床病理特征、预后的关系。结果180例TNBC中,Trop2高表达率为60.6%(109/180),β-catenin异常表达率为71.7%(129/180),两者共表达率为48.9%(88/180),χ^( 2)检验显示与Trop2低表达者相比,Trop2高表达患者中β-catenin异常表达率更高(80.7%vs 57.7%,P<0.001)。Trop2高表达、β-catenin异常表达患者中AJCC分期晚(P=0.006,P=0.001)、远处转移比例更高(P=0.005,P=0.006);HER2-低表达比例更低(P=0.009,P=0.005)。Trop2高表达患者中淋巴结转移的比例更高(P=0.031);年龄<50岁患者比例更低(P=0.035)。β-catenin异常表达患者中组织学分级高(P=0.014)。患者中位随访时间为69.5个月,3.3%失访(6/180),36.1%复发(65/180),19.4%死亡(35/180)。Kaplan-Meier生存分析显示,Trop2高表达(P=0.017,P=0.001)、β-catenin异常表达(P=0.030,P=0.007)与Trop2(高)/HER2(0)/β-catenin(异常)均显著缩短患者的无瘤生存期(disease-free survival,DFS)和总生存期(overall survival,OS)(P均<0.001)。Cox回归分析显示,AJCC分期晚(HR=2.543,P<0.001)、基底样TNBC(HR=3.948,P=0.024)、Trop2(高)/HER2(0)/β-catenin(异常)患者死亡风险显著增高(HR=4.452,P<0.001);肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes,TILs)≥30%的患者死亡风险显著降低(HR=0.341,P=0.044)。结论TNBC中Trop2、β-catenin与HER2表达具有相关性;Trop2(高)/HER2(0)/β-catenin(异常)可作为TNBC预后的预测指标。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 三阴型乳腺癌 trop2 Β-CATENIN HER2 预后
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胃癌中Trop2的表达及临床意义 被引量:3
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作者 潘丹 朱海乐 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1089-1092,共4页
目的检测肿瘤相关钙信号转导蛋白2(tumor-associated calcium signal transducers 2,Trop2)在胃癌及癌旁正常胃组织中的表达,探讨其与临床病理特征的关系及对胃癌预后的意义。方法应用免疫组化法检测135例胃癌及65例癌旁正常胃组织中Tr... 目的检测肿瘤相关钙信号转导蛋白2(tumor-associated calcium signal transducers 2,Trop2)在胃癌及癌旁正常胃组织中的表达,探讨其与临床病理特征的关系及对胃癌预后的意义。方法应用免疫组化法检测135例胃癌及65例癌旁正常胃组织中Trop2的表达。结果 Trop2高表达者86例(63.7%,86/135),其中肠型胃癌74例(64.9%,74/114),弥漫性胃癌12例(57.1%,12/21)。Trop2在癌旁胃组织、慢性胃炎、肠化、低度及高度异型增生组织中高表达者分别为14例(21.5%,14/65)、6例(13.3%,6/45)、15例(30%,15/50)、30例(48.4%,30/62)及39例(50%,39/78)。Trop2在非肿瘤性病变中高表达发生率显著低于肠型胃癌(P<0.05)。Trop2在癌旁正常胃组织、慢性胃炎、肠化组织中高表达发生率显著低于弥漫性胃癌(P<0.05)。Trop2在肠化组织中高表达发生率显著低于低度异型增生组织(P<0.05)。Trop2高表达与肿瘤较低的分化程度、浆膜浸润、淋巴结转移及幽门螺旋杆菌感染具有相关性(P<0.05)。Trop2阳性的胃癌患者生存期明显短于阴性胃癌患者(P<0.01)。结论 Trop2可能参与胃癌的发生、发展,其高表达提示胃癌患者预后不良。 展开更多
关键词 胃肿瘤 trop2 预后 免疫组织化学
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靶向Trop2的抗体偶联药物治疗三阴性乳腺癌的研究进展 被引量:3
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作者 林云 张妍(综述) 陈曦(审校) 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2023年第18期946-950,共5页
乳腺癌是目前全球发病率最高的恶性肿瘤之一,其中三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)占浸润性乳腺癌的10%~20%。TNBC是一种高度异质性和侵袭性的恶性肿瘤,与其他乳腺癌亚型相比,TNBC治疗手段相对匮乏,预后较差,临床上亟... 乳腺癌是目前全球发病率最高的恶性肿瘤之一,其中三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)占浸润性乳腺癌的10%~20%。TNBC是一种高度异质性和侵袭性的恶性肿瘤,与其他乳腺癌亚型相比,TNBC治疗手段相对匮乏,预后较差,临床上亟待寻找可用于精准治疗及提高预后的新靶点。人滋养层细胞表面抗原2(trophoblast cell surface antigen 2,Trop2)在三阴性乳腺癌及多种恶性肿瘤中高表达,其通过细胞表面受体信号在肿瘤细胞的增殖、黏附、侵袭、转移中发挥重要作用,以其为靶点的抗体偶联药物(antibody-drug conjugate,ADC)在临床上中具有广阔的应用前景。本文对靶向Trop2的ADC治疗TNBC的临床研究进展予以综述,为靶向Trop2的ADC在TNBC治疗中的临床应用和提高患者生存预后方面提供参考。 展开更多
关键词 三阴性乳腺癌 滋养层细胞表面抗原2 抗体偶联药物 研究进展
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人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞生物学特性的影响 被引量:4
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作者 褚楚 刘金荣 +7 位作者 张慧林 唐小军 林红 刘鹏 苏亦平 冯振卿 童华 朱进 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期320-325,共6页
目的 :观察人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞生物学特性的影响。方法 :流式细胞术和免疫荧光检测宫颈癌Hela细胞表面Trop-2蛋白的表达;划痕实验和Transwell检测人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测人源抗Trop-2 Fa... 目的 :观察人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞生物学特性的影响。方法 :流式细胞术和免疫荧光检测宫颈癌Hela细胞表面Trop-2蛋白的表达;划痕实验和Transwell检测人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞凋亡的诱导作用;CCK-8(cell counting kit-8)检测人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞增殖的影响。结果:Hela细胞表面有Trop-2蛋白表达,人源抗Trop-2 Fab能够抑制Hela细胞的增殖,有效降低Hela细胞的迁移和侵袭能力,同时能够诱导Hela细胞凋亡。结论:人源抗Trop-2 Fab能明显降低宫颈癌细胞的恶性生物学行为,Trop-2可作为宫颈癌治疗的潜在靶点。 展开更多
关键词 人源抗trop2抗体 宫颈癌 生物学特性
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掺钕钇铝石榴石激光对人滋养层细胞表面抗原2的调控及口腔鳞癌细胞HN6增殖、侵袭和转移的影响 被引量:3
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作者 马浩然 龚爱秀 汤根兄 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第2期175-181,共7页
目的探讨激光对人滋养层细胞表面抗原2(TROP2)调控及对口腔鳞癌细胞HN6增殖、转移和侵袭的影响。方法体外培养口腔鳞癌细胞株HN6,用1064 nm Nd:YAG激光连续照射,检测24、48 h后激光对HN6细胞的增殖、划痕愈合、转移、侵袭的影响。检测Nd... 目的探讨激光对人滋养层细胞表面抗原2(TROP2)调控及对口腔鳞癌细胞HN6增殖、转移和侵袭的影响。方法体外培养口腔鳞癌细胞株HN6,用1064 nm Nd:YAG激光连续照射,检测24、48 h后激光对HN6细胞的增殖、划痕愈合、转移、侵袭的影响。检测Nd:YAG激光对HN6细胞中TROP2表达的影响。TROP2干扰质粒转染至HN6细胞后,检测Nd:YAG激光对HN6细胞增殖和侵袭的影响。结果低剂量和中剂量激光照射时,HN6细胞增殖能力增强,促划痕愈合程度和侵袭能力提高,TROP2表达较高(P<0.05);高剂量激光照射时,HN6细胞增殖受到抑制,划痕愈合明显减慢且侵袭能力受到抑制,TROP2表达较低(P<0.05);干扰TROP2表达后,Nd:YAG激光对HN6细胞增殖与侵袭无影响。结论较低剂量Nd:YAG激光照射促进HN6细胞的增殖、转移和侵袭,高剂量Nd:YAG激光照射抑制HN6细胞的增殖、转移和侵袭。Nd:YAG激光通过调控TROP2的表达影响HN6的增殖及侵袭转移。 展开更多
关键词 ND:YAG激光 trop2 口腔鳞状细胞 增殖 转移 侵袭
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抗人滋养层细胞表面抗原-2单抗的制备及免疫学特性分析 被引量:6
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作者 梁洁 刘琼琼 +6 位作者 张慧林 林红 唐奇 刘玉 苏亦平 冯振卿 朱进 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期645-650,共6页
目的:利用杂交瘤技术制备抗人滋养层细胞表面抗原-2(trophoblast cell-surface antigen 2,Trop2)单克隆抗体并鉴定其免疫学特性。方法:以胰腺癌细胞系BxPC3免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合后制备单抗。通过酶联免疫法、免疫... 目的:利用杂交瘤技术制备抗人滋养层细胞表面抗原-2(trophoblast cell-surface antigen 2,Trop2)单克隆抗体并鉴定其免疫学特性。方法:以胰腺癌细胞系BxPC3免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合后制备单抗。通过酶联免疫法、免疫荧光、免疫沉淀和质谱分析、流式细胞术、免疫组织化学等方法,鉴定单抗的免疫学特性。结果:通过细胞的融合与筛选,获得了持续分泌抗Trop2单抗的杂交瘤细胞株,该抗体可以识别细胞表面的Trop2膜蛋白,也可用于免疫组化识别人肿瘤组织中的Trop2蛋白,同时该抗体对乳腺癌细胞的生长具有一定的抑制作用。结论:该单抗具有作为Trop2阳性表达肿瘤靶向治疗的潜在应用价值。 展开更多
关键词 人滋养层细胞表面抗原-2 单克隆抗体 免疫组化
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