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抗肿瘤坏死因子单抗对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞TRAIL和TNF-α的影响
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作者 陈焱 叶斌 +4 位作者 莫文元 俞诚波 林晡 尹向鹏 许红苗 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2015年第5期493-498,共6页
目的:观察脂多糖对人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)肿瘤坏死因子(TNF)受体相关凋亡诱导配体(TRAIL)和TNF-α的诱导作用及抗肿瘤坏死因子单抗(抗TNF单抗)对其的影响,探讨TNF超家族参与牙周病的可能作用机制。方法:HPLFs培养至第6代,加入不同... 目的:观察脂多糖对人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)肿瘤坏死因子(TNF)受体相关凋亡诱导配体(TRAIL)和TNF-α的诱导作用及抗肿瘤坏死因子单抗(抗TNF单抗)对其的影响,探讨TNF超家族参与牙周病的可能作用机制。方法:HPLFs培养至第6代,加入不同浓度的脂多糖(0、0.1、1、10、100μg/m L)培养24 h,分为命名为Z0组、Z0.1组、Z1组、Z10组、Z100组,并取Z1组浓度的脂多糖,在加药的同时加抗TNF单抗75μg/m L(Z1+75组)。分别采用实时荧光定量PCR法或Western blot法测定TRAIL和TNF-αm RNA或蛋白的表达。结果:Z1组、Z10组HPLFs TRAIL m RNA的表达水平显著高于Z0组或Z0.1组(均P<0.05),Z1组与Z10组之间差异无统计学意义(P>0.05);Z100组显著高于Z0组(P<0.05)且与Z0.1组、Z1组和Z10组比较差异无统计学意义(均P>0.05)。Z1组或Z10组TNF-αm RNA的表达水平显著高于Z0组或Z100组(均P<0.05);Z1组与Z10组之间,Z0组、Z0.1组和Z100组之间差异无统计学意义(均P>0.05)。HPLFs TRAIL蛋白的表达水平在Z100组<Z0组<Z0.1组<Z1组(均P<0.05或<0.01);Z10组显著高于Z0组或Z100组(均P<0.01),但与Z0.1组或Z1组之间差异无统计学意义(均P>0.05)。抗TNF单抗治疗后TRAIL m RNA及蛋白和TNF-αm RNA的表达水平显著低于Z1组(P<0.05和P<0.01)。TRAIL和TNF-αm RNA的表达水平呈显著直线正相关(r=0.819,n=30,P<0.01)。结论:HPLFs经脂多糖诱导后,其TRAIL和TNF-α的表达呈现先升高后下降,且随脂多糖的浓度变化而相应地变化,这种诱导作用能被抗TNF单抗所抑制。 展开更多
关键词 人牙周膜成纤维细胞 肿瘤坏死因子 trail 脂多糖 抗肿瘤坏死因子单抗
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TRAIL蛋白的表达、纯化和抗肿瘤活性 被引量:14
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作者 李小安 房殿春 +1 位作者 杨仕明 罗元辉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第9期1058-1060,共3页
目的 利用大肠杆菌表达出TRAIL蛋白 ,并观察分离纯化后的TRAIL蛋白的抗肿瘤活性。方法 采用CaCl2 法将带有TRAIL(氨基酸 114 -2 81,含六聚组氨酸尾 )基因的pET d质粒转入大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysS ,IPTG诱导蛋白表达 ;使用Ni NTA层析... 目的 利用大肠杆菌表达出TRAIL蛋白 ,并观察分离纯化后的TRAIL蛋白的抗肿瘤活性。方法 采用CaCl2 法将带有TRAIL(氨基酸 114 -2 81,含六聚组氨酸尾 )基因的pET d质粒转入大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysS ,IPTG诱导蛋白表达 ;使用Ni NTA层析柱分离纯化蛋白 ,SDS PAGE和Westernblot法鉴定TRAIL蛋白的表达 ;MTT法检测TRAIL蛋白的抗肿瘤活性。结果 我们分离纯化出分子量为 2 0 .1× 10 3 的蛋白 ,Westernblot法证实为TRAIL蛋白 ,MTT法检测出其有较高的抗肿瘤活性 ,呈现出较好的时效和量效关系。结论 成功地利用大肠杆菌表达、Ni NTA层析柱分离纯化出具有抗肿瘤活性的TRAIL蛋白 。 展开更多
关键词 trail蛋白 大肠杆菌 抗肿瘤活性 药理作用 抗癌药
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通过奥沙利铂抑制PI3K/Akt通路以增强TRAIL诱导结肠癌RKO细胞凋亡敏感性的实验研究 被引量:11
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作者 徐明昊 张悦 +2 位作者 孙明华 李恩泽 朱志图 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第18期2113-2116,共4页
目的通过亚毒性剂量奥沙利铂抑制PI3K/Akt通路以增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导结肠癌RKO细胞凋亡的敏感性,探讨其作用机制。方法将常规传代培养的人结肠癌RKO细胞分为空白对照组、对照组、TRAIL单药组(25、50、100、200... 目的通过亚毒性剂量奥沙利铂抑制PI3K/Akt通路以增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导结肠癌RKO细胞凋亡的敏感性,探讨其作用机制。方法将常规传代培养的人结肠癌RKO细胞分为空白对照组、对照组、TRAIL单药组(25、50、100、200、400 ng/ml)、奥沙利铂单药组(10、20、40、80μg/ml)及联合用药组(100 ng/ml TRAIL+40μg/ml奥沙利铂)。采用甲基偶氮唑蓝(MTT)检测对数生长期细胞,计算细胞增殖率和药物抑制细胞增殖50%的浓度(IC50);瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞形态;流式细胞术检测细胞凋亡,计算细胞凋亡率;蛋白印迹法(Western blot)检测各组细胞蛋白变化。结果 TRAIL单药组24 h时细胞增殖率与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);奥沙利铂单药组24、48、72 h时IC50与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);联合用药组24 h时细胞增殖率与40μg/ml奥沙利铂单药组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。100 ng/ml TRAIL组细胞凋亡率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);40μg/ml奥沙利铂组、联合用药组细胞凋亡率与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。100 ng/ml TRAIL组p-Akt活化性增强,没有观察到活化的Caspase-3;40μg/ml奥沙利铂组和联合用药组p-Akt活化性被明显抑制,可以观察到活化的Caspase-3。对照组细胞形态正常,40μg/ml奥沙利铂组可见典型的凋亡小体。结论奥沙利铂可通过抑制PI3K/Akt通路活化而增强TRAIL诱导结肠癌RKO细胞凋亡的敏感性,为结肠癌的治疗提供了新思路。 展开更多
关键词 tnf相关凋亡诱导配体 奥沙利铂 结肠肿瘤 PI3K Akt 细胞凋亡
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人TRAIL cDNA的真核表达和体外肿瘤细胞的凋亡诱导作用 被引量:9
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作者 史须 黄家强 +2 位作者 张颖妹 宋泉声 马大龙 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期145-149,共5页
目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体( TRAIL)全长 cDNA及其胞外区真核表达产物体外诱导肿瘤细胞的凋亡作用,为 TRAIL基因治疗提供实验依据。方法 从胎心 cDNA文库中经 PCR扩增获得两种形式 cDNAs,构建相应的真核表达载体后进行... 目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体( TRAIL)全长 cDNA及其胞外区真核表达产物体外诱导肿瘤细胞的凋亡作用,为 TRAIL基因治疗提供实验依据。方法 从胎心 cDNA文库中经 PCR扩增获得两种形式 cDNAs,构建相应的真核表达载体后进行基因转染,并筛选得到稳定表达细胞株;收集表达上清进行肿瘤细胞的体外凋亡诱导,同时观察凋亡相关蛋白 TFAR19与表达上清共同存在时对肿瘤细胞的作用。结果 成功获得表达两种目的蛋白的真核细胞系,其表达上清均能诱导肿瘤细胞 HeLa和 Hec-1a的凋亡,而且 TFAR19能增强表达上清的凋亡诱导作用。结论 证明 TRAIL基因的真核表达产物同样能诱导肿瘤细胞凋亡,如有 TFAR19存在则效果更佳。 展开更多
关键词 肿瘤坏死在子相关凋亡诱导配体 CDNA 真核表达 体外肿瘤细胞 细胞凋亡 TFAR19
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蛇床子素对TRAIL诱导白血病HL-60细胞凋亡的作用及其相关机制研究 被引量:8
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作者 于有江 叶记林 +3 位作者 彭建明 吴爱莲 王冬艳 刘延庆 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期1016-1021,共6页
目的:探讨蛇床子素(Osthole)对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导白血病HL-60细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:采用MTT法检测不同浓度Osthole和TRAIL单独及联合应用对HL-60细胞增殖的影响。选择低于半数抑制浓度(IC50)的100μm... 目的:探讨蛇床子素(Osthole)对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导白血病HL-60细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:采用MTT法检测不同浓度Osthole和TRAIL单独及联合应用对HL-60细胞增殖的影响。选择低于半数抑制浓度(IC50)的100μmol/L的Osthole和40 ng/ml TRAIL单独或联合处理细胞,通过流式细胞术测定HL-60细胞凋亡和细胞线粒体膜电位(MMP)的变化,RT-PCR法检测BCL-2、BAX和DR5 mRNA的表达,用分光光度法检测Caspase-3、-8、-9活性变化。结果:100μmol/L Osthole和40 ng/ml TRAIL联合处理HL-60细胞48 h,HL-60细胞的凋亡率达(33.9±2.7)%,较单用Osthole、TRAIL均显著提高(P<0.05),同时2者联合应用能增强降低MMP和BCL-2/BAX表达比值的效果,提高DR5的表达和Caspase-3、-8、-9活性。结论:Osthole能增强TRAIL诱导HL-60细胞凋亡的敏感性,其机制可能与其激活线粒体凋亡途径和上调DR5的表达密切相关。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 HL-60细胞 细胞凋亡 蛇床子素
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可溶性人TRAIL诱导胃癌细胞BGC-823凋亡的研究 被引量:7
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作者 李彦 姜政 +3 位作者 向廷秀 曾波 陶小红 王丕龙 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1066-1070,共5页
目的通过构建pBud-EGFP-TRAIL质粒体外观察可溶性人TRAIL蛋白(sTRAIL)对胃癌细胞BGC-823的作用。方法以EFGP基因为报告基因,sTRAIL为目的基因,构建pBud-EGFP-TRAIL双表达质粒,鉴定酶切和测序重组体。经脂质体转染法转染体外培养的胃癌细... 目的通过构建pBud-EGFP-TRAIL质粒体外观察可溶性人TRAIL蛋白(sTRAIL)对胃癌细胞BGC-823的作用。方法以EFGP基因为报告基因,sTRAIL为目的基因,构建pBud-EGFP-TRAIL双表达质粒,鉴定酶切和测序重组体。经脂质体转染法转染体外培养的胃癌细胞BGC-823,用荧光显微镜观察EGFP的表达,RT-PCR及Western blot进一步检测sTRAIL mRNA及其蛋白的表达,MTT法检测转染后对胃癌细胞的生长抑制率,TUNEL法观察细胞的凋亡情况,流式细胞仪分析转染后胃癌细胞的凋亡率。结果测序结果证实pBud-EGFP-TRAIL载体构建成功,质粒经脂质体转染后,通过表达sTRAIL蛋白对胃癌细胞发挥作用。MTT法显示转染该质粒的细胞的生长抑制率明显高于对照组,TUNEL法显示细胞核固缩,核染色质聚集或断裂,形成凋亡小体。流式细胞仪结果表明转染该质粒的细胞的的凋亡率明显高于对照组。结论在体外初步证实TRAIL能诱导胃癌细胞BGC-823凋亡。 展开更多
关键词 胃肿瘤 肿瘤坏死因子 肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体 细胞凋亡 BGC-823细胞
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TRAIL和顺铂对横纹肌肉瘤细胞凋亡时caspase-3活性和线粒体膜电位的影响 被引量:5
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作者 徐玉生 苗金红 +3 位作者 王利民 王义生 许建中 杨迪生 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期142-145,共4页
目的:探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)蛋白和顺铂协同抑制横纹肌肉瘤细胞生长和诱导凋亡作用及其机制。方法:将不同浓度的TRAIL和顺铂作用于培养的人RD胚胎型横纹肌肉瘤细胞,通过MTT比色法、形态学改变、流式细胞仪检测细胞凋... 目的:探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)蛋白和顺铂协同抑制横纹肌肉瘤细胞生长和诱导凋亡作用及其机制。方法:将不同浓度的TRAIL和顺铂作用于培养的人RD胚胎型横纹肌肉瘤细胞,通过MTT比色法、形态学改变、流式细胞仪检测细胞凋亡、caspase-3活性和线粒体膜电位的改变,分析其对横纹肌肉瘤细胞的作用及和顺铂协同作用的效果和机制。结果:TRAIL浓度为1.0、10.0、100.0μg/L时,细胞毒性指数分别为18.9%、20.8%、43.5%;顺铂浓度为1.0、5.0、10.0mg/L时,细胞毒性指数分别为9.8%、23.4%和43.8%。而浓度为100μg/L的TRAIL与浓度为5mg/L的顺铂联合作用时,细胞毒性指数明显高达66.4%,FCM分析显示联合应用后细胞线粒体跨膜电位降低,同时提高caspase-3的活性,与细胞凋亡率增加相一致。结论:TRAIL和顺铂联合应用对横纹肌肉瘤细胞具有明显的协同杀伤效果,这一作用与增加caspase-3活性及降低线粒体跨膜电位有关。 展开更多
关键词 横纹肌肉瘤 肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体 顺铂 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3
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三氧化二砷增强TRAIL杀伤人A549细胞的作用及机制研究 被引量:9
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作者 赵雪强 王绩英 +3 位作者 王昌明 莫碧文 蒋明 陈峰 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期415-418,共4页
目的研究三氧化二砷(As2O3)增强重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对人非小细胞肺癌细胞(A549)的作用及其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测As2O3及联合TRAIL对人A549的IC50值;不同浓度As2O3与TRAIL联合作用48 ... 目的研究三氧化二砷(As2O3)增强重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对人非小细胞肺癌细胞(A549)的作用及其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测As2O3及联合TRAIL对人A549的IC50值;不同浓度As2O3与TRAIL联合作用48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR检测Survivin、Caspase-3 mRNA表达变化。结果 As2O3有抗肿瘤活性,IC50值为(42.44±0.66)μmol.L-1;As2O3与TRAIL联用时IC50值为(7.04±0.19)μmol.L-1;As2O3协同增强TRAIL的抗肿瘤活性,CDI值为0.94。联合药物组作用48h后,随As2O3浓度增高Survivin mRNA的表达降低,Caspase-3mRNA的表达增强。结论 As2O3是有效的化疗药物,通过下调Survivin mRNA的表达,上调Caspase-3 mRNA的表达,逆转A549的耐药性,协同TRAIL增强对肺癌细胞的杀伤作用。 展开更多
关键词 三氧化二砷 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 非小细胞肺癌 Survivin CASPASE-3 耐药
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重组TRAIL腺病毒抑制肺癌细胞生长和诱导凋亡的作用 被引量:4
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作者 杨芳 孙茂盛 +3 位作者 易山 谢天宏 施锐 李鸿钧 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第4期362-367,共6页
目的:研究重组TRAIL腺病毒(Ad-TRAIL)对人非小细胞肺癌细胞株YTMLC、A549、H460抑制生长和诱导凋亡的作用,探讨Ad-TRAIL用于非小细胞肺癌基因治疗的可能性。方法:培养肿瘤细胞,分别加入Ad-TRAIL、sTRAIL,并设Ad、PBS作对照。倒置显微镜... 目的:研究重组TRAIL腺病毒(Ad-TRAIL)对人非小细胞肺癌细胞株YTMLC、A549、H460抑制生长和诱导凋亡的作用,探讨Ad-TRAIL用于非小细胞肺癌基因治疗的可能性。方法:培养肿瘤细胞,分别加入Ad-TRAIL、sTRAIL,并设Ad、PBS作对照。倒置显微镜、吖啶橙染色后荧光显微镜、电镜进行细胞形态结构观察;肿瘤细胞生长抑制实验检测细胞存活率,绘制肿瘤细胞生长抑制曲线;DNA凝胶电泳、PI染色、TUNEL染色和流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡;集落形成实验观察肿瘤细胞集落形成能力。结果:Ad-TRAIL组、sTRAIL组与空腺病毒Ad组、PBS阴性对照组相比均明显抑制非小细胞肺癌细胞株YTMLC、A549、H460的增殖。DNA凝胶电泳出现DNA梯形条带;形态学观察发现Ad-TRAIL组的肿瘤细胞具有细胞凋亡的形态;Ad-TRAIL作用的YTMLC细胞有较高比例(8.55%)的亚二倍体凋亡峰,而Ad和PBS组分别为1.08%和0.47%;Ad-TRAIL组被TUNEL标记的细胞比例为10.6%,高于Ad组的1.13%。Ad-TRAIL组的集落数为28±7,而PBS和Ad对照组分别为257±18,193±12。结论:Ad-TRAIL对非小细胞肺癌细胞具有抑制生长和诱导凋亡的作用,Ad-TRAIL有可能用于非小细胞肺癌的基因治疗。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 重组复制缺陷型腺病毒 凋亡 非小细胞肺癌
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肿瘤坏死因子家族新成员——TRAIL 被引量:11
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作者 王梁华 焦炳华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1998年第5期392-395,共4页
肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)或称凋亡素2配体(Apo2ligand,Apo2L),是TNF家族的新成员.它是从表达序列标签库(expressedsequencedtag,EST)中寻找TNF的同源分... 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)或称凋亡素2配体(Apo2ligand,Apo2L),是TNF家族的新成员.它是从表达序列标签库(expressedsequencedtag,EST)中寻找TNF的同源分子时发现的.TRAIL是一种分子质量为325ku的Ⅱ型跨膜糖蛋白,活性形式呈同源三聚体.TRAIL和可溶性的TRAIL强烈诱导肿瘤细胞株凋亡.新近发现的TRAIL受体DR4和DR5及TRID说明了TRAIL与TNF和Fas/Apo1配体的作用途径是不同的.随着对TRAIL的受体及作用机理研究的深入,TRAIL很可能成为新一代抗肿瘤制剂. 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子 凋亡诱导配体 凋亡 trail 受体
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重组可溶性TRAIL的表达及其诱导A549和H460^(wt)细胞凋亡 被引量:5
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作者 刘磊 方艳秋 +1 位作者 许淑芬 谭岩 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期270-273,共4页
目的:获得人重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rsTRAIL)蛋白,并探讨其应用于非小细胞肺癌(NSCLC)治疗的前景。方法:RT-PCR从外周血单核细胞(PBMCs)中获取目的基因片段,构建重组质粒PQE30-TRAIL并转化入大肠杆菌(E.coli)M15,IPTG... 目的:获得人重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rsTRAIL)蛋白,并探讨其应用于非小细胞肺癌(NSCLC)治疗的前景。方法:RT-PCR从外周血单核细胞(PBMCs)中获取目的基因片段,构建重组质粒PQE30-TRAIL并转化入大肠杆菌(E.coli)M15,IPTG诱导目的蛋白表达并经镍固定金属亲和层析纯化,MTT法检测细胞增殖情况,荧光显微镜观察H460wt细胞的形态学改变,流式细胞仪检测其凋亡率。结果:获得与GenBank中报道一致的TRAIL基因片段。SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析显示,获得具有TRAIL免疫原性、相对分子质量约为21000目的蛋白。Ni2+-NTAagarose纯化得到单一条带蛋白。rsTRAIL处理H460wt细胞24h后,细胞凋亡率为43.2%,顺铂可以增强rsTRAIL对A549细胞的杀伤作用。结论:获得了与天然TRAIL蛋白具有相同生物学活性的目的蛋白,该目的蛋白具有诱导NSCLC细胞凋亡的作用,联合顺铂能够增强rsTRAIL对NSCLC的杀伤作用。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 细胞凋亡 非小细胞肺 顺铂
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携带TRAIL基因慢病毒载体的构建及其体外感染淋巴瘤细胞效率 被引量:4
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作者 付晓瑞 张旭东 +3 位作者 张辰 赵璐 汪变红 张明智 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期900-905,共6页
本研究目的构建携带人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因的慢病毒载体,并研究其对不同细胞系的淋巴瘤细胞的感染效率。采用分子克隆技术,将针对TRAIL基因mRNA的cDNA片段插入到克隆载体pGM-T,构建pGM-T-TRAIL,然后将测序正确的TR... 本研究目的构建携带人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因的慢病毒载体,并研究其对不同细胞系的淋巴瘤细胞的感染效率。采用分子克隆技术,将针对TRAIL基因mRNA的cDNA片段插入到克隆载体pGM-T,构建pGM-T-TRAIL,然后将测序正确的TRAIL基因克隆至慢病毒表达载体pWPI,构建慢病毒表达载体pWPI-TRAIL。最后利用pWPI/VSV-G/Δ8.2慢病毒包装系统,通过转染293T细胞,制备重组慢病毒plenti-TRAIL,并进行浓缩和滴度测定。将重组慢病毒载体感染不同来源的淋巴瘤细胞系,测定荧光表达评价感染效率,利用RT-PCR和Western blot法评价TRAIL基因的表达情况。结果表明,酶切鉴定及测序结果表明pGM-T-TRAIL和pWPI-TRAIL载体构建成功,滴度测定结果显示浓缩的重组慢病毒plenti-TRAIL浓度可达109IU/ml。感染效率结果显示YTS细胞较DOHH2和Jurkat细胞更易被慢病毒感染(P<0.05)。RT-PCR和Western blot实验表明淋巴瘤细胞后plenti-TRAIL感染后可有效地表达TRAIL基因。结论:成功构建了慢病毒表达载体pWPI-TRAIL,并制备出重组慢病毒plenti-TRAIL。plenti-TRAIL可以有效感染不同细胞来源的淋巴瘤细胞系,同时感染后的淋巴瘤细胞可以有效表达TRAIL基因。 展开更多
关键词 人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 慢病毒载体 淋巴瘤
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caspase-8在胶质母细胞瘤抵抗TRAIL诱导凋亡中的作用 被引量:9
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作者 齐玲 于洪泉 +4 位作者 金宏 丁丽娟 温娜 唐泽波 李蕴潜 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期612-616,共5页
目的:对人脑胶质母细胞瘤SC189细胞株中单克隆细胞株进行研究,探讨caspase-8在胶质母细胞瘤抵抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导凋亡分子机制中的作用。方法:获取SC189单克隆细胞株,应用酸性磷酸酶法检测SC189单克隆细胞株对TR... 目的:对人脑胶质母细胞瘤SC189细胞株中单克隆细胞株进行研究,探讨caspase-8在胶质母细胞瘤抵抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导凋亡分子机制中的作用。方法:获取SC189单克隆细胞株,应用酸性磷酸酶法检测SC189单克隆细胞株对TRAIL敏感性;Western blotting检测各单克隆细胞株表达FADD、DR5、DR4及caspase-8情况;经TRAIL作用后发生caspase-8、caspase-3、caspase-9、DFF-45凋亡级联裂解反应情况。结果:获得的5株SC189单克隆细胞株,经不同浓度TRAIL作用后细胞死亡率为-5.25%~45.80%,其中4株对TRAIL抵抗,1株对TRAIL相对敏感;Western blotting检测发现FADD、DR5、DR4表达相似,caspase-8表达不同,发生抵抗的细胞株caspase-8表达明显减少,经TRAIL作用后不发生凋亡级联裂解反应;相对敏感的细胞株caspase-8表达增多,经TRAIL作用后可出现明显的凋亡级联裂解反应。结论:SC189单克隆细胞株中caspase-8表达量直接与TRAIL反应敏感性有关联。 展开更多
关键词 脑胶质母细胞瘤 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 caspase一8
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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL及其受体在急性髓系白血病细胞中的表达及意义 被引量:13
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作者 赵湜 王红祥 +2 位作者 毛红 肖娟 邹萍 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第1期65-69,共5页
为了检测肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)及其受体在急性髓系白血病细胞中的表达 ,并探讨其在白血病治疗中的意义 ,采用RT PCR方法及流式细胞术 ,对 39例急性髓系白血病细胞 (患者组 )、18例完全缓解白血病细胞 (缓解组 )和 2 1... 为了检测肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)及其受体在急性髓系白血病细胞中的表达 ,并探讨其在白血病治疗中的意义 ,采用RT PCR方法及流式细胞术 ,对 39例急性髓系白血病细胞 (患者组 )、18例完全缓解白血病细胞 (缓解组 )和 2 1例正常人骨髓或外周血单个核细胞 (对照组 )表面TRAIL及其受体的表达进行检测。结果表明 :①患者组和缓解组TRAIL、DR4和DR5表达高 ,而DcR1和DcR2表达低。②缓解组DR5的表达高于患者组。③患者组和缓解组DR5的表达均高于DR4。④患者组AML不同亚型表达TRAIL及其受体相似。结论 :TRAIL及其受体在急性髓系白血病细胞中的表达具有明显的差异性。DR5在TRAIL介导的急性髓系白血病细胞凋亡中起重要的作用。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 急性髓系白血病 基因表达
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DR5在TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡中的作用 被引量:10
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作者 马远方 杨东亮 +1 位作者 陆士新 陈有海 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期332-334,共3页
目的 :研究DR5在介导TRAIL凋亡信号中的作用。方法 :用含人DR5细胞外全长结构域重组DR5免疫BALB C小鼠 ,制备抗DR5单克隆抗体 ;流式细胞仪检测Jurkat细胞表面DR5表达水平 ;采用TRAIL凋亡检测试剂盒 ,检测Jurkat细胞凋亡率及抗DR5单克隆... 目的 :研究DR5在介导TRAIL凋亡信号中的作用。方法 :用含人DR5细胞外全长结构域重组DR5免疫BALB C小鼠 ,制备抗DR5单克隆抗体 ;流式细胞仪检测Jurkat细胞表面DR5表达水平 ;采用TRAIL凋亡检测试剂盒 ,检测Jurkat细胞凋亡率及抗DR5单克隆抗体对TRAIL诱导细胞凋亡的阻断率。结果 :DR5在Jurkat细胞表面的表达率为 94 83% ,TRAIL和抗TRAIL单克隆抗体能够诱导Jurkat细胞凋亡 ,呈现明显的剂量相关性 ,TRAIL浓度在 5 0~ 10 0ng ml时 ,杀伤率达 90 %以上。预先用抗DR5单克隆抗体与Jurkat细胞作用后 ,TRAIL对Jurkat细胞的杀伤功能几乎完全被mAb所阻断 ,其平均阻断率达90 4 9%。结论 :DR5在TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡中起着十分关键的作用。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 死亡受体5 凋亡 抗DR5单克隆抗体
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sTRAIL真核表达质粒对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制作用 被引量:4
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作者 李彦 姜政 +3 位作者 向廷秀 曾波 陶小红 王丕龙 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期198-201,共4页
目的探讨可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(soluble tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,sTRAIL)真核表达质粒对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制作用。方法建立胃癌细胞株BGC-823裸鼠移植瘤模型,成瘤后于瘤内多点注射... 目的探讨可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(soluble tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,sTRAIL)真核表达质粒对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制作用。方法建立胃癌细胞株BGC-823裸鼠移植瘤模型,成瘤后于瘤内多点注射重组真核表达质粒pBud-EGFP-TRAIL,并设pBud-EGFP组和生理盐水组为对照,观察并记录肿瘤的生长情况。Western blot和RT-PCR检测sTRAIL mRNA和蛋白表达情况,HE染色观察肿瘤组织病理改变,TUNEL法及电镜技术观测肿瘤组织细胞凋亡情况。结果注射pBud-EGFP-TRAIL组的sTRAIL mRNA和蛋白为阳性,其瘤体大小明显小于pBud-EGFP组和生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色示pBud-EGFP-TRAIL组肿瘤细胞大量死亡,电镜下可见到典型凋亡细胞,TUNEL法显示其凋亡细胞明显增多。结论sTRAIL真核表达质粒pBud-EGFP-TRAIL瘤内注射对人胃癌裸鼠移植瘤有抑制作用。 展开更多
关键词 胃肿瘤 裸鼠 肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体
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hTERT启动子调控的TRAIL基因表达载体的构建及其对肝癌细胞增殖的抑制作用 被引量:3
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作者 李金华 刘扬 +4 位作者 王宏芳 王志成 吴嘉慧 龚守良 李娟 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期825-831,共7页
目的:构建hTERT启动子调控的肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)基因表达载体,探讨其对肝癌细胞SMMC7721和肝细胞HL7702增殖的抑制作用。方法:采用分子生物学方法构建重组质粒pshuttle-TRAIL和pshuttle-hTERT-TRAIL,经PCR和酶切鉴... 目的:构建hTERT启动子调控的肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)基因表达载体,探讨其对肝癌细胞SMMC7721和肝细胞HL7702增殖的抑制作用。方法:采用分子生物学方法构建重组质粒pshuttle-TRAIL和pshuttle-hTERT-TRAIL,经PCR和酶切鉴定正确后,通过脂质体转染SMMC7721和HL7702细胞,同时转染pcDNA3.1+-GFP并用荧光显微镜检测转染效率。MTT法检测重组质粒对细胞增殖变化的影响。结果:成功构建重组质粒pshuttle-TRAIL和pshuttle-hTERT-TRAIL,荧光显微镜检测结果显示:质粒与脂质体的比例为1∶3时细胞转染效率最高。pshuttle-hTERT-TRAIL组SMMC7721细胞增殖抑制率从16h开始明显增加,与对照组比较差异有显著性(P<0.001),且从24h开始与pshuttle-TRAIL组比较细胞增殖抑制率明显增加(P<0.05);但重组质粒对HL7702细胞增殖抑制率无影响。结论:hTERT启动子调控的TRAIL可明显抑制肝癌细胞的增殖,而对人肝细胞的增殖无影响,其作用效果明显优于TRAIL单基因治疗。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 HTERT启动子 肿瘤靶向治疗 细胞增殖
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2-DG增强TRAIL诱导白血病细胞HL-60凋亡的作用 被引量:4
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作者 赵素容 段海峰 +3 位作者 张配 刘浩 蒋琛琛 蒋志文 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期351-355,共5页
本研究旨在探讨2-脱氧葡萄糖(2-DG)增强HL-60细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)敏感性的作用及其可能机制。采用MTT法检测不同浓度2-DG、TRAIL对HL-60细胞增殖的影响。选择低于半数抑制浓度(IC50)的10 mmol/L的2-DG和100 ng/ml... 本研究旨在探讨2-脱氧葡萄糖(2-DG)增强HL-60细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)敏感性的作用及其可能机制。采用MTT法检测不同浓度2-DG、TRAIL对HL-60细胞增殖的影响。选择低于半数抑制浓度(IC50)的10 mmol/L的2-DG和100 ng/ml的TRAIL单独或联合处理细胞,用PI单染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测RIP1、GRP78、PARP蛋白的表达,试剂盒检测caspase-3的活性变化。结果表明,2-DG(10mmol/L)与TRAIL(100 ng/ml)联合作用于HL-60细胞48 h的凋亡率为(45.1±4.3)%,较单用2-DG、TRAIL的凋亡率明显提高(P<0.01),同时二者联合应用能增强GRP78蛋白的表达及caspase-3的活性,下调RIP1蛋白的表达。结论:2-DG能增强TRAIL诱导HL-60细胞的凋亡的敏感性,其机制可能是通过引起过度的内质网应激反应、下调RIP1蛋白的表达以及增加caspase-3的活性。 展开更多
关键词 白血病 2-脱氧葡萄糖 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 细胞凋亡
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恶性胶质瘤细胞死亡诱导信号复合体表达与TRAIL诱导凋亡的关系 被引量:3
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作者 于洪泉 张宇 +3 位作者 金宏 赵东海 杨淑艳 齐玲 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期904-906,共3页
目的:通过研究恶性胶质瘤细胞中死亡诱导信号复合体(DISC)与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导凋亡的关系,初步探讨TRAIL诱导凋亡抵抗的机制。方法:分离恶性胶质瘤组织,获得和培养原代胶质瘤细胞,用100μg.L-1 TRAIL作用后采用... 目的:通过研究恶性胶质瘤细胞中死亡诱导信号复合体(DISC)与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导凋亡的关系,初步探讨TRAIL诱导凋亡抵抗的机制。方法:分离恶性胶质瘤组织,获得和培养原代胶质瘤细胞,用100μg.L-1 TRAIL作用后采用酸性磷酸酶法检测细胞凋亡水平;Western blotting法检测细胞表达死亡诱导信号复合体的水平。结果:获得3株(GC417、GC321、GC125)原代恶性胶质瘤细胞;3株细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感程度不同[GC321(0.12±0.01 vs 0.51±0.02)和GC125(0.22±0.01 vs 0.36±0.01)],对TRAIL诱导凋亡作用敏感,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);而GC417(0.24±0.01 vs 0.23±0.02)对TRAIL诱导凋亡不敏感。Western blotting法检测结果显示,死亡诱导信号复合体表达不同,GC321和GC125表达增高,GC417表达减少。结论:不同来源的原代培养恶性胶质瘤细胞对TRAIL诱导凋亡的反应不同,死亡诱导信号复合体表达也不同,死亡诱导信号复合体表达的减少可能与凋亡抵抗的发生密切相关。 展开更多
关键词 胶质瘤 死亡诱导信号复合体 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 细胞凋亡
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新城疫病毒通过上调小鼠NK细胞TRAIL表达杀伤Novikoff小鼠肝癌细胞 被引量:6
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作者 宋德志 梁莹 +4 位作者 樊晓晖 殷君 宫金伶 赖振屏 高灵茜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期599-604,共6页
目的观察经腹腔注射的新城疫病毒(NDV)对小鼠脾脏NK细胞表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及杀伤Novikoff小鼠肝癌细胞的影响,并探讨其与γ干扰素(IFN-γ)的关系。方法给予BALB/c小鼠和IFN-γR-/-B6.129S7小鼠腹腔注射NDV,12 h后... 目的观察经腹腔注射的新城疫病毒(NDV)对小鼠脾脏NK细胞表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及杀伤Novikoff小鼠肝癌细胞的影响,并探讨其与γ干扰素(IFN-γ)的关系。方法给予BALB/c小鼠和IFN-γR-/-B6.129S7小鼠腹腔注射NDV,12 h后,用ELISA检测小鼠外周血IFN-γ浓度;分离小鼠脾脏NK细胞,用反转录PCR法检测NK细胞中TRAIL mRNA转录水平,Western blot法检测脾脏NK细胞中TRAIL蛋白水平,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞对Novikoff肝癌细胞的杀伤作用。结果腹腔注射NDV可以提高BALB/c小鼠外周血IFN-γ浓度,上调小鼠脾脏NK细胞TRAIL mRNA和蛋白表达水平,增强小鼠脾脏NK细胞体外条件下对Novikoff肝癌细胞的杀伤活性。TRAIL中和抗体能抑制NK细胞对Novikoff肝癌细胞的杀伤作用。IFN-γR-/-B6.129S7小鼠接受NDV注射后脾脏NK细胞的TRAIL表达无显著增加,NDV激活的NK细胞对Novikoff肝癌细胞的杀伤活性显著低于IFN-γ受体正常的BALB/c小鼠。结论腹腔注射NDV可增强脾脏NK细胞的体外抗肿瘤活性,其机制之一是通过IFN-γ受体途径上调NK细胞表面TRAIL蛋白表达来发挥作用。 展开更多
关键词 新城疫病毒 NK细胞 肿瘤坏死因子相关凋亡配体 肝癌细胞
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