TRAIL蛋白的表达、纯化和抗肿瘤活性 被引量：14

1

作者 李小安 房殿春 +1 位作者 杨仕明 罗元辉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第9期1058-1060,共3页

目的　利用大肠杆菌表达出TRAIL蛋白 ,并观察分离纯化后的TRAIL蛋白的抗肿瘤活性。方法　采用CaCl2 法将带有TRAIL(氨基酸 114 -2 81,含六聚组氨酸尾 )基因的pET d质粒转入大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysS ,IPTG诱导蛋白表达 ;使用Ni NTA层析... 目的　利用大肠杆菌表达出TRAIL蛋白 ,并观察分离纯化后的TRAIL蛋白的抗肿瘤活性。方法　采用CaCl2 法将带有TRAIL(氨基酸 114 -2 81,含六聚组氨酸尾 )基因的pET d质粒转入大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysS ,IPTG诱导蛋白表达 ;使用Ni NTA层析柱分离纯化蛋白 ,SDS PAGE和Westernblot法鉴定TRAIL蛋白的表达 ;MTT法检测TRAIL蛋白的抗肿瘤活性。结果　我们分离纯化出分子量为 2 0 .1× 10 3 的蛋白 ,Westernblot法证实为TRAIL蛋白 ,MTT法检测出其有较高的抗肿瘤活性 ,呈现出较好的时效和量效关系。结论　成功地利用大肠杆菌表达、Ni NTA层析柱分离纯化出具有抗肿瘤活性的TRAIL蛋白 。 展开更多

关键词 trail蛋白 大肠杆菌 抗肿瘤活性 药理作用 抗癌药

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蛇床子素对TRAIL诱导白血病HL-60细胞凋亡的作用及其相关机制研究 被引量：8

2

作者 于有江 叶记林 +3 位作者 彭建明 吴爱莲 王冬艳 刘延庆 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期1016-1021,共6页

目的:探讨蛇床子素(Osthole)对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导白血病HL-60细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:采用MTT法检测不同浓度Osthole和TRAIL单独及联合应用对HL-60细胞增殖的影响。选择低于半数抑制浓度(IC50)的100μm... 目的:探讨蛇床子素(Osthole)对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导白血病HL-60细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:采用MTT法检测不同浓度Osthole和TRAIL单独及联合应用对HL-60细胞增殖的影响。选择低于半数抑制浓度(IC50)的100μmol/L的Osthole和40 ng/ml TRAIL单独或联合处理细胞,通过流式细胞术测定HL-60细胞凋亡和细胞线粒体膜电位(MMP)的变化,RT-PCR法检测BCL-2、BAX和DR5 mRNA的表达,用分光光度法检测Caspase-3、-8、-9活性变化。结果:100μmol/L Osthole和40 ng/ml TRAIL联合处理HL-60细胞48 h,HL-60细胞的凋亡率达(33.9±2.7)%,较单用Osthole、TRAIL均显著提高(P<0.05),同时2者联合应用能增强降低MMP和BCL-2/BAX表达比值的效果,提高DR5的表达和Caspase-3、-8、-9活性。结论:Osthole能增强TRAIL诱导HL-60细胞凋亡的敏感性,其机制可能与其激活线粒体凋亡途径和上调DR5的表达密切相关。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 HL-60细胞 细胞凋亡 蛇床子素

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三氧化二砷增强TRAIL杀伤人A549细胞的作用及机制研究 被引量：9

3

作者 赵雪强 王绩英 +3 位作者 王昌明 莫碧文 蒋明 陈峰 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期415-418,共4页

目的研究三氧化二砷(As2O3)增强重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对人非小细胞肺癌细胞(A549)的作用及其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测As2O3及联合TRAIL对人A549的IC50值;不同浓度As2O3与TRAIL联合作用48 ... 目的研究三氧化二砷(As2O3)增强重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对人非小细胞肺癌细胞(A549)的作用及其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测As2O3及联合TRAIL对人A549的IC50值;不同浓度As2O3与TRAIL联合作用48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR检测Survivin、Caspase-3 mRNA表达变化。结果 As2O3有抗肿瘤活性,IC50值为(42.44±0.66)μmol.L-1;As2O3与TRAIL联用时IC50值为(7.04±0.19)μmol.L-1;As2O3协同增强TRAIL的抗肿瘤活性,CDI值为0.94。联合药物组作用48h后,随As2O3浓度增高Survivin mRNA的表达降低,Caspase-3mRNA的表达增强。结论 As2O3是有效的化疗药物,通过下调Survivin mRNA的表达,上调Caspase-3 mRNA的表达,逆转A549的耐药性,协同TRAIL增强对肺癌细胞的杀伤作用。 展开更多

关键词 三氧化二砷 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 非小细胞肺癌 Survivin CASPASE-3 耐药

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重组TRAIL腺病毒抑制肺癌细胞生长和诱导凋亡的作用 被引量：4

4

作者 杨芳 孙茂盛 +3 位作者 易山 谢天宏 施锐 李鸿钧 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第4期362-367,共6页

目的:研究重组TRAIL腺病毒(Ad-TRAIL)对人非小细胞肺癌细胞株YTMLC、A549、H460抑制生长和诱导凋亡的作用,探讨Ad-TRAIL用于非小细胞肺癌基因治疗的可能性。方法:培养肿瘤细胞,分别加入Ad-TRAIL、sTRAIL,并设Ad、PBS作对照。倒置显微镜... 目的:研究重组TRAIL腺病毒(Ad-TRAIL)对人非小细胞肺癌细胞株YTMLC、A549、H460抑制生长和诱导凋亡的作用,探讨Ad-TRAIL用于非小细胞肺癌基因治疗的可能性。方法:培养肿瘤细胞,分别加入Ad-TRAIL、sTRAIL,并设Ad、PBS作对照。倒置显微镜、吖啶橙染色后荧光显微镜、电镜进行细胞形态结构观察;肿瘤细胞生长抑制实验检测细胞存活率,绘制肿瘤细胞生长抑制曲线;DNA凝胶电泳、PI染色、TUNEL染色和流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡;集落形成实验观察肿瘤细胞集落形成能力。结果:Ad-TRAIL组、sTRAIL组与空腺病毒Ad组、PBS阴性对照组相比均明显抑制非小细胞肺癌细胞株YTMLC、A549、H460的增殖。DNA凝胶电泳出现DNA梯形条带;形态学观察发现Ad-TRAIL组的肿瘤细胞具有细胞凋亡的形态;Ad-TRAIL作用的YTMLC细胞有较高比例(8.55%)的亚二倍体凋亡峰,而Ad和PBS组分别为1.08%和0.47%;Ad-TRAIL组被TUNEL标记的细胞比例为10.6%,高于Ad组的1.13%。Ad-TRAIL组的集落数为28±7,而PBS和Ad对照组分别为257±18,193±12。结论:Ad-TRAIL对非小细胞肺癌细胞具有抑制生长和诱导凋亡的作用,Ad-TRAIL有可能用于非小细胞肺癌的基因治疗。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 重组复制缺陷型腺病毒 凋亡 非小细胞肺癌

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TRAIL及其受体在咖啡因抑制肝癌细胞系HepG2增殖中的作用 被引量：2

5

作者 吕雄文 李俊 +3 位作者 靳弟 代雪飞 吴宝明 张磊 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期619-624,共6页

目的探讨TRAIL及其受体在咖啡因(caffeine)抑制肝癌细胞系HepG2增殖中的作用。方法HepG2细胞分别经caffeine、TRAIL及caffeine+TRAIL作用24h,采用MTT法检测HepG2细胞增殖抑制情况,根据中效原理进行联合用药效应评价;流式细胞仪检测细胞... 目的探讨TRAIL及其受体在咖啡因(caffeine)抑制肝癌细胞系HepG2增殖中的作用。方法HepG2细胞分别经caffeine、TRAIL及caffeine+TRAIL作用24h,采用MTT法检测HepG2细胞增殖抑制情况,根据中效原理进行联合用药效应评价;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布;Westernblot法检测caffeine作用不同时间HepG2细胞中TRAIL受体相关蛋白的表达。结果在1.25～20mmol.L-1浓度范围内,caffeine明显抑制HepG2细胞增殖;在0.01275～0.2040μmol.L-1浓度范围内,TRAIL可明显抑制HepG2细胞增殖。Caffeine联合TRAIL在多数效应范围内的合用指数小于1,具有协同作用。Caffeine5mmol.L-1和TRAIL0.0510μmol.L-1联合用药组HepG2细胞凋亡率明显高于各单独用药组,且两者联合用药对HepG2细胞周期具有明显的影响,使G0/G1期细胞比例明显增加,S期及G2/M期细胞比例明显减少;caffeine5mmol.L-1作用HepG2细胞24h时,其DR4及DR5的表达量明显增加,而DcR1和DcR2的表达无改变。结论TRAIL在caffeine抑制HepG2细胞增殖过程中具有一定的协同作用,其机制可能与caffeine上调HepG2细胞表面DR4、DR5的表达,联合TRAIL后能够进一步诱导凋亡及调节细胞周期有关。 展开更多

关键词 咖啡因 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 死亡受体 HEPG2细胞 细胞凋亡 细胞周期

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人重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导急性髓系白血病细胞凋亡的实验研究 被引量：3

6

作者 王红祥 邹萍 赵湜 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第6期766-769,共4页

为了研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)对急性髓系白血病 (AML)细胞的作用 ,通过MTT比色法测定不同浓度TRAIL对 3 9例AML患者 (病例组 )和 2 1例健康人 (对照组 )的骨髓或外周血单个核细胞的杀伤率 ,用流式细胞术检测细胞凋亡... 为了研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)对急性髓系白血病 (AML)细胞的作用 ,通过MTT比色法测定不同浓度TRAIL对 3 9例AML患者 (病例组 )和 2 1例健康人 (对照组 )的骨髓或外周血单个核细胞的杀伤率 ,用流式细胞术检测细胞凋亡。结果发现 ,不同浓度TRAIL对AML细胞均有不同程度的杀伤作用 ,而对正常细胞无此作用。结论 :TRAIL能通过诱导细胞凋亡而杀伤AML细胞 ,是一种有望应用于临床白血病治疗的新型生物制剂。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子 相关凋亡诱导配体 急性髓系白血病 急性髓系白血病细胞 细胞凋亡 trail

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人端粒酶逆转录酶核心启动子调控的人TRAIL蛋白在人卵巢癌细胞中的表达 被引量：2

7

作者 李红梅 于月成 +4 位作者 宋天保 辛晓燕 张明 魏晓丽 许静洪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1106-1109,共4页

目的:构建人端粒酶逆转录酶基因核心启动子(hTERT)调控的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体真核表达载体,并检测TRAIL在转染的卵巢癌细胞SKOV3中的表达情况。方法:利用基因重组方法将TRAIL基因克隆入带有hTERT基因核心启动子pIRES2-EGFP真... 目的:构建人端粒酶逆转录酶基因核心启动子(hTERT)调控的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体真核表达载体,并检测TRAIL在转染的卵巢癌细胞SKOV3中的表达情况。方法:利用基因重组方法将TRAIL基因克隆入带有hTERT基因核心启动子pIRES2-EGFP真核表达载体中。获得由hTERT基因核心启动子调控的绿色荧光蛋白和带有效应型TRAIL基因的真核表达载体hTERTpromoter-pIRES2-EGFP-TRAIL。采用脂质体介导的方法将hTERT调控的TRAIL基因真核表达载体转染人卵巢癌SKOV3细胞,采用G418筛选获得阳性克隆;应用免疫细胞化学法、蛋白质印迹分析、流式细胞术(FCM)结合间接免疫荧光、RT-PCR法检测转染前后卵巢癌细胞中外源基因的表达。结果:经酶切鉴定及测序结果证实所构建载体正确。转染细胞中的TRAIL表达明显高于对照组细胞。结论:成功地构建了hTRET基因核心启动子调控的TRAIL基因真核表达载体,并在人卵巢癌细胞系SKOV3中得到稳定表达,为进一步研究其对卵巢癌细胞生物学行为的影响奠定了实验基础。 展开更多

关键词 人端粒酶逆转录酶基因核心启动子 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 基因治疗 卵巢癌细胞

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TRAIL联合喜树碱诱导胰腺癌细胞凋亡的研究 被引量：1

8

作者 高显峰 王广义 +1 位作者 谢淑丽 吕国悦 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2010年第23期1334-1337,1341,共5页

目的:探讨喜树碱(CPT)增强TRAIL诱导胰腺癌细胞PANC-1凋亡的机制。方法:通过MTT检测TRAIL组、喜树碱组、二者联合组对胰腺癌细胞PANC-1生长抑制的影响;利用Hoechst33258荧光染色检测各组细胞凋亡情况;应用Western-blot方法检测PANC-1在... 目的:探讨喜树碱(CPT)增强TRAIL诱导胰腺癌细胞PANC-1凋亡的机制。方法:通过MTT检测TRAIL组、喜树碱组、二者联合组对胰腺癌细胞PANC-1生长抑制的影响;利用Hoechst33258荧光染色检测各组细胞凋亡情况;应用Western-blot方法检测PANC-1在喜树碱应用前后凋亡信号传导蛋白分子DR4、DR5、Caspase-8、Caspase-3以及c-flip的表达情况。结果:PANC-1细胞经不同浓度TRAIL(10、30、100、300、1000ng/mL)作用24h后,当浓度在100ng/mL及以上时与对照组相比有统计学差异(P<0.01),虽然存在差异,但当TRAIL浓度为1000ng/mL时,其细胞抑制率仅为(10.60±2.36)%,TRAIL与不同浓度的喜树碱(10、30、100、300、1000ng/mL)联合作用后其细胞抑制率与单独应用喜树碱相比有显著性差异(P<0.05);Hoechst33258荧光染色结果显示:联合组有大量细胞出现细胞核聚集、边缘化、核碎裂等典型细胞凋亡形态,而其余各组未见明显凋亡征象;Western-blot结果显示:单独TRAIL组及单独喜树碱组仅能看到Caspase-8和Caspase-3的前体,而二者联合后不仅看到了其前体,而且还看到其裂解带,并且发现经过喜树碱预处理后,PANC-1细胞中c-Flip蛋白的表达被明显下调了,CPT组及联合组与对照组及单独TRAIL相比均有显著性差异(P<0.05),而喜树碱应用前后对DR4和DR5表达无显著效应。结论:TRAIL联合喜树碱对胰腺癌细胞PANC-1诱导的凋亡具有协同作用,其机制是喜树碱下调了c-Flip蛋白的表达,解除了其对Caspase-8的抑制,激活了死亡受体通路,与DR4和DR5无关。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 c—Flip 喜树碱 细胞凋亡

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沉默ERK增强A375黑素瘤细胞对TRAIL诱导细胞凋亡的敏感性 被引量：1

9

作者 李红霞 张帆 +2 位作者 李坤 刘庆平 秦建中 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期343-349,共7页

目的：探讨直接抑制细胞外信号调节激酶（extra cellular signal-regulated kinase,ERK）表达后,对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL）对黑素瘤细胞杀伤作用的影响及其作用机制。方法：用... 目的：探讨直接抑制细胞外信号调节激酶（extra cellular signal-regulated kinase,ERK）表达后,对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL）对黑素瘤细胞杀伤作用的影响及其作用机制。方法：用携带ERK特异或对照shRNA的慢病毒感染A375黑素瘤细胞,48 h后加入终浓度为100μg/ml基因重组TRAIL蛋白继续培养6h,收获细胞,碘化丙啶染色,用流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和TRAIL受体的表达;Western blotting检测相关蛋白的表达水平。结果：亚型特异的ERK shRNA分别沉默ERK1或ERK2,导致A375细胞出现G_1期阻滞（对照shRNA组的G_1期细胞比例为71%,ERK1、ERK2、ERK1＋2 shRNA组分别增加到85%、90%和81%,P〈0.01）;S期细胞从对照组的11%减少到2%左右（P〈0.001）、G_2/M期细胞也从对照组的17%减少到3%（P〈0.01）。细胞周期改变伴有P21、P27蛋白上调和Cyclin D1蛋白降低,但未见明显的细胞凋亡。经对照shRNA和TRAIL处理的细胞,仅有15%的凋亡率,而ERK shRNA和TRAIL联合处理则使凋亡率达到40%~60%（P〈0.01）。抑制ERK蛋白表达能显著上调细胞表面TRAIL受体DR4的表达（从对照组32%增加到75%~80%,P〈0.01）,但DR5变化不明显。ERK抑制还明显降低A375细胞的葡萄糖转运受体1（Glut 1）和己糖激酶Ⅱ（HK-Ⅱ）的蛋白表达水平。结论：直接抑制ERK不仅可以抑制肿瘤细胞周期的进展,而且可以增强TRAIL对A375黑素瘤细胞的杀伤作用,其机制与上调细胞表面DR4的表达和干扰肿瘤细胞糖代谢有关。 展开更多

关键词 黑素瘤 A375细胞 细胞外信号调节激酶 trail 细胞凋亡 糖代谢

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融合蛋白Kininogen D5_(60-148)-TRAIL_(114-281)的表达及其抑制血管新生和诱导细胞凋亡的作用 被引量：1

10

作者 宗英 王梁华 +4 位作者 孙铭娟 董晓毅 王燕 陆国才 焦炳华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期336-341,共6页

目的:采用原核表达系统表达人Kininogen D560-148-TRAIL114-281融合蛋白,并对其生物学活性进行研究。方法:PCR技术扩增Kininogen D560-148和TRAIL114-281的编码序列,分别构建原核表达载体pMAL-Kininogen D560-148(pMAL-KD5)、pMAL-TRAIL... 目的:采用原核表达系统表达人Kininogen D560-148-TRAIL114-281融合蛋白,并对其生物学活性进行研究。方法:PCR技术扩增Kininogen D560-148和TRAIL114-281的编码序列,分别构建原核表达载体pMAL-Kininogen D560-148(pMAL-KD5)、pMAL-TRAIL114-281(pMAL-TRAIL)和pMAL-Kininogen D560-148-TRAIL114-281(pMAL-KT),重组质粒分别转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达融合蛋白MBP-KD5、MBP-TRAIL和MBP-KT,并经亲和层析纯化。MTT法检测细胞的增殖,管状形成实验检测内皮细胞血管形成,流式细胞仪和电镜检测细胞凋亡。结果:成功构建原核表达载体pMAL-KD5、pMAL-TRAIL和pMAL-KT,并获得纯化的融合蛋白MBP-KD5、MBP-TRAIL和MBP-KT。融合蛋白MBP-KT与MBP-KD5、MBP-TRAIL相比可显著抑制内皮细胞ECV304和胰腺癌细胞SW1990的增殖、明显抑制ECV304细胞体外管腔的形成,同时,MBP-KT剂量依赖性地诱导SW1990细胞凋亡。结论:融合蛋白Kininogen D560-148-TRAIL114-281既能诱导肿瘤细胞凋亡又能抑制血管生成,为进一步开发靶向性抗肿瘤药物奠定了基础。 展开更多

关键词 高分子量激肽原 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 血管生成抑制因子 胰腺肿瘤细胞

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甲胎蛋白对人肝癌Bel 7402细胞caspase信号传递及耐受TRAIL的影响 被引量：1

11

作者 李孟森 詹志农 +2 位作者 周升 刘新华 李刚 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期159-168,共10页

目的研究甲胎蛋白(AFP)对人肝癌Bel 7402细胞内caspase信息通路信号传递的影响,以及对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导肝癌细胞凋亡的对抗作用。方法激光共聚焦显微镜观察AFP与caspase-3、caspase-8在Bel 7402细胞内的共定位;... 目的研究甲胎蛋白(AFP)对人肝癌Bel 7402细胞内caspase信息通路信号传递的影响,以及对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导肝癌细胞凋亡的对抗作用。方法激光共聚焦显微镜观察AFP与caspase-3、caspase-8在Bel 7402细胞内的共定位;免疫共沉淀(Co-IP)技术研究AFP与caspase-3、caspase-8的相互作用;RNA干扰(RNAi)技术封阻AFP表达,并用Western blotting检测RNAi干扰肝癌Bel 7402细胞内AFP表达的效果;用蛋白酶活性比色法检测AFP对肝癌细胞caspase-3、caspase-8活性的影响;MTT法分析干扰AFP表达30 h后再给予TRAIL(2 nmol/L)处理24 h,Bel 7402细胞的生长情况,并用荧光显微镜观察经TRAIL处理后肝癌细胞的凋亡状况。结果共聚焦显微镜观察发现AFP、caspase-3、caspase-8主要表达于Bel 7402细胞的细胞质,发现AFP能与caspase-3共定位于细胞质,但与caspase-8在细胞质的共定位可能性很小;Co-IP技术研究发现AFP能与caspase-3结合,但不能与caspase-8结合;2 nmol/L剂量的TRAIL单独处理Bel 7402细胞并不能显著改变caspase-3活性,但能提升caspase-8活性,而用全反式维甲酸(ATRA)40μmol/L加TRAIL(2 nmol/L)处理时,则能提高Bel 7402细胞caspase-3活性;干扰AFP表达后,单独用TRAIL(2 nmol/L)也能激活caspase-3,而干扰AFP表达前后对caspase-8活性没有显著性改变;MTT分析发现,2 nmol/L剂量的TRAIL对Bel 7402细胞的生长并没有显著性抑制作用,但是干扰AFP表达后TRAIL(2 nmol/L)能明显抑制Bel 7402细胞生长(抑制率为48.4%);荧光显微镜观察表明,干扰AFP表达后TRAIL(2 nmol/L)能诱导Bel 7402细胞凋亡。结论AFP选择性抑制caspase-3活性是阻断人肝癌Bel7402细胞内凋亡信息传递的重要机制,也是AFP抵抗TRAIL诱导肝癌细胞凋亡的关键环节。 展开更多

关键词 甲胎蛋白 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 肿瘤耐药 肝癌细胞 caspase信息通路

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受体依赖性TRAIL重组腺病毒对人肺癌细胞凋亡的诱导作用

12

作者 马玲娣 王勇 +6 位作者 倪诚 王仕忠 鲍永仪 关乃富 张科 Leif G. Salford 樊小龙 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期577-582,共6页

目的:观察重组TRAIL腺病毒(Ad5-TRAIL及Ad5F35-TRAIL)对人非小细胞肺癌(nonsmall-cell lung cancer,NSCLC)原代培养细胞和细胞株的凋亡诱导作用,探讨两种Ad-TRAIL用于肺癌基因治疗的价值。方法:采用流式细胞术检测人肺癌细胞系A549、Z79... 目的:观察重组TRAIL腺病毒(Ad5-TRAIL及Ad5F35-TRAIL)对人非小细胞肺癌(nonsmall-cell lung cancer,NSCLC)原代培养细胞和细胞株的凋亡诱导作用,探讨两种Ad-TRAIL用于肺癌基因治疗的价值。方法:采用流式细胞术检测人肺癌细胞系A549、Z793、QG56和NCI-H520及10例原代培养肺癌细胞中CAR和CD46的表达水平;分别以Ad5-TRAIL及Ad5F35-TRAIL重组腺病毒按MOI 10和50感染上述细胞,48 h后Annexin V-FITC双标法流式细胞术检测细胞的早期凋亡。结果:A549、Z793、QG56和NCI-H520 4株肺癌细胞中,CD46的表达均明显高于CAR表达。Z793、QG56细胞对Ad5-TRAIL和Ad5F35-TRAIL的作用较敏感,MOI=10感染后凋亡率分别为(11.76±2.10)%、(15.96±2.89)%和(6.05±1.58)%、(10.11±1.26)%,显著高于对照组[(2.33±0.37)%和(5.95±1.89)%,P<0.05];MOI=50感染时NCI-H520细胞凋亡率分别为(12.89±3.2)%和(9.08±1.35)%,与对照组(7.04±2.17)%相比差异无统计学意义(P>0.05);Ad5-TRAIL和Ad5F35-TRAIL均不能诱导A549细胞凋亡。10例原代肺癌细胞CD46表达也明显较CAR高;Ad5-TRAIL或Ad5F35-TRAIL感染后,5例的原代肺癌细胞检测到凋亡;与Ad5-TRAIL相比,Ad5F35-TRAIL诱导的凋亡率更高。结论:两种TRAIL重组腺病毒对非小细胞肺癌细胞均有凋亡诱导作用,Ad5F35-TRAIL的作用强于Ad5-TRAIL,更适合于非小细胞肺癌的基因治疗。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 肿瘤坏死因子受体相关凋亡诱导配体 腺病毒 凋亡 柯萨奇腺病毒受体(CAR) CD46

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抑制PI3K信号通路促进TRAIL诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡

13

作者 朱明月 李伟 +7 位作者 夏华 鲁琰 董栩 陈栘 郭峻莉 符史干 谢协驹 李孟森 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期668-677,共10页

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)对癌细胞有独特的细胞毒性作用,而对正常细胞没有影响.但乳腺癌细胞耐受TRAIL诱导凋亡.本研究探索磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinosito... 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)对癌细胞有独特的细胞毒性作用,而对正常细胞没有影响.但乳腺癌细胞耐受TRAIL诱导凋亡.本研究探索磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)信号通路对人乳腺癌MCF-7细胞耐受TRAIL的影响.采用MTT法、显微照相以及DAPI染色观察TRAIL对MCF-7细胞生长的抑制作用以及诱导细胞凋亡状况;流式细胞分析细胞凋亡的情况;激光共聚焦显微镜观察多聚ADP核糖多聚酶-1(poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1)的迁移和定位;Western印迹分析死亡受体、caspase-3/8、磷酸化的AKT[pAKT(Ser473)]、Src和PARP-1等蛋白质表达.结果显示,小剂量TRAIL(<80 nmol/L)和Ly294002(<40μmol/L)对MCF-7细胞生长没有显著的抑制作用,但是大剂量TRAIL(160 nmol/L)和Ly294002(80μmol/L)则能抑制MCF-7细胞生长;低剂量Ly294002协同TRAIL抑制MCF-7细胞生长,并诱导细胞凋亡;Ly294002和TRAIL共同作用能促进PARP-1从胞浆进入细胞核;蛋白质表达分析显示,MCF-7细胞均表达死亡受体DR4、DR5、诱骗受体DcR1和DcR2、以及caspase-8,但是不表达caspase-3;Ly294002和TRAIL共同作用也能抑制pAKT(Ser473)和Src的表达,并且导致PARP-1断裂.本研究结果提示,抑制PI3K信号可增加MCF-7细胞对TRAIL诱导的敏感性;MCF-7细胞通过PI3K/AKT途径促进Src的表达耐受TRAIL的细胞毒性作用;Ly294002联合TRAIL是一种新的药物组合方式治疗乳腺癌. 展开更多

关键词 乳腺癌 细胞凋亡 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(trail) PI3K信号通路

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香加皮杠柳苷联用TRAIL对胃癌SGC-7901和MGC-803细胞的作用及其机制 被引量：10

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作者 孙佳玮 魏思思 +4 位作者 董佩 李磊 戴素丽 赵连梅 单保恩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1076-1080,共5页

目的:探讨香加皮杠柳苷(cortex periplocae,CPP)联用肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对胃癌细胞的作用及其机制。方法:人胃癌细胞系SGC-7901、MGC-803培养完成后,采用50... 目的:探讨香加皮杠柳苷(cortex periplocae,CPP)联用肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对胃癌细胞的作用及其机制。方法:人胃癌细胞系SGC-7901、MGC-803培养完成后,采用50、100、200 ng/ml的CPP和1μg/ml的TRAIL单用或联合处理。MTS法检测SGC-7901和MGC-803细胞的增殖情况,流式细胞术检测其凋亡率,Western boltting检测pro-BID、Mcl-1、cleaved caspase-3、DR4、DR5的表达水平。结果:SGC-7901和MGC-803细胞经CPP(50、100、200 ng/ml)和TRAIL(1μg/ml)联合处理24 h后,细胞增殖率明显低于空白对照组和对应的CPP各剂量单独处理组(P<0.05或P<0.01)。SGC-7901和MGC-803细胞凋亡率均明显高于空白对照组和对应的CPP各剂量单独处理组(P<0.05或P<0.01)。SGC-7901和MGC-803细胞中pro-BID、Mcl-1表达水平明显降低(均P<0.05),cleaved caspase-3表达水平明显升高(P<0.05),DR4和DR5受体的表达水平升高(均P<0.05)。结论:CPP协同TRAIL可明显诱导人胃癌SGC-7901和MGC-803细胞凋亡,增强人胃癌细胞对TRAIL的敏感性。 展开更多

关键词 香加皮杠柳苷 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 胃癌细胞 增殖 凋亡

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肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)基因抑制小鼠子宫基质细胞的蜕膜化 被引量：5

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作者 张晋平 罗文萍 +4 位作者 张倩 彭洪英 谭冬梅 王应雄 谭毅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第3期288-296,共9页

为了观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因对体外培养的小鼠蜕膜基质细胞增殖及凋亡的作用,探讨TRAIL对小鼠子宫蜕膜化进程的影响,构建TRAIL过表达及干扰质粒,转染小鼠基质细胞后诱导蜕膜化发生.转染72h后,应用半定量RT-PCR和We... 为了观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因对体外培养的小鼠蜕膜基质细胞增殖及凋亡的作用,探讨TRAIL对小鼠子宫蜕膜化进程的影响,构建TRAIL过表达及干扰质粒,转染小鼠基质细胞后诱导蜕膜化发生.转染72h后,应用半定量RT-PCR和Western blotting检测蜕膜基质细胞中TRAILmRNA和蛋白质的表达情况、MTT法观察蜕膜基质细胞的生长和增殖能力、流式细胞术检测蜕膜基质细胞的细胞周期分布情况和凋亡率.经酶切和核苷酸测序证实,TRAIL基因正确克隆入真核表达载体且能够上调TRAIL的表达,干扰质粒能有效地抑制TRAIL基因的表达.TRAIL过表达和RNA干扰的结果表明:TRAIL具有将蜕膜基质细胞阻滞在G0/G1期、抑制蜕膜基质细胞增殖并促使其凋亡的功效,提示TRAIL可能参与调节胚胎植入后基质细胞的有序蜕膜化进程. 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(trail) 子宫基质细胞 蜕膜化

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TRAIL联合吉西他滨对肺癌NCI-H460细胞增殖和凋亡的影响 被引量：3

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作者 孙非凡 孙铭娟 +1 位作者 王梁华 焦炳华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期296-300,共5页

目的：观察吉西他滨（gemcitabine）联合TNF相关凋亡诱导配体（TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL）对人肺癌细胞NCI-H460增殖和凋亡的影响。方法：MTT法检测NCI-H460细胞的增殖,流式细胞术检测NCI-H460细胞的凋亡。结果：... 目的：观察吉西他滨（gemcitabine）联合TNF相关凋亡诱导配体（TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL）对人肺癌细胞NCI-H460增殖和凋亡的影响。方法：MTT法检测NCI-H460细胞的增殖,流式细胞术检测NCI-H460细胞的凋亡。结果：吉西他滨和TRAIL单用或联用均可浓度（0.00110μg/ml）和时间（24、48、72 h）依赖性抑制NCI-H460细胞的增殖,两药联用比单用时抑制率更高,3组药物作用72 h时对肿瘤的抑制率分别为14.9%77.5%、23.4%74.8%、22.3%80.5%;作用72 h时两药单用和联用对细胞增殖抑制的IC50分别为0.085 3、0.098 2、0.043 5μg/ml。两药联用对NCI-H460细胞增殖的抑制效果还与用药顺序以及两药比例有关,吉西他滨作用24 h后再加TRAIL比TRAIL作用24 h后再加吉西他滨对NCI-H460的抑制效果更好,吉西他滨与TRAIL联用的比例为1∶0.3时对NCI-H460细胞增殖的抑制率最大。吉西他滨和TRAIL联用时NCI-H460细胞的凋亡率显著高于两药单用的凋亡率（49.04%vs29.33%、25.69%,P〈0.01）。结论：吉西他滨与TRAIL联用可协同抑制肺癌细胞NCI-H460的增殖、促进细胞凋亡。 展开更多

关键词 吉西他滨 TNF相关凋亡诱导配体 人肺癌细胞 NCI-H460 增殖 凋亡

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人胎盘TRAIL基因的cDNA克隆及序列测定 被引量：1

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作者 张明烽 唐爽 +1 位作者 宋红卫 张涌 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2005年第2期6-8,13,共4页

　根据GeneBank(U37518)中TRAIL(肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体)的cDNA序列,设计扩增引物。采用RT-PCR从人胎盘中扩增出TRAIL基因的全长cDNA。产物纯化后连至pGEM-TEasy载体,转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性克隆菌,酶切鉴定并进行序列测... 　根据GeneBank(U37518)中TRAIL(肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体)的cDNA序列,设计扩增引物。采用RT-PCR从人胎盘中扩增出TRAIL基因的全长cDNA。产物纯化后连至pGEM-TEasy载体,转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性克隆菌,酶切鉴定并进行序列测定。结果表明,本试验成功地克隆了TRAIL基因的1039bp全长cDNA。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(trail) RT-PCR 序列测定 人胎盘

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TRAIL联合化疗药物对人宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的影响 被引量：2

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作者 张佳冰 张银刚 《中国康复理论与实践》 CSCD 2004年第12期754-755,共2页

目的探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体 (TRAIL)对人宫颈癌Hela细胞的作用 ,以及与化疗药物的协同作用。方法将Hela细胞接种至 96孔培养板后分别加入浓度为l.0、10 .0、10 0 .0 μl/L的TRAIL、0 .1、1.0、10 .0mg/L的阿霉素 (ADM )和丝... 目的探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体 (TRAIL)对人宫颈癌Hela细胞的作用 ,以及与化疗药物的协同作用。方法将Hela细胞接种至 96孔培养板后分别加入浓度为l.0、10 .0、10 0 .0 μl/L的TRAIL、0 .1、1.0、10 .0mg/L的阿霉素 (ADM )和丝裂霉素 (MMC) ,及不同匹配的TRAIL +MMC和TRAIL +ADM ,采用四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色法分别检测肿瘤细胞的生存率 ;将Hela细胞接种至 12孔板 ,培育 2 4h后加入不同浓度的TRAIL、ADM、MMC、TRAIL +ADM、TRAL +MMC ,用流式细胞术检测不同处理组肿瘤细胞的凋亡率和死亡率。结果 10 0 μg/LTRAIL引起细胞的凋亡率为 2 0 .1% ,与无药物组 1.1%的凋亡率有非常显著性差异 (P <0 .0 1) ;单独采用 10mg/LMMC、ADM对细胞的抑制率为 3 6.0 %和 44 .1% ,而 10 0 μg/LTRAIL与 10mg/LMMC、ADM联合后对细胞的抑制率分别达到 5 8.4%和 73 .7% ,两者有协同作用 (P <0 .0 5 )。结论在体外实验中 ,TRAIL可通过诱导宫颈癌Hela细胞的凋亡而产生抗肿瘤作用 ;TRAIL与化疗药物ADM、MMC有协同抗肿瘤作用。 展开更多

关键词 宫颈癌 化疗 肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体

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KLF5转录因子抑制TRAIL诱导PC-3前列腺癌细胞凋亡的分子机制 被引量：3

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作者 杨超 石琦 +2 位作者 马建斌 郭鹏 贺大林 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期206-209,共4页

目的探究通过抑制KLF5表达促进TRAIL诱导的前列腺癌PC-3细胞凋亡的分子机制。方法在TRAIL诱导下,使用MTT实验、流式细胞实验、Western blot及qRT-PCR检测KLF5敲低组与对照组的PC-3细胞在细胞活性、凋亡比例及凋亡相关标志物的表达。结果... 目的探究通过抑制KLF5表达促进TRAIL诱导的前列腺癌PC-3细胞凋亡的分子机制。方法在TRAIL诱导下,使用MTT实验、流式细胞实验、Western blot及qRT-PCR检测KLF5敲低组与对照组的PC-3细胞在细胞活性、凋亡比例及凋亡相关标志物的表达。结果在PC-3细胞中抑制KLF5表达后,TRAIL诱导下的细胞凋亡明显增加,TRAIL受体DR4、DR5表达上升,凋亡抑制因子c-FLIP蛋白表达下调,但是其mRNA表达水平不变。结论抑制KLF5,可以通过上调TRAIL受体、下调c-FLIP蛋白表达的途径,促进TRAIL诱导的前列腺癌PC-3细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。使用小干扰RNA或小分子药物抑制KLF5表达,可能是潜在的激素非敏感前列腺癌治疗手段。 展开更多

关键词 前列腺癌 Krüppel样因子5(KLF5) 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(trail) 凋亡 细胞型Fas相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)

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真核双基因表达载体pBud-TRAIL-IL-24的构建及其在宫颈癌细胞中的表达 被引量：2

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作者 潘玥 向廷秀 +3 位作者 章海林 陈妮 陈飞兰 赖国旗 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期302-306,共5页

目的:构建肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)基因和白细胞介素24(Interleutin-24,IL-24)基因的真核双基因表达载体,并观察其对宫颈癌细胞生长的影响情况。方法:采用分子克... 目的:构建肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)基因和白细胞介素24(Interleutin-24,IL-24)基因的真核双基因表达载体,并观察其对宫颈癌细胞生长的影响情况。方法:采用分子克隆技术,将IL-24基因插入真核表达载体pBud-TRAIL中,构建双表达质粒pBud-TRAIL-IL-24,经酶切和测序鉴定后,转染宫颈癌HeLa细胞。荧光显微镜和免疫荧光双标技术检测TRAIL和IL-24在HeLa细胞中的表达。MTT法检测重组质粒对HeLa细胞生长状况的影响。结果:成功构建了真核双基因表达载体pBud-TRAIL-IL-24,并在宫颈癌细胞中表达;转染48 h后可见重组质粒对宫颈癌细胞生长有明显抑制作用(P<0.05)。结论:构建的双表达载体pBud-TRAIL-IL-24能在宫颈癌细胞中表达,并可有效抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,为进一步研究TRAIL和IL-24联合应用于宫颈癌的基因治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 宫颈癌细胞 双表达载体 trail基因 IL-24基因

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