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地高辛标记探针Southern印迹杂交技术要点及改进 被引量：7
1
作者 刘立鸿 许璐 +2 位作者 汪凯 张富春 马正海 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第3期57-59,共3页
Southern印迹杂交技术是检测特定DNA片段的常规方法之一,其操作程序繁琐,对基因组DNA的提取、纯化、酶切等均有较高要求,要获得理想杂交结果需要反复摸索。总结地高辛标记探针Southern印迹杂交的技术要点,并结合具体操作提出改良方案。
关键词 地高辛 southern杂交 改进 技术要点
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一种简捷的Southern印迹杂交方法 被引量：8
2
作者 朱华晨 许新萍 李宝健 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期128-130,共3页
在综合前人方法的基础上,发展了一种简捷、灵敏、廉价、效果可靠的Southern印迹杂交方案。使用0 4mol LNaOH溶液将琼脂糖凝胶上的DNA在变性的同时转移到尼龙膜上,晾干膜后无需固定就可以直接用于杂交。预杂交液和杂交液选用Church缓冲系... 在综合前人方法的基础上,发展了一种简捷、灵敏、廉价、效果可靠的Southern印迹杂交方案。使用0 4mol LNaOH溶液将琼脂糖凝胶上的DNA在变性的同时转移到尼龙膜上,晾干膜后无需固定就可以直接用于杂交。预杂交液和杂交液选用Church缓冲系统,该缓冲系统中仅需10g LBSA作为封闭剂即可。整个洗膜过程可简化为一种溶液、2～3次洗涤。碱变性及转移后的尼龙膜,也可以用于地高辛(DIG)等非放射性检测系统,并可耐多轮杂交和洗脱。本方法可适用于包括高等植物基因组在内的多种生物材料的DNA检测。 展开更多
关键词 southern印迹 DNA 杂交 植物基因组
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华山新麦草特异重复序列的筛选、克隆及Southern杂交分析 被引量：5
3
作者 陈林刚 武军 +5 位作者 赵继新 刘淑会 杨群慧 杜万里 庞玉辉 陈新宏 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期23-28,共6页
为了寻找华山新麦草特异重复序列,以华山新麦草、栽培一粒小麦、栽培二粒小麦、野生一粒小麦、野生二粒小麦、圆锥小麦、阿拉拉特小麦、茹科夫斯基小麦、斯卑尔脱小麦、普通小麦＂中国春＂（CS）为材料,利用200条RAPD引物筛选出11条华... 为了寻找华山新麦草特异重复序列,以华山新麦草、栽培一粒小麦、栽培二粒小麦、野生一粒小麦、野生二粒小麦、圆锥小麦、阿拉拉特小麦、茹科夫斯基小麦、斯卑尔脱小麦、普通小麦＂中国春＂（CS）为材料,利用200条RAPD引物筛选出11条华山新麦草特异条带（命名为RHS1-RHS11）,并对这些条带进行回收、克隆、测序。将序列在NCBI数据库中进行比对,其中RHS1、RHS2、RHS3、RHS4、RHS6、RHS8、RHS9在NCBI数据库中未发现与其同源的序列。RHS5、RHS7、RHS10、RHS11在NCBI数据库中有相似序列,其最高覆盖度和最高相似性分别为：83%和100%、99%和85%、49%和100%、19%和83%。通过Southern blotting进行序列特异性检测,RHS1、RHS2、RHS4、RHS6和RHS9等5个克隆在10种材料中都没有杂交信号;RHS7、RHS10和RHS11在华山新麦草及其他9种材料中都有弥散分布的杂交信号;RHS3、RHS5和RHS8只在华山新麦草中有杂交信号的序列。这些结果说明RHS3、RHS5、RHS8为华山新麦草基因组特异重复序列。 展开更多
关键词 华山新麦草 特异重复序列 克隆 southern杂交
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转基因甘蔗植株Southern杂交体系的优化 被引量：7
4
作者 崔学强 张树珍 +1 位作者 沈林波 冯翠莲 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期105-109,共5页
对甘蔗Southern杂交体系的优化,旨为转基因甘蔗Southern杂交鉴定分析提供参考。以转基因甘蔗为材料,就探针不同标记方法的比较、甘蔗基因组DNA的提取、基因组DNA酶切量、酶切时间及杂交过程等方面,对地高辛标记的Southern杂交技术进行... 对甘蔗Southern杂交体系的优化,旨为转基因甘蔗Southern杂交鉴定分析提供参考。以转基因甘蔗为材料,就探针不同标记方法的比较、甘蔗基因组DNA的提取、基因组DNA酶切量、酶切时间及杂交过程等方面,对地高辛标记的Southern杂交技术进行了优化研究。结果表明,改良的CTAB法提取的甘蔗DNA能满足后期实验的要求;PCR法标记探针的效率较随机引物法标记探针的效率高,更适合用于Southern杂交;40μg的DNA在400μL酶切体系中,酶切10 h可获得良好的酶切效果;杂交温度40℃,杂交18 h,可获得清晰的杂交条带。 展开更多
关键词 甘蔗 southern杂交 地高辛 PCR法标记探针 酶切
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甜菜基因组DNA的提取及Southern杂交分析 被引量：4
5
作者 侯静 马凤鸣 +2 位作者 陈胜勇 丁广洲 李彩凤 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第12期14-18,共5页
分别采用常规CTAB法和SDS法提取甜菜基因组DNA,并将提取的DNA应用于Southern杂交分析,发现基因组DNA的质量对杂交信号有非常大的影响。常规CTAB法提取的DNA产生的Southern杂交信号,仅出现在高分子质量位置;SDS法提取的DNA产生的Souther... 分别采用常规CTAB法和SDS法提取甜菜基因组DNA,并将提取的DNA应用于Southern杂交分析,发现基因组DNA的质量对杂交信号有非常大的影响。常规CTAB法提取的DNA产生的Southern杂交信号,仅出现在高分子质量位置;SDS法提取的DNA产生的Southern杂交信号,在高分子质量和低分子质量位置均出现。SDS法提取的甜菜基因组DNA适于Southern杂交分析。 展开更多
关键词 甜菜 基因组DNA 常规CTAB法 SDS法 southern杂交
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Southern杂交方法用于近交系小鼠H-2基因检测 被引量：1
6
作者 马丽颖 刘双环 +1 位作者 岳秉飞 贺争鸣 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2008年第1期62-64,共3页
目的建立一种简便、快捷、准确的检测方法用于近交系小鼠的遗传检测。方法根据近交系小鼠的H-2基因序列设计相应的探针,并标记生物素,利用微孔板Southern杂交技术,使探针与模板DNA杂交,再加入亲和素标记的辣根过氧化物酶进行酶显色反应... 目的建立一种简便、快捷、准确的检测方法用于近交系小鼠的遗传检测。方法根据近交系小鼠的H-2基因序列设计相应的探针,并标记生物素,利用微孔板Southern杂交技术,使探针与模板DNA杂交,再加入亲和素标记的辣根过氧化物酶进行酶显色反应,通过酶标仪检测杂交结果,以确定近交系小鼠的基因型。结果57BL/6和C57BL/10为H-2b型;DBA/2和Scid为H-2d型;615和C3H为H-2k型;NCPC/2、TA1、TA2和T739均为H-2b型。结论通过Southern杂交检测可以确定近交系小鼠的基因型。该检测方法简便、易行,检测结果客观,可以应用于近交系小鼠的遗传检测。 展开更多
关键词 southern杂交 H-2基因 近交系 小鼠
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转人组织蛋白酶K基因小鼠的Southern杂交鉴定 被引量：3
7
作者 祝梅香 邹星 +5 位作者 沈洁 王嫣 徐凤 郭金微 张晶 李亦平 《中国比较医学杂志》 CAS 2005年第1期40-42,共3页
目的　用地高辛标记探针的方法进行Southern杂交 ,以检测转人组织蛋白酶K基因小鼠外源DNA的整合情况 ,筛选携带目的基因的阳性小鼠。方法　用地高辛标记探针的方法 ,对转人组织蛋白酶K基因小鼠 (F0代 )及首建阳性鼠与野生型ICR小鼠交配... 目的　用地高辛标记探针的方法进行Southern杂交 ,以检测转人组织蛋白酶K基因小鼠外源DNA的整合情况 ,筛选携带目的基因的阳性小鼠。方法　用地高辛标记探针的方法 ,对转人组织蛋白酶K基因小鼠 (F0代 )及首建阳性鼠与野生型ICR小鼠交配产生的F1代进行Southern杂交 ,对F0代和F1代进行筛选。结果　经显微注射法 ,共获得 2 5只转基因小鼠 ,通过Southern杂交鉴定 ,1只为阳性 ,阳性率为 4 % ;对PCR阳性的F1代小鼠 35只进行Southern杂交 ,结果全部为阳性。结论　外源基因 (人CathepsinK基因 )已整合到小鼠的染色体上 ,并且能够遗传。 展开更多
关键词 小鼠 阳性 southern杂交 组织蛋白酶 目的基因 地高辛标记探针 FD 外源基因 交配 外源DNA
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向下转膜法在乙肝病毒Southern杂交中的应用 被引量：3
8
作者 张秉强 吴莹 +4 位作者 唐霓 郭进军 黄英 汤华 黄爱龙 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第2期26-28,共3页
目的评价向下转膜法在乙肝病毒(HBV)Southern杂交中的应用效果。方法用带有1.3倍HBV基因的真核表达载体转染HepG2细胞,使其产生瞬时HBV表达,72小时收集细胞并提取细胞总DNA,琼脂糖凝胶电泳后,以向上和向下两种方式转移在尼龙膜上;用化... 目的评价向下转膜法在乙肝病毒(HBV)Southern杂交中的应用效果。方法用带有1.3倍HBV基因的真核表达载体转染HepG2细胞,使其产生瞬时HBV表达,72小时收集细胞并提取细胞总DNA,琼脂糖凝胶电泳后,以向上和向下两种方式转移在尼龙膜上;用化学发光标记和检测试剂盒将乙肝病毒基因片段标记成探针,再与向上和向下转膜后的尼龙膜进行杂交,判断产生明显HBV杂交条带所需的细胞总DNA量,从而验证向下转膜法在乙肝病毒Southern杂交中的应用效果。结果发现向下转膜后,检测HBV表达所需的细胞总DNA量极少,灵敏度高,0.5μg细胞总DNA电泳后转膜,即可检测出HBVDNA的表达,凝胶中仅有8%的DNA残留;而向上转膜所需的总DNA量大,灵敏度低,25μg的细胞总DNA电泳后转膜,仅能检测出弱的条带。结论向下转膜法是一种较好的转膜方式,适于对乙肝病毒的Southern杂交,值得推广应用。 展开更多
关键词 southern杂交 乙肝病毒 膜法 HepG2细胞 琼脂糖凝胶电泳 真核表达载体 总DNA 化学发光标记 DNA量 HBV 检测试剂盒 基因片段 推广应用 尼龙膜 灵敏度 条带 转染 探针
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一种改良的Southern印迹杂交方法
9
作者 李建平 张燕红 +1 位作者 王冬梅 黄全生 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2007年第B11期116-118,共3页
在综合前人方法的基础上，改良了一种简捷、灵敏、廉价、效果可靠的Southem印迹杂交方案，使用0．4moL／L NaOH溶液将琼脂糖凝胶上的DNA在变性的同时转移到尼龙膜上，紫外交联固定后用于杂交。预杂交液和杂交液选用Church缓冲系统，该... 在综合前人方法的基础上，改良了一种简捷、灵敏、廉价、效果可靠的Southem印迹杂交方案，使用0．4moL／L NaOH溶液将琼脂糖凝胶上的DNA在变性的同时转移到尼龙膜上，紫外交联固定后用于杂交。预杂交液和杂交液选用Church缓冲系统，该缓冲系统中仅需10g／LBSA作为封闭剂即可。整个洗膜过程可简化为一种溶液、2-3次洗涤。碱变性及转移后的尼龙膜，也可以用于地高辛（DIG）等非放射性检测系统，并可耐多轮杂交和洗膜。方法可适用于包括高等植物基因组在内的多种生物材料的DNA检测。 展开更多
关键词 southern印迹 DNA 杂交 植物基因组
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基于地高辛标记对小麦进行Southern杂交分析主要影响因素的优化和验证 被引量：7
10
作者 刘禄 牛焱焱 +4 位作者 雷昊 林志珊 赵翔宇 叶兴国 张宪省 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期182-188,共7页
以转基因小麦和野生型小麦DNA为材料,对利用地高辛标记对小麦基因组DNA进行Southern杂交分析的影响因素进行了优化研究,包括探针制备与纯化、样品DNA量、酶切体系、真空转印条件、杂交条件、免疫检测方法等。结果表明,对随机引物标记的... 以转基因小麦和野生型小麦DNA为材料,对利用地高辛标记对小麦基因组DNA进行Southern杂交分析的影响因素进行了优化研究,包括探针制备与纯化、样品DNA量、酶切体系、真空转印条件、杂交条件、免疫检测方法等。结果表明,对随机引物标记的模板和标记后的探针进行纯化可明显提高探针的标记效率,10μg高质量的DNA样品在80μl的体系中,酶切8～12h可获得良好的效果;真空转膜时使用碱性液比中性液获得的转膜效果更干净;试剂纯度、杂交温度及杂交炉转速等均对杂交效果产生重要影响;配合改进的CSPD涂布方法,使用化学发光检测系统比单纯使用X光片显像更易操作,背景更干净;本研究所优化的地高辛标记的小麦Southern杂交分析显示出较高的灵敏度和信噪比,结果稳定,可克服同位素标记对实验条件、设备及实验人员身体状况等限制,在普通实验室推广应用。 展开更多
关键词 小麦 地高辛标记 随机引物 PCR法标记探针 免疫检测 southern杂交
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地高辛标记对旱稻进行southern杂交分析主要影响因素的优化和验证 被引量：1
11
作者 邢文岳 苏乐乐 +2 位作者 李朝炜 魏景芳 朱昀 《江苏农业科学》 北大核心 2017年第8期41-43,共3页
以转基因旱稻和野生型旱稻为材料,对通过地高辛随机引物标记法进行的旱稻基因组Southern杂交条件进行了优化分析,包括探针制备效率、DNA样品量、酶切体系及转膜时间等。结果表明:影响探针制备效率的首要因素是温度而不是时间;DNA上样量... 以转基因旱稻和野生型旱稻为材料,对通过地高辛随机引物标记法进行的旱稻基因组Southern杂交条件进行了优化分析,包括探针制备效率、DNA样品量、酶切体系及转膜时间等。结果表明:影响探针制备效率的首要因素是温度而不是时间;DNA上样量在10~30μg均可以获得高质量的杂交图;60μL体系15 h即可酶切彻底并获得良好的杂交效果;转膜时间6 h即可。本研究所优化的地高辛标记的旱稻杂交分析结果稳定重复性好,具有较高的灵敏度和信噪比。 展开更多
关键词 旱稻 地高辛 southern杂交方法 优化 验证
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一种改进的快速Southern杂交方法
12
作者 卢一凡 邓继先 《生物技术通报》 CAS CSCD 1997年第3期24-25,共2页
本文提出一种使用琼指糖凝胶直接杂交的方法,结果明确、简单可行,是微量核酸、低拷贝基因鉴定以及疾病核酸诊断的一种较好方法。
关键词 改进 快速southern杂交方法 琼脂糖凝胶 低拷贝数基因
全文增补中
Southern杂交技术在农作物遗传转化研究中的应用 被引量：6
13
作者 代军 《安徽农业科学》 CAS 2015年第1期20-23,共4页
Southern杂交技术作为分子生物学中的经典技术,为特定DNA片段的检测提供了快速、准确、灵敏的方法。在植物遗传转化研究中,Southern杂交技术广泛应用于外源基因的检测及拷贝数的鉴定工作,为植物转基因研究的准确性提供了充分的保障。综... Southern杂交技术作为分子生物学中的经典技术,为特定DNA片段的检测提供了快速、准确、灵敏的方法。在植物遗传转化研究中,Southern杂交技术广泛应用于外源基因的检测及拷贝数的鉴定工作,为植物转基因研究的准确性提供了充分的保障。综述了Southern杂交技术在水稻、玉米、小麦、大豆等主要农作物遗传转化研究中的应用,可为农作物转基因研究方法的明确及转基因食品安全检测方法的探索提供参考。 展开更多
关键词 southern杂交 农作物 遗传转化 外源基因检测
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黄鳝激素敏感性脂肪酶基因Hsl染色体原位杂交定位 被引量：3
14
作者 戢福云 余其兴 潘佩文 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期163-167,共5页
动物脂肪组织中的甘油三酯在数量上是最重要的储存能源。Hsl基因所编码的激素敏感性脂肪酶是一种多功能酶。它通过催化水解储存在脂肪组织中的甘油三酯,以及卵巢、肾上腺、睾丸和胎盘中的胆固醇酯,在机体能量供应和类固醇生成作用中发... 动物脂肪组织中的甘油三酯在数量上是最重要的储存能源。Hsl基因所编码的激素敏感性脂肪酶是一种多功能酶。它通过催化水解储存在脂肪组织中的甘油三酯,以及卵巢、肾上腺、睾丸和胎盘中的胆固醇酯,在机体能量供应和类固醇生成作用中发挥重要作用。本研究以放射性同位素和地高辛标记重组质粒pBS中所含猪Hsl基因作为探针,分别与PstⅠ酶切的黄鳝基因组总DNA和有丝分裂染色体标本进行Southern杂交和荧光原位杂交(FISH)。结果显示,Southern杂交呈现一条带,片段长度约为11.5kb。同时,应用FISH定位Hsl基因于黄鳝5号染色体,相对着丝粒距离为78.35±1.26。该定位结果与应用"特定染色体DNA池"定位黄鳝Hsl基因结果相符,且定位结果更为精细。表明在淡水鱼类黄鳝基因组中存在Hsl基因,另一方面也首次提供黄鳝5号染色体上FISH杂交信息,从而为增加黄鳝染色体组中已知的遗传标记和建立高精度遗传图谱奠定基础。 展开更多
关键词 黄鳝 Hsl基因 southern杂交 FISH
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转Bt基因抗虫红麻福红952后代的分子杂交验证 被引量：2
15
作者 祁建民 徐建堂 +3 位作者 林荔辉 陶爱芬 兰涛 吴建梅 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2008年第1期77-79,共3页
利用花粉管通道法将抗虫质粒DNA导入受体红麻品种福红952,在受体品种中获得Bt抗虫目的基因的表达.分别用PCR和Southern杂交技术,对所转化的红麻转基因4个世代的株系进行分子验证,结果表明:4个世代中都检测到B t抗虫目的基因片段,说明外... 利用花粉管通道法将抗虫质粒DNA导入受体红麻品种福红952,在受体品种中获得Bt抗虫目的基因的表达.分别用PCR和Southern杂交技术,对所转化的红麻转基因4个世代的株系进行分子验证,结果表明:4个世代中都检测到B t抗虫目的基因片段,说明外源基因已经整合到红麻的基因组中并获得了稳定遗传. 展开更多
关键词 红麻 BT转基因 PCR southern杂交
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低温诱导甜菜(Beta vulgaris L.)Ty7Br600基因的Northern blotting和Southern blotting分析 被引量：1
16
作者 戴建军 程大友 +3 位作者 常缨 李彩凤 闫桂萍 马凤鸣 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期80-83,共4页
以低温诱导甜菜幼苗为试验材料,以未进行低温诱导的甜菜幼苗为对照,采用α-32P-ATP放射标记按随机引物标记法标记本实验室克隆的Ty7Br600基因,进行Northern杂交。Northern杂交试验结果显示,在低温诱导培养的甜菜幼苗的RNA群体中,出现较... 以低温诱导甜菜幼苗为试验材料,以未进行低温诱导的甜菜幼苗为对照,采用α-32P-ATP放射标记按随机引物标记法标记本实验室克隆的Ty7Br600基因,进行Northern杂交。Northern杂交试验结果显示,在低温诱导培养的甜菜幼苗的RNA群体中,出现较强的杂交条带,而在未诱导培养的甜菜幼苗的RNA群体中,则几乎没有阳性杂交条带出现。因此,Ty7Br600这一序列有可能是二年生甜菜幼苗经低温诱导处理之后被诱导表达的与抽薹相关的新基因序列。Southern杂交结果发现,在每一组酶切中至少有2~3条条带,表明Ty7Br600确为甜菜基因组片段,也同时表明该基因在甜菜基因组中以2个拷贝或低拷贝形式存在。 展开更多
关键词 甜菜(Beta VULGARIS L.) 低温诱导 NORTHERN杂交 southern杂交
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豆伞滑刃线虫类FMRF酰胺多肽基因的克隆与分析
17
作者 林世锋 王仁刚 +4 位作者 王自力 李莉 陈越男 吴沙沙 刘国琴 《华北农学报》 北大核心 2025年第3期166-172,共7页
为探究豆伞滑刃线虫与寄主植物互作的分子机制,通过构建豆伞滑刃线虫体前端特异cDNA文库与RACE技术相结合的方法克隆获得1个豆伞滑刃线虫类FMRF酰胺多肽基因Bd-FLP-12,并应用生物信息学方法进行序列分析,应用Southern杂交和半定量RT-PC... 为探究豆伞滑刃线虫与寄主植物互作的分子机制,通过构建豆伞滑刃线虫体前端特异cDNA文库与RACE技术相结合的方法克隆获得1个豆伞滑刃线虫类FMRF酰胺多肽基因Bd-FLP-12,并应用生物信息学方法进行序列分析,应用Southern杂交和半定量RT-PCR方法分别检测基因拷贝数和在不同发育阶段的表达水平。序列分析表明,Bd-FLP-12编码蛋白由90个氨基酸残基组成,其中含有1个信号肽序列和1个FLP-12成熟肽序列,无跨膜结构域,属于分泌型蛋白。根据Southern杂交结果推测,Bd-FLP-12基因在豆伞滑刃线虫基因组中为单拷贝。半定量RT-PCR结果显示,Bd-FLP-12在豆伞滑刃线虫各龄期均有表达,但在卵期相对比较微弱。综上,首次在豆伞滑刃线虫中克隆获得Bd-FLP-12基因全长序列,解析了该基因的结构、性质和表达特征,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 豆伞滑刃线虫 类FMRF酰胺多肽 生物信息学 southern杂交 表达分析
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豆伞滑刃线虫扩展蛋白基因BdEXP1克隆与分析
18
作者 郭凯阳 林世锋 +5 位作者 王仁刚 李莉 张洁 余世洲 王自力 刘国琴 《广东农业科学》 2025年第4期53-62,共10页
【目的】克隆豆伞滑刃线虫扩展蛋白(Expansin,EXP)基因BdEXP1并进行表达特性分析,为深入研究BdEXP1基因在豆伞滑刃线虫与寄主互作过程中的作用提供参考。【方法】基于前期豆伞滑刃线虫体前端特异表达cDNA文库的筛选和测序结果,通过RACE... 【目的】克隆豆伞滑刃线虫扩展蛋白(Expansin,EXP)基因BdEXP1并进行表达特性分析,为深入研究BdEXP1基因在豆伞滑刃线虫与寄主互作过程中的作用提供参考。【方法】基于前期豆伞滑刃线虫体前端特异表达cDNA文库的筛选和测序结果,通过RACE技术克隆目的基因cDNA全长序列,并进行生物信息学分析;利用Southern杂交技术确定基因拷贝数,利用实时荧光定量PCR和原位杂交技术分别进行基因表达模式和表达定位分析。【结果】克隆获得BdEXP1基因cDNA全长序列,GenBank登录号为PQ276072。该基因cDNA编码区长450 bp,编码149个氨基酸;DNA编码区长499 bp,包含2个外显子和1个内含子,为多拷贝基因。BdEXP1蛋白质相对分子量为16.16 kD,理论等电点为7.47,与松材线虫相似度最高、达64%,含有1个典型且保守的DPBB_SPI-like结构域,存在信号肽但无跨膜结构域,属于分泌型蛋白。实时荧光定量PCR分析表明,BdEXP1在豆伞滑刃线虫各个龄期表达无明显差异。原位杂交分析表明,BdEXP1基因在豆伞滑刃线虫食道腺特异表达。【结论】成功克隆豆伞滑刃线虫BdEXP1基因,并证明该基因在线虫食道腺特异表达,推测其编码蛋白在线虫与寄主互作过程中分泌到体外发挥作用。 展开更多
关键词 豆伞滑刃线虫 扩展蛋白 生物信息学 southern杂交 原位杂交
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快速简便的杂交检测DNA(英文) 被引量：2
19
作者 毛强 耿天龙 王胜华 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1577-1581,共5页
Southern杂交作为黄金标准,已广泛运用于DNA的检测上。但是,经典的southern杂交和近年来一些DNA检测方法存在放射性污染,操作繁琐,耗时,对实验仪器设备要求高等问题。本文利用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的dUTP合成DNA探针建立了快速检测... Southern杂交作为黄金标准,已广泛运用于DNA的检测上。但是,经典的southern杂交和近年来一些DNA检测方法存在放射性污染,操作繁琐,耗时,对实验仪器设备要求高等问题。本文利用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的dUTP合成DNA探针建立了快速检测DNA的液相杂交方法。该方法包括探针制备、液相杂交、电泳分离和信号检测四个步骤,并在此基础上对FITC-双链和FITC-单链探针的杂交效果作了比较。结果显示,使用FITC标记的两种探针都能取得良好的实验结果,但单链探针较双链的检测灵敏度高;双链DNA探针可以检测出0.8μg(3.64×10-13 mol)的质粒,而单链DNA探针可以检测出0.38μg(1.82×10-13 mol)的质粒DNA,在检出效率上是前者的2.1倍。整个检测过程操作简便,可在3h内完成,可较好地解决了其他DNA检测方法存在的费时费力的问题。 展开更多
关键词 液相杂交 FITC-12-dUTP southern杂交 DNA检测 荧光
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LA-PCR法制备赤麂Y_2涂染探针与原位杂交 被引量：1
20
作者 粘伟红 潘丹岷 +1 位作者 曹祥荣 张锡然 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期78-80,共3页
应用显微切割技术获得赤麂的Y2单条染色体,经LA-PCR(linker-adaptor PCR)扩增后用D IG标记制备探针,然后用Southern b lot杂交法对所制备的探针进行验证并对毛冠鹿的中期核型进行原位杂交.结果表明:用该法制备的涂染探针是成功的,原位... 应用显微切割技术获得赤麂的Y2单条染色体,经LA-PCR(linker-adaptor PCR)扩增后用D IG标记制备探针,然后用Southern b lot杂交法对所制备的探针进行验证并对毛冠鹿的中期核型进行原位杂交.结果表明:用该法制备的涂染探针是成功的,原位杂交也获得了阳性结果,可以初步验证毛冠鹿中的Y染色体. 展开更多
关键词 LA-PCR southern杂交 原位杂交 赤麂 毛冠鹿
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