硅烷法固定ssDNA制作的压电式DNA传感器 被引量：10

1

作者 高志贤 房彦军 +3 位作者 王红勇 周焕英 宁保安 晁福寰 《传感器技术》 CSCD 北大核心 2002年第12期60-64,共5页

利用硅烷法将ssDNA固化T方向切割、3.58MHz和10MHz石英晶体金电极上,构建了压电DNA传感器,建立了快速检测葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因的方法。优化了固定SEB基因的条件,并用动态法、静态法和斑点杂交法进行了固化效果观察。结果表明:该传... 利用硅烷法将ssDNA固化T方向切割、3.58MHz和10MHz石英晶体金电极上,构建了压电DNA传感器,建立了快速检测葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因的方法。优化了固定SEB基因的条件,并用动态法、静态法和斑点杂交法进行了固化效果观察。结果表明:该传感器2h后,有较好响应;对不同长度DNA探针固化效果进行比较,169bp(即169个碱基)SEB探针固定和杂交效果较好;利用0.5mol/LNaOH进行电极洗脱,时间为45min,电极可以再生,且传感器可以重复使用3次;利用1.2mol/LNaOH和1.2mol/LHCl洗涤电极,该电极可多次再利用;固化好的电极于4℃条件下可以保存三周之久。 展开更多

关键词 硅烷法 ssdna 压电式DNA传感器 葡萄球菌肠毒素B 3-氯基丙基三乙氧基甲硅烷

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谷氨酸棒状杆菌CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统优化 被引量：1

2

作者 王婷 马洪坤 +3 位作者 赵桂红 蔡柠匀 张德志 陈宁 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第19期1-7,共7页

谷氨酸棒状杆菌作为重要的微生物细胞工厂,基因组修饰已经成为调节目标代谢物的首要途径。为了提高基因定点突变的编辑效率,建立了高效省时的CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统。利用卡那霉素抗性作为筛选标记,构建了1株严谨的单链模式菌... 谷氨酸棒状杆菌作为重要的微生物细胞工厂,基因组修饰已经成为调节目标代谢物的首要途径。为了提高基因定点突变的编辑效率,建立了高效省时的CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统。利用卡那霉素抗性作为筛选标记,构建了1株严谨的单链模式菌M-1,用于验证与统计编辑效率。首先,采用强启动子Ptuf,优化了切割效率;其次,利用重组酶RecT和合理长度与添加量的ssDNA,优化了重组效率。实验结果显示:在启动子Ptuf和RecT的双重作用下,采用滞后链(70bp、12.5μg)优化组合方式,使基因编辑效率提升至(80±5.7)%。由RecT介导的CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统可在很大程度上加快谷氨酸棒状杆菌代谢工程改造。 展开更多

关键词 CRISPR-Cpf1 ssdna 谷氨酸棒状杆菌 优化 基因组编辑

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抗ssDNA单抗免疫组化法用于检测肿瘤细胞株对化疗药物敏感性的研究 被引量：1

3

作者 吴晓燕 徐志伟 +2 位作者 吴国庆 苗乃法 冯永堂 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期456-458,共3页

目的 :应用本室制备的抗单链DNA (ssDNA)单克隆抗体(mAb) ,检测多种化疗药物对不同肿瘤细胞株凋亡的诱导作用 ,并根据凋亡率判断肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。方法 :用血浆峰值浓度 (PPC)的 9种化疗药物 ,分别诱导肿瘤细胞株K5 6 2和He... 目的 :应用本室制备的抗单链DNA (ssDNA)单克隆抗体(mAb) ,检测多种化疗药物对不同肿瘤细胞株凋亡的诱导作用 ,并根据凋亡率判断肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。方法 :用血浆峰值浓度 (PPC)的 9种化疗药物 ,分别诱导肿瘤细胞株K5 6 2和Hep 2的凋亡。用抗ssDNAmAb免疫组化染色法 ,检测肿瘤细胞株的凋亡并计算调亡率。结果 :以抗ssDNAmAb建立的检测细胞凋亡的免疫组化法 ,能够区分凋亡细胞和非凋亡细胞。该法检测证明 ,化疗药物可诱导敏感肿瘤细胞株凋亡 ,但不同化疗药物诱导同一肿瘤细胞株或不同肿瘤细胞株凋亡的程度不同。结论 :抗ssDNAmAb免疫组化法 ,可用于检测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。 展开更多

关键词 单克隆抗体 细胞凋亡 化疗药物 敏感性 抗ssdna单抗免疫组化法 检测 肿瘤细胞株

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随机ssDNA文库不对称PCR扩增条件的优化及回收效率比较 被引量：2

4

作者 周晏丞 曹立亭 +1 位作者 陈露 马跃 《四川畜牧兽医》 2015年第11期33-35,37,共4页

本研究开展了SELEX技术中ssDNA文库不对称PCR扩增及回收条件的优化试验,结果得出:20μL不对称PCR反应体系中上下游引物的最佳比例为60∶1,最优循环数为30个循环,回收效率最高的方法为乙醇沉淀法。此条件下,随机ssDNA文库不对称PCR扩增... 本研究开展了SELEX技术中ssDNA文库不对称PCR扩增及回收条件的优化试验,结果得出:20μL不对称PCR反应体系中上下游引物的最佳比例为60∶1,最优循环数为30个循环,回收效率最高的方法为乙醇沉淀法。此条件下,随机ssDNA文库不对称PCR扩增出来的条带清晰、稳定、特异性高,并具有较好的纯化效率。 展开更多

关键词 配基系统进化技术 ssdna文库 不对称PCR DNA纯化

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食源性致病菌ssDNA适配体的筛选及应用进展

5

作者 张明 尹珍珍 吴恒志 《食品与生物技术学报》 CSCD 北大核心 2024年第11期44-59,共16页

单链DNA(single-stranded DNA,ssDNA)适配体是通过体外配体指数富集系统进化筛选获得的较短的单链脱氧核糖核苷酸序列。它们能够通过构象变化实现与靶标高亲和力和特异性结合,具有制备简单、成本低、稳定性高、易于修饰和免疫原性低等优... 单链DNA(single-stranded DNA,ssDNA)适配体是通过体外配体指数富集系统进化筛选获得的较短的单链脱氧核糖核苷酸序列。它们能够通过构象变化实现与靶标高亲和力和特异性结合,具有制备简单、成本低、稳定性高、易于修饰和免疫原性低等优点,因此被称为“化学抗体”。ssDNA适配体已在食品安全检测领域显示出巨大潜力。作者综述了基于细胞指数富集配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术发展的ssDNA适配体筛选技术,以及ssDNA适配体在食源性致病菌检测领域中的应用,总结了目前研究的不足以及未来发展方向,旨在为提高食品安全监管与食源性疾病预防和控制效果提供理论依据。 展开更多

关键词 ssdna适配体 食源性致病菌 筛选 应用

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RecET重组机制及应用研究进展

6

作者 郑园霞 张毅 刘亮伟 《河南农业大学学报》 北大核心 2025年第3期379-388,共10页

RecE/RecT(即RecET)介导短臂(30~60 bp)DNA重组,从而成为一种新的工具广泛用于质粒构建、基因组编辑代谢路径等方面。综述了RecET重组工具由创建到完善的发展过程、在质粒构建及基因组编辑中的应用、RecE/RecT蛋白晶体结构及冷冻电镜结... RecE/RecT(即RecET)介导短臂(30~60 bp)DNA重组,从而成为一种新的工具广泛用于质粒构建、基因组编辑代谢路径等方面。综述了RecET重组工具由创建到完善的发展过程、在质粒构建及基因组编辑中的应用、RecE/RecT蛋白晶体结构及冷冻电镜结构的解析,探讨了其外切活性重组说及ssDNA退火机制,进而说明了体外重组、体外互作、在真核生物研究中的价值等,并对其存在的问题和未来发展进行了展望。 展开更多

关键词 RecET重组 RecET基因组编辑工具 RecET蛋白结构 外切活性重组说 ssdna退火机制

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金纳米粒子与单链DNA的相互作用 被引量：6

7

作者 孙莉萍 张建锋 +4 位作者 李辉 王秀燕 张召武 王霜 张其清 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第1期95-99,共5页

研究了金纳米粒子与单链DNA在不同pH值时的相互作用以及金纳米粒子与不同碱基序列单链DNA的相互作用.结果表明,在pH为12.6的强碱性条件下,单链DNA能使金纳米粒子稳定分散在溶液中;在pH为1.4的强酸性条件下,单链DNA能保护金纳米粒子不发... 研究了金纳米粒子与单链DNA在不同pH值时的相互作用以及金纳米粒子与不同碱基序列单链DNA的相互作用.结果表明,在pH为12.6的强碱性条件下,单链DNA能使金纳米粒子稳定分散在溶液中;在pH为1.4的强酸性条件下,单链DNA能保护金纳米粒子不发生融合,而只发生团聚,且团聚现象具有可逆性.不同寡核苷酸对金纳米粒子的亲和力按poly dA>poly dC>poly dT的顺序依次减弱.单链DNA对纳米金的保护作用强度与单链DNA的长度成正比. 展开更多

关键词 金纳米粒子 单链DNA 相互作用 ssdna

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筛选环孢霉素A适体的SELEX技术的建立(英文) 被引量：10

8

作者 李卫滨 兰小鹏 +1 位作者 杨湘越 周长邵 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期829-834,共6页

体外合成一个全长78个核苷酸,中间含35个随机序列的随机单链寡核苷酸序列(ssDNA)文库,运用指数富集的配体系统进化(SELEX)技术,以环孢霉素A(CsA)为靶目标,以磁珠作为筛选介质,利用生物素-链酶抗生物素-辣根过氧化物酶系统,检测每轮ssDN... 体外合成一个全长78个核苷酸,中间含35个随机序列的随机单链寡核苷酸序列(ssDNA)文库,运用指数富集的配体系统进化(SELEX)技术,以环孢霉素A(CsA)为靶目标,以磁珠作为筛选介质,利用生物素-链酶抗生物素-辣根过氧化物酶系统,检测每轮ssDNA文库与CsA的亲和力,筛选并鉴定CsA特异性的适体.经过11轮的筛选,ssDNA文库与CsA的亲和力呈上升趋势.将第10轮筛选产物克隆测序并运用相关软件进行一级结构和二级结构分析.随机挑选的19个克隆适体,根据一级结构的同源性可分为5个家族,二级结构预测以茎环(发夹)为主,这可能是适体与CsA作用的部位.CsA特异性的适体将用于酶联法、免疫荧光法等对CsA进行检测. 展开更多

关键词 环孢霉素A 适体 随机ssdna文库

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RecA蛋白介导的转基因小鼠制备 被引量：3

9

作者 赵永贞 肖邦 +4 位作者 张兴举 唐中林 崔文涛 杨述林 李奎 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期309-313,共5页

受精卵原核内核酸酶对外源基因的降解是导致显微注射法制备转基因动物效率低的重要原因之一,RecA蛋白可与单链DNA结合而阻止细胞核内核酸酶对单链DNA的降解。本试验建立了显微注射和RecA蛋白结合制备转基因动物的技术模型,并初步探讨了R... 受精卵原核内核酸酶对外源基因的降解是导致显微注射法制备转基因动物效率低的重要原因之一,RecA蛋白可与单链DNA结合而阻止细胞核内核酸酶对单链DNA的降解。本试验建立了显微注射和RecA蛋白结合制备转基因动物的技术模型,并初步探讨了RecA蛋白对显微注射法制备转基因动物效率的影响。以单链DNA、RecA蛋白与单链DNA的复合体以及双链DNA为外源基因进行受精卵原核显微注射转基因试验,分别获得F0代小鼠28、41和32只,并通过PCR和Southern blot进行了转基因鉴定。结果显示,在小鼠受精卵原核显微注射Re-cA+ssDNA复合体获得的F0代中14.6%(6/41)为转基因个体,显微注射dsDNA获得的F0代中转基因个体占6.2%(2/32),而显微注射ssDNA获得的F0代中无一为转基因个体。 展开更多

关键词 RecA蛋白 显微注射 ssdna 转基因

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比色生物传感器检测Cd^(2+) 被引量：3

10

作者 张婷婷 张瑞英 +2 位作者 陈镇 罗义庭 熊兴良 《传感器与微系统》 CSCD 2015年第5期143-145,共3页

基于Cd2+—DNA复合物介导AuNPs聚集构建了比色生物传感器,并用于检测镉离子(Cd2+)。单链DNA(ssDNA)通过Au-N键与AuNPs静电吸附,带负电荷的DNA互相排斥,使DNA-AuNPs能稳定分散在盐溶液中。Cd2+能优先结合DNA,AuNPs暴露在盐溶液中发生聚集... 基于Cd2+—DNA复合物介导AuNPs聚集构建了比色生物传感器,并用于检测镉离子(Cd2+)。单链DNA(ssDNA)通过Au-N键与AuNPs静电吸附,带负电荷的DNA互相排斥,使DNA-AuNPs能稳定分散在盐溶液中。Cd2+能优先结合DNA,AuNPs暴露在盐溶液中发生聚集,溶液由红色变成蓝紫色。Pb2+,Cu2+有轻微干扰,其它金属离子无干扰,裸眼可观察的检测下限低至0.5μmol/L。该方法成功用于环境水样中Cd2+检测。 展开更多

关键词 CD^2+ ssdna AuNPs 比色生物传感器

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巯基修饰单链DNA在纳米金薄膜电极上自组装、杂交和取向的电化学交流阻抗谱 被引量：2

11

作者 魏旭 郝青丽 +2 位作者 陆路德 汪信 杨绪杰 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期970-977,共8页

利用电化学交流阻抗技术对SH-ssDNA在纳米金薄膜电极表面的自组装、杂交和取向进行了系统表征。探讨了SH-ssDNA的组装时间、浓度和链长对其自组装的影响,自组装15h时电荷传递电阻Rct最大,表面覆盖率最高;研究了SH-ssDNA的浓度、链长以... 利用电化学交流阻抗技术对SH-ssDNA在纳米金薄膜电极表面的自组装、杂交和取向进行了系统表征。探讨了SH-ssDNA的组装时间、浓度和链长对其自组装的影响,自组装15h时电荷传递电阻Rct最大,表面覆盖率最高;研究了SH-ssDNA的浓度、链长以及与互补DNA的杂交方式对杂交反应的影响。结果发现,随着单链浓度的增加,杂交后Rct的变化值逐渐降低,当SH-ssDNA为5μmol/L时Rct值比杂交前增加了16%。通过对阻抗谱数据模拟和分析,表明SH-ssDNA以垂直竖立取向在金电极表面形成均匀致密单分子层,杂交效率与SH-ssDNA的覆盖率密切相关。 展开更多

关键词 交流阻抗谱 SH-ssdna 自组装 杂交 取向

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筛选环孢霉素A适体的SELEX技术的建立 被引量：1

12

作者 李卫滨 兰小鹏 +1 位作者 杨湘越 吴文冰 《实用医学杂志》 CAS 2007年第19期2966-2968,共3页

目的:运用指数富集的配体系统进化(SELEX)技术,筛选并鉴定环孢霉素A(CsA)特异性的适体。方法:合成一个全长78个核苷酸中间含35个随机序列的随机单链寡核苷酸序列(ssDNA)文库,通过SELEX方法,即以磁珠作为筛选介质,利用生物素-链亲和素-... 目的:运用指数富集的配体系统进化(SELEX)技术,筛选并鉴定环孢霉素A(CsA)特异性的适体。方法:合成一个全长78个核苷酸中间含35个随机序列的随机单链寡核苷酸序列(ssDNA)文库,通过SELEX方法,即以磁珠作为筛选介质,利用生物素-链亲和素-辣根过氧化物酶系统检测每轮ssDNA文库与CsA的亲和力,筛选针对CsA的适体,将最后一轮筛选产物克隆测序并运用相关软件进行一级结构和二级结构分析。结果:经过10轮的筛选,ssDNA文库与CsA的亲和力呈上升趋势,随机挑选的19个克隆适体根据一级结构的同源性可分为5个家族,二级结构预测以茎环(发夹)为主。结论:我们通过改良SELEX方法筛选得到了CsA特异性的适体。 展开更多

关键词 环孢菌素 适体 随机ssdna 文库

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大肠杆菌RecA蛋白质的生物学活性和生理机能 被引量：1

13

作者 黄占景 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1995年第S1期81-84,共4页

关键词 RecA蛋白 生物学活性 阻遏物 蛋白酶活性 肠杆菌 同源重组 SOS反应 ssdna 单链DNA 双链DNA

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自组装DNA与[Co(phen)_3]^(2+/3+)相互作用的表面增强拉曼光谱法研究 被引量：5

14

作者 董丽琴 周剑章 +2 位作者 吴玲玲 董平 林仲华 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2003年第2期315-319,共5页

对金基体上自组装 ss DNA及 ds DNA与钴邻菲啉配合物离子 ( [Co( phen) 3 ]2 +/ 3 +)相互作用进行电化学现场表面增强拉曼光谱 ( SERS)研究 ,获得相互作用位点及相互作用模式的信息 . ds DNA与 [Co( phen) 3 ]2 +/ 3 +存在一定的嵌插... 对金基体上自组装 ss DNA及 ds DNA与钴邻菲啉配合物离子 ( [Co( phen) 3 ]2 +/ 3 +)相互作用进行电化学现场表面增强拉曼光谱 ( SERS)研究 ,获得相互作用位点及相互作用模式的信息 . ds DNA与 [Co( phen) 3 ]2 +/ 3 +存在一定的嵌插作用 ,即配合物通过配体邻菲啉 ( phen)环以嵌插模式结合在碱基 A-T及 G-C富集区 ,同时与磷酸二酯键 PO2 结合 ,并伴随 ds DNA螺旋构象由 B型向 A型转变 ;而 [Co( phen) 3 ]2 +/ 3 +则是以静电模式与 ss DNA的磷酸二酯键 PO2 及脱氧核糖组成的骨架相互作用 . 展开更多

关键词 自组装 ssdna DSDNA [Co(phen)3]^2+/3+ 表面增强拉曼光谱 相互作用 自组装 钴配合物 DNA靶标药物

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随机单链DNA文库SELEX筛选寡核苷酸适配子方法的建立 被引量：18

15

作者 詹林盛 邵宁生 +2 位作者 彭剑淳 孙红琰 王全立 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第1期151-155,共5页

指数富集配基的系统进化 (SELEX)技术是一种新的组合化学技术 .体外构建了一个长度为 81nt、含有35个随机序列的单链DNA (ssDNA)文库 ,优化了ssDNA文库扩增为双链DNA (dsDNA)文库的PCR反应条件 .通过对比不对称PCR和生物素 -链亲和素磁... 指数富集配基的系统进化 (SELEX)技术是一种新的组合化学技术 .体外构建了一个长度为 81nt、含有35个随机序列的单链DNA (ssDNA)文库 ,优化了ssDNA文库扩增为双链DNA (dsDNA)文库的PCR反应条件 .通过对比不对称PCR和生物素 -链亲和素磁珠分离方法制备ssDNA文库的效果 ,确定了以生物素 -链亲和素磁珠分离方法制备ssDNA .由于脱氧核糖核酸的疏水性导致ssDNA文库与硝酸纤维素滤膜的结合背景过高 ,因此选择以微孔板为介质 ,分离与靶蛋白结合的适配子 .经过 9轮循环筛选 ,随机ssDNA文库与丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白 (C蛋白 )的结合率从 0 . 5 %上升到 32 . 5 % . 展开更多

关键词 随机单链DNA文库 SELEX技术 筛选 寡核苷酸适配子 丙型肝炎病毒核心蛋白

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单链DNA在氨基乙硫醇单分子膜金电极上固定化的研究 被引量：19

16

作者 刘盛辉 陈帆 +1 位作者 莫卫民 张明琴 《浙江工业大学学报》 CAS 1999年第1期38-42,共5页

利用了氨基乙硫醇在金电极表面形成自组装单分子膜，然后用水溶性的碳化二亚胺作为偶联活化剂，ｓＤＮＡ的５’端磷酸基与电极表面自组装膜上的氨基以磷酸氨基酯键的形式共价结合，从而在金电极表面形成ｓｓＤＮＡ单分子层。采用反射红... 利用了氨基乙硫醇在金电极表面形成自组装单分子膜，然后用水溶性的碳化二亚胺作为偶联活化剂，ｓＤＮＡ的５’端磷酸基与电极表面自组装膜上的氨基以磷酸氨基酯键的形式共价结合，从而在金电极表面形成ｓｓＤＮＡ单分子层。采用反射红外光谱对电极表面ｓＤＮＡ单分子层进行了表征，并用氧化还原电对Ｃｏ（ｂｐｙ）３＋／２＋３作为杂交指示剂对电极表面的ｓＤＮＡ层的响应特性进行了研究。 展开更多

关键词 金电极 固定化 DNA 单分子膜 氨基乙硫醇

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sFas、sFasL及细胞因子在类风湿关节炎疾病中的意义 被引量：5

17

作者 余奇文 张勇 +3 位作者 张冬青 李宁丽 马安伦 周光炎 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期141-142,共2页

目的研究sFas,sFasL,细胞因子及抗单链DNA抗体与类风湿关节炎rheumatoidarthritisRA致病的关系及意义。方法采用ELISA法检测32名RA患者的血清标本。结果RA患者血清sFassFasLIL6及IL8的水平均高于正常对照组。活动期sFasL,IL6及IL... 目的研究sFas,sFasL,细胞因子及抗单链DNA抗体与类风湿关节炎rheumatoidarthritisRA致病的关系及意义。方法采用ELISA法检测32名RA患者的血清标本。结果RA患者血清sFassFasLIL6及IL8的水平均高于正常对照组。活动期sFasL,IL6及IL8的水平显著高于非活动期P0.01,而sFas的水平未见显著差异。在32例RA患者中,有8例sFas和sFasL的水平同时升高,9例抗单链DNA抗体和sFasL同时升高。结论IL6和IL8的水平与RA的炎症程度有关。高浓度的sFas和sFasL可抑制Ts细胞对TH细胞的负向调节。由Fas/FasL启动淋巴细胞凋亡产生的核抗原,可致机体产生抗单链DNA抗体。检测sFassFasLIL6及IL8有助于对RA的诊断,并可为RA的免疫生物治疗提供依据。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 SFAS SFASL 细胞因子 抗单链DNA抗体

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适体SELEX筛选中单链DNA的制备 被引量：6

18

作者 王丽 贺江 +3 位作者 王耘 雷兆静 屠康 刘贤进 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第5期1133-1136,共4页

探讨建立适体SELEX筛选中单链DNA(ssDNA)的制备方法,生成适体筛选的次级库,为适体SELEX筛选奠定基础。将PCR扩增后带生物素标记的双链DNA(dsDNA)连接在链霉亲和素标记的凝胶上,用NaOH变性解链制备ssDNA。利用荧光法分析dsDNA与凝胶结合... 探讨建立适体SELEX筛选中单链DNA(ssDNA)的制备方法,生成适体筛选的次级库,为适体SELEX筛选奠定基础。将PCR扩增后带生物素标记的双链DNA(dsDNA)连接在链霉亲和素标记的凝胶上,用NaOH变性解链制备ssDNA。利用荧光法分析dsDNA与凝胶结合所需的时间及NaOH对生物素与链霉亲和素标记凝胶结合的影响,在优化的试验条件下制备ssDNA,用琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳对其产物进行鉴定。结果显示:生物素标记的dsDNA与链霉亲和素标记的凝胶结合的时间以40 min为佳,0.01 mol/L、0.10 mol/L和1.00 mol/L的NaOH均不影响生物素与链霉亲和素标记凝胶的结合;在优化试验条件下制备的产物为ssDNA。表明采用上述方法制备ssDNA,操作简单、方便,所需时间短,适用于适体SELEX筛选中次级库的生成。 展开更多

关键词 适体 SELEX 双链DNA 单链DNA

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采用毛细管电泳技术筛选特异识别蓖麻毒素适配子的研究 被引量：6

19

作者 唐吉军 谢剑炜 +2 位作者 邵宁生 郭磊 闫妍 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1840-1843,共4页

采用指数富集配基的系统进化(SELEX)技术从随机寡核苷酸文库中筛选获得特异识别蓖麻毒素靶分子的适配子.将毛细管电泳技术作为分离手段引入到SELEX筛选中,利用毛细管电泳高效的分离能力使得筛选周期大大缩短.酶联免疫和斑点杂交实验结... 采用指数富集配基的系统进化(SELEX)技术从随机寡核苷酸文库中筛选获得特异识别蓖麻毒素靶分子的适配子.将毛细管电泳技术作为分离手段引入到SELEX筛选中,利用毛细管电泳高效的分离能力使得筛选周期大大缩短.酶联免疫和斑点杂交实验结果表明,仅经4轮筛选即可获得特异识别蓖麻毒素蛋白的寡核苷酸适配子. 展开更多

关键词 指数富集配基的系统进化 毛细管电泳 随机单链DNA文库 蓖麻毒素

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毛细管电泳法评价细胞色素c与单链脱氧核糖核酸库的相互作用 被引量：3

20

作者 梅芳 赵新颖 屈锋 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1229-1234,共6页

以细胞色素c(Cyt c)为碱性蛋白质模型,建立了毛细管电泳评价Cyt c与3种不同链长的单链脱氧核糖核酸(ssDNA)库相互作用的评价方法,研究了离子强度对Cyt c与ssDNA库相互作用的影响。比较了Cyt c与含有20、40和60个随机碱基序列的3种不同... 以细胞色素c(Cyt c)为碱性蛋白质模型,建立了毛细管电泳评价Cyt c与3种不同链长的单链脱氧核糖核酸(ssDNA)库相互作用的评价方法,研究了离子强度对Cyt c与ssDNA库相互作用的影响。比较了Cyt c与含有20、40和60个随机碱基序列的3种不同链长的ssDNA库的作用及基于未涂层毛细管和涂层毛细管的毛细管区带电泳方法。因碱性蛋白质在未涂层毛细管管壁上存在吸附,因此利用未涂层毛细管区带电泳不能区别3种ssDNA库与其作用的差异。利用涂层毛细管电泳法,在压力辅助的反向电压下,根据游离ssDNA库的峰面积变化可比较3种ssDNA库与细胞色素c的相互作用差异。结果表明,含有20个随机寡核苷酸链长的ssDNA库与Cty c的作用最强。此外,NaCl浓度显著影响Cyt c与ssDNA60库的作用。在优化的实验条件下,0.02 mol/L NaCl有利于两者的相互作用。调节盐浓度可抑制非特异性静电作用,能提高碱性蛋白质适配体的单轮筛选效率。利用未涂层毛细管电泳分析复合物及游离ssDNA库的峰面积变化,可优化有利复合物形成的盐浓度。 展开更多

关键词 毛细管电泳 细胞色素C 单链DNA库 碱性蛋白质 核酸适配体

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