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SARS冠状病毒对血液系统的影响及可能的机制(英文) 被引量：39
1
作者 杨默 韩锦伦 +2 位作者 李桂霞 霍泰辉 李志光 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第3期217-221,共5页
20 0 2年 11月在广东发现首例严重急性呼吸综合征 (俗称“非典型性肺炎”)病例。 2 0 0 3年 2月世界卫生组织 (WHO)在越南河内正式确认此疾病为新的人类传染病 ,并命名为严重急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyndrome ,SARS)。 2... 20 0 2年 11月在广东发现首例严重急性呼吸综合征 (俗称“非典型性肺炎”)病例。 2 0 0 3年 2月世界卫生组织 (WHO)在越南河内正式确认此疾病为新的人类传染病 ,并命名为严重急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyndrome ,SARS)。 2 0 0 3年 3月在香港发现其病原体为新的冠状病毒 (coronavirus) ,称之为SARS冠状病毒 (SARS CoV)。SARS患者常常出现异常的血液学改变 ,包括淋巴细胞减少 (在成人为 6 8% - 90 % ;在儿童为 10 0 % ,n =10 ) ,血小板减少 (成人 2 0 % - 4 5 % ,儿童 5 0 % ) ,和白细胞减少 (成人 2 0 % - 34% ,儿童 70 % )。同时在部份患者D 二聚体水平可见升高。初步的研究表明SARS冠状病毒可侵犯造血细胞 ,但作用机制尚不清楚。我们推测其病理生理过程可能包括 :(1)通过CD13或CD6 6a受体 ,SARS病毒直接侵入造血细胞或感染骨髓基质细胞等 ,加重细胞凋亡 ,引致造血抑制 ;(2 )通过生成自身抗体或免疫复合物等免疫介导造成细胞损害。肺部损害也可部分解释血小板减少。肺部可能是成熟巨核细胞释出血小板的器官之一。SARS病人有广泛肺泡损害 ,包括充血、水肿、透明膜形成和肺纤维化 ,使肺部有效毛细血管床减少 ,从而血小板生成减少。同时 ,炎症损伤使肺部血小板聚集、血栓形成 ,也引致血小板? 展开更多
关键词 sars sars冠状病毒 淋巴细胞减少症 血小板减少症 白细胞减少症
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SARS冠状病毒对心脏及其传导系统影响的病理学研究 被引量：11
2
作者 周光德 赵景民 +6 位作者 王松山 孙艳玲 潘登 杨建法 李文淑 于海丽 张泰和 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期52-54,共3页
目的　探讨严重急性呼吸综合征(SARS)对心脏、尤其是心脏传导系统的影响。方法　应用HE、组织化学及核酸原位杂交等方法 ,对 6例SARS死亡患者的心脏组织及其中 1例死者的心脏传导系统进行病理研究。结果　SARS患者的心脏损伤表现为心肌... 目的　探讨严重急性呼吸综合征(SARS)对心脏、尤其是心脏传导系统的影响。方法　应用HE、组织化学及核酸原位杂交等方法 ,对 6例SARS死亡患者的心脏组织及其中 1例死者的心脏传导系统进行病理研究。结果　SARS患者的心脏损伤表现为心肌细胞空泡变性、萎缩和少数心肌细胞肌浆溶解 ,心肌间质轻度水肿、少量炎细胞浸润及轻度小血管炎 ;Macchiavello染色示心肌细胞胞质内偶见病毒包涵体 ;核酸原位杂交示少部分心肌细胞及心脏传导系统特化心肌细胞内呈现明确的冠状病毒 (SARS CoV)阳性杂交信号。结论　SARS CoV不仅能够感染心肌细胞 ,而且可感染心脏传导系统中的特化心肌细胞 ,可引起心脏轻度病毒性心肌炎性改变。该研究结果为解释临床上SARS患者心律失常和心肌酶谱异常提供了重要的病理学依据。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征 sars冠状病毒 心脏传导系统 病理学
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SARS冠状病毒编码蛋白质及其基因分析的研究进展 被引量：11
3
作者 梅林 李京 +2 位作者 闫婕 刘婷婷 李学军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期126-128,共3页
关键词 严重急性呼吸综合征 sars冠状病毒 sars-COV
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4株SARS冠状病毒中国分离株3′非编码区的序列测定及分析 被引量：7
4
作者 范宝昌 姜涛 +8 位作者 于曼 邓永强 彭文明 常国辉 司炳银 刘伯华 杨保安 祝庆余 秦鄂德 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期273-277,共5页
分别对 4株SARS冠状病毒中国株基因组 3′非编码区序列进行测定和分析 ,然后应用Blast、DNAstarGeneQuest等软件对中国株的这段序列与其它SARS和非SARS冠状病毒的序列进行比较 .结果显示 ,所测 4株SARS冠状病毒中国分离株的 3′非编码... 分别对 4株SARS冠状病毒中国株基因组 3′非编码区序列进行测定和分析 ,然后应用Blast、DNAstarGeneQuest等软件对中国株的这段序列与其它SARS和非SARS冠状病毒的序列进行比较 .结果显示 ,所测 4株SARS冠状病毒中国分离株的 3′非编码区长度均为 339nt,与其它已测序SARS冠状病毒的相应序列完全一致 .SARS冠状病毒的非编码区含有冠状病毒保守的“伪结”结构 .在距末端 138nt处还存在 1个长约 32nt的Ⅱ型茎 环结构的序列 ,该序列在其它已知人冠状病毒中并不存在 ,而与禽传染性支气管炎病毒和星状病毒中的对应序列高度同源 . 展开更多
关键词 sars冠状病毒 中国分离株 序列测定 3′非编码区 重症急性呼吸综合征 非典型肺炎
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SARS冠状病毒PLpro蛋白酶的结构与功能 被引量：18
5
作者 杨宇东 孙莉 陈忠斌 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期15-21,共7页
SARS冠状病毒基因组编码2种病毒蛋白酶,即木瓜样蛋白酶(PLpro)和3C样蛋白酶(3CLpro).其中,PLpro蛋白酶结构与功能研究是近年来冠状病毒分子生物学研究的热点之一.PLpro蛋白酶参与SARS冠状病毒1a(1ab)复制酶多聚蛋白N端部分的切割加工,是... SARS冠状病毒基因组编码2种病毒蛋白酶,即木瓜样蛋白酶(PLpro)和3C样蛋白酶(3CLpro).其中,PLpro蛋白酶结构与功能研究是近年来冠状病毒分子生物学研究的热点之一.PLpro蛋白酶参与SARS冠状病毒1a(1ab)复制酶多聚蛋白N端部分的切割加工,是SARS冠状病毒复制酶复合体(RC)形成的重要调节蛋白分子;最新研究表明,SARS冠状病毒PLpro蛋白酶是一种病毒编码的去泛素化酶(DUB),对细胞蛋白具有明显去泛素化作用;而且对泛素(Ub)和泛素样分子ISG15均具有活性.PLpro蛋白酶对宿主抗病毒天然免疫反应具有负调节作用,是SARS冠状病毒的一种重要干扰素拮抗分子.PLpro蛋白酶是一种多功能病毒蛋白酶.本文结合作者课题组研究工作,对SARS冠状病毒PLpro蛋白酶结构和功能研究最新进展进行综述. 展开更多
关键词 sars冠状病毒 PLpro蛋白酶 去泛素化酶 抗病毒天然免疫 干扰素拮抗剂
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SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体在SARS尸检组织中的表达 被引量：13
6
作者 贺莉 丁彦青 +14 位作者 车小燕 张庆玲 黄仲曦 王慧君 申洪 李祖国 蔡俊杰 张进华 耿舰 李欣 张文丽 韩慧霞 康伟 杨磊 陆药丹 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第11期1128-1130,共3页
目的观察SARS死者的尸检组织中SARS冠状病毒(SARS-CoV)的存在与分布情况。方法应用免疫组化技术检测4例尸检标本肺、脾脏、淋巴结、脑、垂体、心、肝、肾、胰腺、气管、食道、胃肠道和骨髓等组织的SARS-CoV N蛋白。结果肺泡上皮、肺、... 目的观察SARS死者的尸检组织中SARS冠状病毒(SARS-CoV)的存在与分布情况。方法应用免疫组化技术检测4例尸检标本肺、脾脏、淋巴结、脑、垂体、心、肝、肾、胰腺、气管、食道、胃肠道和骨髓等组织的SARS-CoV N蛋白。结果肺泡上皮、肺、脾、淋巴结内浸润的单核细胞/巨噬细胞、脑神经元、肝细胞、肾远曲小管上皮细胞、胰腺腺泡细胞、垂体嗜酸细胞、甲状旁腺嗜酸性细胞、肾上腺皮质细胞、气管及支气管浆液腺上皮细胞、食道粘膜鳞状上皮、胃肠道柱状上皮细胞及胃壁细胞、骨髓早幼粒细胞及小静脉内皮细胞等细胞质内SARS-CoV N蛋白单克隆抗体均为阳性。结论SARS-CoV可侵犯全身多种器官和组织。SARS-CoV N蛋白单克隆抗体在胃肠道、肾远曲小管及汗腺细胞内的阳性表达,对研究SARS-CoV传播途径具有重要意义。 展开更多
关键词 sars冠状病毒 N蛋白单克隆抗体 尸检组织 sars-COV 急性重症呼吸综合征
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反转录巢式PCR方法检测SARS冠状病毒 被引量：19
7
作者 王艳 马文丽 +6 位作者 宋艳斌 肖维威 张宝 黄海 王洪敏 马晓冬 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第5期421-423,共3页
目的探索SARS冠状病毒早期诊断的有效手段。方法对临床病例样品采用反转录巢式PCR方法鉴定SARS冠状病毒。提取样品RNA,用巢式PCR外侧下游引物进行反转录,以反转录产物为模板,进行巢式第一次、第二次PCR。PCR产物克隆到pMD18-T载体后进... 目的探索SARS冠状病毒早期诊断的有效手段。方法对临床病例样品采用反转录巢式PCR方法鉴定SARS冠状病毒。提取样品RNA,用巢式PCR外侧下游引物进行反转录,以反转录产物为模板,进行巢式第一次、第二次PCR。PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行测序鉴定。结果被检样品扩增出特异片段,经测序验证确实来自SARS相关冠状病毒。Blast比较结果与SARS冠状病毒多伦多株相应片段只有一个碱基的差异。结论反转录巢式PCR方法验证在非典型肺炎患者标本中存在SARS相关冠状病毒的序列,证实该法不失为一种检测SARS冠状病毒的快速、简便、易行的方法。 展开更多
关键词 sars冠状病毒 巢式反转录PCR 早期诊断
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SARS冠状病毒3CL蛋白酶及其抑制剂的理论研究 被引量：5
8
作者 王嵩 黄旭日 +2 位作者 高雪峰 赵熹 孙家锺 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2006年第3期535-537,共3页
应用AutoDock程序将SARS冠状病毒3CL蛋白酶及其抑制剂配体和受体进行了对接,并用InsightⅡ中的Discover3模块进行了分子动力学模拟,分析了蛋白酶活性口袋的形状,讨论了其亚基的氢键、静电、疏水等相互作用,为进一步设计药物提供了重要... 应用AutoDock程序将SARS冠状病毒3CL蛋白酶及其抑制剂配体和受体进行了对接,并用InsightⅡ中的Discover3模块进行了分子动力学模拟,分析了蛋白酶活性口袋的形状,讨论了其亚基的氢键、静电、疏水等相互作用,为进一步设计药物提供了重要的参考信息. 展开更多
关键词 sars冠状病毒3CL蛋白酶 抑制剂 对接 分子动力学模拟
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SARS冠状病毒E蛋白的结构研究及功能预测 被引量：4
9
作者 邵琛 胡冬华 +9 位作者 孙海珠 颜力楷 苏忠民 王荣顺 朱文圣 郭建华 史宁中 孙晖 李泽生 孙家锺 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2005年第8期1512-1516,共5页
结合生物信息学方法及分子模拟手段,选择较高准确度的方法,预测了SARSE蛋白的分子结构并探讨其潜在的生物学活性和功能.研究结果表明,SARSE蛋白跨膜区25个疏水的氨基酸形成α-螺旋结构,包埋于病毒外壳磷脂双分子层中;N端10个氨基酸残基... 结合生物信息学方法及分子模拟手段,选择较高准确度的方法,预测了SARSE蛋白的分子结构并探讨其潜在的生物学活性和功能.研究结果表明,SARSE蛋白跨膜区25个疏水的氨基酸形成α-螺旋结构,包埋于病毒外壳磷脂双分子层中;N端10个氨基酸残基位于膜外;C端41个残基则附着于磷脂双分子膜内侧.同时发现,C端由9个氨基酸组成的劈裂是一个可能的活性部位.对分子进行进一步静电势分析证实,E蛋白C端可能的活性部位具有较大的静电势,可能的活性残基具有最大电荷密度,故有较强的结合受体或与其它蛋白相互作用的能力. 展开更多
关键词 sars冠状病毒 E蛋白 结构预测 生物信息学 静电势
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156例SARS患者血清抗SARS冠状病毒抗体的观测 被引量：6
10
作者 王海宝 刘景汉 +8 位作者 欧阳锡林 于洋 马曙轩 李锡金 吕留彩 田亚平 刘红鹰 许红民 姚伟 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第5期441-443,共3页
本研究的目的是观察严重急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyndrome ,SARS)患者抗SARS 冠状病毒 (SARS CoV)抗体IgG和IgM的产生及抗体效价变化特征 ,探索采集SARS痊愈患者抗血清的时机。应用ELISA方法对随机抽取的 156名SARS患者... 本研究的目的是观察严重急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyndrome ,SARS)患者抗SARS 冠状病毒 (SARS CoV)抗体IgG和IgM的产生及抗体效价变化特征 ,探索采集SARS痊愈患者抗血清的时机。应用ELISA方法对随机抽取的 156名SARS患者血清标本进行抗SARS CoV抗体IgG和IgM抗体效价测定。结果表明 ,156名SARS患者于病后 3至 9周期间 ,IgG抗体阳性率为 75.6% ,IgM抗体阳性率为 41.7% ,IgG和IgM抗体均阳性为 41% ,IgG和IgM抗体均阴性为 2 3 .7% ;IgG抗体阳性患者中抗体效价为 18.2 3± 2 4.72 ,IgM抗体阴性患者抗体效价为 2 .18± 1.13 ;IgG和IgM抗体效价与SARS患者的性别、年龄、病程、体温正常天数无显著相关性。结论 :并非所有SARS患者都能产生抗SARS CoV抗体 ,即使产生抗体 ,其效价的个体差异也较大 ,并不能通过性别、年龄、病程及体温正常天数等因素较准确地评估抗体的效价。因此 ,在SARS抗血清采集前 ,应重新进行抗体效价测定 ,遴选具有高效价抗SARS CoV抗体的SARS痊愈患者进行抗血清的采集 ,才能提高所采集的抗血清在临床的治疗效果 。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征 抗sars冠状病毒抗体 酶联免疫吸附测定
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抗SARS冠状病毒M蛋白片段单克隆抗体的制备与初步鉴定 被引量：6
11
作者 钱超 姜平 +1 位作者 卢春 姚堃 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期213-215,共3页
目的： 制备抗SARS冠状病毒（SARS-CoV） M 蛋白N端1～43氨基酸（aa）单克隆抗体（mAb）, 并对其特性进行初步鉴定.方法： 用纯化的SARS-M/GST融合蛋白抗原免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备抗M蛋白片段的mAb.用间接ELISA法筛选能分泌... 目的： 制备抗SARS冠状病毒（SARS-CoV） M 蛋白N端1～43氨基酸（aa）单克隆抗体（mAb）, 并对其特性进行初步鉴定.方法： 用纯化的SARS-M/GST融合蛋白抗原免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备抗M蛋白片段的mAb.用间接ELISA法筛选能分泌抗M蛋白片段mAb的杂交瘤细胞株. Western blot和间接ELISA鉴定所获mAb的特异性, 并用小鼠mAb亚类测定试剂盒检测所获的mAb Ig亚类.为分析mAb识别位点, 进一步将M蛋白片段截短为部分重叠的2段表达, 以Western blot初步定位mAb识别位点.结果： 获得1株可分泌特异性抗SARS-CoV M蛋白片段的mAb杂交瘤细胞株（3H9）, Ig亚类鉴定为IgG2a, 轻链为κ型.Western blot显示其mAb可特异识别SARS-CoV M蛋白N端1～43aa, 间接ELISA证实mAb可与包被于聚苯乙烯微孔板上的SARS病毒全蛋白抗原发生特异性反应, 其识别位点位于M蛋白N端16～28aa.结论： 成功获得1株抗SARS-CoV M蛋白N端1～43aa mAb杂交瘤细胞, 并初步定位其识别位点. 展开更多
关键词 sars冠状病毒 单克隆抗体 M蛋白
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SARS冠状病毒PLpro蛋白酶对泛素样分子的DUB活性 被引量：4
12
作者 陈晓娟 杨宇东 +3 位作者 孙莉 胡日查 邢雅玲 陈忠斌 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期664-670,共7页
SARS冠状病毒基因组中非结构基因nsp3编码的木瓜样蛋白酶(PLpro)在病毒基因组复制及逃避宿主天然免疫中发挥重要作用,是研发抗病毒药物的重要靶标.SARS冠状病毒PLpro是一种病毒编码的去泛素化酶(DUB).为深入研究SARS冠状病毒PLpro对泛... SARS冠状病毒基因组中非结构基因nsp3编码的木瓜样蛋白酶(PLpro)在病毒基因组复制及逃避宿主天然免疫中发挥重要作用,是研发抗病毒药物的重要靶标.SARS冠状病毒PLpro是一种病毒编码的去泛素化酶(DUB).为深入研究SARS冠状病毒PLpro对泛素样分子(ubiquitin-likeprotein,UBL)的DUB特性,本研究构建缺失PLpro N末端泛素样结构域(Ubl)和下游跨膜结构域(TM)的PLpro构建体(constructs),并构建3种缺失蛋白酶催化活性的突变体,检测PLpro对泛素样分子干扰素刺激基因15(ISG15)及SUMO-1的作用.实验结果表明,PLpro和PLpro-TM在细胞内具有很强的去ISG(DeISGylation)活性;缺失PLpro N末端泛素样结构域(Ubl)对PLpro的去ISG15活性没有影响;对PLpro蛋白酶活性位点C1651和H1812突变后,PLpro-TM的去ISG15活性消失,而对D1826位点突变后不影响此活性.PLpro不具有去SUMO(DeSUMOylation)活性,而PLpro-TM具有一定的去SUMO活性;PLpro催化活性相关的3个关键氨基酸残基Cys-His-Asp突变后对去SUMO活性有一定的影响.研究结果提示,SARS PLpro除了具有DUB的活性,还具有体内去ISG活性和去SUMO活性;PLpro蛋白酶活性与其去ISG活性之间有一定相关性;PLpro去SUMO-1活性具有TM依赖性.SARS冠状病毒PLpro对泛素样分子作用特性的研究为阐明病毒逃避宿主天然免疫机制和开发新型抗病毒药物提供重要的理论依据. 展开更多
关键词 sars冠状病毒 木瓜样蛋白酶(PLpro) 去泛素化酶 干扰素刺激基因15(ISG15) SUMO-1
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针对leader序列的siRNA能够有效抑制SARS冠状病毒多个mRNA的表达(英文) 被引量：3
13
作者 叶健 刘利新 +3 位作者 薛远 曲静 高光侠 方荣祥 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1092-1100,共9页
小干扰RNAs(siRNAs)能够有效降解具有互补序列的RNA.在SARS-CoV的基因组RNA和所有亚基因组RNA的5′端均有一段共同的leader序列,而且该leader序列在不同的病毒分离物中高度保守,因此leader序列可作为一个用于抑制SARS-CoV复制的有效靶点... 小干扰RNAs(siRNAs)能够有效降解具有互补序列的RNA.在SARS-CoV的基因组RNA和所有亚基因组RNA的5′端均有一段共同的leader序列,而且该leader序列在不同的病毒分离物中高度保守,因此leader序列可作为一个用于抑制SARS-CoV复制的有效靶点.研究表明,针对leader序列化学合成的siRNA和DNA载体表达的shRNA都可以有效抑制SARS-CoV mRNA的表达.Leader序列特异的siRNA或shRNA不仅可以有效抑制leader与报告基因EGFP融合基因的表达,而且还可以有效抑制leader与刺突蛋白(spikeprotein)、膜蛋白(membrane protein)和核衣壳蛋白(nucleocapsid protein)基因的融合转录产物的表达.结果表明,针对leader序列的RNA干扰可以发展成为一种抗SARS-CoV治疗的有效策略. 展开更多
关键词 leaderRNA RNA干扰 sars冠状病毒 短发夹RNA 小干扰RNA
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杆状病毒表达SARS冠状病毒纤突蛋白及其抗原性分析 被引量：3
14
作者 王喜军 胡森 +5 位作者 王清华 邓国华 王笑梅 吴东来 申之义 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期549-552,共4页
本研究构建了SARS冠状病毒纤突蛋白(S)重组杆状病毒(rBac-SS)。SDS-PAGE及Western-Blot分析表明约190 Ku左右的重组SARS纤突蛋白(rSS)在rBac-SS感染sf9昆虫细胞获得表达,并具有特异免疫反应原性。以rBac-SS感染的昆虫细胞裂解物稀释后... 本研究构建了SARS冠状病毒纤突蛋白(S)重组杆状病毒(rBac-SS)。SDS-PAGE及Western-Blot分析表明约190 Ku左右的重组SARS纤突蛋白(rSS)在rBac-SS感染sf9昆虫细胞获得表达,并具有特异免疫反应原性。以rBac-SS感染的昆虫细胞裂解物稀释后直接包被ELISA板,与Vero细胞培养的全病毒裂解物比较,检测SARS-CoV康复病人血清特异抗体,表现出同样的敏感性和特异性;rBac-SS感染的昆虫细胞用于间接免疫荧光,快速检测血清特异抗体反应,具有良好的敏感性和特异性。结果显示,杆状病毒表达的rSS有望替代SARS-CoV全病毒,作为安全、敏感和特异的重组诊断抗原,并为探索重组亚单位疫苗的可行性奠定基础。 展开更多
关键词 sars冠状病毒 纤突蛋白 重组杆状病毒 ELISA IFA
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SARS冠状病毒S蛋白DNA疫苗的构建及其免疫效果研究 被引量：4
15
作者 秦莉 吴少庭 +9 位作者 王西明 袁仕善 林绮萍 雷明军 潘晖榕 黄达娜 温见翔 高世同 张仁利 屈伸 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1042-1046,共5页
目的构建SARS冠状病毒棘突糖蛋白(S蛋白)的两个片段S1和S2的真核表达质粒pVAC-S1和pVAC-S2,检测它们在哺乳动物细胞中的表达,并观察它们在小鼠中诱导的体液和细胞免疫应答。方法采用PCR方法体外扩增SARS冠状病毒棘突糖蛋白的两个片段S1... 目的构建SARS冠状病毒棘突糖蛋白(S蛋白)的两个片段S1和S2的真核表达质粒pVAC-S1和pVAC-S2,检测它们在哺乳动物细胞中的表达,并观察它们在小鼠中诱导的体液和细胞免疫应答。方法采用PCR方法体外扩增SARS冠状病毒棘突糖蛋白的两个片段S1和S2的基因片段,定向克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-S1和pVAC-S2重组质粒。并通过Lipofectamine 2000将它们转染到HEK293细胞,RT-PCR和Western-blot鉴定重组质粒在真核细胞中的转录和表达。以构建的重组质粒直接免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清特异性抗体以及抗体亚类,流式细胞术检测小鼠脾脏T淋巴细胞亚群分布。结果成功构建了重组真核表达质粒pVAC-S1和pVAC-S2,并可在HEK293细胞中获得表达。免疫小鼠三次后,抗体滴度达到了1∶3 200。pVAC-S1诱导了高滴度的IgG2a,IgG2b和IgG1,pVAC-S2刺激产生高滴度IgG2a,IgG2b和较高滴度的IgG3。脾脏T淋巴细胞亚群分析示pVAC-S1和pVAC-S2两免疫组小鼠CD3+和CD8+T细胞明显升高。结论构建的真核表达质粒pVAC-S1和pVAC-S2能在哺乳动物细胞中表达,免疫小鼠后诱导了明显的细胞和体液免疫应答。 展开更多
关键词 sars冠状病毒 棘突蛋白 DNA疫苗 棘突蛋白
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SARS冠状病毒核衣壳蛋白的重组表达及其单克隆抗体的制备 被引量：3
16
作者 王平 黄庆生 +5 位作者 薛小平 雷迎峰 王海涛 任君萍 丁天兵 徐志凯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期50-52,共3页
　目的: 表达SARS冠状病毒核衣壳蛋白(N蛋白),并以表达产物为免疫原制备特异性单克隆抗体 (mAb)。方法: 采用RT- PCR方法, 从灭活的病毒抗原标本中扩增编码N蛋白的基因。测序确认后, 再亚克隆至原核表达载体中。从SDS -PAGE凝胶中回收... 　目的: 表达SARS冠状病毒核衣壳蛋白(N蛋白),并以表达产物为免疫原制备特异性单克隆抗体 (mAb)。方法: 采用RT- PCR方法, 从灭活的病毒抗原标本中扩增编码N蛋白的基因。测序确认后, 再亚克隆至原核表达载体中。从SDS -PAGE凝胶中回收原核表达产物后免疫BALB/c小鼠, 经融合、筛选制备特异性mAb。结果: 从标本中扩增出 1 269bp的DNA, 测序结果证实为N蛋白基因。将该基因克隆至原核表达载体中后, 在大肠杆菌中获得了较好的表达。表达产物经SDS- PAGE后, 在Mr约为 43 000处可见 1条明显的诱导表达带。Westernblot的结果表明, 该电泳带与SARS患者的恢复期血清呈特异的免疫反应。从SDS- PAGE凝胶中回收表达产物并免疫BALB/c小鼠, 制备出 3株抗N蛋白的mAb。这些mAb与SDS- PAGE凝胶上Mr约为 43 000的蛋白带也呈现很强的免疫反应。结论: 所获的重组N蛋白及特异性mAb, 将为进一步建立SARS病毒感染早期诊断的方法奠定了基础。 展开更多
关键词 sars冠状病毒 核衣壳蛋白 原核表达 单克隆抗体
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RT-PCR对SARS患者粪便SARS冠状病毒RNA的连续测定及其临床意义 被引量：3
17
作者 任翊 丁惠国 +6 位作者 吴清发 陈唯军 陈东 包志英 杨玲 赵春惠 汪健 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期368-371,共4页
目的采用RT-PCR方法,观察SARS冠状病毒(SARS-associatedcoronavirus,SARS-CoV)在SARS患者粪便中的排出状况。方法以2003年5月16日至23日在本院住院的46例临床确诊SARS患者为研究对象,连续留取粪便标本共103份,提取RNA后采用14对SARS-Co... 目的采用RT-PCR方法,观察SARS冠状病毒(SARS-associatedcoronavirus,SARS-CoV)在SARS患者粪便中的排出状况。方法以2003年5月16日至23日在本院住院的46例临床确诊SARS患者为研究对象,连续留取粪便标本共103份,提取RNA后采用14对SARS-CoV特异性引物,对每份标本同时进行7次套式RT-PCR扩增,只要有1次RT-PCR结果阳性即判定该标本为阳性。结果在46例患者中,有17例(37.0%)患者的粪便SARS-CoV套式RT-PCR扩增结果为阴性,29例(63.0%)为阳性。粪便SARS-CoVRT-PCR结果阳性时SARS患者的病程为(31.76±10.78)d(12～64d),其中最长1例为64d,系2次连续留取的粪便标本均为阳性、每次标本用2个不同引物RT-PCR扩增结果均为阳性。结论SARS-CoV在患者粪便中排出的时间可长达发病后64d,平均32d,对SARS患者恢复期的消毒隔离应该予以足够的重视。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征 sars冠状病毒 套式RT-PCR
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杆状病毒表达SARS冠状病毒核蛋白抗原性的研究 被引量：2
18
作者 胡森 王喜军 +4 位作者 王清华 吴东来 邓国华 王笑梅 步志高 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第4期301-303,319,共4页
目的　对杆状病毒表达SARS冠状病毒NP抗原性进行分析与比较。方法　利用SDS PAGE、Western Blot和ELISA证明重组核蛋白(rSN)在昆虫细胞获得高效表达,具有特异免疫反应原性。结果　表达rSN的昆虫细胞裂解、稀释后直接包被ELISA板,来检测S... 目的　对杆状病毒表达SARS冠状病毒NP抗原性进行分析与比较。方法　利用SDS PAGE、Western Blot和ELISA证明重组核蛋白(rSN)在昆虫细胞获得高效表达,具有特异免疫反应原性。结果　表达rSN的昆虫细胞裂解、稀释后直接包被ELISA板,来检测SARS CoV康复病人血清特异抗体,敏感性稍高于Vero细胞培养的全病毒(OD分别为2 .8和0 .6 ) ,与健康人血清不发生特异反应(OD值为0 .0 1) ;表达rSN昆虫细胞用于间接免疫荧光,快速检测血清特异抗体反应,同样表现了良好的敏感性和特异性。结论　昆虫细胞表达rSN有望替代SARS CoV全病毒,作为安全、敏感和特异的诊断抗原,应用于ELISA和IFA血清学检测。 展开更多
关键词 sars冠状病毒 核蛋白 重组杆状病毒 ELISA IFA
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siRNA对SARS冠状病毒复制的抑制作用 被引量：9
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作者 赵慧 陈水平 +9 位作者 段鸿元 邓永强 姜涛 赵卓 于曼 康晓平 杨保安 李晓萸 秦成峰 秦鄂德 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期397-402,共6页
为探讨siRNA在哺乳动物细胞中对SARS冠状病毒复制的抑制作用,针对BJ0 1株SARS冠状病毒复制酶基因(Pol)和刺突蛋白基因(S) ,设计4个siRNA ,并构建相应的siRNA表达载体及克隆细胞系.利用间接免疫荧光法及实时定量反转录PCR法,检测所设计的... 为探讨siRNA在哺乳动物细胞中对SARS冠状病毒复制的抑制作用,针对BJ0 1株SARS冠状病毒复制酶基因(Pol)和刺突蛋白基因(S) ,设计4个siRNA ,并构建相应的siRNA表达载体及克隆细胞系.利用间接免疫荧光法及实时定量反转录PCR法,检测所设计的siRNA对SARS冠状病毒复制的抑制作用.结果表明,针对Pol基因的siRNA(psOe)在Vero细胞中可阻断BJ0 1株SARS病毒RNA的复制及其蛋白的表达.该结果为深入阐明SARS冠状病毒的致病机理及探讨SARS病毒防治新途径奠定了基础. 展开更多
关键词 sars冠状病毒 RNAi siRNA
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SARS冠状病毒S蛋白的功能性受体-ACE2 被引量：5
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作者 孙琰 柳林 潘欣 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第4期25-30,共6页
SARS冠状病毒的棘突S蛋白 ,与细胞受体介导的感染有关。血管紧张素转化酶 2 (ACE2 )是SARS CoVS蛋白的功能性受体 ,人类ACE2酶的细胞外区域由 2个亚基组成 ,其中锌金属肽酶区域可以进一步分成 2个亚域 (I和II) ,形成一个长而深的裂缝 ,... SARS冠状病毒的棘突S蛋白 ,与细胞受体介导的感染有关。血管紧张素转化酶 2 (ACE2 )是SARS CoVS蛋白的功能性受体 ,人类ACE2酶的细胞外区域由 2个亚基组成 ,其中锌金属肽酶区域可以进一步分成 2个亚域 (I和II) ,形成一个长而深的裂缝 ,环绕裂缝顶端的隆起线可能作为与S 糖蛋白结合的区域。ACE2可以与SARS CoVS蛋白的S3 1 8 5 1 0结合。这将为发展新型SARS疫苗和SARS的预防和治疗提供新的研究方向。 展开更多
关键词 sars冠状病毒S蛋白 血管紧张素转化酶2 受体
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