酿酒酵母S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：16

1

作者 杨静 王旻 +2 位作者 孙进 韦平和 汤卫国 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期253-255,共3页

目的　构建S 腺苷甲硫氨酸合成酶基因工程菌 ,为酶促转化法生产S 腺苷甲硫氨酸奠定基础。方法　应用PCR技术从S 腺苷甲硫氨酸高产酿酒酵母染色体DNA中扩增得到S 腺苷甲硫氨酸合成酶基因sam2 ,将其克隆至表达载体pT7 7,转化大肠杆菌 ,1%... 目的　构建S 腺苷甲硫氨酸合成酶基因工程菌 ,为酶促转化法生产S 腺苷甲硫氨酸奠定基础。方法　应用PCR技术从S 腺苷甲硫氨酸高产酿酒酵母染色体DNA中扩增得到S 腺苷甲硫氨酸合成酶基因sam2 ,将其克隆至表达载体pT7 7,转化大肠杆菌 ,1%琼脂糖电泳比较大小 ,筛选重组子。结果　SDS PAGE显示重组菌S 腺苷甲硫氨酸合成酶亚基分子量约为 4 2KDa ,平均表达量约占菌体总可溶性蛋白的 4 2 % ,酶活达到 14 .1U/g湿菌体 ,比宿主菌酶活提高 15 .7倍。结论　酿酒酵母SAM合成酶基因在大肠杆菌中高效表达 。 展开更多

关键词 s-腺苷甲硫氨酸合酶 克隆 表达

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壳聚糖固定化S-腺苷甲硫氨酸合成酶 被引量：6

2

作者 尹春丽 陶贵荣 +1 位作者 许乐 牛卫宁 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期945-950,共6页

在大肠杆菌中重组表达了S-腺苷甲硫氨酸合成酶,然后以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,对酶进行固定化研究.结果表明,最佳固定化条件为：壳聚糖质量浓度为2.5g/dL、戊二醛体积分数为0.8％、固定化酶量为6 mg/mL、固定化时间为12 h,该条件... 在大肠杆菌中重组表达了S-腺苷甲硫氨酸合成酶,然后以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,对酶进行固定化研究.结果表明,最佳固定化条件为：壳聚糖质量浓度为2.5g/dL、戊二醛体积分数为0.8％、固定化酶量为6 mg/mL、固定化时间为12 h,该条件下所得固定化酶活性回收率为76％,固定化酶热稳定性较好,在55℃下保温5h仍保留53％的活力,而游离酶在50℃下保温5h则完全失活.固定化酶在碱性溶液环境的稳定性较高,在pH 7.5～9.0的缓冲液中4℃保温10 h酶活性仍保留80％以上.将固定化酶用于S-腺苷甲硫氨酸的合成,连续反应5批次后,酶活性仍保留64％.在底物三磷酸腺苷（ATP）浓度为30 mmol/L的条件下,固定化酶催化底物ATP的转化率超过95％. 展开更多

关键词 s-腺苷甲硫氨酸合成酶 壳聚糖 固定化酶 酶学性质

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氨基树脂固定化S-腺苷甲硫氨酸合成酶的研究 被引量：3

3

作者 尹春丽 曹珊珊 +2 位作者 许乐 陶贵荣 牛卫宁 《化学与生物工程》 CAS 2014年第9期17-20,共4页

以氨基树脂为载体对S-腺苷甲硫氨酸（SAM）合成酶进行固定化,优化了酶的固定化条件并对固定化酶的性质进行了研究。优化的固定化条件为：戊二醛体积分数5%、SAM合成酶添加量20mg·g-1、固定化时间5h。所制备的固定化SAM合成酶的酶... 以氨基树脂为载体对S-腺苷甲硫氨酸（SAM）合成酶进行固定化,优化了酶的固定化条件并对固定化酶的性质进行了研究。优化的固定化条件为：戊二醛体积分数5%、SAM合成酶添加量20mg·g-1、固定化时间5h。所制备的固定化SAM合成酶的酶活力为476.8U·g-1,酶活力回收率为74.5%。与游离SAM合成酶相比,固定化SAM合成酶的稳定性大幅提高,在50℃孵育5h酶活力仍保留61.2%,而游离SAM合成酶则完全失活;在pH值为6.0-6.5、8.0-9.5的缓冲溶液中,固定化SAM合成酶也更加稳定;固定化SAM合成酶连续催化反应10批次,酶活力保留86.3%;固定化SAM合成酶在4℃储存30d,酶活力保留81.4%。固定化SAM合成酶米氏常数KATPm=0.14mmol·L-1,KLm-Met=0.28mmol·L-1。 展开更多

关键词 s-腺苷甲硫氨酸合成酶 氨基树脂 固定化酶 酶学性质

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不同来源S-腺苷甲硫氨酸合酶在大肠杆菌中的表达及催化应用 被引量：1

4

作者 Hero Nmeri Godspower 乔郅钠 +1 位作者 徐美娟 饶志明 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期26-33,共8页

S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)是一种重要的代谢中间体,对机体代谢活动的正常运行起重要作用,它是由底物L-甲硫氨酸和ATP在SAM合酶催化下生成的,目前主要应用于医药行业。该研究首先以蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus和谷氨酸... S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)是一种重要的代谢中间体,对机体代谢活动的正常运行起重要作用,它是由底物L-甲硫氨酸和ATP在SAM合酶催化下生成的,目前主要应用于医药行业。该研究首先以蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus和谷氨酸棒杆菌Corynebacterium glutamicum基因组为模板扩增出SAM合酶编码基因BcmetK和CgmetK,以pETDueT1质粒为载体,以大肠杆菌E.coli BL21(DE3)为底盘细胞,构建了SAM合成菌株E.coli BL21/pETDuet1-BcmetK和E.coli BL21/pETDuet1-CgmetK。其次,针对SAM合成菌株全细胞催化合成体系条件进行了优化,重组大肠杆菌E.coli BL21/pETDuet1-BcmetK在最优条件[L-甲硫氨酸浓度50 mmol/L、ATP浓度50 mmol/L、1.2%(体积分数)的OD_(600)值约9.0的细胞悬浮液、600 mmol/L pTSoNa、50 mmol/L MgSO_(4)、100 mmol/L K_(2)SO_(4)、45℃、pH 8.0]下,连续转化5 h,获得了464 mg/L的SAM。重组大肠杆菌E.coli BL21/pETDuet1-CgmetK在最优条件[L-甲硫氨酸浓度50 mmol/L、ATP浓度40 mmol/L、0.8%(体积分数)的OD_(600)值约9.0的细胞悬浮液、800 mmol/L pTSoNa、50 mmol/L MgSO 4、100 mmol/L K_(2)SO 4、45℃、pH 8.5]下,连续转化5 h,获得了528 mg/L的SAM,可见,谷氨酸棒杆菌来源的SAM合酶催化能力优于蜡状芽孢杆菌来源的,更有利于SAM的合成。该研究成功构建了SAM合成菌株,虽然产量水平不高,但为SAM的可持续生物合成提供了重要借鉴。 展开更多

关键词 蜡状芽孢杆菌 谷氨酸棒杆菌 大肠杆菌 s-腺苷甲硫氨酸合酶 s-腺苷甲硫氨酸 全细胞催化

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S-腺苷酰L-甲硫氨酸 (SAM)对 HL-60细胞 DNA甲基化酶活力和甲基化水平的影响(英文) 被引量：6

5

作者 白坚石 马晴 +1 位作者 王萍 何忠效 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期155-159,共5页

以 S-腺苷酰 - L-甲硫氨酸 (SAM)为诱导物 ,在 1 0 μmol/L最佳浓度下造成 1 6%的 HL- 60细胞分化 .HPLC检测结果表明 ,细胞基因组 DNA甲基化水平升高 .通过3H甲基同位素参入法研究细胞 DNA甲基化酶活力 ,则发现在细胞分化过程中酶活力... 以 S-腺苷酰 - L-甲硫氨酸 (SAM)为诱导物 ,在 1 0 μmol/L最佳浓度下造成 1 6%的 HL- 60细胞分化 .HPLC检测结果表明 ,细胞基因组 DNA甲基化水平升高 .通过3H甲基同位素参入法研究细胞 DNA甲基化酶活力 ,则发现在细胞分化过程中酶活力未见升高 .说明细胞基因组甲基化水平升高并不是胞内 DNA甲基化酶催化能力改变的结果 ,而是由于 SAM进入细胞提供过量甲基造成的 . 展开更多

关键词 s-腺苷酰-L-甲硫氨酸 HL-60细胞 细胞分化 DNA甲基化酶 甲基化水平 酶活

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一种S-腺苷甲硫氨酸依赖的甲基转移酶活性的检测方法 被引量：3

6

作者 谷劲松 谭晓军 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2012年第3期521-525,共5页

通过PCR扩增获得了S-腺苷-L-高半胱氨酸核苷酶(SAHN)和S-核糖基高半胱氨酸酶(SRHH)的基因序列,克隆入表达载体,转化宿主细胞,表达纯化得到带有组氨酸标签的重组蛋白,基于SAHN和SRHH重组酶建立了一种酶偶联分析S-腺苷甲硫氨酸(AdoMet)依... 通过PCR扩增获得了S-腺苷-L-高半胱氨酸核苷酶(SAHN)和S-核糖基高半胱氨酸酶(SRHH)的基因序列,克隆入表达载体,转化宿主细胞,表达纯化得到带有组氨酸标签的重组蛋白,基于SAHN和SRHH重组酶建立了一种酶偶联分析S-腺苷甲硫氨酸(AdoMet)依赖的甲基转移酶活性的检测方法.甲基转移酶的共同产物S-腺苷-L-高半胱氨酸(AdoHcy)首先被SAHN酶水解生成腺嘌呤和S-核苷高半胱氨酸,后者进一步被SRHH酶裂解生成高半胱氨酸,最后高半胱氨酸与Ellman’s试剂反应生成5-硫代-2-硝基苯甲酸(TNB).实验结果表明,重组表达获取的2种酶蛋白均具有良好的催化活性,酶偶联反应生成的TNB与初始AdoHcy浓度呈现显著的线性正相关.该检测方法克服了S-腺苷甲硫氨酸依赖的甲基转移酶的共同产物AdoHcy的反馈抑制,使甲基化反应进行完全,从而保证了对甲基转移酶活性准确有效的定量分析. 展开更多

关键词 s-腺苷-L-高半胱氨酸 s-腺苷-L-高半胱氨酸核苷酶 s-核糖基高半胱氨酸酶 s-腺苷甲硫氨酸依赖甲基转移酶 酶偶联分析

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S-甲基异硫脲对阿霉素致大鼠心肌线粒体腺苷三磷酸合酶活性改变的影响 被引量：1

7

作者 阳冠明 刘微 +4 位作者 李树全 彭献华 叶司原 利基林 林善修 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期116-119,共4页

目的研究S-甲基异硫脲(SMT)对阿霉素(ADR)所致大鼠心肌线粒体腺苷三磷酸合酶(ATPS)活性改变的影响。方法大鼠腹腔注射ADR(5.0 mg.kg-1)1次,给ADR处理的大鼠静脉注射不同剂量的SMT1次进行干预。分别用寡霉素—无机磷法、血红蛋白氧化法... 目的研究S-甲基异硫脲(SMT)对阿霉素(ADR)所致大鼠心肌线粒体腺苷三磷酸合酶(ATPS)活性改变的影响。方法大鼠腹腔注射ADR(5.0 mg.kg-1)1次,给ADR处理的大鼠静脉注射不同剂量的SMT1次进行干预。分别用寡霉素—无机磷法、血红蛋白氧化法测定心肌线粒体的ATPS活性、一氧化氮合酶活性;分别用荧光素酶法、硝酸还原酶法测定心肌线粒体的腺苷三磷酸(ATP)含量、一氧化氮(NO)含量;用逆转录-聚合酶链反应方法检测心肌线粒体的ATPS6 mRNA、ATPS8 mRNA表达。结果SMT(5.0,10.0,20.0 mg.kg-1)拮抗ADR所致心肌线粒体的ATPS活性降低、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性增加(P<0.01);拮抗ADR所致心肌线粒体的ATP含量降低、NO含量增加(P<0.01);拮抗ADR所致心肌线粒体的ATPS6 mRNA、ATPS8 mRNA表达水平降低(P<0.01)。结论SMT拮抗ADR导致心肌线粒体的ATPS6 mRNA、ATPS8 mRNA表达水平降低而拮抗ADR导致ATPS活性降低,从而改善心肌线粒体供能;SMT拮抗ADR导致心肌线粒体的ATPS6 mRNA、ATPS8 mRNA表达水平降低可能与其选择性地抑制ADR所诱导心肌线粒体的iNOS活性使NO产生减少,从而减少NO抑制心肌线粒体的ATPS6 mRNA、ATPS8 mRNA表达有关。 展开更多

关键词 s-甲基异硫脲 阿霉素 心肌 线粒体 腺苷三磷酸合酶 一氧化氮 一氧化氮合酶

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反相高效液相色谱法测定酶促转化法制备的S-腺苷甲硫氨酸

8

作者 夏虹 陶敏 《应用化工》 CAS CSCD 2008年第1期107-108,共2页

反相高效液相色谱法测定酶促转化法制备的S-腺苷甲硫氨酸，采用Luna C18柱（250mm×4．6mm，5μm），流动相为100％0．02mol／L乙酸铵，用乙酸调pH值至4．0；流速为1．0mL／min，用二极管阵列检测器检测，检测波长为254nm，在200～... 反相高效液相色谱法测定酶促转化法制备的S-腺苷甲硫氨酸，采用Luna C18柱（250mm×4．6mm，5μm），流动相为100％0．02mol／L乙酸铵，用乙酸调pH值至4．0；流速为1．0mL／min，用二极管阵列检测器检测，检测波长为254nm，在200～800μg,／mL范围内线性良好（r=0．9997），检出限为2．3ng。 展开更多

关键词 s-腺苷甲硫氨酸 反相高效液相色谱 酶促转化法

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解淀粉芽孢杆菌mtnN基因对其生物合成S-腺苷甲硫氨酸的影响 被引量：1

9

作者 阮丽英 温志友 魏雪团 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第6期193-200,共8页

为探索解淀粉芽孢杆菌中mtnN基因编码的S-腺苷高半胱氨酸核苷酶对S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)合成的影响,通过基因敲除技术和反义RNA抑制技术构建了针对mtnN基因的系列工程菌株。与出发菌株HZ-12相比,缺失mtnN基因的菌株... 为探索解淀粉芽孢杆菌中mtnN基因编码的S-腺苷高半胱氨酸核苷酶对S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)合成的影响,通过基因敲除技术和反义RNA抑制技术构建了针对mtnN基因的系列工程菌株。与出发菌株HZ-12相比,缺失mtnN基因的菌株SAM产量和生物量分别下降了51%和26%,说明完全阻断该基因不利于菌体的生长和产物的合成。进一步通过反义RNA微调抑制mtnN基因的表达,与对照菌株HZ-12/pHY300相比,所构建的反义RNA工程菌HZ-12/pHY-mtnNasRNA-1、HZ-12/pHY-mtnNasRNA-2和HZ-12/pHYmtnNasRNA-3生物量没有显著性变化,且其SAM产量分别达到14.58、12.27 mg/L和12.49 mg/L,相比对照分别提高了44%、22%和24%。本研究不仅阐释了mtnN基因对SAM合成的影响规律,而且为SAM高产工程菌株的构建提供了新的思路。 展开更多

关键词 s-腺苷甲硫氨酸 解淀粉芽孢杆菌 s-腺苷高半胱氨酸核苷酶 反义RNA 代谢工程

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去泛素化酶组成型光形态发生因子9信号复合体5上调甲硫氨酸腺苷转移酶2A表达促进肝癌细胞增殖 被引量：1

10

作者 谢培一 陈磊峰 +3 位作者 卢虹成 杜栋年 李家娟 邵江华 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第12期1539-1543,共5页

目的研究去泛素化酶组成型光形态发生因子9信号复合体5(CSN5)调控肝癌细胞增殖的的分子机制。方法采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法以及免疫组织化学法检测并比较CSN5在肝癌和癌旁组织表达的差异性。在肝癌细胞转染CSN5干扰片段并采... 目的研究去泛素化酶组成型光形态发生因子9信号复合体5(CSN5)调控肝癌细胞增殖的的分子机制。方法采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法以及免疫组织化学法检测并比较CSN5在肝癌和癌旁组织表达的差异性。在肝癌细胞转染CSN5干扰片段并采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证CSN5和甲硫氨酸腺苷转移酶2A(MAT2A)表达的变化,同时用EdU法检测肝癌细胞增殖的变化。结果CSN5在肝癌组织和肝癌细胞中的表达水平明显增高(P<0.05)。干扰CSN5后肝癌细胞中CSN5 mRNA及蛋白的水平和肝癌细胞增殖能力显著降低(P<0.001)。在肝癌细胞中干扰CSN5的表达可以明显降低MAT2A蛋白水平(P<0.01)并进而影响肝癌细胞的增殖能力。结论CSN5可以通过调控甲硫氨酸腺苷转移酶2A的表达进而调控肝癌细胞的增殖。 展开更多

关键词 肝癌 去泛素化酶 增殖 组成型光形态发生因子9信号复合体5 甲硫氨酸腺苷转移酶2A

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甲硫氨酸腺苷转移酶活性缺陷致高甲硫氨酸血症3例报告 被引量：7

11

作者 马艳艳 李东晓 +4 位作者 李溪远 宋金青 刘玉鹏 丁圆 杨艳玲 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期57-60,共4页

目的探讨甲硫氨酸腺苷转移酶缺陷导致的高甲硫氨酸血症患儿的临床表现和分子遗传学特点。方法回顾分析3例因甲硫氨酸腺苷转移酶缺陷导致的高甲硫氨酸血症患儿的临床资料及相关基因分析,并进行核心家系分析。结果 3例患儿,男孩2例,女孩1... 目的探讨甲硫氨酸腺苷转移酶缺陷导致的高甲硫氨酸血症患儿的临床表现和分子遗传学特点。方法回顾分析3例因甲硫氨酸腺苷转移酶缺陷导致的高甲硫氨酸血症患儿的临床资料及相关基因分析,并进行核心家系分析。结果 3例患儿,男孩2例,女孩1例,年龄5个月~3岁,来自3个不相关的家系;均无阳性家族史。1例在新生儿筛查时被发现,1例于1个月时病理性黄疸发病,另1例于2岁时因手抖和生长发育落后而就诊。血氨基酸酯酰肉碱谱分析均显示甲硫氨酸显著增高,134.50~790.67μmol/L。患儿均为甲硫氨酸腺苷转移酶编码基因MAT1A突变;1例为复合杂合突变,第3外显子c.274T>C和第7外显子c.895C>T突变;1例为第6外显子c.757G>A纯合突变;另1例为第7外显子c.791G>A纯合突变。核心家系分析示患儿的突变均分别来自父母。结论对于以神经系统损害为主要表现的患儿应考虑到甲硫氨酸代谢障碍性疾病,血氨基酸和基因分析是明确诊断的重要方法。新生儿筛查是发现此病的有效方法。 展开更多

关键词 甲硫氨酸 甲硫氨酸腺苷转移酶 高甲硫氨酸血症 遗传代谢病

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S-腺苷甲硫氨酸制备方法的研究进展 被引量：9

12

作者 牛卫宁 左晓佳 +1 位作者 王丽衡 钦传光 《化学与生物工程》 CAS 2009年第3期1-5,共5页

S-腺苷甲硫氨酸(SAM)是生物体内重要的生理活性物质,参与多种生化反应,临床上被广泛用于治疗抑郁症、神经紊乱、肝病、关节炎等。综述了SAM制备方法的研究进展,述及的SAM制备方法包括化学合成法、微生物发酵法、体外酶促合成法以及全细... S-腺苷甲硫氨酸(SAM)是生物体内重要的生理活性物质,参与多种生化反应,临床上被广泛用于治疗抑郁症、神经紊乱、肝病、关节炎等。综述了SAM制备方法的研究进展,述及的SAM制备方法包括化学合成法、微生物发酵法、体外酶促合成法以及全细胞催化法。 展开更多

关键词 s-腺苷甲硫氨酸 微生物发酵法 体外酶促合成法 全细胞催化

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S-腺苷-L-甲硫氨酸依赖的3-氨基-3-羧基丙基利用酶研究进展

13

作者 何家乐 董敏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期56-70,共15页

S-腺苷-L-甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)是生物体内重要的辅因子。SAM的结构中具有3个不稳定的C-S键,不同的SAM依赖酶能够选择性地切割其中不同的C-S键来催化各种类型的反应。其中,利用SAM甲基部分的甲基转移酶和腺苷部分的SA... S-腺苷-L-甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)是生物体内重要的辅因子。SAM的结构中具有3个不稳定的C-S键,不同的SAM依赖酶能够选择性地切割其中不同的C-S键来催化各种类型的反应。其中,利用SAM甲基部分的甲基转移酶和腺苷部分的SAM自由基酶被广泛研究。UniProt数据库中保存了超过1800000条SAM依赖的甲基转移酶序列;SAM自由基酶也已经成为最大的酶家族之一,数目超过700000个。但利用SAM中3-氨基-3羧基丙基(3-amino-3-carboxypropyl,ACP)的酶却报道相对较少,本文对目前这一类酶的研究进行分类介绍,并对这一领域未来研究方向进行展望。 展开更多

关键词 s-腺苷-L-甲硫氨酸 3-氨基-3-羧基丙基 反应机制 甲基转移酶 非经典sAM自由基酶

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甲硫氨酸腺苷转移酶1A/2A平衡与肝细胞癌 被引量：3

14

作者 李子涵 熊婷 +3 位作者 熊晓丽 卢子贤 周志刚 涂剑 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1232-1239,共8页

肝细胞癌是一种死亡率极高的癌症,大多数病人发现时已属晚期.甲硫氨酸腺苷转移酶(MAT)是细胞生命活动的关键酶,可以通过催化甲酼氨酸和三磷酸腺苷(ATP)结合,促进生物甲基供体S-腺苷甲酼氨酸(SAMe)的生物合成.正常肝细胞中MAT1A与MAT2A... 肝细胞癌是一种死亡率极高的癌症,大多数病人发现时已属晚期.甲硫氨酸腺苷转移酶(MAT)是细胞生命活动的关键酶,可以通过催化甲酼氨酸和三磷酸腺苷(ATP)结合,促进生物甲基供体S-腺苷甲酼氨酸(SAMe)的生物合成.正常肝细胞中MAT1A与MAT2A存在动态平衡,共同维持细胞内SAMe稳态;肝细胞癌中MAT1A转变成MAT2A,会使SAMe生物合成减少,为癌细胞生长提供有利条件,故MAT1A表达降低而MAT2A增高.因此,促进MAT2A向MAT1A转化,进而提高MAT1A/MAT2A的比值可能成为治疗肝细胞癌的关键靶点之一.本文就MAT1A/MAT2A平衡在肝细胞癌中的重要作用作一综述,旨在为寻找肝细胞癌防治靶点提供新的思路. 展开更多

关键词 甲硫氨酸腺苷转移酶1A 甲硫氨酸腺苷转移酶2A 肝细胞癌 平衡调控

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大肠杆菌表达腺苷蛋氨酸合酶及产酶条件优化 被引量：1

15

作者 毛职医 谈新苑 +6 位作者 曹蓉 张晓娟 付静 徐建国 徐国强 张晓梅 许正宏 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期8-13,共6页

腺苷蛋氨酸(adenosymethionine,SAM)是人体中重要的代谢中间体,在医疗上被广泛应用于治疗肝炎,抑郁症以及关节炎等疾病。酶法进行腺苷蛋氨酸的生产具有良好的工业前景。将来源于酿酒酵母BY4741中的腺苷蛋氨酸合酶基因(sam2)进行密码子... 腺苷蛋氨酸(adenosymethionine,SAM)是人体中重要的代谢中间体,在医疗上被广泛应用于治疗肝炎,抑郁症以及关节炎等疾病。酶法进行腺苷蛋氨酸的生产具有良好的工业前景。将来源于酿酒酵母BY4741中的腺苷蛋氨酸合酶基因(sam2)进行密码子优化后,与p ET-28a(+)和p ET-3b(+)进行连接获得重组质粒p ET-28a(+)-sam2和p ET-3b(+)-sam2,分别实现其在E. coli BL21(DE3)和E. coli Rosetta(DE3)中的异源表达,结果表明,重组菌E. coli BL21/p ET-28a(+)-sam2的SAM酶活较高,达到0. 184 U/m L。对该重组菌株进行发酵条件优化,在最优条件下,SAM合酶最高酶活为0. 245 U/m L,比优化前提高34%。 展开更多

关键词 大肠杆菌 s-腺苷蛋氨酸合酶 异源表达 酶法合成 诱导条件优化

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新生儿筛查确诊甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷症5例临床分析

16

作者 张志蕾 孙云 +3 位作者 王彦云 马定远 程威 蒋涛 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期889-892,共4页

目的探讨甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷症的临床和基因变异特点.方法回顾分析串联质谱新生儿筛查发现的5例甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷患儿的临床资料及基因检测.结果22万例新生儿筛查中发现甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷5例,发病率为1/4... 目的探讨甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷症的临床和基因变异特点.方法回顾分析串联质谱新生儿筛查发现的5例甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷患儿的临床资料及基因检测.结果22万例新生儿筛查中发现甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷5例,发病率为1/44000.5例患儿中,3例血甲硫氨酸在70~150μmol/L之间.基因检测2例符合常染色体显性遗传、1例符合常染色体隐性遗传.3例随访至今预后良好,另2例血甲硫氨酸持续>500μmol/L;予以特殊饮食治疗,1例头颅磁共振成像和肝功能异常,1例伴有微缺失综合征,发育落后.结论甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷可通过串联质谱新生儿筛查结合基因检测而早期诊断,需要长期随访. 展开更多

关键词 串联质谱 甲硫氨酸腺苷转移酶Ⅰ/Ⅲ缺陷 MAT1A基因 随访

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腺苷对L-甲状腺素诱发的大鼠肥厚左室心肌中NO含量及NOS活力的影响 被引量：6

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作者 陈丁丁 巢杰 +2 位作者 高利忠 李薇 王友群 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期335-338,共4页

目的　研究腺苷 (Adenosine,Ade)对 L-甲状腺素 (L-thyroxine,L-Thy)诱发的大鼠缺血性肥厚左室心肌中一氧化氮 (NO)含量和一氧化氮合酶 (NOS)活力的影响。方法　 NO含量和 NOS活力采用联苯胺荧光分光光度法测定。结果　 L-Thy诱发的肥... 目的　研究腺苷 (Adenosine,Ade)对 L-甲状腺素 (L-thyroxine,L-Thy)诱发的大鼠缺血性肥厚左室心肌中一氧化氮 (NO)含量和一氧化氮合酶 (NOS)活力的影响。方法　 NO含量和 NOS活力采用联苯胺荧光分光光度法测定。结果　 L-Thy诱发的肥厚左室心肌中的 NO含量比正常对照组显著下降 ,Ade 5 ,1 0 mg· kg- 1·d- 1 ig3 d后 ,可使 NO含量恢复到正常水平。与正常对照组相比 ,L-Thy诱发的肥厚左室心肌中诱导型 NOS(i NOS)活力显著升高 ;结构型 NOS(c NOS)活力显著下降。 Ade 1 0 mg· kg- 1 · d- 1 ig 3 d后 ,i NOS活力比病理组显著下降。Ade5 ,1 0 mg·kg- 1·d- 1 ig3 d后 ,c NOS活力均可恢复至正常水平。结论　Ade通过恢复 L-Thy诱发的大鼠肥厚左室心肌中的 c NOS活力 ,降低 i NOS活力 ,升高 NO含量 ,发挥心肌保护作用。Ade对实验性甲亢大鼠缺血性肥厚左室的治疗作用部分是通过 NO通路实现的。 展开更多

关键词 腺苷 L-甲状腺素 一氧化氮 一氧化氮合酶 心肌肥厚 动物实验

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PI3K-Akt-eNOS信号通路在三磷酸腺苷后处理减轻兔心肌缺血再灌注损伤中的作用 被引量：22

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作者 高妮妮 王芳 廉哲勋 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2014年第1期59-63,共5页

目的:探讨磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(PI3K-Akt-eNOS)信号通路在三磷酸腺苷(ATP)后处理减轻兔心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法:建立兔心肌缺血再灌注模型,随机将动物分为4组:即缺血再灌注组(对照组)、ATP后处理... 目的:探讨磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(PI3K-Akt-eNOS)信号通路在三磷酸腺苷(ATP)后处理减轻兔心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法:建立兔心肌缺血再灌注模型,随机将动物分为4组:即缺血再灌注组(对照组)、ATP后处理组、磷酯酰肌醇-3激酶抑制剂(Wortmannin)+ATP后处理组(Wortmannin+ATP组)、线粒体ATP依赖性钾通道抑制剂5-羟葵酸(5-HD)+ATP后处理组(5-HD+ATP组)。再灌注结束后,苏木素伊红染色法观察心肌病理组织变化、TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数,免疫组化方法检测心肌Bcl-2、Bax蛋白表达、Bcl-2/Bax比值及磷酸化eNOS(p-eNOS)蛋白表达。结果 :ATP后处理组心肌细胞核变小及细胞间质水肿程度较对照组明显减轻,Wortmannin+ATP组和5-HD+ATP组心肌细胞核大小及细胞间质水肿程度与对照组相似;ATP后处理组与对照组比较,心肌细胞凋亡指数明显减低,抗凋亡因子Bcl-2表达及Bcl-2/Bax比值升高,差异均有统计学意义(P<0.01);Wortmannin+ATP组和5-HD+ATP组心肌细胞凋亡指数、Bcl-2/Bax比值与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);p-eNOS蛋白阳性表达ATP后处理组较对照组和Wortmannin+ATP组显著增高,差异有统计学意义(P<0.01),与5-HD+ATP组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 :ATP后处理可能通过激活PI3K-Akt-eNOS信号通路最终作用于线粒体ATP依赖性钾通道,减少细胞凋亡,减轻兔缺血再灌注损伤。 展开更多

关键词 三磷酸腺苷 心肌缺血再灌注损伤 磷酯酰肌醇-3激酶 蛋白激酶B 内皮型一氧化氮合酶

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鼠李糖甲基化相关基因的组合表达调控丁烯基多杀菌素的合成

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作者 苏畅 郭超 +4 位作者 李新颖 陈霞 庞建 王超 张根林 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第16期43-50,共8页

绿色生物杀虫剂丁烯基多杀菌素具有广谱高效的杀虫活性,在农作物生产、粮食贮藏等方面有着极大的应用前景,高生产性能菌株的选育是实现工业化生产的关键所在。在丁烯基多杀菌素生物合成过程中S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)... 绿色生物杀虫剂丁烯基多杀菌素具有广谱高效的杀虫活性,在农作物生产、粮食贮藏等方面有着极大的应用前景,高生产性能菌株的选育是实现工业化生产的关键所在。在丁烯基多杀菌素生物合成过程中S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)作为甲基供体,在3种不同的O-甲基转移酶作用下对鼠李糖基团进行甲基化修饰,O-甲基转移酶及SAM供给充足,对丁烯基多杀菌素的合成极为重要。该研究通过外源添加SAM发酵实验、内源SAM合酶挖掘与活性表征、metK和O-甲基转移酶基因协同表达来探究鼠李糖甲基化及相关基因对丁烯基多杀菌素合成的影响。结果表明,metK和O-甲基转移酶基因的组合过表达工程菌株发酵验证获得3株高产工程菌株I-1、I-2和H-1,产量分别提高3.17、2.21、1.43倍。菌株I-1中busI和metK 1的过表达调控促进了菌株的生长代谢和底物的消耗,从而更高效合成丁烯基多杀菌素。该研究阐明了鼠李糖甲基化相关基因对丁烯基多杀菌素合成的影响,为基因工程改造须糖多孢菌促进目标产物合成提供了参考。 展开更多

关键词 须糖多孢菌 丁烯基多杀菌素 粮食贮藏 虫害防治 O-甲基转移酶 s-腺苷甲硫氨酸

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ATP对噪声暴露豚鼠耳蜗一氧化氮合酶活性的影响 被引量：3

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作者 沈静 汤浩 +3 位作者 章晓芳 张合 张铁民 宋玉梅 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 2000年第4期207-210,共4页

目的　探讨ATP对噪声暴露听力损伤的保护作用及对耳蜗一氧化氮合酶活性的影响。方法　制备豚鼠稳态噪声暴露听力损伤模型 ;应用NADPH -d酶组织化学及免疫组化技术ABC法 ,结合听性脑干反应 (ABR)阈值检测 ,研究ATP对噪声暴露致聋豚鼠耳... 目的　探讨ATP对噪声暴露听力损伤的保护作用及对耳蜗一氧化氮合酶活性的影响。方法　制备豚鼠稳态噪声暴露听力损伤模型 ;应用NADPH -d酶组织化学及免疫组化技术ABC法 ,结合听性脑干反应 (ABR)阈值检测 ,研究ATP对噪声暴露致聋豚鼠耳蜗一氧化氮合酶 (NOS)及诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)活性的影响。结果　ATP对噪声暴露豚鼠的ABR阈移有明显的抑制作用 ;ATP对噪声暴露豚鼠耳蜗NOS、iNOS的活性升高有明显抑制作用。结论　ATP对噪声暴露所致听力损伤具有保护作用 ,这种作用可能与耳蜗NOS。 展开更多

关键词 三磷酸腺苷 噪声 一氧化氮合酶 诱生型 听力损伤

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