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miR-335靶向Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1抑制人骨肉瘤细胞MG-63侵袭转移的实验研究 被引量:4
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作者 王勇 王科峰 赵伟 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期801-807,共7页
背景与目的:微小RNA(micro RNA,mi RNA)是一类小分子内源性RNA,主要在转录后水平调节靶基因的表达。micro RNA-335(mi R-335)作为一种肿瘤抑制因子,参与了多种人类肿瘤的发生、发展过程。本研究旨在探讨mi R-335是否靶向抑制Rho相关卷... 背景与目的:微小RNA(micro RNA,mi RNA)是一类小分子内源性RNA,主要在转录后水平调节靶基因的表达。micro RNA-335(mi R-335)作为一种肿瘤抑制因子,参与了多种人类肿瘤的发生、发展过程。本研究旨在探讨mi R-335是否靶向抑制Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(Rho associated coiled-coil forming protein kinase,ROCK1)基因的表达,并以此调控人骨肉瘤细胞MG-63侵袭及转移。方法:理论预测并通过荧光素酶基因报告验证mi R-335与ROCK1基因的3'-非翻译区(untranslated region,UTR)的特异性结合作用;real-time PCR和蛋白质印迹法(Western blot)分别从基因和蛋白水平检测mi R-335对ROCK1表达的负性调控作用;Transwell小室法检测mi R-335过表达及下调ROCK1表达后MG-63侵袭及转移能力的变化。结果:Targetscan预测显示,mi R-335与ROCK1 3'-UTR存在结合位点。荧光素酶基因报告实验结果显示,mi R-335 mimic和ROCK1 3'-UTR能够靶向结合;mi R-335在MG-63细胞中低表达,ROCK1则呈高表达。Western blot检测结果显示,转染mi R-335 mimic或转染ROCK1 si RNA后ROCK1的蛋白表达减少。Transwell小室法检测结果显示,过表达mi R-335或下调ROCK1后穿过基膜的细胞数目明显下降。结论:mi R-335能特异性结合于ROCK1基因的3'-UTR并下调ROCK1的表达,抑制人骨肉瘤细胞MG-63侵袭转移。 展开更多
关键词 微小RNA-335 rho相关卷曲螺旋形成蛋白液酶1 人骨肉瘤细胞MG-63 侵袭及转移
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Ras同源基因家族蛋白A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶信号通路与脑梗死关系的研究进展 被引量:4
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作者 任浩 王琳 +1 位作者 刘宵 高燕军 《中国脑血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期603-607,共5页
Ras同源基因家族蛋白A(Ras homolog gene family member A,Rho A)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(Rho-associated coiled-coil forming protein kinase,ROCK)信号通路参与许多细胞的调控过程,包括转录、细胞骨架的改变、收缩、黏附、运... Ras同源基因家族蛋白A(Ras homolog gene family member A,Rho A)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(Rho-associated coiled-coil forming protein kinase,ROCK)信号通路参与许多细胞的调控过程,包括转录、细胞骨架的改变、收缩、黏附、运动、增殖、分化等,同时其与动脉粥样硬化、脑梗死、缺血-再灌注损伤的发生发展密切相关[1]。 展开更多
关键词 rho相关激酶 脑梗死 rho相关卷曲螺旋蛋白激酶抑制剂 综述
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miR-153-3p靶向下调Rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1)基因抑制乳腺癌细胞增殖及迁移 被引量:8
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作者 孙蕾 王华 +1 位作者 姜珏 毕学苑 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期138-144,共7页
目的探究miR-153-3p调节乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭的分子机制。方法利用生物信息学软件检索预测miR-153-3p的候选靶基因;采用双荧光素酶报告实验分析miR-153-3p与候选基因的靶向关系;应用实时荧光定量PCR和Western blot法检测miR-15... 目的探究miR-153-3p调节乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭的分子机制。方法利用生物信息学软件检索预测miR-153-3p的候选靶基因;采用双荧光素酶报告实验分析miR-153-3p与候选基因的靶向关系;应用实时荧光定量PCR和Western blot法检测miR-153-3p对MDA-MB-231细胞mRNA和蛋白质表达水平的影响;通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,并以TranswellTM检测细胞的迁移和侵袭能力。结果软件预测显示miR-153-3p与Rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1)有连续的结合区域;共转染miR-153-3p模拟物(miR-153-3p mimics)与ROCK1野生型报告载体的细胞相对荧光素酶活性降低;转染hsa-miR-153-3p-mimics后,MDA-MB-231细胞的miR-153-3p表达水平显著增高,且ROCK1蛋白的表达量明显降低。与对照组相比,转染组MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力均减弱。结论miR-153-3p通过靶向下调ROCK1的表达来抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。 展开更多
关键词 乳腺癌细胞 miR-153-3p rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1) 细胞增殖 细胞迁移
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Rho相关的卷曲蛋白激酶在多重细胞行为中的作用 被引量:1
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作者 刘冬 陈星云 周元国 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期276-280,共5页
Rho相关的卷曲蛋白激酶(ROCK)是一种属于AGC家族的蛋白激酶,主要通过诱导应力纤维形成、重构细胞骨架等方式参与细胞收缩、迁徙、分裂、形态变化等生物学行为,对调节细胞的多种功能发挥重要的作用。
关键词 rho相关卷曲蛋白激酶 细胞骨架 细胞收缩 细胞迁徙
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Rho相关的卷曲蛋白激酶1参与β淀粉样蛋白介导的大鼠原代神经元损伤 被引量:1
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作者 胡勇博 任汝静 王刚 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1013-1018,共6页
目的·探讨Rho相关的卷曲蛋白激酶1(Rho-associated coiled coil protein kinase 1,ROCK1)是否参与了β淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)引起大鼠海马神经元损伤的过程。方法·用Aβ40寡聚肽处理大鼠海马原代神经元,建立神经... 目的·探讨Rho相关的卷曲蛋白激酶1(Rho-associated coiled coil protein kinase 1,ROCK1)是否参与了β淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)引起大鼠海马神经元损伤的过程。方法·用Aβ40寡聚肽处理大鼠海马原代神经元,建立神经元损伤模型。利用免疫印迹法检测ROCK1蛋白表达水平,试剂盒检测ROCK1激酶活性,激光共聚焦显微镜检测荧光染料Fluo-8AM标记的细胞内钙离子负荷,TUNEL染色检测细胞凋亡情况。加入ROCK1抑制剂Y-27632,观察其对Aβ40效应的影响。结果·10μmol/L Aβ40寡聚肽能引起神经元内钙超载,ROCK1蛋白表达增加和活性升高,以及细胞凋亡比例升高;而Y-27632能对抗Aβ40引起的这些效应。结论·ROCK1参与了Aβ40诱导的神经元内钙超载及神经毒性的产生,而ROCK1抑制剂能拮抗Aβ毒性效应。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 rho相关卷曲蛋白激酶1 Β淀粉样蛋白 钙超载
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FBXW7和RhoA/Rho激酶蛋白表达参与糖尿病大鼠心肌纤维化 被引量:4
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作者 申屠路媚 卢敏 +2 位作者 王燕 李杰 牟艳玲 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期1-8,共8页
目的探究F框/含蛋白7 WD-40域蛋白(FBXW7)、Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)的表达与糖尿病心肌纤维化的关系。方法将SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病模型组,采用一次性ip链脲佐菌素60 mg·kg^(-1)建... 目的探究F框/含蛋白7 WD-40域蛋白(FBXW7)、Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)的表达与糖尿病心肌纤维化的关系。方法将SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病模型组,采用一次性ip链脲佐菌素60 mg·kg^(-1)建立1型糖尿病大鼠模型,分别于2,4,8,12和16周进行检测。HE染色观察大鼠心脏组织形态变化;Masson染色和测定心肌羟脯氨酸(HYP)含量观察心肌胶原沉积程度;ELISA法检测血清中FBXW7,转化生长因子β_1(TGF-β_1)和结缔组织生长因子(CTGF)的含量;Western蛋白印迹和免疫组化法检测心肌中FBXW7,RhoA和ROCK1蛋白的表达。结果显微镜下可见糖尿病模型组大鼠心肌不同程度局灶性心肌细胞变性、坏死和纤维组织增生等。与正常对照组相比,4~16周时,模型组大鼠心肌组织中胶原沉积面积和胶原含量显著升高(P<0.05,P<0.01),呈递增趋势;2~4周时,大鼠血清中FBXW7含量显著增加(P<0.01),第8周时降低,但仍显著高于正常对照组(P<0.01);8~16周时,大鼠血清中TGF-β_1和CTGF含量逐渐升高(P<0.01)。Western蛋白印迹和免疫组化结果显示,模型组大鼠心肌RhoA和ROCK1蛋白表达在各时间点均显著高于正常对照组(P<0.05,P<0.01);2~12周模型组大鼠心肌FBXW7表达较正常对照组显著升高(P<0.01,P<0.01),第4周表达最高,8~16周表达下降,与时间呈负相关(r=-0.988,P<0.05),但仍高于正常对照组(P<0.01)。结论 FBXW7和RhoA/Rho激酶参与糖尿病大鼠心肌纤维化的发生发展,可能成为治疗糖尿病心肌病的靶点。 展开更多
关键词 糖尿病心肌病 心肌纤维化 F框/含蛋白7 WD-40域蛋白 rhoA蛋白家族 rho相关卷曲螺旋蛋白激酶
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Rho激酶抑制剂法舒地尔作用BTBD7-ROCK2信号通路抑制肝细胞癌侵袭运动 被引量:2
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作者 胡宽 王志明 陶一明 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1221-1227,共7页
目的:观察Rho激酶抑制剂法舒地尔(Fasudil)对人高侵袭潜能HCC细胞株3(human high metastatic liver cancer cells 3,HCCLM3)侵袭转移的影响,并且探讨其作用的机制。方法:应用100 mol/L Fasudil作用于HCCLM3细胞,采用肌动蛋白微丝荧光染... 目的:观察Rho激酶抑制剂法舒地尔(Fasudil)对人高侵袭潜能HCC细胞株3(human high metastatic liver cancer cells 3,HCCLM3)侵袭转移的影响,并且探讨其作用的机制。方法:应用100 mol/L Fasudil作用于HCCLM3细胞,采用肌动蛋白微丝荧光染色和侵袭小室实验观察HCCLM3细胞的运动侵袭能力。HCCLM3细胞经过处理后分为阴性对照组、Fasudil作用组、BTBD7干扰组,通过Western印迹检测BTB/POZ结构域蛋白7(BR-C,ttk and bab/pox virus domain containing 7,BTBD7)、Ras同系物家族成员C(ras homolog family member C,Rho C)、Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶2(Rhoassociated,coiled-coil containing protein kinase 2,ROCK2)、MMP2和MMP9蛋白表达水平,酶谱分析法检测MMP2和MMP9活性水平。BTBD7干扰组作为阳性对照。结果:Fasudil处理后HCCLM3侵袭运动能力下降,BTBD7,Rho C,ROCK2蛋白表达下调,MMP2和MMP9活性降低,与阴性对照组比较差异有统计学意义(均P<0.01)。结论:Fasudil具有干预BTBD7-ROCK2信号通路、抑制HCC侵袭转移的重要作用。 展开更多
关键词 肝细胞癌 BTB/POZ结构域蛋白7 rho关联卷曲螺旋蛋白激酶2 法舒地尔 侵袭转移
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水蛭素调节RhoA/ROCK信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响 被引量:2
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作者 那丽莎 曲娜 +1 位作者 于雪 栗昭生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1640-1645,共6页
目的:探讨水蛭素(HRD)调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响。方法:将SD大鼠分为Ct组、Model组、低剂量HRD组(HRD-L组,13.33 mg/kg)、高剂量HRD组(HR... 目的:探讨水蛭素(HRD)调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响。方法:将SD大鼠分为Ct组、Model组、低剂量HRD组(HRD-L组,13.33 mg/kg)、高剂量HRD组(HRD-H组,26.66 mg/kg)、阳性对照尼莫地平组(NMDP组,40 mg/kg)、U-46619(RhoA激动剂,0.03 mg/kg)组、HRD-H+U-46619组(26.66 mg/kg+0.03 mg/kg),每组24只。除Ct组外,其他组大鼠均利用改良线栓法构建脑梗死模型,Ct组大鼠仅暴露血管,不进行切口和插线栓。建模成功1 h后,进行给药处理。给药1次/d,持续4周。Zea-Longa法评估大鼠神经功能;干湿重法检测大鼠脑组织含水量;2,3,5-三苯基四唑氯化物(TTC)染色测定大鼠脑梗死体积;TUNEL染色检测大鼠海马CA1区神经元凋亡;ELISA检测大鼠海马组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平;Western blot检测大鼠海马组织中裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。结果:与Ct组比较,Model组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05);与Model组比较,HRD-L组、HRD-H组、NMDP组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达降低,而U-46619组对应指标变化呈相反趋势(P<0.05);与HRD-H组比较,HRD-H+U-46619组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05)。结论:HRD可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路抑制脑梗死大鼠神经元凋亡及炎症反应。 展开更多
关键词 水蛭素 脑梗死 炎症 Ras同源基因家族成员A/rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶信号通路 细胞凋亡
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麦冬皂苷B调节Rho A/ROCK1信号通路对胃荷瘤大鼠肿瘤生长的抑制作用 被引量:1
9
作者 徐明星 李子银 姜红梅 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第19期2180-2187,共8页
目的 探讨麦冬皂苷B(ophiopogonin B,OP-B)对胃荷瘤大鼠肿瘤生长的影响及其作用机制。方法 将66只体质量为180~200 g的6周龄SPF级SD大鼠(雌雄各半)按随机数字表法分为模型组,OP-B低、中、高剂量组,激活剂组,每组10只。采用原位移植Walke... 目的 探讨麦冬皂苷B(ophiopogonin B,OP-B)对胃荷瘤大鼠肿瘤生长的影响及其作用机制。方法 将66只体质量为180~200 g的6周龄SPF级SD大鼠(雌雄各半)按随机数字表法分为模型组,OP-B低、中、高剂量组,激活剂组,每组10只。采用原位移植Walker-256肿瘤组织建立胃荷瘤模型,OP-B低、中、高剂量组大鼠分别灌胃17.5、35、70 mg/kg的OP-B并腹腔注射等量生理盐水,激活剂组灌胃70 mg/kg的OP-B并腹腔注射1 mg/kg的Rho A/ROCK1信号通路激活剂溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid, LPA),模型组灌胃和腹腔注射等量的生理盐水;记录移植瘤质量及体积,计算抑瘤率;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察肿瘤组织形态;原位末端转移酶标记技术(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling, TUNEL)染色检测肿瘤组织细胞凋亡;免疫组织化学染色检测肿瘤组织细胞核增殖抗原67(proliferating cell nuclear antigen, Ki-67)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Cleaved Caspase-3)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法检测Ras同源基因家族蛋白A(Ras homologous gene family member A,Rho A)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(Rho-associated coiled-coil forming protein kinase1,ROCK1)的表达;Western blot检测Rho A、ROCK1蛋白表达。结果 与模型组比较,OP-B低、中、高剂量组肿瘤质量和体积、Ki-67阳性率及Rho A、ROCK1 mRNA和蛋白表达显著降低,抑瘤率、肿瘤细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3阳性率显著升高(P<0.05);与OP-B高剂量组比较,激活剂组肿瘤质量和体积、Ki-67阳性率及Rho A、ROCK1 mRNA和蛋白表达显著升高,抑瘤率、肿瘤细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3阳性率显著降低(P<0.05)。结论 OP-B可能通过抑制Rho A/ROCK1信号通路的激活,抑制胃荷瘤大鼠肿瘤生长。 展开更多
关键词 胃癌 麦冬皂苷B Ras同源基因家族蛋白A/rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1信号通路 增殖 凋亡
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丹参素对IUGR胎鼠脑神经细胞及脑组织Rho/ROCK信号通路的影响 被引量:2
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作者 赵怡然 付洪涛 赵楠楠 《世界中医药》 CAS 2020年第22期3401-3405,共5页
目的:探讨丹参素对IUGR胎鼠脑神经细胞及脑组织Rho/ROCK信号通路的影响。方法:将40只孕鼠以随机数字表法分为正常组、IUGR组、IUGR+低剂量、中剂量、高剂量丹参素组,予以低蛋白饮食法建立IUGR模型,正常组、IUGR组于妊娠第12天尾静脉注... 目的:探讨丹参素对IUGR胎鼠脑神经细胞及脑组织Rho/ROCK信号通路的影响。方法:将40只孕鼠以随机数字表法分为正常组、IUGR组、IUGR+低剂量、中剂量、高剂量丹参素组,予以低蛋白饮食法建立IUGR模型,正常组、IUGR组于妊娠第12天尾静脉注射等体积生理盐水5.0 mg/(kg·d),丹参素低、中、高剂量组分别于妊娠第12天起尾静脉注射等体积不同浓度丹参素溶液,低剂量组10μg/(kg·d),中剂量组20μg/(kg·d),高剂量组30μg/(kg·d),于自然分娩后6 h内测定胎鼠体质量,麻醉处死后行脑组织HE染色,选择RT-PCR、Western blot法对RhoA、ROCKⅡmRNA及蛋白表达进行测定,流式细胞术检测脑神经细胞凋亡率。结果:IUGR组胎鼠体质量明显低于正常组,IUGR+丹参素高剂量组胎鼠体质量高于中剂量组、低剂量组(P<0.05)。IUGR组RhoA、ROCKⅡmRNA、蛋白表达及脑神经细胞凋亡率均高于正常组,而IUGR+丹参素高剂量组低于中剂量组、低剂量组(P<0.05)。结论:丹参素可调控Rho/ROCK信号通路并抑制其活性,以促进IUGR胎鼠脑神经细胞增殖,改善其生长发育。 展开更多
关键词 丹参素 宫内生长受限 神经干细胞 Ras同源基因A rho相关螺旋卷曲蛋白激酶ⅱ
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TGF-β_1介导的RhoA/ROCK通路在大鼠肺肌成纤维细胞分化中的调节作用 被引量:22
11
作者 马文东 袁媛 +6 位作者 杨奕 徐洪 邓海静 于婉莹 孙月 魏中秋 杨方 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1758-1763,共6页
目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)介导的RhoA/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)通路在调控肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化过程中的作用。方法:胰酶消化法获得原代培养的肺成纤维细胞,进行以下实验:(1)观察TGF-β1诱导肺成纤维细胞... 目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)介导的RhoA/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)通路在调控肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化过程中的作用。方法:胰酶消化法获得原代培养的肺成纤维细胞,进行以下实验:(1)观察TGF-β1诱导肺成纤维细胞不同时间后p-RhoA、ROCK、磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶亚基(pMBS)、血清应答因子(SRF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型和III型胶原蛋白表达变化;(2)将细胞分为对照组、TGF-β1诱导分化组和Y-27632(ROCK通路阻滞剂)干预组,免疫细胞化学染色与Western blotting法分别观察与检测ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白在细胞内的定位分布与表达。结果:(1)经TGF-β1诱导24 h后,大鼠肺成纤维细胞胞体内出现大量平行或交叉排列的α-SMA抗体标记的肌丝。随着TGF-β1诱导刺激时间的延长,p-RhoA、ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白表达逐渐增高,其中RhoA/ROCK信号(p-RhoA、ROCK、p-MBS)、SRF和α-SMA蛋白分别在诱导后6 h、12 h和24 h达到高峰。I型胶原和III型胶原蛋白表达均在24 h达高峰,分别为诱导前的2.19和3.04倍(P<0.05)。(2)与TGF-β1诱导分化组比较,当给予Y-27632干预后,在相应时点ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白表达均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TGF-β1通过ROCK信号转导通路的活化,刺激了大鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化,进而促进了胶原蛋白的合成,可能在(矽)肺纤维化形成过程中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 转化生长因子Β rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶 肌成纤维细胞 肺纤维化
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ROCK1及其相关信号分子参与张应变调控的血管平滑肌细胞增殖 被引量:2
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作者 王立意 郭东铭 +3 位作者 庞景之 杨煜晨 沈宝荣 齐颖新 《医用生物力学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第3期205-212,共8页
目的探讨Rho相关卷曲蛋白激酶1(Rho-associated coiled-coil containing protein kinase 1,ROCK1)及其相关信号分子在感受张应变机械刺激、调控血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖功能中的作用。方法应用张应变加... 目的探讨Rho相关卷曲蛋白激酶1(Rho-associated coiled-coil containing protein kinase 1,ROCK1)及其相关信号分子在感受张应变机械刺激、调控血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖功能中的作用。方法应用张应变加载系统对体外培养VSMCs施加牵张幅度10%、频率1.25 Hz生理性周向张应变;Brdu检测VSMCs增殖水平;Western blotting检测力学加载后VSMCs的ROCK1表达水平以及蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)α/βII、蛋白激酶D(protein kinase D,PKD)、胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)磷酸化水平;采用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)检测ROCK1对VSMC增殖和PKCα/βII、PKD、ERK磷酸化的调控作用。结果 10%生理性张应变加载12、24 h显著抑制VSMCs的ROCK1表达,并显著抑制PKD和ERK的磷酸化;10%生理性张应变加载12 h显著抑制PKCα/βⅡ的磷酸化,但加载24 h PKCα/βⅡ的磷酸化与静止对照组相比无显著差异。RNAi抑制VSMCs的ROCK1表达后,VSMCs增殖水平显著降低,同时PKCα/βⅡ和PKD磷酸化水平显著降低,但ERK磷酸化无明显变化。结论 10%生理性张应变可能通过抑制ROCK1表达调控PKCα/βⅡ和PKD的磷酸化水平,从而影响VSMCs增殖,维持血管稳定性。探讨张应变力学刺激调控血管细胞功能的细胞内信号转导网络,对心血管生理和疾病病理机制研究具有一定意义。 展开更多
关键词 血管平滑肌细胞 张应变 rho相关卷曲蛋白激酶 蛋白激酶
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Rho/ROCK信号通路在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征大鼠急性缺血性卒中发生中的作用 被引量:2
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作者 嵇朋 郭向东 +4 位作者 孙根 寇启星 屈雪萍 孙雅静 江利敏 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1178-1186,共9页
目的:研究小GTP结合蛋白(Rho)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)大鼠急性缺血性卒中发生中的作用,为OSAHS后急性缺血性卒中病变的防治提供参考。方法:50只SD大鼠随机分为假手术组、OS... 目的:研究小GTP结合蛋白(Rho)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)大鼠急性缺血性卒中发生中的作用,为OSAHS后急性缺血性卒中病变的防治提供参考。方法:50只SD大鼠随机分为假手术组、OSAHS组、卒中组、OSAHS后卒中组和Rho抑制剂组(C3转移酶5μg·kg^(-1)·d^(-1)腹腔注射),每组10只。采用慢性间歇性低氧建立OSAHS模型,线栓法阻断大脑中动脉建立急性脑卒中模型。观察各组大鼠建模后的一般情况和脑皮质区组织病理形态表现,计算脑梗死体积。比较各组大鼠呼吸频率和神经功能损伤评分,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Westernblotting法检测各组大鼠脑组织中肌球蛋白轻链(MLC)、Rho和ROCKmRNA及蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,其他各组大鼠均有精神状态不佳和脑皮层结构损伤等改变,其中OSAHS后卒中组大鼠变化最严重,Rho抑制剂组变化较轻。与假手术组比较,OSAHS组大鼠呼吸频率增加(P<0.05);与OSAHS组比较,卒中组大鼠呼吸频率降低(P<0.05);与卒中组比较,OSAHS后卒中组大鼠呼吸频率和Longa评分增加(P<0.05),Rho抑制剂组大鼠Longa评分降低(P<0.05);与OSAHS后卒中组比较,Rho抑制剂组大鼠呼吸频率与和Longa评分均降低(P<0.05)。与假手术组比较,OSAHS组大鼠逃避潜伏期延长(P<0.05),穿越平台次数减少(P<0.05);与OSAHS组比较,卒中组大鼠逃避潜伏期延长(P<0.05),穿越平台次数减少(P<0.05);与卒中组比较,OSAHS后卒中组大鼠逃避潜伏期延长(P<0.05),穿越平台次数减少(P<0.05);与OSAHS后卒中组比较,Rho抑制剂组大鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05),穿越平台次数增加(P<0.05)。与卒中组比较,OSAHS后卒中组大鼠脑梗死体积增大(P<0.05);与OSAHS后卒中组比较,Rho抑制剂组大鼠脑梗死体积缩小(P<0.05)。与假手术组比较,OSAHS组大鼠脑组织中Rho和ROCKmRNA和蛋白表达水平及p-MLC/MLC比值升高(P<0.05);与OSAHS组比较,卒中组大鼠脑组织中Rho和ROCKmRNA及蛋白表达水平及其p-MLC/MLC比值升高(P<0.05);与卒中组比较,OSAHS后卒中组大鼠脑组织中Rho和ROCKmRNA及蛋白相表达水平及其p-MLC/MLC比值升高(P<0.05);与OSAHS后卒中组比较,Rho抑制剂组大鼠脑组织中Rho和ROCKmRNA及蛋白表达水平及其p-MLC/MLC比值降低(P<0.05)。结论:OSAHS的间歇性缺氧状态可损伤神经功能,Rho/ROCK信号通路可能在OSAHS大鼠急性缺血性卒中发生中起一定作用。 展开更多
关键词 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征 急性缺血性卒中 小GTP结合蛋白 rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶 肌球蛋白轻链
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醛固酮通过激活RhoA/ROCK信号通路诱导大鼠肝星状细胞迁移 被引量:4
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作者 姬宏利 姬宏娟 王保健 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期812-816,共5页
目的探讨醛固酮(ALD)诱导大鼠肝星状细胞系HSC-T6细胞迁移的作用及其机制。方法HSC-T6细胞分为阴性对照组、ALD单独处理组、安体舒通预处理组、Y27632预处理组。对照组仅用无血清DMEM培养,其余各组给予1 nmol/L ALD刺激24 h,但安体舒通... 目的探讨醛固酮(ALD)诱导大鼠肝星状细胞系HSC-T6细胞迁移的作用及其机制。方法HSC-T6细胞分为阴性对照组、ALD单独处理组、安体舒通预处理组、Y27632预处理组。对照组仅用无血清DMEM培养,其余各组给予1 nmol/L ALD刺激24 h,但安体舒通和Y27632预处理分别在ALD刺激前,分别给予10 nmol/L安体舒通或Y27632预处理1 ho TransweU™实验观察细胞迁移情况、罗丹明标记的鬼笔环肽染色观察细胞纤维型肌动蛋白(F-actin)的分布、激光共聚焦显微镜观察细胞骨架的变化;Western blot法检测细胞Rh。激酶通路上肌球蛋白轻链(MLC)、膜突蛋白(moesin)磷酸化水平。结果ALD处理的HSC-T6细胞迁移增加、F-actin数量增加、MLC和moesin蛋白的磷酸化增强。安体舒通和Y27632均可显著抑制以上作用并抑制MLC和moesin蛋白的磷酸化,两组的抑制效应无明显差别。结论ALD诱导的肝星状细胞的迁移可能与Ras同源蛋白A/Rh。相关卷曲蛋白激酶(RhoA/ROCK)信号通路的激活有关。 展开更多
关键词 醛固酮 Ras同源蛋白A/rho相关卷曲蛋白激酶(rhoA/ROCK)信号通路 细胞迁移
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沉默Ras同源物家族成员C对唾液腺腺样囊性癌增殖、侵袭和迁移的影响
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作者 于汶源 赵鹏 +6 位作者 邵禹 徐勇 徐进 谢磊 于承浩 何秋萍 陈正岗 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期723-734,共12页
目的探讨沉默Ras同源物家族成员C(RhoC)对唾液腺腺样囊性癌(SACC)增殖、凋亡、侵袭、迁移和上皮-间充质转化(EMT)的影响及其分子机制。方法选择2019年1月1日—2024年3月1日于青岛市市立医院手术切除的SACC病灶和正常唾液腺组织各27例,... 目的探讨沉默Ras同源物家族成员C(RhoC)对唾液腺腺样囊性癌(SACC)增殖、凋亡、侵袭、迁移和上皮-间充质转化(EMT)的影响及其分子机制。方法选择2019年1月1日—2024年3月1日于青岛市市立医院手术切除的SACC病灶和正常唾液腺组织各27例,通过蛋白免疫印迹(Western blot)和免疫组织化学法检测RhoC的表达水平。针对RhoC基因序列设计3条小干扰RNA(siRNA),转染至SACC-LM和SACC-83细胞系中并评估转染效率。通过Western blot比较RhoC、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、扭曲家族bHLH转录因子1(TWIST1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达水平。CCK-8实验、流式细胞术、Transwell侵袭实验、伤口愈合实验分别检测各组细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的差异。生物信息学方法预测RhoC可能的上游微小RNA(miRNA)及其在SACC中的表达情况,双荧光素酶报告基因实验验证二者的结合位点。结果RhoC在SACC中的表达显著上升(P<0.05)。沉默RhoC后,实验组ROCK1、p-p38MAPK、TWIST1、N-cadherin、Vimentin的表达显著下降,E-cadherin的表达显著上升(P<0.05);p38MAPK的表达无明显差异(P>0.05);细胞增殖、侵袭和迁移能力显著下降,凋亡率显著上升(P<0.05)。miR-138-5p在SACC中低表达,miR-138-5p micmic可以显著下调转染RhoC野生型质粒后293T细胞的荧光素酶活性(P<0.05)。结论RhoC在SACC中高表达,沉默RhoC可能靶向下游ROCK1/p38MAPK/TWIST1信号通路从而抑制SACC的增殖、侵袭、迁移和EMT,同时促进其凋亡。miR-138-5p在SACC中低表达,是RhoC潜在的上游基因,二者可能存在结合位点。 展开更多
关键词 唾液腺腺样囊性癌 Ras同源物家族成员C rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1 上皮-间充质转化 miR-138-5p
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Rock2对细胞周期检查点Cdc25A的调节作用 被引量:5
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作者 刘天德 余新 +3 位作者 袁荣发 王庆诺 杨志强 邵江华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期961-968,共8页
目的:探讨肝癌细胞中Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock2)对细胞周期检查点细胞分裂周期蛋白25A(Cdc25A)的调节作用。方法:Western blotting检测51对肝癌及癌旁组织中Rock2与Cdc25A的蛋白表达情况。构建并筛选shRock2干扰质粒,稳定转染... 目的:探讨肝癌细胞中Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock2)对细胞周期检查点细胞分裂周期蛋白25A(Cdc25A)的调节作用。方法:Western blotting检测51对肝癌及癌旁组织中Rock2与Cdc25A的蛋白表达情况。构建并筛选shRock2干扰质粒,稳定转染到人肝细胞癌Huh-7和HepG2细胞中,Western blotting检测Cdc25A蛋白表达变化;针对Rock2干扰序列,利用PCR定点突变技术进行碱基突变,构建Rock2突变质粒从而"恢复"Rock2表达,分析Cdc25A蛋白表达变化并用MTT法检测肝癌细胞增殖的改变。Western blotting检测Rock2稳定低表达的肝癌细胞中检查点激酶1(Chk1)和检查点激酶2(Chk2)蛋白的变化,免疫共沉淀及免疫荧光分析Rock2与Cdc25A的相互作用。结果:Rock2与Cdc25A蛋白在肝癌组织中较癌旁组织呈现高表达,而且两者呈正相关。肝癌细胞中稳定低表达Rock2后,Cdc25A蛋白表达明显下降;"恢复"Rock2表达后,Cdc25A蛋白表达增加而且肝癌细胞也出现增殖加快现象。Rock2低表达对Chk1和Chk2蛋白变化无明显影响。免疫共沉淀表明Rock2与Cdc25A直接相互作用,免疫荧光检测表明Rock2与Cdc25A存在共定位。结论:Rock2对细胞周期检查点Cdc25A起直接的正向调控作用,而且不依赖于Chk1/Chk2,可能为肝癌基因表达调控研究提供新的靶基因。 展开更多
关键词 rho相关卷曲螺旋蛋白激酶2 细胞分裂周期蛋白25A 细胞周期 肝肿瘤
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shRNA沉默ROCK1和ROCK2表达对缺氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响 被引量:4
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作者 孙国芳 丁浩 +4 位作者 李菊香 洪葵 董家龙 吴清华 程晓曙 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期2307-2312,共6页
目的:探讨Rho相关的卷曲蛋白激酶(ROCK1)和ROCK2在缺氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法:原代培养大鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定。将ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA瞬时转染细胞,48 h后给予缺氧6 h处理。实... 目的:探讨Rho相关的卷曲蛋白激酶(ROCK1)和ROCK2在缺氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法:原代培养大鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定。将ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA瞬时转染细胞,48 h后给予缺氧6 h处理。实验分为5组:(1)空白对照组;(2)缺氧组;(3)缺氧+阴性对照shRNA组;(4)缺氧+ROCK1-shRNA组;(5)缺氧+ROCK2-shRNA组。用倒置显微镜观察心肌细胞搏动频率与节律;用全自动生化分析仪测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量;用MTT检测细胞存活率;用流式细胞仪检测细胞凋亡率;用Western blotting检测ROCK1和ROCK2的表达,并检测caspase-3和p-PI3K的表达情况。结果:鉴定证实大鼠心肌细胞原代培养成功。缺氧损伤后心肌细胞搏动频率较对照组明显减慢,搏动幅度减弱,节律不规整(P<0.01),而ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.05或P<0.01)。全自动生化分析仪检测发现,缺氧能导致细胞培养液LDH含量升高(P<0.01),而ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.01)。MTT检测发现,缺氧能导致心肌细胞存活率降低(P<0.05),而ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.05)。流式细胞仪检测发现,缺氧能导致心肌细胞凋亡率升高(P<0.01),而ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.05或P<0.01)。Western blotting检测发现,ROCK1-shRNA的转染能降低ROCK1的表达(P<0.05),ROCK2-shRNA的转染能降低ROCK2的表达(P<0.01);缺氧能导致caspase-3表达升高(P<0.05)、p-PI3K表达降低(P<0.01),ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.05或P<0.01)。结论:ROCK1和ROCK2表达下调能抑制缺氧损伤导致的大鼠心肌细胞凋亡,其机制与抑制caspase-3活化和增强p-PI3K的表达有关。 展开更多
关键词 rho相关卷曲蛋白激酶 心肌细胞 SHRNA 缺氧 细胞凋亡
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ROCK在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响 被引量:4
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作者 钟立 孙彤 刘祖翠 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1537-1541,共5页
目的:探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(Rho-associated coiled-coil forming protein kinase,ROCK)在人卵巢癌组织中的表达及其对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响。方法:免疫组化SP法检测ROCK在80例人卵巢上皮性肿瘤中的表达。用ROC... 目的:探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(Rho-associated coiled-coil forming protein kinase,ROCK)在人卵巢癌组织中的表达及其对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响。方法:免疫组化SP法检测ROCK在80例人卵巢上皮性肿瘤中的表达。用ROCK抑制剂Fasudil处理SKOV3细胞,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分析细胞凋亡水平,分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3)活性,Western blot检测凋亡相关蛋白p53表达,比较不同浓度Fasudil对细胞增殖、细胞凋亡、caspase-3活性以及凋亡相关蛋白表达的影响。结果:ROCK在恶性卵巢上皮性肿瘤的阳性表达明显高于良性肿瘤(χ2=20.961,P=0.000),在晚期上皮性卵巢癌组织中其表达高于早期肿瘤(χ2=16.675,P=0.000)。不同浓度Fasudil处理组SKOV3细胞24 h增殖抑制率和凋亡率均明显高于未加药组(F=402.537,P=0.000;F=124.251,P=0.000),并均随药物浓度增加而逐渐升高,且Fasudil呈浓度依赖性地增强caspase-3活性(F=32.423,P=0.000)和p53蛋白的表达(F=31.599,P=0.000)。结论:ROCK在卵巢癌组织中有较高表达,可能在卵巢癌细胞增殖和凋亡抑制中扮演一定角色。 展开更多
关键词 卵巢癌 rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶 增殖 凋亡
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miR-93-5p靶向下调ROCK2表达对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、迁移和侵袭的影响 被引量:2
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作者 杨舟 林书典 +3 位作者 詹宇威 肖璐 符克英 黄小蝶 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期665-674,共10页
目的:探讨miR-93-5p对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLSs)增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其可能的机制。方法:选择类风湿性关节炎(RA)患者(RA组,n=37)和接受关节置换手术的关节创伤患者(对照组,n=30)作为研究对象,从RA患者滑膜组... 目的:探讨miR-93-5p对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLSs)增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其可能的机制。方法:选择类风湿性关节炎(RA)患者(RA组,n=37)和接受关节置换手术的关节创伤患者(对照组,n=30)作为研究对象,从RA患者滑膜组织分离出RA-FLSs,采用免疫荧光法和流式细胞术鉴定细胞。将RA-FLSs分为空白组、mimics NC组(转染miR-93-5p mimics NC)、mimics组(转染miR-93-5p mimics)、OE-NC组(转染ROCK2过表达空载质粒)、OE-Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(ROCK)2组(转染ROCK2过表达质粒)、mimics+OE-NC组(共转染miR-93-5p mimics和ROCK2过表达空载质粒)和mimics+OE-ROCK2组(共转染miR-93-5p mimics和ROCK2过表达质粒)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组患者滑膜组织和各组细胞中miR-93-5p和ROCK2 mRNA表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,EdU染色检测各组细胞中EdU阳性细胞率,Transwell小室实验检测各组RA-FLSs迁移和侵袭数,Western blotting法检测各组细胞中ROCK2、Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-93-5p与ROCK2之间的靶向关系。结果:免疫荧光法检测,Vimentin蛋白表达呈阳性。流式细胞术检测,第3代RA-FLSs表面CD55呈阳性表达,CD14和CD68呈阴性表达,证实分离的细胞为RA-FLSs。RT-qPCR法检测,与对照组比较,RA组患者滑膜组织中miR-93-5p表达水平明显降低(P<0.01),ROCK2 mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。与空白组和mimics NC组比较,mimics组细胞中miR-93-5p表达水平明显升高(P<0.01),ROCK2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。CCK-8法和EdU染色检测,与mimics NC组比较,mimics组细胞增殖活性和EdU阳性细胞率明显降低(P<0.01),OE-ROCK2组细胞增殖活性和EdU阳性细胞率明显升高(P<0.01);与mimics组比较,mimics+OE-ROCK2组细胞增殖活性和EdU阳性细胞率明显升高(P<0.01)。Transwell小室实验检测,与mimics NC组比较,mimics组RA-FLSs的迁移和侵袭数明显减少(P<0.01),OE-ROCK2组RA-FLSs的迁移和侵袭数明显增加(P<0.01);与mimics组比较,mimics+OE-ROCK2组RA-FLSs的迁移和侵袭数明显增加(P<0.01)。Western blotting法检测,与mimics NC组比较,mimics组细胞中ROCK2、Ki-67、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显降低(P<0.01),OE-ROCK2组细胞中ROCK2、Ki-67、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与mimics组比较,mimics+OE-ROCK2组细胞中ROCK2、Ki-67、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。miR-93-5p与ROCK2-3’-UTR之间存在靶向结合位点。双荧光素酶报告实验验证转染miR-93-5p mimic可明显降低ROCK野生型(ROCK2-WT)组细胞中荧光素酶活性(P<0.01)。结论:过表达miR-93-5p通过靶向下调ROCK2表达抑制RA-FLSs的增殖、迁移和侵袭。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞 微小RNA-93-5p rho相关螺旋卷曲蛋白激酶 细胞迁移 细胞侵袭
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不同生长期小鼠胸腺T细胞不同亚群的变化及ROCK抑制剂对衰老小鼠胸腺再生的促进作用 被引量:3
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作者 曾艳 陈昌蓉 +5 位作者 姜晓玲 刘美 童晨曦 朱小康 宋银宏 杜德兵 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期16-23,共8页
目的研究各发育阶段小鼠胸腺细胞、胸腺上皮细胞(TEC)和脾脏中T细胞的变化,探索Rho相关卷曲蛋白激酶(ROCK)抑制剂对衰老小鼠胸腺再生的作用。方法取幼年、青年、中年及老年期C57BL/6雌鼠的胸腺和脾脏,流式细胞术分析小鼠胸腺细胞、TEC... 目的研究各发育阶段小鼠胸腺细胞、胸腺上皮细胞(TEC)和脾脏中T细胞的变化,探索Rho相关卷曲蛋白激酶(ROCK)抑制剂对衰老小鼠胸腺再生的作用。方法取幼年、青年、中年及老年期C57BL/6雌鼠的胸腺和脾脏,流式细胞术分析小鼠胸腺细胞、TEC及脾脏中T细胞亚群;ROCK抑制剂体外处理衰老进程中小鼠TEC,荧光酶联斑点分析仪观察细胞增殖情况;ROCK抑制剂处理20月龄衰老小鼠,流式细胞术检测小鼠胸腺细胞、TEC及脾脏中T细胞亚群的变化。结果随月龄增加,胸腺细胞、TEC总数及各细胞亚群数量均显著降低;脾脏中总CD4^(+)T细胞及CD8^(+)T细胞比例无显著性改变,但CD4+初始T细胞、CD8+初始T细胞和CD4+近期胸腺迁出细胞(RTE)在脾脏中所占比例呈下降趋势;ROCK抑制剂在体外促进衰老进程中小鼠TEC增殖,ROCK抑制剂在体内使衰老小鼠胸腺细胞、TEC以及外周脾脏中T淋巴细胞各亚群数量明显增加。结论随着小鼠月龄增加,胸腺呈进行性退化。ROCK抑制剂可以显著缓解衰老小鼠胸腺的萎缩,促进衰老小鼠胸腺再生。 展开更多
关键词 胸腺 胸腺上皮细胞 rho相关卷曲蛋白激酶(ROCK)抑制剂 衰老 再生
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