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携带OX40L重组溶瘤病毒的构建及靶向杀伤肝癌的研究
1
作者
杨豪
邓卓雅
+6 位作者
孙芳
雷光林
程晋霞
于洪妤
田崇瑜
张绍庚
杨鹏辉
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2022年第12期2387-2397,共11页
目的拯救携带OX40L的重组溶瘤流感病毒株,全面鉴定并评价其靶向杀伤肝癌细胞的效果。方法将编码OX40L的基因片段嵌合在A/Puerto Rico/8/34(PR8)的NS片段特定位置,利用反向遗传学技术(reverse genetics,RG),与PR8流感病毒的剩余7个骨架质...
目的拯救携带OX40L的重组溶瘤流感病毒株,全面鉴定并评价其靶向杀伤肝癌细胞的效果。方法将编码OX40L的基因片段嵌合在A/Puerto Rico/8/34(PR8)的NS片段特定位置,利用反向遗传学技术(reverse genetics,RG),与PR8流感病毒的剩余7个骨架质粒pHW191-PB2、pHW192-PB1、pHW193-PA、pHW194-HA、pHW195-NP、p HW196-NA、p HW197-M共转染COSⅠ/MDCK细胞,成功拯救获得重组溶瘤流感病毒,命名为r Flu-OX40L。经血凝、TCID_(50)方法测定病毒滴度;重组病毒纯化后电镜观察病毒形态特征及大小分布;检测MDCK细胞病毒生长曲线;MTS法检测重组病毒对肝癌细胞活力的影响;流式细胞术检测重组病毒诱导肝癌细胞死亡方式;利用肝癌荷瘤小鼠模型评价重组病毒r Flu-OX40L在动物体内的抗肿瘤效果。结果重组溶瘤流感病毒rFlu-OX40L可在鸡胚中稳定传代,HA效价达2^(7~8),病毒滴度可达7~8 Lg TCID_(50)/ml;重组病毒rFlu-OX40L与流感病毒PR8生长曲线相一致,72 h达高峰;MTS结果显示,3 MOI重组病毒可显著降低肝癌细胞活力,且对正常肝细胞无明显影响,呈时间和剂量依赖性;流式细胞结果显示,重组病毒可显著诱导肝癌细胞凋亡,呈时间和剂量依赖性;利用肝癌荷瘤小鼠模型,瘤内注射重组溶瘤流感病毒rFlu-OX40L较PR8、PBS对照组,小鼠脾细胞中CD3+、CD4+、CD8+、CD45+、CD69+T细胞数量呈现显著升高趋势。结论携带OX40L的重组溶瘤流感病毒rFlu-OX40L在体内外均可选择性杀伤肝癌细胞,有望为肝癌的临床治疗提供新的免疫治疗策略。
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关键词
溶瘤病毒
流感病毒
rg技术
OX40L
肝癌
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题名
携带OX40L重组溶瘤病毒的构建及靶向杀伤肝癌的研究
1
作者
杨豪
邓卓雅
孙芳
雷光林
程晋霞
于洪妤
田崇瑜
张绍庚
杨鹏辉
机构
中国人民解放军总医院第五医学中心
河北北方学院
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2022年第12期2387-2397,共11页
基金
北京市自然科学基金(7202194)资助项目。
文摘
目的拯救携带OX40L的重组溶瘤流感病毒株,全面鉴定并评价其靶向杀伤肝癌细胞的效果。方法将编码OX40L的基因片段嵌合在A/Puerto Rico/8/34(PR8)的NS片段特定位置,利用反向遗传学技术(reverse genetics,RG),与PR8流感病毒的剩余7个骨架质粒pHW191-PB2、pHW192-PB1、pHW193-PA、pHW194-HA、pHW195-NP、p HW196-NA、p HW197-M共转染COSⅠ/MDCK细胞,成功拯救获得重组溶瘤流感病毒,命名为r Flu-OX40L。经血凝、TCID_(50)方法测定病毒滴度;重组病毒纯化后电镜观察病毒形态特征及大小分布;检测MDCK细胞病毒生长曲线;MTS法检测重组病毒对肝癌细胞活力的影响;流式细胞术检测重组病毒诱导肝癌细胞死亡方式;利用肝癌荷瘤小鼠模型评价重组病毒r Flu-OX40L在动物体内的抗肿瘤效果。结果重组溶瘤流感病毒rFlu-OX40L可在鸡胚中稳定传代,HA效价达2^(7~8),病毒滴度可达7~8 Lg TCID_(50)/ml;重组病毒rFlu-OX40L与流感病毒PR8生长曲线相一致,72 h达高峰;MTS结果显示,3 MOI重组病毒可显著降低肝癌细胞活力,且对正常肝细胞无明显影响,呈时间和剂量依赖性;流式细胞结果显示,重组病毒可显著诱导肝癌细胞凋亡,呈时间和剂量依赖性;利用肝癌荷瘤小鼠模型,瘤内注射重组溶瘤流感病毒rFlu-OX40L较PR8、PBS对照组,小鼠脾细胞中CD3+、CD4+、CD8+、CD45+、CD69+T细胞数量呈现显著升高趋势。结论携带OX40L的重组溶瘤流感病毒rFlu-OX40L在体内外均可选择性杀伤肝癌细胞,有望为肝癌的临床治疗提供新的免疫治疗策略。
关键词
溶瘤病毒
流感病毒
rg技术
OX40L
肝癌
Keywords
oncolytic virus
influenza virus
rg
technology
OX40L
liver cancer
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
携带OX40L重组溶瘤病毒的构建及靶向杀伤肝癌的研究
杨豪
邓卓雅
孙芳
雷光林
程晋霞
于洪妤
田崇瑜
张绍庚
杨鹏辉
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2022
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