番茄环纹斑点病毒RdRP蛋白多抗制备

1

作者 张春雨 刘悦 +3 位作者 张博轩 李小宇 宋景荣 王永志 《中国蔬菜》 北大核心 2025年第6期157-161,共5页

番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)的依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRP)是病毒复制和转录的核心酶。本研究通过原核表达RdRP的部分片段并制备多克隆抗体,旨在为TZSV的检测和诊断提供关键材料,并为... 番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)的依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRP)是病毒复制和转录的核心酶。本研究通过原核表达RdRP的部分片段并制备多克隆抗体,旨在为TZSV的检测和诊断提供关键材料,并为后续研究RdRP在病毒基因表达调控以及病毒与宿主互作等方面的作用奠定基础。结果表明:从TZSV染病番茄中扩增出大小为903 bp的TZSV RdRP-a片段,原核表达获得大小为36 kDa的重组蛋白;蛋白纯化后免疫小鼠,制备多克隆抗体,获得的多抗血清效价可达到1∶128000;经Western blot鉴定,所制备的多克隆抗体能够特异性识别TZSV-RdRP重组蛋白和天然TZSV。 展开更多

关键词 番茄环纹斑点病毒 rdrp 原核表达 多克隆抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料

抗Ⅰ型鸭肝炎病毒RdRp蛋白噬菌体单链抗体库构建及单链抗体的淘选 被引量：5

2

作者 王永娟 李碧春 +2 位作者 沈明君 洪伟鸣 左伟勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期334-338,共5页

为构建抗1型鸭肝炎病毒(DHV-1)RdRp蛋白的单链抗体(scFv)库,并淘选特异性scFv,本研究采用RT-PCR方法从DHV-1基因组中扩增Rd Rp基因,将其克隆于pET-32a载体中进行重组RdRp蛋白原核表达。将纯化的重组蛋白免疫小鼠,以提取的免疫鼠脾脏总RN... 为构建抗1型鸭肝炎病毒(DHV-1)RdRp蛋白的单链抗体(scFv)库,并淘选特异性scFv,本研究采用RT-PCR方法从DHV-1基因组中扩增Rd Rp基因,将其克隆于pET-32a载体中进行重组RdRp蛋白原核表达。将纯化的重组蛋白免疫小鼠,以提取的免疫鼠脾脏总RNA为模板,利用抗体轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)简并引物,经RT-PCR扩增抗体的VL和VH编码序列,由Linker序列连接,通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)扩增完整的sc Fv基因(VL-Linker-VH)。将扩增的scFv基因克隆于pCANTAB5E载体中构建噬菌体scFv文库,利用纯化的重组RdRp蛋白开展4轮吸附-洗脱-富集以淘选抗RdRp的ScFv;最后对淘选到的阳性ScFv进行可溶性表达,以ELISA方法检测其免疫结合活性。结果显示,获得了7株具有良好抗原结合活性的ScFv。淘选到的DHV-1 RdRp特异的基因工程ScFv,为鸭病毒性肝炎防制新策略研究奠定了基础。 展开更多

关键词 Ⅰ型鸭肝炎病毒 rdrp 噬菌体抗体库 单链抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料

阴道毛滴虫病毒RDRP基因的克隆与分析 被引量：1

3

作者 赵月平 张西臣 +2 位作者 李建华 尹继刚 宫鹏涛 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期42-44,共3页

目的对阴道毛滴虫病毒RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)基因的克隆,以便探讨其功能。方法提取阴道毛滴虫总核酸为模板,根据所克隆的阴道毛滴虫病毒部分序列和GenBank中发表的阴道毛滴虫病毒TVV-T1序列设计一对引物,经RT-PCR得到与预计大小一致... 目的对阴道毛滴虫病毒RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)基因的克隆,以便探讨其功能。方法提取阴道毛滴虫总核酸为模板,根据所克隆的阴道毛滴虫病毒部分序列和GenBank中发表的阴道毛滴虫病毒TVV-T1序列设计一对引物,经RT-PCR得到与预计大小一致的PCR特异性产物,将其克隆到pMD-18T载体后测序,并与GenBank中核苷酸序列进行同源性搜索与分析。结果目的基因片段长度为2271bp,与阴道毛滴虫病毒T1株(U08999)的同源性最高为85.2%。结论国内首次成功克隆出阴道毛滴虫病毒RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)基因序列。 展开更多

关键词 阴道毛滴虫病毒 rdrp 克隆 分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪繁殖与呼吸综合征病毒RdRp基因的克隆与原核表达 被引量：1

4

作者 蔡汝健 宋长绪 +2 位作者 郝永清 杨鼎 何锦玲 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第2期16-18,共3页

将猪繁殖与呼吸综合征病毒RNA依赖性的RNA聚合酶(RdRp)基因进行克隆、表达,并获得纯化重组蛋白,为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒RdRp的功能奠定基础。以RdRp基因cDNA为模板,用PCR扩增出RdRp基因片段,应用定向克隆策略将扩增后片段... 将猪繁殖与呼吸综合征病毒RNA依赖性的RNA聚合酶(RdRp)基因进行克隆、表达,并获得纯化重组蛋白,为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒RdRp的功能奠定基础。以RdRp基因cDNA为模板,用PCR扩增出RdRp基因片段,应用定向克隆策略将扩增后片段与高效表达载体pET32a(+)重组,阳性克隆重组质粒经酶切及测序鉴定,IPTG诱导高效表达。PCR法扩增出720 bp的片段,酶切及测序鉴定获得正确的重组质粒,在大肠埃希菌LB21中表达得到分子质量约为46 ku的融合蛋白。成功克隆及表达了猪繁殖与呼吸综合征病毒RdRp基因。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 rdrp基因 克隆 原核表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

家蚕质型多角体病毒RDRP基因的序列测定及同源性分析 被引量：1

5

作者 孙京臣 杨艺峰 +4 位作者 戴伟君 谭玉蓉 张勤奋 张景强 徐兴耀 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期53-58,共6页

应用分段RTPCR方法和分子克隆技术从家蚕质型多角体病毒(Bombyxmoricytoplasmicpolyhedrosisvirus,BmCPV)中国株的dsRNA中成功地分3段克隆了RDRP基因(RNAdependentRNApolymerase),大小分别为1442、827、1675bp,进行了基因全序列拼接,获... 应用分段RTPCR方法和分子克隆技术从家蚕质型多角体病毒(Bombyxmoricytoplasmicpolyhedrosisvirus,BmCPV)中国株的dsRNA中成功地分3段克隆了RDRP基因(RNAdependentRNApolymerase),大小分别为1442、827、1675bp,进行了基因全序列拼接,获得37kb的全长RDRP基因(GenBank序列号为AY496445)。通过在线blast分析,与BmCPV1、DpCPV1、LdCPV1、LdCPV14、TnCPV15核苷酸同源性分别为89%、81%、81%、541%和509%,氨基酸同源性分别为965%、931%、929%、411%和335%。根据核苷酸同源性与氨基酸同源性构建的进化树具有较好的一致性。通过ClustalX软件分析,定位了该病毒RDRP基因的3个保守区域(酸性区,核苷酸结合的核心区和催化功能核心区)。 展开更多

关键词 家蚕质型多角体病毒 DSRNA rdrp基因 同源性

在线阅读 下载PDF 职称材料

RNA依赖的RNA聚合酶(RdRP)与非编码RNA(ncRNA)调控的研究进展 被引量：6

6

作者 丁超 张兰 +1 位作者 曹洁 于文强 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期256-261,共6页

RNA依赖的RNA聚合酶(RNA dependent RNA polymerase,RdRP)是一类以单链RNA为模板合成互补RNA链的聚合酶。根据其来源可分为病毒RdRP和细胞RdRP,病毒RdRP对病毒基因组复制及病毒引起的宿主免疫反应有重要作用,宿主细胞RdRP主要参与RNA干... RNA依赖的RNA聚合酶(RNA dependent RNA polymerase,RdRP)是一类以单链RNA为模板合成互补RNA链的聚合酶。根据其来源可分为病毒RdRP和细胞RdRP,病毒RdRP对病毒基因组复制及病毒引起的宿主免疫反应有重要作用,宿主细胞RdRP主要参与RNA干扰(RNA interference,RNAi)现象。越来越多研究证明RdRP的功能与非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)密不可分,本文对病毒RdRP、细胞RdRP与ncRNA调控之间的关系作了较详细的阐述,同时对丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)诱发的肝癌机制提出新的观点。 展开更多

关键词 RNA依赖的RNA聚合酶(rdrp) 非编码RNA(ncRNA) RNA干扰(RNAI) 丙型肝炎病毒(HCV)

在线阅读 下载PDF 职称材料

两株GI.1型和GI.2型兔出血症病毒RdRp基因的克隆与分析 被引量：1

7

作者 庞雪晴 唐诗 +7 位作者 曾红梅 赵位 王印 罗燕 姚学萍 任梅渗 任永军 杨泽晓 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第6期1286-1296,共11页

为了解兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)RdRp基因的遗传稳定性和变异规律,本研究分别克隆了RHDV SCH04株和RHDV2 SCCN03株的RdRp基因,然后对基因序列进行比对和系统发育分析,并通过编码蛋白质的理化性质、信号肽、... 为了解兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)RdRp基因的遗传稳定性和变异规律,本研究分别克隆了RHDV SCH04株和RHDV2 SCCN03株的RdRp基因,然后对基因序列进行比对和系统发育分析,并通过编码蛋白质的理化性质、信号肽、跨膜区域、二级结构、三级结构、磷酸化和糖基化修饰位点的预测,对RdRp进行生物信息学分析。结果显示,两株RdRp基因序列全长均为1548 bp,编码516个氨基酸。GI.1型RHDV毒株间序列相似性为86.9%~99.9%,GI.2型RHDV毒株间为91.3%~99.9%。GI.1型和GI.2型RHDV毒株间序列相似性为84.3%~88.3%。SCH04株和SCCN03株分别属于GI.1a型和GI.2型RHDV,且SCH04株和SCCN03株的RdRp基因核苷酸序列相似性为84.95%,其编码蛋白存在17个氨基酸差异位点,氨基酸序列相似性为96.71%;二者均属于稳定蛋白,不存在信号肽和跨膜区域;其分子量、等电点、脂溶系数、平均亲水系数和不稳定系数等指标无显著差异。SCH04株RdRp的α螺旋和β转角比例比SCCN03株略高,分别为41.86%和4.26%,而SCCN03株RdRp的延伸链和无规则卷曲比例比SCH04株略高,分别为12.79%和43.41%;SCCN03株RdRp比SCH04株多4个磷酸化位点和1个N-糖基化位点。分析结果表明不同型间RHDV RdRp基因核苷酸变异率较高,GI.1 RHDV毒株间的变异范围大于GI.2 RHDV毒株。SCH04株和SCCN03株RHDV RdRp的氨基酸序列相似性高于核苷酸序列相似性,其二级结构和高级结构差异较小,遗传相对稳定。本研究为RHDV的遗传演变和生物合成等分子病原学研究提供了科学参考。 展开更多

关键词 兔出血症病毒 rdrp 对比分析 生物信息学分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

白狐源星状病毒RdRp基因的鉴定及遗传演化分析 被引量：1

8

作者 冀锦朝 黄勉 +4 位作者 卢刚 欧嘉俊 彭仕明 萨家祺 李守军 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期12-16,共5页

【目的】探究广州动物园一例死亡白狐Alopex lagopus肾脏中鉴定出的星状病毒的遗传变异情况。【方法】对死亡白狐进行剖检,利用半巢式RT-PCR对内脏器官进行病原学检测,对扩增出的病毒株的RdRp基因序列进行相似性分析。【结果】死亡白狐... 【目的】探究广州动物园一例死亡白狐Alopex lagopus肾脏中鉴定出的星状病毒的遗传变异情况。【方法】对死亡白狐进行剖检,利用半巢式RT-PCR对内脏器官进行病原学检测,对扩增出的病毒株的RdRp基因序列进行相似性分析。【结果】死亡白狐的肾脏苍白肿大,被膜难以剥离,肾脏中检测出的星状病毒RdRp基因呈阳性。RdRp基因与9株参考毒株的核苷酸相似性为67.5%~96.2%,其中与香港猫源星状病毒1637F的核苷酸相似性(96.2%)最高。【结论】本研究为星状病毒在野生哺乳动物间的跨种传播及肠外器官中的感染提供了依据。 展开更多

关键词 白狐 星状病毒 肾脏 野生哺乳动物 rdrp基因

在线阅读 下载PDF 职称材料

丙型肝炎病毒依赖于RNA的RNA聚合酶(RdRp)研究进展 被引量：2

9

作者 陈忠斌 王升启 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第6期605-608,共4页

由于缺乏合适的HCV感染细胞模型 ,严重制约了HCV复制 ,特别是HCV复制的关键因子依赖于RNA的RNA聚合酶 (RdRp)的研究 .对HCV序列比较分析并通过异源表达证明NS5B是HCV复制的RdRp .NS5BC端疏水性氨基酸区域以及NS5B与细胞膜形成复合体等影... 由于缺乏合适的HCV感染细胞模型 ,严重制约了HCV复制 ,特别是HCV复制的关键因子依赖于RNA的RNA聚合酶 (RdRp)的研究 .对HCV序列比较分析并通过异源表达证明NS5B是HCV复制的RdRp .NS5BC端疏水性氨基酸区域以及NS5B与细胞膜形成复合体等影响NS5B溶解性 .在合适的反应条件下NS5B可以多种RNA分子为模板催化RNA复制 ,特别是能有效复制HCV全长 (+ )RNA .高浓度GTP激活HCVRdRp活性 .NS5BN/C端缺失突变和保守性A、B、C区中的点突变影响RdRp活性 ,但D区 345位精氨酸突变为赖氨酸时RdRp活性明显升高 . 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白NS5B RNA聚合酶

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于处方挖掘与药效团模型的新型冠状病毒RdRp抑制成分筛选 被引量：3

10

作者 李婧 韦缤琪 +2 位作者 李可馨 苏学燕 张志锋 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1981-1991,共11页

本研究采用药效团模型对作用于新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RdRp靶点的常用中药成分进行筛选,寻找潜在活性成分。对临床常用抗新冠肺炎中药处方进行全面挖掘及筛选,分析统计常用药材及使用频数,利用中药系统药理学分析平台(TCMSP)及文献挖... 本研究采用药效团模型对作用于新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RdRp靶点的常用中药成分进行筛选,寻找潜在活性成分。对临床常用抗新冠肺炎中药处方进行全面挖掘及筛选,分析统计常用药材及使用频数,利用中药系统药理学分析平台(TCMSP)及文献挖掘的方式筛选“抗新冠候选活性成分”,以已报道的具有RdRp酶抑制活性的化合物作为训练集,建立基于RdRp配体的HipHop药效团模型,将候选成分与药效团进行匹配,采用分子对接技术对匹配到FitValue较高的化合物与SARS-CoV-2病毒RdRp蛋白进行对接并评估其相互作用。共搜集到临床常用中药处方31个,包含药材92种。通过TCMSP及文献挖掘得到药材中1384种候选活性成分。通过测试集验证的最优药效团02具有1个氢键供体及2个氢键受体,与候选成分匹配得到104种潜在RdRp抑制活性成分。选取FitValue较高且结合自由能较低的前30种化合物进行分析,发现liquiritin apioside、iridin、liquiritin、forsythiaside、procyanidin B-5,3′-O-gallate及saikosaponin C等成分具有较高的FitValue,可作为RdRp抑制的潜在活性成分。通过分类分析发现黄酮类结构可能是抑制RdRp的潜在活性基团。本研究通过构建药效团模型对常用抗新冠中药处方中抑制SARS-CoV-2 RdRp潜在活性成分进行了虚拟筛选,希望对抗SARS-CoV-2活性成分筛选提供参考思路。 展开更多

关键词 新型冠状病毒疾病 SARS-CoV-2 rdrp抑制剂 中药处方 药效团 分子对接

在线阅读 下载PDF 职称材料

鹅星状病毒RdRp蛋白对细胞因子转录水平的影响

11

作者 饶丹 尹磊 +4 位作者 吴佩 王媛媛 何书海 张宁 董建国 《江苏农业科学》 北大核心 2024年第7期164-168,共5页

为了解鹅星状病毒(GAstV)RdRp蛋白对细胞因子转录水平的影响,试验将构建的pCMV-RdRp真核质粒转染293细胞,并于转染后12、24、36 h收集细胞,提取核酸检测细胞内CCL2、CCL5、IL-1β、IFN-α、TNF-α、IFITM1和IFITM2的转录水平。结果发现,... 为了解鹅星状病毒(GAstV)RdRp蛋白对细胞因子转录水平的影响,试验将构建的pCMV-RdRp真核质粒转染293细胞,并于转染后12、24、36 h收集细胞,提取核酸检测细胞内CCL2、CCL5、IL-1β、IFN-α、TNF-α、IFITM1和IFITM2的转录水平。结果发现,GAstV RdRp蛋白于12、24、36 h极显著抑制CCL2转录,12 h极显著促进CCL5表达,24、36 h极显著抑制CCL5表达(P<0.01);GAstV RdRp蛋白于24、36 h极显著促进IL-1β转录(P<0.01);GAstV RdRp蛋白于12 h极显著促进IFN-α的转录,于24、36 h极显著抑制IFN-α转录(P<0.01);GAstV RdRp蛋白于12、24、36 h显著或极显著抑制TNF-α转录(P<0.01);GAstV RdRp蛋白于24 h极显著抑制IFITM1转录(P<0.01),于36 h显著抑制IFITM1转录(P<0.05),于12、36 h极显著促进IFITM2转录(P<0.01),于24 h极显著抑制IFITM2的转录(P<0.01)。表明GAstV RdRp蛋白过表达能够诱导IL-1β的转录,抑制CCL2、TNF-α和IFITM1的转录;GAstV RdRp蛋白早期促进CCL5和IFN-α的转录,后期抑制CCL5和IFN-α的转录;GAstV RdRp蛋白早期和晚期促进IFITM2转录,中期抑制IFITM2转录。 展开更多

关键词 鹅星状病毒 细胞因子 转录 rdrp蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

不同状态禽呼肠孤病毒的冷冻电镜结构研究

12

作者 刘京路 高立 +6 位作者 王有望 祁小乐 张雪利 包珂岩 高玉龙 王笑梅 朱平 《电子显微学报》 北大核心 2025年第1期10-17,共8页

禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)是一种双链RNA病毒,对家禽养殖业构成严重威胁。本文利用冷冻电镜技术解析了ARV病毒的完整病毒颗粒(virion)以及处于转录状态的病毒核心颗粒(T⁃core)的高分辨率三维结构。对比分析表明,ARV病毒virion和... 禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)是一种双链RNA病毒,对家禽养殖业构成严重威胁。本文利用冷冻电镜技术解析了ARV病毒的完整病毒颗粒(virion)以及处于转录状态的病毒核心颗粒(T⁃core)的高分辨率三维结构。对比分析表明,ARV病毒virion和T⁃core颗粒的塔状突起蛋白λC存在明显结构差异,显示其在病毒转录过程中的重要作用。在病毒转录态核心颗粒中,作者发现σA蛋白与双链RNA存在较强结合,并确认了起关键作用的氨基酸残基。同时,分析了ARV病毒内部转录酶复合体RdRP以及基因组三维结构,获得了处于转录过程中ARV病毒核心颗粒内部基因组的三维分布. 展开更多

关键词 禽呼肠孤病毒 冷冻电镜 塔状突起 rdrp 双链RNA

在线阅读 下载PDF 职称材料

烟草靶斑病菌株zlcy-2中真菌病毒鉴定及弱毒特性研究

13

作者 肖艳松 杨志娟 +5 位作者 苏家恩 尹秀娟 王迎 钟杰 刘天波 陈颐 《中国烟草学报》 北大核心 2025年第3期115-122,共8页

【目的】筛选防治烟草靶斑病的真菌病毒。【方法】对烟草靶斑病菌进行致病力测定、dsRNA提取、病毒基因组测序等获得含病毒的弱毒菌株,经水平传染确定病毒引致的弱毒特性,并测定弱毒菌株的防病效果。【结果】获得了1个含有dsRNA的弱毒菌... 【目的】筛选防治烟草靶斑病的真菌病毒。【方法】对烟草靶斑病菌进行致病力测定、dsRNA提取、病毒基因组测序等获得含病毒的弱毒菌株,经水平传染确定病毒引致的弱毒特性,并测定弱毒菌株的防病效果。【结果】获得了1个含有dsRNA的弱毒菌株zlcy-2,其至少含有5种病毒。它们与线粒体病毒科(Mitoviridae)、葡萄孢欧尔密病毒科(Botourmiaviridae)以及双分体病毒科(Partitiviridae)病毒有96%以上的相似性,推测属于已知病毒的不同株系,分别命名为Rhizoctonia solani mitovirus zlcy-2(RsMzlcy-2),Rhizoctonia solani partitivirus 8-zlcy-2(RsPV8-zlcy-2),Rhizoctonia solani virus 717-zlcy-2(RhsV717-zlcy-2),Rhizoctonia solani botourmiavirus virus 9(RsBV9)和Rhizoctonia solani partitivirus zlcy-2A(RsPV zlcy-2A)。zlcy-2中病毒可以水平传染,能引起菌株弱毒力。通过对携带不同病毒的衍生后代菌株致病力比较,推测zlcy-2中至少RsMzlcy-2和Rs RV8-zlcy-2与寄主弱毒特性相关。离体接种防效发现zlcy-2预处理能明显抑制烟草靶斑病菌扩展。【结论】zlcy-2及其中的病毒具有生防潜力。 展开更多

关键词 烟草靶斑病 真菌病毒 RNA依赖的RNA聚合酶 弱毒特性 生物防治

在线阅读 下载PDF 职称材料

RNA干涉及其应用前景 被引量：20

14

作者 张利生 陈大元 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期341-344,共4页

RNA干涉是指由特定双链RNA(dsRNA)引起的转录后基因沉默现象。研究表明,Dicer断裂dsRNA产生的小干涉RNA可以抑制哺乳动物体细胞和胚胎中的基因的表达。RdRP在扩增RNAi中起着关键性的作用,RdRP活性复制较长的触发性dsRNA或以一种非引物... RNA干涉是指由特定双链RNA(dsRNA)引起的转录后基因沉默现象。研究表明,Dicer断裂dsRNA产生的小干涉RNA可以抑制哺乳动物体细胞和胚胎中的基因的表达。RdRP在扩增RNAi中起着关键性的作用,RdRP活性复制较长的触发性dsRNA或以一种非引物的方式复制短的siRNA,即以siRNA为引物的RdRP反应使靶mRNA转变为dsRNA,同时复制触发性dsRNA。所有的产物又可作为Dicer的底物,起始RdRP级联反应。本文综述了RNAi可能的作用机制,并对RNAi在分析功能基因组、药物治疗等方面的应用前景进行了展望。 展开更多

关键词 RNA干涉 双链RNA DSRNA 转录 基因沉默 DICER酶 rdrp活性 功能基因组 作用机制 RNAI

在线阅读 下载PDF 职称材料

RNA干扰机制及其主要蛋白因子研究进展 被引量：10

15

作者 和琼姬 燕飞 陈剑平 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第2期415-420,共6页

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)分子介导的、在mRNA水平上关闭相应序列基因表达、使其沉默的过程。RNAi作为一种古老而保守的基因沉默机制,广泛存在于真核生物体内,在细胞的发育调控、抗病毒防... RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)分子介导的、在mRNA水平上关闭相应序列基因表达、使其沉默的过程。RNAi作为一种古老而保守的基因沉默机制,广泛存在于真核生物体内,在细胞的发育调控、抗病毒防御、修复遗传损伤、调节正常的基因等生命过程中起着重要的作用。RNAi机制可以分为3个阶段:启动阶段、效应阶段及扩增阶段。RNAi干扰相关的主要蛋白因子有Dicer酶、Argonaute(AGO)蛋白家族和RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNApolymerase,RdRP)。文章对RNAi机制及其相关主要蛋白因子进行简要综述。 展开更多

关键词 RNAI DICER ARGONAUTE rdrp

在线阅读 下载PDF 职称材料

RNAi作用机制及应用研究进展 被引量：10

16

作者 冯小艳 张树珍 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期1-8,共8页

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由小非编码RNA(small non-coding RNA,snc RNA)诱发的基因沉默现象,广泛存在于真核生物中。RNAi现象自发现以来,很快成为生物学研究的热点,并取得了一定成果。就RNAi的作用机制、作用过程的关键因子及... RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由小非编码RNA(small non-coding RNA,snc RNA)诱发的基因沉默现象,广泛存在于真核生物中。RNAi现象自发现以来,很快成为生物学研究的热点,并取得了一定成果。就RNAi的作用机制、作用过程的关键因子及其应用的研究进展进行综述,以期为RNAi的进一步研究提供参考。 展开更多

关键词 RNAI 作用机制 DICER argonaute蛋白家族 rdrp

在线阅读 下载PDF 职称材料

草鱼呼肠孤病毒分离株HZ08基因组L节段的全长克隆与序列分析 被引量：3

17

作者 张超 王庆 +4 位作者 石存斌 曾伟伟 刘永奎 杨淞 吴淑勤 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第1期116-123,共8页

从浙江省湖州地区采集发病草鱼(Ctenopharyngodon idellus)样品,取症状明显病鱼的肝、脾、肾组织,经过滤除菌处理后接种草鱼肾脏细胞(CIK)进行病毒分离。盲传8代,CIK细胞未出现明显细胞病变,但感染细胞固定后经电镜观察发现,细胞质内有... 从浙江省湖州地区采集发病草鱼(Ctenopharyngodon idellus)样品,取症状明显病鱼的肝、脾、肾组织,经过滤除菌处理后接种草鱼肾脏细胞(CIK)进行病毒分离。盲传8代,CIK细胞未出现明显细胞病变,但感染细胞固定后经电镜观察发现,细胞质内有大量病毒聚集,病毒无囊膜,近球形,直径约70nm,形态与已报道的草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)相似。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示,病毒基因组由11个dsRNA组成,呈现水生呼肠孤病毒基因组典型特征。为了从分子水平上进一步了解该病毒的特性,应用单引物扩增技术获得了该病毒基因组L节段的全长。序列分析结果表明:完整的L1、L2、L3节段分别由3 927、3 870、3 753个碱基对组成,每个节段正链RNA仅含有1个开放阅读框,通过同源性比较,推测分别编码病毒的结构蛋白VP1、VP2、VP3,其中VP1推测为病毒RNA转录的鸟苷酸转移酶和甲基化酶,VP2为病毒的RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp),VP3为病毒NTP酶及解旋酶。3个推测结构蛋白的序列与GCRV 873株的同源性最高,分别为31%、45%、36%,并且具有与其他呼肠孤病毒相同的基序(motif)。各节段都具有相同的5'端和3'端保守序列,即5'-GUAAUUU......UUCAUC-3'。利用RdRp构建系统进化树,HZ08株与水生呼肠孤病毒聚为一簇,但单独列为1支,应为水生呼肠孤病毒属新成员。 展开更多

关键词 草鱼呼肠孤病毒 序列分析 RNA依赖性RNA聚合酶(rdrp)

在线阅读 下载PDF 职称材料

慢病毒介导siRNA抑制1型鸭肝炎病毒复制 被引量：1

18

作者 王永娟 董亚青 +4 位作者 朱善元 王安平 洪伟鸣 吴双 左伟勇 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期522-529,共8页

为筛选能抑制DHAV-1复制的siRNA,探索RNAi技术在鸭病毒性肝炎防治中的应用,采用PCR法扩增DHAV-1 RdRp基因,并构建pEGFP-RdRp融合表达EGFP-RdRp蛋白;根据RdRp的序列测定结果,设计3条RdRp特异siRNA,并合成相应shRNA分别插入pmiRZipΔ中构... 为筛选能抑制DHAV-1复制的siRNA,探索RNAi技术在鸭病毒性肝炎防治中的应用,采用PCR法扩增DHAV-1 RdRp基因,并构建pEGFP-RdRp融合表达EGFP-RdRp蛋白;根据RdRp的序列测定结果,设计3条RdRp特异siRNA,并合成相应shRNA分别插入pmiRZipΔ中构建pRdRp-shRNA;共转染pRdRp-shRNA和pEGFP-RdRp于HEK-293T细胞,通过荧光显微镜法、流式细胞术、相对荧光定量PCR法筛选抑制效率较高的siRNA;将高效siRNA用于病毒载体pmiRZip介导的慢病毒制备;通过计算重组慢病毒转导、DHAV-1感染的鸭胚胎成纤维细胞中病毒TCID50和RdRp基因表达量确定siRNA对病毒及病毒基因的抑制作用。结果显示,3个siRNA均能抑制RdRp基因的表达,包含GDD模体的shRNA2的抑制率最高,对应重组病毒能使DHAV-1的TCID50下降6.2lg,RdRp基因转录量下降89.6%,抑制时间至少达120h,为鸭病毒性肝炎临床防治提供了新思路。 展开更多

关键词 鸭病毒性肝炎 GDD模体 rdrp RNA干扰 siRNA

在线阅读 下载PDF 职称材料

Ⅰ型鸭肝炎病毒RNA聚合酶基因的克隆及原核表达

19

作者 王超 付玉志 +5 位作者 张伟伟 陈宗艳 李传峰 杨宗伟 吴润 刘光清 《中国动物传染病学报》 CAS 2011年第2期20-25,共6页

根据Ⅰ型鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus,DHV-Ⅰ）ZJ-Ⅴ株基因组序列（GenBank登录号：EF382778）,设计了一对扩增RNA聚合酶基因（RNA-dependent RNA polymerase,RdRp）的特异性引物,以ZJ-Ⅴ株基因组为模板,扩增DHV-Ⅰ的RdRp基因。运... 根据Ⅰ型鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus,DHV-Ⅰ）ZJ-Ⅴ株基因组序列（GenBank登录号：EF382778）,设计了一对扩增RNA聚合酶基因（RNA-dependent RNA polymerase,RdRp）的特异性引物,以ZJ-Ⅴ株基因组为模板,扩增DHV-Ⅰ的RdRp基因。运用DNAStar软件对ZJ-Ⅴ株病毒与GenBank上已发表的其他不同DHV毒株的RdRp基因序列进行同源性比较和遗传进化分析,结果表明,ZJ-Ⅴ株与A型DHV-ⅠR85952株（DQ226541）的同源性为97.1%,亲缘关系最近,与2株台湾新型（B型）DHV之间为76.9%和77.0%,与C-GY株和4株韩国新型（C型）DHV株之间为76.2%~76.5%,亲缘关系较远。将RdRp基因克隆至原核表达载体pET-32a（＋）,获得重组表达质粒pET-RdRp,转化宿主菌E.coli BL21（DE3）,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析结果显示RdRp蛋白分子量约为65 kDa,Western blot检测证明RdRp蛋白能与Ⅰ型鸭病毒性肝炎阳性血清产生特异性免疫反应,具有良好的免疫学活性。本文为进一步研究DHV-Ⅰ的复制机理奠定了基础。 展开更多

关键词 Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ) RNA聚合酶基因(rdrp) 原核表达 序列分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

马铃薯X病毒复制酶基因载体的构建及在烟草中的转化

20

作者 王俊杰 马美 施晓东 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第30期18622-18626,18636,共6页

[目的]构建马铃薯X病毒复制酶基因(RdRp)的载体,并将其在烟草中转化。[方法]将RdRp基因分为3个片段,分别连入表达载体中,其中基因5'端和3'端序列通过PCR方法获得,中间序列通过酶切从病毒载体pGR107上获得。最后将构建成功的载... [目的]构建马铃薯X病毒复制酶基因(RdRp)的载体,并将其在烟草中转化。[方法]将RdRp基因分为3个片段,分别连入表达载体中,其中基因5'端和3'端序列通过PCR方法获得,中间序列通过酶切从病毒载体pGR107上获得。最后将构建成功的载体转入烟草中进行表达。[结果]表达载体pK1390+RdRp被成功构建;获得PCR初步鉴定为转基因的植株50多棵。[结论]为研究植物病毒机制提供了依据,也为利用杂交手段得到外源蛋白高效表达的双转基因植物奠定了基础。 展开更多

关键词 PVX rdrp 载体构建 抗病毒 转基因

在线阅读 下载PDF 职称材料