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差异显示反转录PCR技术研究进展 被引量:15
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作者 赵锦荣 阎小君 苏成芝 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第1期28-32,共5页
分析一对细胞或组织在不同状态下基因表达的差异,已成为分子生物学研究领域的热点之一.近年来,用于识别差异表达基因的方法已发展起来多种.DDRTPCR是近年来较为广泛应用的一种技术.理论上,DDRTPCR技术比较简单,但实施起来却存在着假阳... 分析一对细胞或组织在不同状态下基因表达的差异,已成为分子生物学研究领域的热点之一.近年来,用于识别差异表达基因的方法已发展起来多种.DDRTPCR是近年来较为广泛应用的一种技术.理论上,DDRTPCR技术比较简单,但实施起来却存在着假阳性率高,凝胶中单条cDNA带成分不均一,所获cDNA仅代表着mRNA3′UT区(约300bp)以及一些低拷贝数mRNA不能有效被呈现等问题.对DDRTPCR技术的改良也主要集中在解决这些问题方面. 展开更多
关键词 MRNA 差异显示 DDRT-PCR 分子生物学 生物技术
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萝卜mRNA差异显示技术反应体系的优化及应用 被引量:5
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作者 张慧蓉 龚义勤 +4 位作者 柳李旺 杨金兰 黄丹琼 李培 宋闲勇 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2007年第1期76-80,共5页
以萝卜品种短叶十三为材料,对影响mRNA差异显示(DDRT—PCR)反应体系的主要因子进行优化试验,最终确定了优化体系(15μl):随机引物0.5μmol/L,锚定引物1.0μmol/L,dNTPs0.1—0.2mmol/L,Mg^2+1.5mmol/L,模板cDNA 15n... 以萝卜品种短叶十三为材料,对影响mRNA差异显示(DDRT—PCR)反应体系的主要因子进行优化试验,最终确定了优化体系(15μl):随机引物0.5μmol/L,锚定引物1.0μmol/L,dNTPs0.1—0.2mmol/L,Mg^2+1.5mmol/L,模板cDNA 15ng,TaqDNA聚合酶0.9U;并对PCR扩增程序中的复性温度进行梯度筛选,表明40℃较适合于萝卜mRNA差异显示(DDRT-PCR)反应体系。同时应用该优化体系分别对短叶十三花芽分化和扬花萝卜、春萝卜BYC抽薹过程中基因的差异表达进行初步分析。 展开更多
关键词 萝卜 差异显示技术 体系优化 应用
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用差异显示杂交技术筛选与造血相关的新基因 被引量:4
3
作者 汪思应 卢海妹 +5 位作者 郑红 王丹 胡兆平 许望翔 魏汉东 杨晓明 《安徽医科大学学报》 CAS 2000年第6期422-424,共3页
目的 建立 4月龄人胎肝组织差异表达基因EST库 ,并分离未知功能基因以寻找造血相关的新基因。方法 表达性差异显示技术 (RDA)、核苷酸序列分析、竞争PCR及Northern杂交。结果 建立了 4月龄人胎肝组织差异表达基因EST库。该文库富集... 目的 建立 4月龄人胎肝组织差异表达基因EST库 ,并分离未知功能基因以寻找造血相关的新基因。方法 表达性差异显示技术 (RDA)、核苷酸序列分析、竞争PCR及Northern杂交。结果 建立了 4月龄人胎肝组织差异表达基因EST库。该文库富集了造血及肝生长调控相关基因 ,部分克隆序列测定及分析表明该库含有重要的未知功能新基因 ,具有一株新基因可能与红细胞增殖、分化有关。结论 RDA技术为寻找新的基因提供了有效的手段。 展开更多
关键词 造血系统 RNA 差异显示杂交技术 EST库
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利用有序差异显示技术克隆受稻瘟病菌诱导表达的水稻cDNA的研究 被引量:3
4
作者 罗文永 李晓方 +3 位作者 胡骏 刘文华 肖昕 刘良式 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第7期635-642,共8页
利用有序差异显示技术 (ODD)分析受稻瘟病菌诱导表达的水稻基因 ,通过反式RNA印迹进行辅助筛选 ,获得了 37个在接种稻瘟病菌后表达量增强的水稻cDNA克隆 .采用RNA印迹对其中 5个克隆在接种稻瘟病菌后的表达分析表明 ,这些克隆在抗病以... 利用有序差异显示技术 (ODD)分析受稻瘟病菌诱导表达的水稻基因 ,通过反式RNA印迹进行辅助筛选 ,获得了 37个在接种稻瘟病菌后表达量增强的水稻cDNA克隆 .采用RNA印迹对其中 5个克隆在接种稻瘟病菌后的表达分析表明 ,这些克隆在抗病以及感病的水稻株系中都具有诱导表达的特点 .根据序列同源性分析 ,与这些克隆序列相应的同源基因可能涉及抑制病原菌生长、清除真菌毒素、传递抗病信号以及调节宿主生理状态等几方面的功能 . 展开更多
关键词 有序差异显示技术(ODD) 水稻 稻瘟病菌 CDNA 克隆
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利用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)研究大豆抗疫霉根腐病的分子机制 被引量:4
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作者 叶楠 李永刚 文景芝 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第9期6-9,共4页
文章以中国优良大豆品种东农46及大豆疫霉优势生理小种1号菌株为材料,利用mRNA差异显示技术研究东农46与大豆疫霉根腐病菌非亲和互作中前后基因表达的差异,寻找并分离出与大豆疫霉根腐病抗病性相关的9条cDNA片段,通过这些差异片段的序... 文章以中国优良大豆品种东农46及大豆疫霉优势生理小种1号菌株为材料,利用mRNA差异显示技术研究东农46与大豆疫霉根腐病菌非亲和互作中前后基因表达的差异,寻找并分离出与大豆疫霉根腐病抗病性相关的9条cDNA片段,通过这些差异片段的序列分析进一步阐述大豆对疫霉根腐病菌的分子抗病机制。 展开更多
关键词 大豆疫霉根腐病 MRNA差异显示技术 抗病基因
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利用差异显示技术克隆小麦抗白粉病相关基因的研究 被引量:2
6
作者 孔凡晶 陈孝 +1 位作者 马有志 辛志勇 《麦类作物学报》 CAS CSCD 2004年第1期11-14,共4页
对小麦—簇毛麦抗病易位系进行差异显示分析,以期获得小麦抗白粉病基因的分子克隆。根据已克隆植物抗病基因的保守域,设计了简并引物,与锚定引物组合,对抗病诱导的小麦抗白粉病易位系进行了差异显示分析,共获得10个差异片段,其中两个片... 对小麦—簇毛麦抗病易位系进行差异显示分析,以期获得小麦抗白粉病基因的分子克隆。根据已克隆植物抗病基因的保守域,设计了简并引物,与锚定引物组合,对抗病诱导的小麦抗白粉病易位系进行了差异显示分析,共获得10个差异片段,其中两个片段R3-1和8C1.3-6Northern杂交为阳性。将这两个片段克隆后进行了测序,序列分析结果为两个新序列,GenBank登录号分别为AF498271和AF498272。R3-1没有发现同源性较高的植物基因序列,发现8C1.3-6与Sphenostylisstenocarpa 类几丁质酶基因有同源性。 展开更多
关键词 小麦 白粉病 抗病基因 差异显示技术 分子克隆 简并引物
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mRNA差异显示技术在动物营养中的应用 被引量:5
7
作者 关荣发 许梓荣 《中国饲料》 北大核心 2003年第5期12-14,共3页
关键词 MRNA差异显示技术 动物 营养 应用
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荧光标记mRNA差异显示技术在分离食管癌相关基因片段中的应用 被引量:2
8
作者 张云汉 陈东 +4 位作者 高冬玲 殷智榕 姜国忠 李靖若 贺建业 《河南医科大学学报》 北大核心 2001年第5期522-524,共3页
目的 :以荧光标记的mRNA差异显示技术分离食管癌及其正常食管粘膜组织相关的差异基因片段。方法 :结合GenomyxLRTM DNA测序 /差异显示系统及GenomyxSCTM 荧光图象扫描系统 ,以及配套的FluoroDD和HI EROGLYPHmRNAProfileKit,采用荧光标记... 目的 :以荧光标记的mRNA差异显示技术分离食管癌及其正常食管粘膜组织相关的差异基因片段。方法 :结合GenomyxLRTM DNA测序 /差异显示系统及GenomyxSCTM 荧光图象扫描系统 ,以及配套的FluoroDD和HI EROGLYPHmRNAProfileKit,采用荧光标记的mRNA差异显示技术进行检测。结果 :从人食管癌及正常食管粘膜组织间 ,同时直接分离出了相关的癌基因或抑癌基因片段 74条。结论 :该技术方便、快捷 。 展开更多
关键词 MRNA差异显示技术 荧光标记 食管癌
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利用mRNA差异显示技术筛选绵羊毛性状相关基因 被引量:1
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作者 牟艳军 刘国龄 +3 位作者 廖和荣 沙莎 赵宗胜 李大全 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2006年第1期95-97,共3页
利用mRNA差异显示技术(DD-PCR),比较绵羊肩、腹、腿三部位皮肤中mRNA的差异表达,共获得差异表达的cDNA片段16条,其中肩部、腹部与腿部之间的差异较大;对所有16条差异片段进行测序并在GENBANK中进行检索,未发现有同源序列。提示16条cDNA... 利用mRNA差异显示技术(DD-PCR),比较绵羊肩、腹、腿三部位皮肤中mRNA的差异表达,共获得差异表达的cDNA片段16条,其中肩部、腹部与腿部之间的差异较大;对所有16条差异片段进行测序并在GENBANK中进行检索,未发现有同源序列。提示16条cDNA片段可能为未发现的基因片段,也可能存在假阳性片段。 展开更多
关键词 绵羊 皮肤 羊毛性状 MRNA差异显示技术
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研究基因差异表达的新方法:mRNA差异显示技术 被引量:3
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作者 王兰芳 乐国伟 《饲料研究》 CAS 2001年第6期1-3,共3页
关键词 基因表达 基因差异表达 MRNA差异显示技术 原理 应用研究
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用银染mRNA差异显示技术寻找不同生长阶段绵羊皮肤中差异表达基因 被引量:3
11
作者 崔建东 赵宗胜 +3 位作者 李大全 王建华 王宏伟 毛录山 《中国草食动物》 2004年第3期11-14,共4页
利用优化了的银染mRNA差异显示技术 (DD PCR) ,比较了出生后 40日龄、60日龄和 12 0日龄三个不同生长阶段的绵羊相同部位的皮肤中总RNA的差异表达。结果表明 :同一个体不同日龄的绵羊存在着表达量不同的差异表达基因 ,并初步筛选出了 8... 利用优化了的银染mRNA差异显示技术 (DD PCR) ,比较了出生后 40日龄、60日龄和 12 0日龄三个不同生长阶段的绵羊相同部位的皮肤中总RNA的差异表达。结果表明 :同一个体不同日龄的绵羊存在着表达量不同的差异表达基因 ,并初步筛选出了 8条重复性好的差异cDNA片段 ,其中 1条表达量不同的差异片段存在于 40日龄 ,5条存在于 60日龄 ,2条为 12 0日龄所特有。 展开更多
关键词 绵羊 皮肤 基因表达 差异表达 银染mRNA差异显示技术 羊毛性状 生长阶段
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分离丁酸钠诱导人大肠癌新分化相关基因的mRNA差异显示技术的一些改进 被引量:1
12
作者 李丰 吴一迪 +1 位作者 王芸庆 宋今丹 《中国医科大学学报》 CSCD 北大核心 2000年第5期325-328,共4页
目的 :探讨应用 m RNA差异显示技术分离丁酸钠诱导的人大肠癌分化相关基因的改进方法。方法 :实验过程中针对某些关键因素如引物设计及 PCR参数的优化、PCR扩增产物显示方法、差异片段的鉴定及再证实等方面进行摸索和改进 ,总结出较为... 目的 :探讨应用 m RNA差异显示技术分离丁酸钠诱导的人大肠癌分化相关基因的改进方法。方法 :实验过程中针对某些关键因素如引物设计及 PCR参数的优化、PCR扩增产物显示方法、差异片段的鉴定及再证实等方面进行摸索和改进 ,总结出较为行之有效的改进方法。结果 :获得的差异片段经克隆测序并与 Gene Bank比较 ,其中的一个可能是新的基因 ,另一个与鼠 SOCS家族同源。结论 :经改进的方法 ,具有工作量小、实验周期短、操作简单、重复性好、成本低的优点。 展开更多
关键词 MRNA差异显示技术 丁酸钠 大肠癌 发病机理
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利用mRNA差异显示技术克隆恶疫霉侵染诱导表达的草莓基因 被引量:2
13
作者 陈孝仁 张博月 May Bente Brurberg 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期54-58,共5页
为了解草莓与恶疫霉互作的分子机制,以接种后3、5和7 d的感病草莓品种‘FDP821’的冠部为材料,利用mRNA差异显示技术研究‘FDP821’与恶疫霉亲和互作前后基因表达的差异,获得78条差异表达的cDNA片段,通过分析从中分离出恶疫霉侵染诱导... 为了解草莓与恶疫霉互作的分子机制,以接种后3、5和7 d的感病草莓品种‘FDP821’的冠部为材料,利用mRNA差异显示技术研究‘FDP821’与恶疫霉亲和互作前后基因表达的差异,获得78条差异表达的cDNA片段,通过分析从中分离出恶疫霉侵染诱导表达的10个草莓基因cDNA片段。BLASTX在线分析表明,这些草莓基因的功能涉及呼吸作用、衰老和核苷运输与代谢等。为阐明草莓与恶疫霉互作的分子机制提供了重要的线索。 展开更多
关键词 草莓冠腐病 恶疫霉 MRNA差异显示技术
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mRNA差异显示技术、PCR技术及其在动物营养研究中的运用 被引量:3
14
作者 李宏 周庆安 刘文刚 《饲料工业》 2005年第12期39-41,共3页
21世纪将是生命科学的世纪。当前,世界各国都将分子生物学纳入本国科技发展的重点。分子生物学技术的迅速发展为营养科学探索必需营养缺陷的分子基础提供了强有力的实验工具。本文旨在对mRNA差异显示技术、PCR技术等两种最常用的生物技... 21世纪将是生命科学的世纪。当前,世界各国都将分子生物学纳入本国科技发展的重点。分子生物学技术的迅速发展为营养科学探索必需营养缺陷的分子基础提供了强有力的实验工具。本文旨在对mRNA差异显示技术、PCR技术等两种最常用的生物技术手段的原理、特点及其在动物营养研究中的应用作一综述。 展开更多
关键词 MRNA差异显示技术 PCR技术 动物营养学 技术原理 现代生物技术
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mRNA差异显示技术的研究进展 被引量:2
15
作者 陈永华 严钦泉 《江西农业学报》 CAS 2005年第1期66-69,共4页
对mRNA差异显示技术中引物设计、应用非放射性标记、优化PCR参数、假阳性鉴定的方法等方面进行了概述。
关键词 MRNA差异显示技术 放射性标记 研究进展 术中 假阳性 引物设计 PCR 鉴定 应用
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mRNA差异显示技术及其在植物研究中的应用 被引量:5
16
作者 童建华 刘华英 鲁旭东 《农业与技术》 2004年第4期109-111,共3页
本文简要介绍了mRNA差别显示技术的基本原理及其在植物学研究中的应用。
关键词 mRNA差异 显示技术 植物 基因表达
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mRNA差异显示技术及其在动物遗传研究中的应用 被引量:3
17
作者 褚晓红 胡锦平 翁经强 《黄牛杂志》 2004年第1期34-35,50,共3页
mRNA表达水平的变化决定细胞的功能状态,mRNA差异显示技术是在转录水平上研究基因表达的有效方法,本文综述了mRNA差异显示技术的基本原理方法、PCR引物设计及其循环参数优化、克服假阳性方法的建立,以及其在动物遗传研究中的应用现状,... mRNA表达水平的变化决定细胞的功能状态,mRNA差异显示技术是在转录水平上研究基因表达的有效方法,本文综述了mRNA差异显示技术的基本原理方法、PCR引物设计及其循环参数优化、克服假阳性方法的建立,以及其在动物遗传研究中的应用现状,并对其前景进行了展望。 展开更多
关键词 MRNA差异显示技术 动物 遗传 PCR引物设计 假阳性 凝胶显示方法 全基因序列
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mRNA差异显示技术在营养学研究中的应用 被引量:4
18
作者 王兰芳 乐国伟 《动物科学与动物医学》 2001年第3期15-16,共2页
关键词 MRNA差异显示技术 技术原理 营养学研究
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mRNA差异显示技术的研究进展 被引量:7
19
作者 陈永华 严钦泉 +1 位作者 余建蒲 肖国樱 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期9-12,43,共5页
针对mRNA差异显示技术中的假阳性高和放射性污染等缺陷,文章从改进引物设计、应用非放射性标记、优化PCR参数、假阳性鉴定等方面进行了综述。1采用4种兼并或单碱基引物作锚定引物;用特异和长序列(≥20bp)专一性引物作为随机引物,可增加... 针对mRNA差异显示技术中的假阳性高和放射性污染等缺陷,文章从改进引物设计、应用非放射性标记、优化PCR参数、假阳性鉴定等方面进行了综述。1采用4种兼并或单碱基引物作锚定引物;用特异和长序列(≥20bp)专一性引物作为随机引物,可增加特异性;在锚定引物之前加上了一段T7启动子序列,在随机引物前加上一段M13重复序列,可使DDRT—PCR的体系的扩增特异性更一致。2针对放射性同位素检测法的缺点,文章提出并比较了几种常用的非放射性同位素标记方法。3保证起始(模板)mRNA质量和浓度,降低dNTP浓度,选择最适的反转录和PCR退火温度,可优化PCR参数。4用两种不同的反转录酶进行反转录平行实验,很容易区分出RNA制备过程中造成的假阳性,目前假阳性鉴定大多还是以Northern印迹为基础,再作些适当的改进。 展开更多
关键词 MRNA差异显示技术 研究进展 Northern 非放射性同位素 非放射性标记 dNTP浓度 锚定引物 随机引物 放射性污染 启动子序列 假阳性 重复序列 标记方法 退火温度 平行实验 反转录酶 制备过程 R参数 特异性 PCR 单碱基 专一性
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利用荧光mRNA差异显示技术克隆短芒大麦盐胁迫相关基因的ESTs
20
作者 陆一鸣 李彦舫 +3 位作者 白杰英 颜宏利 贺艳 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期203-206,共4页
目的 :获取短芒大麦盐胁迫相关基因的 ESTs。 方法 :应用荧光 m RNA差异显示技术进行筛选 ,并利用反向 North-ern杂交方法对差异片段进行快速鉴定以排除假阳性。结果 :共获得 32个与盐胁迫相关的 c DNA序列 ,并获得 Gen Bank注册号。BL ... 目的 :获取短芒大麦盐胁迫相关基因的 ESTs。 方法 :应用荧光 m RNA差异显示技术进行筛选 ,并利用反向 North-ern杂交方法对差异片段进行快速鉴定以排除假阳性。结果 :共获得 32个与盐胁迫相关的 c DNA序列 ,并获得 Gen Bank注册号。BL AST同源性分析结果表明 ,1 3个与已知基因序列有同源性 ,1 9个为未知 ESTs。其类型分别为 :诱导表达型 ,2 2个 ;增强表达型 ,7个 ;抑制表达型 ,3个。 结论 :通过荧光 m RNA差异显示技术获得了短芒大麦盐胁迫相关基因的 ESTs。 展开更多
关键词 荧光mRNA差异显示技术 克隆 短芒大麦 盐胁迫相关基因 ESTS 基因表达
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