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抗菌肽Magainin基因的克隆及其在Pichia pastoris中的表达 被引量：24
1
作者 陈海旭 邹冠玉 +1 位作者 屈贤铭 杨胜利 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期461-464,共4页
用化学合成法合成了以酵母偏爱密码子编码的抗菌肽magainin基因片段 ,合成片段拼接后 ,与pUC19重组 ,获得magainin基因 .Magainin基因与酵母表达载体pPIC3重组 ,构建胞内表达载体pPIC3 Mag ,电击法转化GS115宿主菌 ,经表型筛选和PCR鉴... 用化学合成法合成了以酵母偏爱密码子编码的抗菌肽magainin基因片段 ,合成片段拼接后 ,与pUC19重组 ,获得magainin基因 .Magainin基因与酵母表达载体pPIC3重组 ,构建胞内表达载体pPIC3 Mag ,电击法转化GS115宿主菌 ,经表型筛选和PCR鉴定证实了目的基因已稳定整合入Pichiapastoris酵母基因组中 .阳性克隆用甲醇诱导表达 ,用免疫印迹法确定了产物的正确性 . 展开更多
关键词 抗菌肽 Magainin基因 克隆 酶母表达 pPIC3
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人血管内皮生长因子受体Flt-1胞外区2-3loop在Pichia.pastoris酵母中的表达、纯化及其生物学活性研究 被引量：5
2
作者 马骊 王小宁 +3 位作者 张智清 周小明 曾革非 陈爱君 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期61-65,共5页
目的 :研究人Flt 1胞外区 2 3loopcDNA在Pichia pastoris酵母中的表达 ,获得高效表达的具有生物学活性的重组Flt 1(2 3)。方法 :采用PCR扩增Flt 1(2 3)基因 ,经DNA序列分析后 ,插入含AOX1启动子和α分泌信号肽序列的Pichia pastoris... 目的 :研究人Flt 1胞外区 2 3loopcDNA在Pichia pastoris酵母中的表达 ,获得高效表达的具有生物学活性的重组Flt 1(2 3)。方法 :采用PCR扩增Flt 1(2 3)基因 ,经DNA序列分析后 ,插入含AOX1启动子和α分泌信号肽序列的Pichia pastoris酵母表达载体中 ,构建重组质粒pPIC9K Flt 1(2 3) ,转化酵母宿主菌GS115 ,筛选His+ Muts 表型转化子 ,摇瓶培养 ,1%甲醇诱导表达。表达产物经CM SepharoseFF阳离子交换层析和SephacrylS 10 0分子筛层析纯化后 ,测定其生物学活性。结果 :SDS PAGE分析显示 ,表达产物以可溶性分子形式存在于上清中 ,诱导 4d的表达量达上清总蛋白的 6 0 %以上。ELISA及Westernblot实验表明 ,表达产物具有良好的抗原性和特异性。经CM SepharoseFF阳离子交换层析和SephacrylS 10 0分子筛层析纯化后 ,Flt 1(2 3)纯度达到 90 %以上。生物学活性检测证实其具有结合hVEGF1 6 5 的能力和抑制hVEGF1 6 5 对HUVEC的促增殖功能。结论 :获得了具有生物学活性的可溶性重组Flt 1受体胞外区 2 3loop小片段 ,为进一步的动物实验和临床应用打下了基础。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 FLT-1 基因表达 pichia.PASTO
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基因工程菌Pichia pastoris高密度发酵表达重组人血清白蛋白 被引量：4
3
作者 郭美锦 庄英萍 +2 位作者 吴康华 储炬 张嗣良 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期101-103,116,共4页
在摇瓶条件下对基因工程菌 Pichia pastoris的发酵条件进行了实验 ,并根据摇瓶发酵的优化结果进行了补料分批高密度发酵。在分批发酵时 ,接种量为 1 0 %且种子细胞光密度 ( OD60 0 )为2 0左右时 ,细胞生长的延迟期约为 2 .1 1 h,细胞生... 在摇瓶条件下对基因工程菌 Pichia pastoris的发酵条件进行了实验 ,并根据摇瓶发酵的优化结果进行了补料分批高密度发酵。在分批发酵时 ,接种量为 1 0 %且种子细胞光密度 ( OD60 0 )为2 0左右时 ,细胞生长的延迟期约为 2 .1 1 h,细胞生长光密度与培养时间的关系模型为 :y=0 .7841 e0 .2 319t(线性相关系数 r=0 .9936) ;在补料发酵时细胞浓度可达 1 1 5 g/L～ 1 60 g/L (干重 ) ,在 1 2 0 h重组人血清白蛋白表达量达 3. 展开更多
关键词 重组巴氏毕赤酵母 高密度发酵 重组人血清蛋白 基因表达 分批发酵 补料发酵
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前列腺特异膜抗原在Pichia pastoris酵母中的表达及鉴定 被引量：2
4
作者 叶传忠 赵旭东 +3 位作者 许明 李平作 张永康 陈常庆 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期352-355,共4页
前列腺特异膜抗原是一种具有高度前列腺特异性的糖蛋白 ,其表达的增高与肿瘤的术后复发、激素抵抗及较差的预后正相关 ,在前列腺癌的诊断和治疗中有广泛的应用前景 .从前列腺癌组织提取总RNA ,利用RT PCR技术获得PSMA基因的全长序列 ,... 前列腺特异膜抗原是一种具有高度前列腺特异性的糖蛋白 ,其表达的增高与肿瘤的术后复发、激素抵抗及较差的预后正相关 ,在前列腺癌的诊断和治疗中有广泛的应用前景 .从前列腺癌组织提取总RNA ,利用RT PCR技术获得PSMA基因的全长序列 ,构建了重组酵母表达载体pPIC3.5K PSMA .电击法转化Pichiapastoris酵母 ,通过表型筛选和PCR鉴定证实该基因已稳定整合入Pichiapastoris酵母基因组中 .SDS PAGE显示 ,获得的PSMA蛋白分子量约 10 0kD ,表达产物经West ern印迹证实可特异地与PSMA单克隆抗体 4G5结合 .结果表明 ,成功地获得PSMA编码的cDNA并在酵母细胞中获得表达 . 展开更多
关键词 前列腺特异膜抗原 毕赤酵母 基因表达 鉴定
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巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)高效异源表达脂肪酶研究进展 被引量：2
5
作者 李杨 蔡海莺 +2 位作者 赵敏洁 李阳 冯凤琴 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期377-381,共5页
脂肪酶作为一种常见的工业用酶,广泛应用于食品、化妆品等与生活密切相关的工业领域,但较高的生产成本和使用成本,在一定程度上限制了其进一步应用。通过巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)异源表达系统重组表达脂肪酶,成为解决限制脂肪... 脂肪酶作为一种常见的工业用酶,广泛应用于食品、化妆品等与生活密切相关的工业领域,但较高的生产成本和使用成本,在一定程度上限制了其进一步应用。通过巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)异源表达系统重组表达脂肪酶,成为解决限制脂肪酶发展的方法之一。本文介绍了脂肪酶在P.pastoris表达系统中的异源表达及其优化策略,并对毕赤酵母表面展示异源脂肪酶的技术及应用进行了归纳。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母(P.pastoris) 脂肪酶 重组表达优化方法 表面展示技术
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Pichia pastoris表达β-葡萄糖苷酶基因研究 被引量：4
6
作者 曾黎辉 POULTON JonathanE 吕柳新 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2003年第3期331-335,共5页
采用Pichiapastoris(毕赤酵母)表达系统表达拟南芥β-葡萄糖苷酶基因(AT5g44640),获得了有活性的目的蛋白.研究了影响β-葡萄糖苷酶基因表达的因素.结果表明,表达载体整合拷贝数、不同P.pastoris菌株、甲醇体积分数、诱导培养时间和诱... 采用Pichiapastoris(毕赤酵母)表达系统表达拟南芥β-葡萄糖苷酶基因(AT5g44640),获得了有活性的目的蛋白.研究了影响β-葡萄糖苷酶基因表达的因素.结果表明,表达载体整合拷贝数、不同P.pastoris菌株、甲醇体积分数、诱导培养时间和诱导培养起始的D(600nm)等对β-葡萄糖苷酶的产量都有一定的影响. 展开更多
关键词 Β-葡萄糖苷酶 基因表达 pichia-pastoris 产量 酶活性 真核表达系统 拟南芥
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在甲醇酵母Pichia pastoris胞内表达有活性的辣根过氧化物酶 被引量：5
7
作者 蒋太交 吉鑫松 +1 位作者 章如安 袁中一 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 2000年第2期206-209,共4页
为了开辟在甲醇酵母 Pichia pastoris中表达 HRP的新途径 ,将编码成熟 HRP同功酶 C基因克隆到表达载体 p PIK3.5K中 .p PIK3.5KHRP转化 GS1 1 5后 ,用 PCR筛选阳性 P.pastoris重组株 ,并用甲醇进行诱导 . Western印迹杂交分析表明目标蛋... 为了开辟在甲醇酵母 Pichia pastoris中表达 HRP的新途径 ,将编码成熟 HRP同功酶 C基因克隆到表达载体 p PIK3.5K中 .p PIK3.5KHRP转化 GS1 1 5后 ,用 PCR筛选阳性 P.pastoris重组株 ,并用甲醇进行诱导 . Western印迹杂交分析表明目标蛋白 (约为 38k D)能被天然 HRP的多克隆抗体所识别 ,因此活性辣根过氧化物酶已在 P.pastoris胞内表达 .筛选菌株中显示了明显的过氧化物酶活性 ,同时诱导过程中血红素和 Ca Cl2 展开更多
关键词 辣根过氧化物酶 毕赤酵母 基因表达
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别藻蓝蛋白基因在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达 被引量：1
8
作者 任育红 葛保胜 +4 位作者 金海珠 唐志红 郭承华 杨雨 秦松 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期136-140,共5页
采用亚克隆方法,将别藻蓝蛋白(allophycocyanin,APC)基因插入到毕赤酵母整合型表达载体pPIC6αA中,再用SacⅠ线性化,纯化后,用氯化锂法转化毕赤酵母菌株X-33,筛选表达APC的重组子。PCR和序列分析表明,APC基因已整合到酵母染色体中。重... 采用亚克隆方法,将别藻蓝蛋白(allophycocyanin,APC)基因插入到毕赤酵母整合型表达载体pPIC6αA中,再用SacⅠ线性化,纯化后,用氯化锂法转化毕赤酵母菌株X-33,筛选表达APC的重组子。PCR和序列分析表明,APC基因已整合到酵母染色体中。重组子经甲醇诱导,用Western blotting在培养基上清液检测到APC,表明别藻蓝蛋白(APC)在毕赤酵母中可以表达。APC由两种亚基组成,分子量分别为19kDa和21kDa。重组子经摇瓶培养48h表达量达4.4mg/L。 展开更多
关键词 别藻蓝蛋白 毕赤酵母 表达
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伪狂犬病病毒闽A株gE基因去信号肽片段在Pichia pastoris中的表达 被引量：1
9
作者 敖敬群 王瑾雯 +3 位作者 陈新华 王珣章 龙綮新 娄高明 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第4期629-633,共5页
伪狂犬病病毒囊膜糖蛋白E是一种在伪狂犬病根除计划中具有重要作用的糖蛋白 .将伪狂犬病病毒闽A株 gE基因去信号肽片段克隆到巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPICZαA中 ,获得的重组表达载体pPICZαA FL电击转化野生型酵母菌SM... 伪狂犬病病毒囊膜糖蛋白E是一种在伪狂犬病根除计划中具有重要作用的糖蛋白 .将伪狂犬病病毒闽A株 gE基因去信号肽片段克隆到巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPICZαA中 ,获得的重组表达载体pPICZαA FL电击转化野生型酵母菌SMD116 8后 ,得到多株酵母工程菌SMD116 8/ pPICZαA FL .经高浓度ZeocinTM筛选、表型鉴定、工程菌的诱导表达及表达产物的鉴定 ,最后得到高效表达 gE基因去信号肽片段的酵母工程菌SMD116 8/ pPICZαA FL 7.工程菌 72h培养上清的SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳与蛋白质印迹结果显示 ,gE基因去信号肽片段表达产物大小约为 80ku ,比预期的 6 3 8ku大 .凝胶薄层扫描结合Bradford蛋白质总含量测定结果表明 ,表达产物占工程菌培养上清总蛋白的 13 4 9% ,表达量可达 11 7mg/L .间接ELISA结果表明重组表达产物具有良好的抗原性 。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 闽A株 GE基因 信号肽 表达
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人纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)在Pichia pastoris中的表达 被引量：2
10
作者 田昱 李平 朱运松 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第3期258-263,共6页
用ＰＣＲ方法从ｐＰＡＩＪ．７中扩增人纤溶酶原激活剂抑制物２型（ＰＡＩ－２）基因，与ｐＰＵＣ１８重组，经限制性内切酶片段分析与核苷酸序列分析，获得全长人ＰＡＩ－２基因．ＰＡＩ－２基因与表达载体ｐＰＩＣ９重组，构建受乙醇... 用ＰＣＲ方法从ｐＰＡＩＪ．７中扩增人纤溶酶原激活剂抑制物２型（ＰＡＩ－２）基因，与ｐＰＵＣ１８重组，经限制性内切酶片段分析与核苷酸序列分析，获得全长人ＰＡＩ－２基因．ＰＡＩ－２基因与表达载体ｐＰＩＣ９重组，构建受乙醇氧化酶１基因（ＡＯＸ１）启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒，转化ＧＳ１１５宿主菌，经表型筛选和ＰＣＲ扩增筛选阳性克隆，用甲醇诱导表达，重组ＰＡＩ－２以分泌型表达，占分泌总蛋白的３０％，具ＰＡＩ－２抗原性，与低分子量尿激酶形成了抗ＳＤＳ复合物，具抑制纤溶的活性（９１．４ＡＩＵ／ｍｌ）．对培养条件也进行了探讨． 展开更多
关键词 纤溶酶原激活剂 抑制物2型 酵母表达 PCR
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外源基因在甲醇酵母Pichia pastoris中的表达策略 被引量：1
11
作者 钱平 李祥敏 +1 位作者 仇华吉 陈焕春 《动物医学进展》 CSCD 2002年第6期24-27,共4页
甲醇酵母 Pichia pastoris表达系统是近几年发展起来的一个真核表达系统 ,在其乙醇氧化酶基因启动子的控制下 ,某些外源基因的表达量可达克 /升以上。虽然该系统是一种优良的表达系统 ,但有许多因素影响外源基因在其中的表达 ,包括外源... 甲醇酵母 Pichia pastoris表达系统是近几年发展起来的一个真核表达系统 ,在其乙醇氧化酶基因启动子的控制下 ,某些外源基因的表达量可达克 /升以上。虽然该系统是一种优良的表达系统 ,但有许多因素影响外源基因在其中的表达 ,包括外源基因的拷贝数及其整合到酵母染色体的位置和方式、m RNA的 5′和 3′端非翻译区、转录起始密码子的上下文、外源基因 A+ T的组成与转录和翻译的阻断、密码子的偏爱性、信号肽序列的特性、产物的稳定性、宿主菌的生理特性、培养基成份和培养条件等。在应用该表达系统过程中 ,这些因素均需予以考虑。本文就这些因素作了概述和讨论 。 展开更多
关键词 外源基因 甲醇酵母 表达策略
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新型酵母表达系统-Pichia.pastoris高效分泌型表达病毒生长因子的研究 被引量：2
12
作者 付平平 黎洋 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2000年第7期378-380,共3页
目的：实现痘苗病毒生长因子的高效分泌型表达。方法：构建pPIC9K/VGF表达载体，扩增引物分别为P1：TATACGTAGATAGTGGTAAGG，P2：TAGAATTCTTAAGTGTTTGGTTTT；采用Pichia.pastoris酵母表达系统。结果：经酶切鉴定，证明克隆的基因是正确... 目的：实现痘苗病毒生长因子的高效分泌型表达。方法：构建pPIC9K/VGF表达载体，扩增引物分别为P1：TATACGTAGATAGTGGTAAGG，P2：TAGAATTCTTAAGTGTTTGGTTTT；采用Pichia.pastoris酵母表达系统。结果：经酶切鉴定，证明克隆的基因是正确的；经SDS-PAGE分析，证明转化基因组中确实整合有VGF基因，其分子量为9．6kD；得到了高效分泌型VGF高产菌株，目的蛋白占培养液上清蛋白总量的80％以上，产量为0.45g/L。结论：证实可以通过Pichia.pasoris系统制备可溶性痘菌病毒生长因子。为大规模工业生产打下基础。 展开更多
关键词 痘苗病毒生长因子 酵母表达系统 分泌型表达
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人hIGF-1在Pichia pastoris酵母中的分泌表达及表达产物的鉴定
13
作者 彭鸿娟 李明 +3 位作者 杨林 陈晓光 陈新华 王珣章 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2000年第z2期44-47,共4页
根据人ＩＣＦ－１（Ｈｕｍａｎ　Ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ－１，ｈＩＧＦ－１）的天然基因序列，在尽量保存原基因序列的基础上，将一些密码子换成Ｐｉｃｈｉａ　ｐａｓｔｏｒｉｓ酵母的偏爱密码子，人工合... 根据人ＩＣＦ－１（Ｈｕｍａｎ　Ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ－１，ｈＩＧＦ－１）的天然基因序列，在尽量保存原基因序列的基础上，将一些密码子换成Ｐｉｃｈｉａ　ｐａｓｔｏｒｉｓ酵母的偏爱密码子，人工合成ｈＩＧＦ－１双链ＤＮＡ．将此合成基因整合人Ｘ－３３酵母的染色体上，用Ｚｅｏｃｉｎ＋平板筛选得到重组菌株．以胞外分泌的方式表达了ｈＩＧＦ－１蛋白，表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳和ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析，得到该表达产物的相对分子质量约为７２００． 展开更多
关键词 HIGF-1 pichia pastoris 表达
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Pichia pastoris发酵表达重组人复合α干扰素
14
作者 郝玉有 庄英萍 +3 位作者 王永红 张嗣良 储炬 刘志敏 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期172-176,共5页
在Pichia pastoris表达系统中,研究了甘油补料周期、甲醇流加策略和诱导pH对cIFN表达的影响,优化后的发酵条件是:甘油补料周期为4 h,诱导pH为5.0,基于在线甲醇检测维持甲醇浓度不超过5 g/L。培养96 h后,最大细胞干重、cIFN的表达量和生... 在Pichia pastoris表达系统中,研究了甘油补料周期、甲醇流加策略和诱导pH对cIFN表达的影响,优化后的发酵条件是:甘油补料周期为4 h,诱导pH为5.0,基于在线甲醇检测维持甲醇浓度不超过5 g/L。培养96 h后,最大细胞干重、cIFN的表达量和生物活性分别达到168 g/L、1.24 g/L和5.4×107U/mL。 展开更多
关键词 复合α干扰素 高表达 pichia pastoris 甲醇流加
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外源基因在甲醇酵母Pichia pastoris中的表达策略
15
作者 钱平 仇华吉 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期179-180,共2页
甲醇酵母 Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ表达系统是近几年发展起来的一个真核表达系统，在其乙醇氧化酶 ＡＯＸ１基因启动子的控制下，某些外源基因（如 ＴＮＦ、ＥＧＦ等）的表达量可达克每升以上。虽然该系统是一种优良的表达系统，... 甲醇酵母 Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ表达系统是近几年发展起来的一个真核表达系统，在其乙醇氧化酶 ＡＯＸ１基因启动子的控制下，某些外源基因（如 ＴＮＦ、ＥＧＦ等）的表达量可达克每升以上。虽然该系统是一种优良的表达系统，但有许多因素影响外源基因在其中的表达，包括外源基因的拷贝数及整合到酵母染色体的位置和方式、ｍＲＮＡ的５’和３’非翻译区（ＵＴＲ）、转录起始密码子的上下文、外源基因Ａ＋Ｔ的组成与转录和翻译的阻断、密码子的偏爱性、信号肽的特性、产物的稳定性、宿主菌的生理特性、培养基成分和培养条件等。在应用该表达系统过程中，这些因素都需加以考虑。本文将就这些因素作一概述和讨论，以有利于提高外原基因在该系统中的表达水平。 展开更多
关键词 pichia pastoris表达系统 表达策略
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抗菌肽Japonicin Ⅱ基因的克隆及其在Pichia pastoris中的表达 被引量：3
16
作者 尹佳 詹冬玲 +1 位作者 崔敬爱 陈晓平 《中国酿造》 CAS 北大核心 2009年第12期23-25,共3页
采用重叠区基因扩增法(SOE)人工设计和合成抗菌肽JaponicinⅡ基因。按正确的阅读框架定向克隆至真核表达载体pPICZαA上,构建出的重组质粒pPICZαA-Jap,经电击法转化至GS115宿主菌,Zeocin筛选的阳性克隆用甲醇诱导表达,用Tricine-SDS-P... 采用重叠区基因扩增法(SOE)人工设计和合成抗菌肽JaponicinⅡ基因。按正确的阅读框架定向克隆至真核表达载体pPICZαA上,构建出的重组质粒pPICZαA-Jap,经电击法转化至GS115宿主菌,Zeocin筛选的阳性克隆用甲醇诱导表达,用Tricine-SDS-PAGE确定了产物的正确性;利用琼脂孔穴扩散法证明了表达产物具有抗菌活性。 展开更多
关键词 抗菌肽Japonicin Ⅱ 重叠区基因扩增法 克隆 表达 毕赤酵母菌
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华根霉(Rhizopus chinensis)前导肽脂肪酶基因的克隆及其在Pichia pastoris中的表达 被引量：8
17
作者 王乐乐 喻晓蔚 徐岩 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第1期105-110,共6页
通过3次PCR程序克隆得到了华根霉(Rhizopus chinensis CCTCCM201021)脂肪酶全基因序列,该基因的开放阅读框长1170bp,不含内含子,编码一个389个氨基酸残基的蛋白质,包括26个氨基酸的信号肽,94个氨基酸的前导序列和269个氨基酸的成熟肽,... 通过3次PCR程序克隆得到了华根霉(Rhizopus chinensis CCTCCM201021)脂肪酶全基因序列,该基因的开放阅读框长1170bp,不含内含子,编码一个389个氨基酸残基的蛋白质,包括26个氨基酸的信号肽,94个氨基酸的前导序列和269个氨基酸的成熟肽,其推断的氨基酸序列与一些已报道的根霉脂肪酶序列同源性为86%。在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中分泌表达前导肽序列。SDS-PAGE分析表明表达蛋白的分子量约37kD。N-端氨基酸序列分析表明该重组蛋白分泌过程中前导序列N-端的67个氨基酸被切割掉,表达的重组脂肪酶由前导序列C-端的27个氨基酸和成熟肽的269个氨基酸组成。发酵132h后上清中重组脂肪酶的表达量最高,蛋白含量约5.4mg/mL,橄榄油乳化法测水解酶活为161U/mL,其比活比野生型华根霉脂肪酶高约43倍。 展开更多
关键词 华根霉 脂肪酶 克隆 表达 毕赤酵母
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海洋球石藻病毒(Coccolithovirus)硫氧还蛋白(Trx)在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达及其活性分析 被引量：1
18
作者 蔡艺钦 张稚兰 +1 位作者 罗邦彬 刘静雯 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期905-910,共6页
从实验室保存的pBS-Trx重组质粒中克隆球石藻病毒EhV-Trx基因,构建毕赤酵母重组表达载体pPIC9K-EhV-Trx,将重组质粒电转化毕赤酵母GS115,诱导分泌表达并对重组蛋白进行二硫键还原酶活性分析。结果表明,EhV-Trx基因开放阅读框为591bp,编... 从实验室保存的pBS-Trx重组质粒中克隆球石藻病毒EhV-Trx基因,构建毕赤酵母重组表达载体pPIC9K-EhV-Trx,将重组质粒电转化毕赤酵母GS115,诱导分泌表达并对重组蛋白进行二硫键还原酶活性分析。结果表明,EhV-Trx基因开放阅读框为591bp,编码197个氨基酸;在毕赤酵母GS115中成功诱导表达重组EhV-Trx,经SDS-PAGE分析目的蛋白分子量约为27.8kDa;重组EhV-Trx具有二硫键还原酶的活性,能有效打开胰岛素A、B两条链的二硫键,有望开发成一种新型的硫氧还蛋白脱敏制剂应用于食品安全领域。 展开更多
关键词 海洋球石藻病毒(EhV) 硫氧还蛋白 毕赤酵母 分泌表达 活性分析
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胰岛素原基因的高效分泌表达系统——甲醇酵母Pichia pastoris 被引量：1
19
作者 吴颖 钱凯先 《浙江大学学报（工学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第7期1091-1095,共5页
为了提高重组人胰岛素的表达效率,使用了近年发展起来的真核表达系统-甲醇酵母Pichia pastoris. Pichia pastoris以甲醇为其惟一碳源,而乙醇氧化酶基因的启动子是强启动子,可用来调控异源蛋白的表达.该系统具有操作技术简单,可进行高水... 为了提高重组人胰岛素的表达效率,使用了近年发展起来的真核表达系统-甲醇酵母Pichia pastoris. Pichia pastoris以甲醇为其惟一碳源,而乙醇氧化酶基因的启动子是强启动子,可用来调控异源蛋白的表达.该系统具有操作技术简单,可进行高水平的胞内或胞外表达,及对表达产物进行翻译后修饰与加工等显著优点.将含有小C肽或不含有C肽的人胰岛素原类似物基因整合到酵母基因组上来发酵生产人胰岛素原,在表达量上,每升发酵液中可以得到胰岛素原250～300mg,分泌水平约占总蛋白量的20%,重组人胰岛素具有与猪胰岛素相同的受体结合能力和生物活性. 展开更多
关键词 胰岛素原 甲醇酵母 pichia pastoris 乙醇氧化酶(AOX) 表达系统
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HIV-1外膜蛋白gp120在酵母Pichia pastoris中的表达
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作者 冯劼 朱娟莉 +1 位作者 董兆麟 陈超 《西北大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期801-804,813,共5页
目的用巴斯德毕赤酵母系统表达HIV外膜糖蛋白gp 120。方法将从HIV-1型国际标准株pHXB2-gp 160的基因序列中扩增出的gp 120分子的长片段基因(1 419 bp)和短片段基因(417bp)分别克隆入真核表达载体pPICZαA与pPICZB中,以电穿孔法转化酵母G... 目的用巴斯德毕赤酵母系统表达HIV外膜糖蛋白gp 120。方法将从HIV-1型国际标准株pHXB2-gp 160的基因序列中扩增出的gp 120分子的长片段基因(1 419 bp)和短片段基因(417bp)分别克隆入真核表达载体pPICZαA与pPICZB中,以电穿孔法转化酵母GS 115。用YPDS-zeo平板筛选重组子、PCR方法检测整合到酵母菌GS 115基因组中的gp 120片段基因,经甲醇诱导表达后,SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物。结果诱导后gp 120短片段多肽在GS 115中少量表达,在诱导表达24 h重组蛋白表达量及抗原性达到最高,表达产物被降解,具有良好的抗原特异性。诱导后gp 120长片段多肽未被GS 115所表达。结论在巴斯德毕赤酵母中成功表达gp 120分子长片段需要优化gp 120基因,为制备HIV-1的诊断抗原和基因工程重组疫苗打下基础。 展开更多
关键词 人免疫缺陷病毒I型 GP 120 基因克隆 蛋白表达 毕赤酵母
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