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噬菌体表达短肽模拟脂多糖类脂A表位的研究 被引量:9
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作者 鲍永利 富宁 +2 位作者 杨贵贞 于春雷 王莉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期49-51,共3页
目的:得到拟类脂A的六肽。方法:用抗类脂A的单克隆抗体筛选噬菌体随机六肽库,经四轮筛选后进行ELISA检测,用得到的15个阳性克隆分别免疫小鼠,并将使小鼠产生抗LPS抗体的10个克隆进行测序,将保守序列进行肽合成。结... 目的:得到拟类脂A的六肽。方法:用抗类脂A的单克隆抗体筛选噬菌体随机六肽库,经四轮筛选后进行ELISA检测,用得到的15个阳性克隆分别免疫小鼠,并将使小鼠产生抗LPS抗体的10个克隆进行测序,将保守序列进行肽合成。结果:得到保守序列为LysPheSerSerArg,即KFSSRX。固相合成此小肽可与其1B6抗体结合,且此结合可被LPS抑制。 展开更多
关键词 脂多糖 模拟短肽 噬菌体肽库 六肽
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脂多糖结合蛋白与CD14结合位点模拟肽的初步筛选 被引量:8
2
作者 冯起甲 徐智 +4 位作者 吴国明 徐顺贵 李树钧 陈维中 郭芮伶 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第16期1572-1575,共4页
目的应用噬菌体随机12肽库筛选脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide binding protein,LBP)与CD14结合位点的多肽序列。方法以CD14为固相筛选分子,对噬菌体12肽库进行4轮亲合筛选,采用酶联免疫吸附(ELISA)法鉴定筛选后的噬菌体克隆与CD14... 目的应用噬菌体随机12肽库筛选脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide binding protein,LBP)与CD14结合位点的多肽序列。方法以CD14为固相筛选分子,对噬菌体12肽库进行4轮亲合筛选,采用酶联免疫吸附(ELISA)法鉴定筛选后的噬菌体克隆与CD14的结合活性,取结合活性较高的克隆进行DNA测序,推导其多肽序列并与LBP序列比对,再进行竞争抑制实验检测筛选噬菌体与LBP竞争结合CD14的效力。结果挑取的20个噬菌体克隆中,16个结合实验鉴定阳性,取6个亲和力最高的克隆测序,得到3条不同编码的12肽序列(FHRWPTWPLPSP、MHRHPPPITLPL和AAF-HRAHHLTSP),3条多肽与LBP一级结构同源性低,为模拟肽。6个噬菌体克隆有较高的竞争抑制率。结论用噬菌体12肽库成功筛选出LBP与CD14结合位点的模拟肽。 展开更多
关键词 LBP CD14 噬菌体肽库 模拟肽
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从HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库中筛选抗原表位 被引量:6
3
作者 潘卫 戚中田 +4 位作者 吴晓兰 贺祥 潘欣 陈秋莉 杜平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期20-23,共4页
目的探讨病毒抗原序列研究的新方法。方法应用噬菌体展示技术,筛选HCV核心蛋白的抗原序列。用抗-HCV核心抗体单独阳性的血清,对巳构建的HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库进行4轮筛选,检测筛选阳性的克隆数、插入阳性率和杂... 目的探讨病毒抗原序列研究的新方法。方法应用噬菌体展示技术,筛选HCV核心蛋白的抗原序列。用抗-HCV核心抗体单独阳性的血清,对巳构建的HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库进行4轮筛选,检测筛选阳性的克隆数、插入阳性率和杂交阳性率来评价筛选的效果。测定和分析7个杂交阳性克隆的DNA序列。结果所测定的7个序列中,6个为HCV核心蛋白序列,其中5个被正确地展示于噬菌体表面,1个可能被正确展示,这些序列均含有重要的HCV核心抗原表位。另1个为大肠杆菌nrfa基因。结论噬菌体展示技术完全可应用于病毒蛋白抗原序列的筛选,并具有简便、快速、准确的优点。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 核心蛋白 噬菌体 随机肽库 抗原
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应用噬菌体表面展示技术筛选丙型肝炎病毒核心蛋白抗原模拟表位 被引量:6
4
作者 钟彦伟 成军 +5 位作者 王刚 洪源 王琳 李莉 张玲霞 陈菊梅 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期34-36,共3页
为筛选丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白(core)特异性噬菌体 12肽模拟表位 ,应用噬菌体表面展示技术 ,以抗 HCV核心蛋白抗原的单克隆抗体作为固相筛选分子 ,对人工化学合成的噬菌体随机 12肽库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程 ,随机挑... 为筛选丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白(core)特异性噬菌体 12肽模拟表位 ,应用噬菌体表面展示技术 ,以抗 HCV核心蛋白抗原的单克隆抗体作为固相筛选分子 ,对人工化学合成的噬菌体随机 12肽库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程 ,随机挑取 5 0个克隆 ,经噬菌体酶联免疫吸附法 (ELISA)鉴定 ,并进行交叉反应实验以及竞争抑制性结合实验 ,最后对所选克隆进行DNA序列分析 ,以确定HCV核心抗原的模拟表位。经免疫学鉴定后 ,从随机筛选的 5 0个克隆中确定 10个阳性克隆 ,进行DNA序列测定 ,确定氨基酸序列XRQXXPXXXHXX为HCV核心的模拟表位。 展开更多
关键词 噬菌体 丙型肝炎病毒 核心蛋白 模拟表位 抗原
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脓毒症单核巨噬细胞特异性结合肽的筛选 被引量:6
5
作者 丁宁 刘承武 +3 位作者 李志杰 刘靖华 邓鹏 姜勇 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1045-1050,共6页
利用噬菌体随机肽库展示技术,筛选出与脓毒症单核/巨噬细胞特异性结合的短肽,探索脓毒症治疗的新方法.分别以经过脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理的人外周血单核细胞株(THP-1)细胞作为筛选的靶细胞,以未经LPS处理的THP-1细胞作为非... 利用噬菌体随机肽库展示技术,筛选出与脓毒症单核/巨噬细胞特异性结合的短肽,探索脓毒症治疗的新方法.分别以经过脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理的人外周血单核细胞株(THP-1)细胞作为筛选的靶细胞,以未经LPS处理的THP-1细胞作为非特异性噬菌体吸附细胞,对噬菌体随机环七肽库进行4轮"差减"筛选,经过细胞ELISA验证阳性噬菌体克隆,对获得的阳性克隆进行DNA测序及生物信息学分析,并进一步利用免疫荧光实验,鉴定噬菌体克隆与LPS处理THP-1细胞的结合特异性.4轮筛选后,随机挑取的噬菌体克隆,测序后得到可与LPS处理的THP-1细胞特异性结合肽.对去冗余后的七肽进行Clustal W多序列比对分析和BlastP蛋白同源相似性分析,细胞免疫荧光检测确定获得的噬菌体展示七肽可与LPS处理的THP-1细胞特异性结合.噬菌体随机肽库技术为脓毒症单核/巨噬细胞表面靶位的筛选提供了高效、快捷的筛选体系,实验获得的多肽基序具有高度保守性和细胞特异性,这些多肽的生物活性将是下一步的研究内容. 展开更多
关键词 单核 巨噬细胞 脂多糖 噬菌体展示 肽库 脓毒症
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HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库的构建 被引量:8
6
作者 潘卫 戚中田 +2 位作者 贺祥 陈秋莉 潘欣 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第9期857-860,共4页
目的 :为了探讨噬菌体展示技术在筛选和鉴定病毒抗原表位研究中的应用前景。 方法 :利用随机引物 PCR法以HCV核心基因为模板合成随机 DNA片段 ,再经特定引物二次扩增后获得高丰度的 HCV核心蛋白随机 DNA片段 ,将该片段插入噬菌粒载体 p ... 目的 :为了探讨噬菌体展示技术在筛选和鉴定病毒抗原表位研究中的应用前景。 方法 :利用随机引物 PCR法以HCV核心基因为模板合成随机 DNA片段 ,再经特定引物二次扩增后获得高丰度的 HCV核心蛋白随机 DNA片段 ,将该片段插入噬菌粒载体 p CANTAB5 X的 Xba 位点 ,转化大肠杆菌 TG1,辅助噬菌体拯救 ,建立噬菌体随机肽展示文库。结果 :所构建的随机文库含 1.2 3× 10 5个不同克隆 ,库容噬菌体滴度为 2× 10 1 2 TU/ m l(转导单位 / ml) ,PCR法检测插入阳性为 2 8.1% ,核酸杂交证实 40 %的克隆为 HCV核心基因阳性克隆。 结论 :所建的随机文库有足够大的库容和较好的多样性 ,可以满足HCV C抗原表位的筛选。 展开更多
关键词 噬菌体随机展示肽库 核心蛋白 丙型肝炎 HCV
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异柠檬酸裂解酶肽类抑制剂的优化筛选 被引量:3
7
作者 吴丛梅 赵韫慧 +2 位作者 李莹莹 孙宝娲 殷玉和 《吉林大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期581-586,共6页
利用噬菌体肽库筛选与计算机模拟分子对接技术,优化异柠檬酸裂解酶肽类抑制剂的筛选.先通过噬菌体肽库筛选出与异柠檬酸裂解酶(ICL)具有高亲和力的结合肽,再利用Discovery Studio 2.1模拟多肽与ICL蛋白晶体(1F8I)的分子对接,最后用Fmoc... 利用噬菌体肽库筛选与计算机模拟分子对接技术,优化异柠檬酸裂解酶肽类抑制剂的筛选.先通过噬菌体肽库筛选出与异柠檬酸裂解酶(ICL)具有高亲和力的结合肽,再利用Discovery Studio 2.1模拟多肽与ICL蛋白晶体(1F8I)的分子对接,最后用Fmoc固相合成法合成多肽,并对其生物活性进行检测.实验结果表明,通过噬菌体肽库筛选得到了29条七肽序列,其中12条可与ICL蛋白晶体成功对接.体外生物活性检测结果显示,得到的12条七肽均对ICL的活性有明显抑制作用(抑制率均超过50%). 展开更多
关键词 异柠檬酸裂解酶 肽类抑制剂 噬菌体肽库 虚拟筛选 分子对接
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运用噬菌体展示随机肽库筛选与内毒素结合的高亲和性多肽 被引量:4
8
作者 杨海捷 段光杰 +3 位作者 刘友生 陈锐 余德文 杨宇 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第24期2262-2266,共5页
目的从噬菌体展示随机肽库中筛选与内毒素结合的多肽序列,并进行鉴定。方法以内毒素脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)为靶分子对噬菌体展示随机十二肽库进行4轮亲和筛选,获得与LPS结合的噬菌体克隆,应用结合实验和克隆斑抑制实验进一步... 目的从噬菌体展示随机肽库中筛选与内毒素结合的多肽序列,并进行鉴定。方法以内毒素脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)为靶分子对噬菌体展示随机十二肽库进行4轮亲和筛选,获得与LPS结合的噬菌体克隆,应用结合实验和克隆斑抑制实验进一步确证。挑选结合力强的克隆进行DNA测序,推导出呈现的多肽序列,应用生物信息学软件进行多肽序列分析和同源性分析。结果经4轮亲和筛选从噬菌体展示随机十二肽库中筛选获得了86个克隆,挑选12个结合力强的克隆进行DNA序列测序及生物信息学分析,结合本项目组的噬菌体展示随机七肽库筛选结果推导出呈现的多肽序列为HWQWPHWSPPP(命名为P11肽)。检索相关数据库发现此肽序列未被申请专利,体内约908种蛋白与其结构相匹配,其中包含有与LPS相互作用的位点。结论通过对噬菌体展示随机肽库的淘选,获得与LPS结合的高亲和性多肽,为进一步以这些多肽为先导物进行定向进化研究提供了实验依据和结构基础。 展开更多
关键词 内毒素 噬菌体展示随机肽库 多肽 生物信息学
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噬菌体随机肽库淘选肺癌细胞NCI-H1299特异性结合多肽 被引量:5
9
作者 石磊 潘雪刁 +7 位作者 王军业 潘琴 巫玮 金桂芳 房思练 侯炳忠 何兴祥 臧林泉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期300-304,共5页
目的利用噬菌体展示肽库筛选出与肺癌NCI-H1299细胞特异性结合的多肽,鉴定其特异性和亲和力,为寻找肺癌早期诊断和治疗标志物打下基础。方法以肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,肺二倍体成纤维细胞MRC-5为吸附细胞,在37℃下对噬菌体随机十二... 目的利用噬菌体展示肽库筛选出与肺癌NCI-H1299细胞特异性结合的多肽,鉴定其特异性和亲和力,为寻找肺癌早期诊断和治疗标志物打下基础。方法以肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,肺二倍体成纤维细胞MRC-5为吸附细胞,在37℃下对噬菌体随机十二肽库进行三轮减性筛选,挑取单克隆ELISA初步鉴定噬菌体克隆亲和力;阳性克隆提取质粒,测序后合成多肽,鉴定多肽的亲和力及特异性。结果经ELISA初步鉴定,随机挑选的20个单克隆中,其中6号对NCI-H1299亲和力最高,将其命名为PhageZS6。细胞免疫荧光试验进一步证明,合成的相应多肽FITCZS6对NCI-H1299具有高亲和力。结论利用噬菌体随机十二肽成功筛选出与肺癌细胞具有较高亲和力的多肽ZS6,为肺癌的早期诊断和靶向治疗奠定基础。 展开更多
关键词 噬菌体肽库 多肽 肺癌 NCI—H1299 减性筛选
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猪瘟病毒E2基因噬菌体展示多肽库的构建及表位鉴定 被引量:12
10
作者 徐和敏 王琴 +1 位作者 徐璐 范学政 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期71-76,共6页
本研究通过建立CSFV噬菌体展示多肽库,并对其进行生物淘选,以期获得E2蛋白上新的抗原表位。选择CSFV石门株(SM)和疫苗株(HCLV)为代表株,采用噬菌体展示技术,以T7select415-1b为载体,分别构建了CSFV SM株和HCLV株E2基因噬菌体展示多肽库(... 本研究通过建立CSFV噬菌体展示多肽库,并对其进行生物淘选,以期获得E2蛋白上新的抗原表位。选择CSFV石门株(SM)和疫苗株(HCLV)为代表株,采用噬菌体展示技术,以T7select415-1b为载体,分别构建了CSFV SM株和HCLV株E2基因噬菌体展示多肽库(SM-E2库和HCLV-E2库)。通过生物淘选和噬菌体原位杂交技术,采用7株猪瘟单克隆抗体和1株猪瘟高免血清分别对构建的SM-E2库和HCLV-E2库进行抗原表位筛选。结果共筛选到了5条与E2蛋白高度同源的序列,在E2蛋白上的同源区域分别为TAVSPTTLR、YYEP、TTWKEYSH、GGQ(V)VK和PDGLPHY。结果表明,TAVSPTTLR、YYEP和TTWKEYSH序列与目前已知E2蛋白表位一致,说明它们是E2蛋白上的优势表位;GGQ(V)VK和PDGLPHY序列与预测表位一致,推测是E2蛋白上潜在的抗原表位。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 抗原表位 噬菌体展示多肽库
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脂多糖保守表位模拟肽的筛选与鉴定 被引量:9
11
作者 文维延 韩强涛 富宁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第2期222-226,共5页
用针对脂多糖保守表位的单抗 2B4对噬菌体随机 12肽库进行亲和筛选 ,通过噬菌体ELISA实验及脂多糖(LPS)竞争抑制实验鉴定阳性克隆 .经三轮筛选后 ,与抗体结合的噬菌体得到明显富集 ,噬菌体ELISA结果显示 ,阳性率达 80 % .将其中 12个阳... 用针对脂多糖保守表位的单抗 2B4对噬菌体随机 12肽库进行亲和筛选 ,通过噬菌体ELISA实验及脂多糖(LPS)竞争抑制实验鉴定阳性克隆 .经三轮筛选后 ,与抗体结合的噬菌体得到明显富集 ,噬菌体ELISA结果显示 ,阳性率达 80 % .将其中 12个阳性噬菌体克隆做鼠伤寒杆菌和大肠杆菌LPS竞争抑制实验 ,抑制作用非常明显 ,有良好的剂量依赖关系 ,证明这 12个克隆与LPS具相似表位 .DNA测序并推导噬菌体展示肽的氨基酸序列为 ,GPPQWFFSQPQL (5 / 12 ,41 7% ) ,LPQYFWNTATTA (3/ 12 ,2 5 % ) ,FPQNHWNVPWAT (2 / 12 ,16 6 % ) ,HSQSFWNAPLAM和AHPWTHGYFPPL (1/ 12 ,8 3 % ) .实验结果表明 ,用 2B4抗体筛选到的噬菌体短肽克隆可模拟保守表位 ,即脂多糖的模拟肽 (位 ) . 展开更多
关键词 脂多糖 噬菌体随机肽库 模拟肽 抗原保守区域
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噬菌体表达短肽模拟血吸虫致弱尾蚴特异性抗原表位的研究 被引量:16
12
作者 周东明 曾宪芳 +2 位作者 王敏 Larry McReynold 易新元 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第1期30-32,共3页
目的 从噬菌体随机肽库中筛选模拟血吸虫致弱尾蚴特异性抗原表位的噬菌体克隆 ,并探讨其免疫保护效果。方法 用紫外线致弱尾蚴免疫兔血清IgG筛选以融合蛋白形式在丝状噬菌体外壳蛋白Ⅲ表达的随机 7肽库 ,三轮免疫筛选后获得的噬菌体... 目的 从噬菌体随机肽库中筛选模拟血吸虫致弱尾蚴特异性抗原表位的噬菌体克隆 ,并探讨其免疫保护效果。方法 用紫外线致弱尾蚴免疫兔血清IgG筛选以融合蛋白形式在丝状噬菌体外壳蛋白Ⅲ表达的随机 7肽库 ,三轮免疫筛选后获得的噬菌体克隆经皮下免疫小鼠 3次 ,攻击感染 45d后剖杀 ,观察减虫和减卵效果。结果 经三轮筛选 ,特异性结合的噬菌体富集增加了 10 0多倍 ,随机挑取 2 4个噬菌体克隆经ELISA测定 ,有 2 2个克隆能与致弱尾蚴免疫兔血清IgG特异性反应。混合噬菌体克隆免疫小鼠试验的减虫率与减卵率分别为 33.5 7%和 5 6 .0 7% (P均 <0 .0 0 1)。结论 采用噬菌体随机肽库技术可获得模拟致弱尾蚴特异性抗原表位的短肽分子 。 展开更多
关键词 日本血吸虫 噬菌体随机肽库 免疫筛选 分子模拟 表位
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噬菌体肽库展示的应用及其最新进展 被引量:5
13
作者 张晖 詹金彪 +2 位作者 许林海 严士焜 王克夷 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期375-378,共4页
噬菌体肽库展示技术是近年来发展起来的用丝状噬菌体展示外源肽的一项新技术 ,被广泛应用于研究蛋白质与蛋白质之间的相互作用 ,新药的开发等各个领域。该文就该技术的原理。
关键词 噬菌体 先导化合物 靶分子
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趋化因子受体CCR5亲合短肽的筛选 被引量:4
14
作者 王芳宇 张添元 +4 位作者 罗进贤 李瑞芳 甘菁菁 官文俊 肖凡 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第7期636-641,共6页
趋化因子受体5(CCR5)是HIV-1与宿主细胞结合的辅助因子之一,其功能缺失或被CCR5拮抗剂封闭则会阻止HIV-1感染细胞.为得到与CCR5特异结合的肽类拮抗剂,采用噬菌体展示技术,以稳定表达CCR5的CHO细胞(CHO/CCR5)作为靶标,通过噬菌体随机12... 趋化因子受体5(CCR5)是HIV-1与宿主细胞结合的辅助因子之一,其功能缺失或被CCR5拮抗剂封闭则会阻止HIV-1感染细胞.为得到与CCR5特异结合的肽类拮抗剂,采用噬菌体展示技术,以稳定表达CCR5的CHO细胞(CHO/CCR5)作为靶标,通过噬菌体随机12肽库筛选与CCR5特异结合的多肽;经过四轮筛选后,挑选20个阳性噬菌体克隆进行测序,从中得到11个含有AFDWTFVPSLIL序列的小分子肽.含该序列的噬菌体能与抗人CCR5单抗(2D7)竞争性结合CCR5,且合成肽AFDWTFVPSLIL对趋化因子RANTES与CHO/CCR5的结合具有明显的抑制作用,初步证明该小肽与CCR5具有特异性结合作用. 展开更多
关键词 噬菌体展示 筛选 人趋化因子受体5(CCR5) CHO细胞
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脂多糖结合蛋白/CD14结合位点的初步定位 被引量:3
15
作者 徐智 李琦 +5 位作者 冯起甲 钱桂生 徐顺贵 李昆霖 王兴胜 吴国明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期565-568,共4页
目的应用噬菌体随机12肽库、DNAStar分析软件、亲和实验及竞争抑制实验初步定位脂多糖结合蛋刍(lipopolysaccharide binding protein,LBP)与CD14的结合位点。方法以CD14为筛选分子,联合应用噬菌体肽库展示技术、噬菌体ELISA鉴定、LB... 目的应用噬菌体随机12肽库、DNAStar分析软件、亲和实验及竞争抑制实验初步定位脂多糖结合蛋刍(lipopolysaccharide binding protein,LBP)与CD14的结合位点。方法以CD14为筛选分子,联合应用噬菌体肽库展示技术、噬菌体ELISA鉴定、LBP竞争抑制实验及DNA测序推导LBP/CD14结合位点的展示肽序列,采用DNAStar分析软件:E对所获展示肽序列与LBP一级结构,初步定位LBP/CD14结合位点并人工合成其模拟肽。采用ELISA检测该模拟肽与CD14的亲和力及与LBP的竞争抑制活性。结果DNAStar比对结果表明,经噬菌体肽库筛选获得的8条展示肽氨基酸序列与LBP第252~263位氨基酸有一定相似性。LBP第252~263位氨基酸具有结合位点的特性,即有良好的亲水性、可及性、可塑性及抗原性,该部位可能是LBP/CD14的结合位点。体外活性实验表明,模拟肽FHRNHRsPVTLL可与CD14有臭好的亲和力,有较强的与LBP竞争结合CD14的活性。结论LBP第252—263位氨基酸的模拟肽FHRNHRSPVTLL与CD14有良好的亲和力及有较强的与LBP竞争结合CD14的活性,具有LBP/CD14结合位点的生物学特性,LBP/CD14结合位点初步定位在该区域。 展开更多
关键词 脂多糖结合蛋白 CD14 噬菌体肽库 模拟肽 内毒素
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噬菌体展示短肽模拟脂多糖结合蛋白抗炎功能位点的研究 被引量:6
16
作者 徐德斌 钱桂生 +3 位作者 侯一峰 赵晓利 陈维中 李淑萍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期573-575,共3页
目的 应用噬菌体随机 12肽库筛选脂多糖结合蛋白 (lipopolysaccharidebindingprotein ,LBP)具有抗炎作用的肽序列。方法 以LPS为目标分子 ,对噬菌体十二肽库进行亲合筛选 ,4轮筛选后 ,检测随机挑取的噬菌体克隆的结合活性和抑制活性 ... 目的 应用噬菌体随机 12肽库筛选脂多糖结合蛋白 (lipopolysaccharidebindingprotein ,LBP)具有抗炎作用的肽序列。方法 以LPS为目标分子 ,对噬菌体十二肽库进行亲合筛选 ,4轮筛选后 ,检测随机挑取的噬菌体克隆的结合活性和抑制活性 ,对可与LBP竞争性结合LPS的噬菌体克隆行细胞因子生成抑制实验和LPS内化抑制实验 ,对获得的阳性克隆进行DNA序列测定 ,推导外源肽氨基酸序列 ,并与LBP序列比较 ,确定LBP的抗炎功能位点。结果 随机挑取的 10 0个噬菌体克隆中 16个可与LBP竞争性结合LPS ,其中 7个噬菌体克隆对LBP的增敏LPS刺激PBMC分泌TNF α功能无作用 ,对这 7个克隆进行LPS内化抑制实验 ,其中 3个克隆可以抑制LBP增强LPS内化作用。测序发现这 3个阳性克隆融合多肽的序列均为FHTRWNYWPYLH ,与LBP一级结构氨基酸序列同源性低。结论 该 展开更多
关键词 噬菌体随机肽库 脂多糖结合蛋白 功能位点
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一种稳定、易于操作的噬菌体随机肽库载体的构建 被引量:5
17
作者 万瑛 代佳平 +1 位作者 王燕 刘昕 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期256-258,共3页
目的:拟将噬菌粒pCOMB3改建为更为稳定、高拷贝且易于操作的噬菌体随机肽库载体。方法:对常用噬菌体抗体库呈现载体pCOMB3序列进行点矩阵作图分析(Dot-Plot分析),切除其中重复区,纠正其多代培养后自删除特性... 目的:拟将噬菌粒pCOMB3改建为更为稳定、高拷贝且易于操作的噬菌体随机肽库载体。方法:对常用噬菌体抗体库呈现载体pCOMB3序列进行点矩阵作图分析(Dot-Plot分析),切除其中重复区,纠正其多代培养后自删除特性。原克隆位点63bp的填充序列增加到1435bp以便于酶切鉴定和电泳回收。结果:构建了命名为pTMB2的噬菌粒载体。结论:pTMB2的噬菌粒载体更为稳定且易于操作。 展开更多
关键词 噬菌体随机肽库 pCOMB3 Dot-Plot分析 载体
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噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库的构建 被引量:4
18
作者 杨华 李连青 +6 位作者 王蓓霞 徐容 沈毅珺 贾建安 潘欣 陈秋莉 潘卫 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期396-401,共6页
目的:构建由免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合的噬菌体展示文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选研究打下基础。方法:PCR扩增制备分别编码Protein A 的A、D结构域、Protein G的B2 结构域和Pro tein L的B3结构... 目的:构建由免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合的噬菌体展示文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选研究打下基础。方法:PCR扩增制备分别编码Protein A 的A、D结构域、Protein G的B2 结构域和Pro tein L的B3结构域的序列片段,片段两端引入XbaⅠ酶切位点,3′端引入分别编码0、1、2、3个氨基酸大小随机连接肽的序列,并克隆于pMD 18T载体构建重组质粒。以上述16种重组质粒为模板,PCR扩增分别制备各种单结构域片段及两端部分T载体序列,XbaⅠ酶切,各种酶切片段混合后连接,并克隆于噬菌体展示载体pCANTAB5S,构建噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库,挑取单克隆进行序列测定,评价文库的随机性。结果:噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库库容量为2×107,滴度为1.3×1011;文库中含77%以上的阳性克隆,其中由2个以上单结构域组成的阳性克隆占24%;序列分析显示组合文库包含上述4种单结构域序列,连接方式符合随机连接的特点,随机连接肽的编码核酸也呈随机分布。结论:成功构建了免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库,该文库库容、多样性和随机性完全可满足进行体外分子进化研究的要求。 展开更多
关键词 免疫球蛋白结合分子 噬菌体展示 组合文库 结构域 随机连接肽
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法氏囊活性五肽BP5特异性结合肽的筛选及鉴定 被引量:3
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作者 王臣 郭香玲 +5 位作者 李小康 汪洋 张春杰 吴庭才 李德元 陈溥言 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期966-970,共5页
为鉴定与具有免疫调节功能和抗肿瘤潜能的法氏囊活性五肽(BP5)特异性结合的多肽,本研究利用噬菌体展示技术,以BP5-BSA为靶分子,对噬菌体随机12肽库进行4轮亲和筛选,结合ELISA鉴定和竞争抑制试验,筛选出3个能够特异性与BP5结合的噬菌体... 为鉴定与具有免疫调节功能和抗肿瘤潜能的法氏囊活性五肽(BP5)特异性结合的多肽,本研究利用噬菌体展示技术,以BP5-BSA为靶分子,对噬菌体随机12肽库进行4轮亲和筛选,结合ELISA鉴定和竞争抑制试验,筛选出3个能够特异性与BP5结合的噬菌体阳性克隆。测序结果显示,其编码的12肽序列分别为:PINMQTLNCMAA(P2-12)、GCTLNPMSDLLG(P6-12)和MSSTLNGMLNSL(P7-12),其核心基序为TLNXM。通过人工合成P2-12、P6-12、P7-12多肽,并采用MTT法检测其对BP5抗肿瘤细胞增殖能力的影响,结果显示,P2-12和P7-12肽在0.2μg/m L^20μg/m L浓度下,P6-12肽在2μg/m L^20μg/m L浓度下均能够抑制BP5抗小鼠WEHI-231 B淋巴瘤细胞增殖作用,其中P2-12在20μg/m L浓度下抑制作用最为显著(p<0.01)。此外,p53荧光素酶活性检测结果显示,这3种BP5结合肽在实验浓度下均能够下调BP5促p53基因转录的活性。以上结果表明,这3种BP5特异性结合肽具有下调BP5抗肿瘤活性。本研究为进一步研究BP5抗肿瘤细胞增殖作用的机制提供了相关的实验依据。 展开更多
关键词 法氏囊 活性五肽 噬菌体随机肽库 抗肿瘤 结合肽
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基于赭曲霉毒素A模拟表位的无毒素ELISA方法 被引量:7
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作者 刘仁荣 徐玲 +2 位作者 裘雪梅 陈兴龙 朱立鑫 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2010年第6期47-50,62,共5页
以抗赭曲霉毒素A的单克隆抗体亲和筛选随机7肽库,ELISA方法鉴定阳性克隆,DNA测序推导出赭曲霉毒素A的模拟表位肽,共获得了11个模拟表位肽,共有序列为IRPMV。将化学合成的模拟表位肽与载体BSA偶联后,以之建立无毒素的竞争酶联免疫检测方... 以抗赭曲霉毒素A的单克隆抗体亲和筛选随机7肽库,ELISA方法鉴定阳性克隆,DNA测序推导出赭曲霉毒素A的模拟表位肽,共获得了11个模拟表位肽,共有序列为IRPMV。将化学合成的模拟表位肽与载体BSA偶联后,以之建立无毒素的竞争酶联免疫检测方法,并与常规酶联免疫吸附检测方法及高效液相色谱比较。结果表明:以赭曲霉毒素A模拟表位建立的竞争ELISA方法的线性范围和检测下限都与常规竞争ELISA方法结果相近,样品测试结果与常规竞争ELISA方法及高效液相色谱一致,显示良好的应用前景。 展开更多
关键词 噬菌体展示肽库 赭曲霉毒素A 单克隆抗体 酶联免疫吸附分析(ELISA)
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