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系统发生分析程序MrBayes 3.1使用方法介绍 被引量：11
1
作者 王勇 陈克平 姚勤 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第33期16665-16669,共5页
在介绍MrBayes3.1程序基本特点以及Nexus文件准备的基础上,选取普通DNA序列、普通蛋白质序列、含编码区域的DNA序列、mRNA序列以及混合型数据文件为例分别介绍了MrBayes3.1程序的基本使用方法,为初学者正确使用该程序提供了操作指南,同... 在介绍MrBayes3.1程序基本特点以及Nexus文件准备的基础上,选取普通DNA序列、普通蛋白质序列、含编码区域的DNA序列、mRNA序列以及混合型数据文件为例分别介绍了MrBayes3.1程序的基本使用方法,为初学者正确使用该程序提供了操作指南,同时为深入学习与掌握该程序的特殊用途打好基础。 展开更多
关键词 系统发生分析 贝叶斯推理法 MRBAYES 3.1 使用方法
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6个家兔群体KAP3.1基因的遗传变异分析 被引量：3
2
作者 吴添文 何孟颉 +3 位作者 王晓明 冯凯 李碧春 吴信生 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期643-646,694,共5页
研究设计了2对特异性引物,经过序列拼接首次获得了家兔KAP3.1基因的全长CDS序列,同时采用PCR-SSCP法对6个家兔群体KAP3.1基因的全部CDS序列以及部分5’端和3’端序列进行SNP检测,结果显示,KAP3.1-1位点上发现3种基因型,2个等位基因,在... 研究设计了2对特异性引物,经过序列拼接首次获得了家兔KAP3.1基因的全长CDS序列,同时采用PCR-SSCP法对6个家兔群体KAP3.1基因的全部CDS序列以及部分5’端和3’端序列进行SNP检测,结果显示,KAP3.1-1位点上发现3种基因型,2个等位基因,在序列上发生了C91T突变,为沉默突变;而KAP3.1-2位点未检测到突变。6个群体的基因型分布均处于Hardy-Weinberg平衡,且表现为低度或没有多态。福建黑兔与九疑山兔,福建黑兔与皖系长毛兔,有色獭兔与白色獭兔,九疑山兔与白色獭兔,九疑山兔与皖系长毛兔之间不存在分布差异(P>0.05),而其他家兔群体彼此之间的分布差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01)。研究为KAP3.1基因是否能作为家兔毛质性状选育工作的分子标记可提供一定参考。 展开更多
关键词 兔 KAP3.1基因 遗传变异
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一种新的基于ArcIMS3.1的WebGIS方案 被引量：12
3
作者 邓芳 李新城 朱伟兴 《计算机工程》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期208-209,共2页
通过分析新一代互联网地图服务平台ArcIMS3.1 的特点及其体系构架，探讨其优于Map Object IMS之处，基于ArcIMS3.1平台并结合Japplet技术、JSP技术等，提出一种新的具有多层结构的WebGIS方案，并在工程项目中得到成功的应用, 这对于开展... 通过分析新一代互联网地图服务平台ArcIMS3.1 的特点及其体系构架，探讨其优于Map Object IMS之处，基于ArcIMS3.1平台并结合Japplet技术、JSP技术等，提出一种新的具有多层结构的WebGIS方案，并在工程项目中得到成功的应用, 这对于开展WebGIS领域的研究和应用有较大的实用价值。 展开更多
关键词 ArcMS3.1 WEBGIS 地理信息系统 计算机图形学 数据库
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自发性高血压大鼠外周血淋巴细胞KCa3.1通道表达的变化 被引量：3
4
作者 罗健 张源明 +3 位作者 梁平 王凌鹏 张亚楼 陈曦 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期546-547,共2页
目的:通过研究自发性高血压大鼠(SHR)外周血淋巴细胞钙激活钾通道KCa3.1表达的变化,为高血压病淋巴细胞激活提供证据。方法:使用密度离心法分离SHR和Wistar大鼠外周血淋巴细胞,运用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测SHR和Wistar大... 目的:通过研究自发性高血压大鼠(SHR)外周血淋巴细胞钙激活钾通道KCa3.1表达的变化,为高血压病淋巴细胞激活提供证据。方法:使用密度离心法分离SHR和Wistar大鼠外周血淋巴细胞,运用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测SHR和Wistar大鼠淋巴细胞KCa3.1基因和蛋白的表达。结果:(1)SHR组KCa3.1 mRNA表达水平高于对照组(P<0.05);(2)SHR组KCa3.1蛋白表达水平高于对照组(P<0.05)。结论:SHR淋巴细胞KCa3.1表达增多,提示KCa通道在调节高血压病淋巴细胞激活中起着重要的作用。 展开更多
关键词 高血压病 淋巴细胞 KCa3.1钾通道
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CENDL-3.1铜的检验和改进 被引量：1
5
作者 吴海成 张华 王文明 《核科学与工程》 CSCD 北大核心 2009年第3期212-220,共9页
介绍了利用屏蔽基准实验OKTAVIAN以及核临界安全手册（ICSBEP）中的临界基准实验对CENDL-3．1铜的全套中子评价数据进行的宏观检验。在屏蔽基准检验中，除了中子和7泄漏谱上发现了由非弹性散射截面造成的与实验测量结果的分歧，计算结... 介绍了利用屏蔽基准实验OKTAVIAN以及核临界安全手册（ICSBEP）中的临界基准实验对CENDL-3．1铜的全套中子评价数据进行的宏观检验。在屏蔽基准检验中，除了中子和7泄漏谱上发现了由非弹性散射截面造成的与实验测量结果的分歧，计算结果与实验符合相当好。在快中子谱临界基准检验中，装置HMF072、HMF073和PMF013的keff的计算结果高出实验值大约2％，严重偏离实验结果。针对HMF072装置的灵敏度分析显示，该分歧的产生主要是由于全截面在0．1～1．3MeV能区的评价不当引起的。在对0．1～1．3MeV的全截面进行修正后，临界检验的结果获得了明显改善。 展开更多
关键词 核数据 CENDL-3.1 宏观检验 中子泄漏谱 γ泄漏谱 临界性 灵敏度分析
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统计预报海温场驱动的CAM3.1模式预报试验 被引量：3
6
作者 韩雪 魏凤英 +1 位作者 董敏 董文杰 《应用气象学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期303-311,共9页
基于动力气候模式进行月-季尺度预报的"两步法"思想,提出一种新的预报海温场统计模型,并以该统计模型预报的海温场驱动NCAR CAM3.1模式对1981—2000年月时间尺度的东亚500 hPa高度距平场进行客观回报试验;在此基础上,提出了... 基于动力气候模式进行月-季尺度预报的"两步法"思想,提出一种新的预报海温场统计模型,并以该统计模型预报的海温场驱动NCAR CAM3.1模式对1981—2000年月时间尺度的东亚500 hPa高度距平场进行客观回报试验;在此基础上,提出了对预报结果的订正方法。结果表明:统计预报海温模型的预报海温场能够反映出全球海温空间分布的基本特征,并对表征ENSO事件的Ni(?)o3.4区海温变化的预报能力较强。该统计模型预报的海温场驱动的CAM3.1模式可以较好地预报出东亚500 hPa环流的主要分布特征,试验表明:适当的统计订正方法可以在一定程度上提高CAM3.1模式对东亚夏季500 hPa环流背景的预报技巧。 展开更多
关键词 海温预报统计模型 CAM3.1模式 短期气候预测
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真核表达载体pcDNA3.1-MAGE-1的构建 被引量：2
7
作者 何炜 张朝 +2 位作者 章茜 赵国强 董子明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2005年第4期586-587,共2页
目的:构建含MAGE-1基因的重组真核表达质粒。方法:用RT-PCR方法从人肝细胞肝癌组织中扩增出MAGE-1基因cDNA序列,克隆至pGEM-T载体,测序证实基因碱基序列无误后,再克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建了pcDNA3.1-MAGE-1重组质粒。结果与... 目的:构建含MAGE-1基因的重组真核表达质粒。方法:用RT-PCR方法从人肝细胞肝癌组织中扩增出MAGE-1基因cDNA序列,克隆至pGEM-T载体,测序证实基因碱基序列无误后,再克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建了pcDNA3.1-MAGE-1重组质粒。结果与结论:RT-PCR获得长度为927bp的阳性产物,经T载体和pcDNA3.1(+)真核表达载体克隆、酶切鉴定及序列分析后,证实真核表达质粒pcDNA3.1-MAGE-1构建成功。 展开更多
关键词 MAGE—1 PCDNA3.1(+) 真核表达载体
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pcDNA3.1/hTSHR真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达 被引量：6
8
作者 詹升华 张徽 刘纯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期390-393,共4页
目的 :构建pcDNA3.1(+)人促甲状腺激素受体 (hTSHR)基因真核表达载体 ,并在COS 7细胞中进行表达。方法 :以限制性内切酶EcoRI和XbaI双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR ,获得hTSHRcDNA的全长片段 ,在以低熔点琼脂糖回收纯化后 ,定向插入真... 目的 :构建pcDNA3.1(+)人促甲状腺激素受体 (hTSHR)基因真核表达载体 ,并在COS 7细胞中进行表达。方法 :以限制性内切酶EcoRI和XbaI双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR ,获得hTSHRcDNA的全长片段 ,在以低熔点琼脂糖回收纯化后 ,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆酶切位点中 ,构建重组体pcDNA3.1/hTSHR ,进行酶切、PCR及测序鉴定。通过脂质体介导 ,转染COS 7细胞进行瞬时表达 ,并用RT PCR和免疫细胞化学染色法检测hTSHR的表达。结果 :双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR得到约 2 70 0bp含TSHR全长cD NA的片段 ,同预期片段的大小相符。所构建的pcDNA3.1/hT SHR经双酶切及PCR鉴定同预期大小相符 ;测序结果与Gen Bank中收录的hTSHR全长序列一致 ,表明真核表达质粒构建正确。以脂质体转染COS 7细胞后 ,用RT PCR和免疫细胞化学染色法检测表明 ,细胞可表达hTSHR。结论 :成功地构建真核重组表达质粒pcDNA3.1/hTSHR ,为进一步研究TSHR的功能 ,以及利用hTSHR真核表达载体建立Graves实验动物模型奠定了基础。 展开更多
关键词 人促甲状腺激素受体 PCDNA3.1 COS-7细胞 转染 动物模型
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重组突变型DNA聚合酶β表达载体pcDNA3.1-polβ的构建 被引量：3
9
作者 赵国强 刘栋 +5 位作者 赵勤 杨洪艳 金戈 赵继敏 高丽 董子明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2003年第4期480-483,共4页
目的 :构建含突变型 polβ基因重组表达载体。 方法 :从食管癌标本中提取总RNA ,反转录合成cDNA ,克隆入 pCDNA3.1质粒。以通用鉴定引物PCR扩增、小量提取质粒酶切鉴定重组质粒 ,并进行测序。 结果 :测序结果证实重组载体中的外源片段... 目的 :构建含突变型 polβ基因重组表达载体。 方法 :从食管癌标本中提取总RNA ,反转录合成cDNA ,克隆入 pCDNA3.1质粒。以通用鉴定引物PCR扩增、小量提取质粒酶切鉴定重组质粒 ,并进行测序。 结果 :测序结果证实重组载体中的外源片段序列与所选取的标本完全相符。结论 :成功构建了含突变型polβ基因重组表达载体 ,可应用于下游研究。 展开更多
关键词 重组突变型DNA聚合酶β 表达 载体 pcDNA3.1-polβ 食管癌
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利用新型表达载体pcDNA3.1/Myc-His表达sIL-4受体 被引量：5
10
作者 陈琦 陈广平 +2 位作者 郭慕依 张秀荣 朱虹光 《上海医科大学学报》 CSCD 2000年第4期298-299,301,共3页
关键词 分子生物学 基因载体 pc DNA 3.1/Myc-His
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日本血吸虫pcDNA3.1(+)/MLP核酸疫苗的构建及其对家兔保护性免疫作用的研究 被引量：4
11
作者 刘彦 肖建华 +2 位作者 廖力 张愉快 曾谷清 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第4期299-302,314,共5页
目的　体外扩增日本血吸虫中国大陆株粘蛋白样蛋白抗原的部分基因序列 ,构建日本血吸虫pcDNA3 1(+) /MLP核酸疫苗 (SJP) ,免疫新西兰家兔 ,观察它在肌肉组织中的表达、及其对家兔的保护性免疫作用。方法　分子克隆常规操作构建SJP疫苗 ... 目的　体外扩增日本血吸虫中国大陆株粘蛋白样蛋白抗原的部分基因序列 ,构建日本血吸虫pcDNA3 1(+) /MLP核酸疫苗 (SJP) ,免疫新西兰家兔 ,观察它在肌肉组织中的表达、及其对家兔的保护性免疫作用。方法　分子克隆常规操作构建SJP疫苗 ,免疫家兔 ,家兔肌肉组织体外扩增查MLP基因 ,并通过免疫组化观察重组蛋白在局部肌组织中的表达 ;做血清抗体及细胞因子分析 ,计算减虫率及减卵率。结果　经酶切、PCR及测序鉴定表明所构建的SJP中含有目的基因序列 ;免疫家兔 8周后可以在免疫家兔肌肉中检测到MLP基因 ,免疫组化结果阳性 ;可诱导IgA、IgG1及INF -γ变化 ,减虫率为2 4 10 % ,减卵率为 2 8 10 %。结论　成功地构建了含目的基因的核酸疫苗SJP ,SJP免疫家兔后 ,肌组织有重组蛋白的表达 ,并可产生一定的免疫保护性作用。 展开更多
关键词 日本血吸虫 pcDNA3.1(+)/MLP 核酸疫苗 构建 兔 保护性免疫 粘蛋白样蛋白基因
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K_(Ca)3.1通道对增殖表型大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响 被引量：1
12
作者 苏兴利 张鸿 +4 位作者 于玮 霍健 郭玉芳 王爽 王湘 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期976-980,共5页
目的探讨KCa3.1通道对增殖表型大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响。方法组织贴壁法培养大鼠血管平滑肌细胞,采用光学显微镜、电镜和免疫细胞化学染色法观察初代和9代平滑肌细胞形态学特征。RT-PCR和免疫细胞化学染色法检测初代和9代... 目的探讨KCa3.1通道对增殖表型大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响。方法组织贴壁法培养大鼠血管平滑肌细胞,采用光学显微镜、电镜和免疫细胞化学染色法观察初代和9代平滑肌细胞形态学特征。RT-PCR和免疫细胞化学染色法检测初代和9代平滑肌细胞KCa3.1通道mRNA和蛋白表达。MTT和Transwell法观察KCa3.1通道对平滑肌细胞增殖和迁移的影响。结果初代和9代平滑肌细胞分别表现出收缩表型和增殖表型特征,9代平滑肌细胞KCa3.1通道mRNA、蛋白表达水平、增殖和迁移能力显著高于初代细胞(P<0.01),KCa3.1通道阻断剂TRAM-34可显著抑制9代细胞的增殖和迁移(P<0.01),对初代细胞无明显影响。结论增殖表型血管平滑肌细胞KCa3.1通道表达增加可能促进了细胞的增殖和迁移。 展开更多
关键词 血管平滑肌细胞 KCa3.1 增殖 迁移
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调控T型钙通道Ca_v3.1电压依赖性失活的分子结构域(英文) 被引量：2
13
作者 贺秉军 胡芬 +4 位作者 商学良 韩丽鑫 吴广彦 李俊英 孙金生 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2014年第9期877-886,共10页
T型钙通道（Cav3）广泛分布于各类细胞,其显著的电生理学特点是低电位激活和快速的电压依赖性失活.失活在通道的生理功能调节中起十分重要的作用,但具体参与通道失活的分子基础目前并不完全清楚.为明确Cav3.1通道中调控电压依赖性失活... T型钙通道（Cav3）广泛分布于各类细胞,其显著的电生理学特点是低电位激活和快速的电压依赖性失活.失活在通道的生理功能调节中起十分重要的作用,但具体参与通道失活的分子基础目前并不完全清楚.为明确Cav3.1通道中调控电压依赖性失活的结构域,用Cav1.2通道（无电压依赖性失活）结构域Ⅰ和Ⅱ中的S1-S4、S5-S6区及Ⅰ和Ⅱ间的联系区替换Cav3.1中的相应区域,构建嵌合通道,并在卵母细胞中表达,用电压钳技术分析通道的电生理学特性.结果表明,替换Ⅰ中的S1-S4或S5-S6区可使Cav3.1的失活特性显著改变,但这种改变主要是由激活-失活偶联所致.Ⅱ的替换使通道的失活曲线参数发生显著改变,表明结构域Ⅱ,包括S1-S4和S5-S6均参与Cav3.1失活过程的调控.Ⅰ、Ⅱ间的联系区及Ⅰ中的S5-S6主要调控Cav3.1的失活速率,Ⅰ和Ⅱ中的S1-S4对通道失活速率无影响.综上所述,结构域Ⅱ是调控Cav3.1电压依赖性失活的关键因素,结构域Ⅰ不参与该通道失活过程的调控.Ⅰ、Ⅱ间的联系区及Ⅰ中的S5-S6主要调控Cav3.1通道的失活速率,Ⅰ、Ⅱ中的S1-S4对通道失活速率无影响. 展开更多
关键词 T型钙通道Cav3.1 电压依赖性失活 结构域 电生理
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K_(Ca)3.1通道抑制剂TRAM-34对TGF-β1诱导系膜细胞增生的影响 被引量：1
14
作者 付荣国 陈钊 +8 位作者 张涛 马立群 杜燕 吴喜利 田李芳 侯静静 刘晓丹 安鹏 姚纲练 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期200-203,221,共5页
目的 观察TRAM-34对TGF-β1诱导系膜细胞增生的影响,了解KCa 3.1在肾小球硬化中的作用.方法2ng/mL TGF-β1诱导系膜细胞增生后,采用流式细胞技术和MTT方法观察8、16、24nmol/L TRAM-34分别对细胞周期和细胞增殖的影响,并选用最佳抑制浓... 目的 观察TRAM-34对TGF-β1诱导系膜细胞增生的影响,了解KCa 3.1在肾小球硬化中的作用.方法2ng/mL TGF-β1诱导系膜细胞增生后,采用流式细胞技术和MTT方法观察8、16、24nmol/L TRAM-34分别对细胞周期和细胞增殖的影响,并选用最佳抑制浓度TRAM-34干预15、30、60min后,用RT-PCR技术观察其对系膜细胞α-SMA和FSP-1转录水平的影响.结果 与空白对照组相比,2ng/mL TGF-β1诱导的系膜细胞阻滞于G0～G1期,表现为G0～G1期细胞百分比明显升高[（48.45±1.89）% vs.（70.29±1.84）%,P〈0.01],而S期细胞百分比相应下降[（38.54±1.13）% vs.（19.56±1.67）%;P〈0.01）;各浓度TRAM-34组均可以改善阻滞于G0～G1期的系膜细胞增生,使细胞周期中G0～G1期细胞百分比明显减少,S期细胞百分比明显增多,其中24nmol/L组降低最明显[TGF-β1组vs.TRAM-34组：G0～G1期为（70.29±1.84）% vs.（61.90±1.88）%;S期为（19.56±1.67）% vs.（25.52±1.62）%;P〈0.05）.MTT实验结果也显示各浓度TRAM-34对TGF-β1诱导系膜细胞增生具有抑制作用,其中24nmol/L组抑制作用最显著,与8nmol/L和16nmol/L组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）.24nmol/L的TRAM-34可显著抑制系膜细胞α-SMA和FSP-1的表达.结论 TRAM-34能够改善TGF-β1诱导的系膜细胞阻滞,减少细胞的早衰、表型转化和纤维样增生. 展开更多
关键词 KCa3 1 TRAM-34 系膜细胞 增生 TGF-Β1 肾小球硬化
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pcDNA3.1-Egr.1p-p16基因联合放射治疗对裸鼠肿瘤的作用 被引量：3
15
作者 马红兵 王西京 +7 位作者 胡海涛 狄政莉 夏辉 王铮 李琤 韩志楷 马洁 吴丛梅 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期7-10,15,共5页
目的:探讨pcDNA3.1 Egr.1p p16基因联合放射治疗移植人胰腺癌细胞JF 305裸鼠的抗肿瘤作用的 适宜照射剂量和质粒注入量。方法:不同剂量X射线照射(2,10,20Gy)及瘤内不同量脂质体包裹的pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒(10,20,30μg)注入接种... 目的:探讨pcDNA3.1 Egr.1p p16基因联合放射治疗移植人胰腺癌细胞JF 305裸鼠的抗肿瘤作用的 适宜照射剂量和质粒注入量。方法:不同剂量X射线照射(2,10,20Gy)及瘤内不同量脂质体包裹的pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒(10,20,30μg)注入接种JF305胰腺癌细胞的裸鼠体内,测定各组裸鼠体积以观察各种处理抑瘤效 应的差异,并用RT PCR检测放射治疗后48h各组肿瘤局部p16mRNA水平。结果:质粒注入后接受20GyX射线 照射组照射后4～28d,肿瘤生长速率明显低于2Gy和10Gy照射组(P<0.05)。质粒注入量为20μg或30μg的 联合治疗组照射后4～28d,肿瘤生长速率明显低于注入量为10μg的联合治疗组(P<0.05)。单纯接种 pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒组和接种pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒照射组小鼠的肿瘤组织内有p16mRNA表达,且 pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒照射组的p16mRNA水平明显高于单纯pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒组(P<0.05)。结 论:pcDNA3.1 Egr.1p p16基因联合放射治疗小鼠体内抗肿瘤作用的适宜射线照射剂量为20Gy,质粒注入量为20 μg;pcDNA3.1 Egr.1p p16基因联合放射治疗的抗肿瘤作用明显优于单纯放射治疗或单纯基因治疗,这可能与辐射 激活Egr.1p基因后增强抑瘤基因p16的表达有关。 展开更多
关键词 pcDNA3.1-Egr.1p-p16重组质粒 基因联合放射治疗 X射线 抗肿瘤作用 剂量 质粒注入量
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p53过表达抑制同源盒基因NKX3.1启动子活性 被引量：1
16
作者 于春晓 刘闻闻 +5 位作者 吴伟芳 陈蔚文 张鹏举 张琦 姜安丽 张建业 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期560-565,共6页
NKX3.1是前列腺特异表达的同源盒基因,在前列腺癌的发生发展中起重要作用,而在前列腺癌进展中常会发生p53的基因突变.为研究两者之间的关系,构建NKX3.1启动子(1040bp)-荧光素酶报告基因重组质粒(pGL3-1040)及其缺失突变体,瞬时转染前列... NKX3.1是前列腺特异表达的同源盒基因,在前列腺癌的发生发展中起重要作用,而在前列腺癌进展中常会发生p53的基因突变.为研究两者之间的关系,构建NKX3.1启动子(1040bp)-荧光素酶报告基因重组质粒(pGL3-1040)及其缺失突变体,瞬时转染前列腺癌细胞LNCaP.通过荧光素酶表达活性分析,检测p53过表达对NKX3.1启动子活性的影响.结果表明:p53在LNCaP细胞中过表达可明显抑制NKX3.1启动子活性;RT-PCR及Western引迹检测p53过表达对NKX3.1表达的影响.结果表明,p53过表达可以明显抑制同源盒基因NKX3.1的表达.通过TRANSFAC软件分析,在NKX3.1基因上游-526至-507区存在一个p53反应元件的5′核心序列.缺失pGL3-1040中的p53反应元件核心序列并不能消除p53对NKX3.1启动子的抑制作用,表明p53不是通过p53反应元件直接抑制NKX3.1启动子活性.进一步通过5′缺失突变分析,发现NKX3.1启动子-140～+8bp区仍受p53负调控.此148bp区域中含有一个Sp1和一个CREB元件,瞬时共转染Sp1表达载体或CREB表达载体的结果表明,p53并不是通过与Sp1或CREB相互作用对NKX3.1启动子发挥抑制作用的.上述结果表明,p53过表达可以抑制同源盒基因NKX3.1启动子活性,下调NKX3.1基因的转录,其调控机制有待进一步研究. 展开更多
关键词 同源盒基因NKX3.1 启动子 P53 负调控
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重组体pcDNA3.1(+)-tyr的构建及在小鼠NIH3T3细胞中的表达 被引量：2
17
作者 吉琼梅 朱振宇 +4 位作者 张海涛 李秀英 岳滔 李茜 马涧泉 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期358-362,共5页
[目的]克隆酪氨酸酶基因(tyr),构建pcDNA3.1(+)-tyr真核表达重组体,并导入NIH3T3细胞表达。[方法]用RT-PCR法从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆tyr全长cDNA片段,利用DNA重组技术将其定向插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)的T7启动子下游,并用脂质... [目的]克隆酪氨酸酶基因(tyr),构建pcDNA3.1(+)-tyr真核表达重组体,并导入NIH3T3细胞表达。[方法]用RT-PCR法从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆tyr全长cDNA片段,利用DNA重组技术将其定向插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)的T7启动子下游,并用脂质体法导入NIH3T3细胞,RT-PCR,酪氨酸酶活性测定及多巴染色法检测tyr的表达。[结果]成功克隆1.74kb的全长tyr cDNA片段,经测序证实与GenBank所报道的序列完全一致,tyr准确克隆入pcDNA3.1(+)的多克隆位点,RT-PCR及酪氨酸酶活性测定等方法检测到转染了重组体的NIH3T3细胞中有tyr的表达。[结论]本实验成功构建了pcDNA3.1(+)-tyr真核表达重组体,并成功导入NIH3T3细胞中表达。 展开更多
关键词 黑色素瘤 酪氨酸酶基因 基因表达 pcDNA3.1(+)质粒 RT-PCR法
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细胞内pH对胆碱能受体介导的Kir3.1/3.4电流的调节 被引量：2
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作者 杜肖娜 王川 +1 位作者 贾庆忠 张海林 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期53-58,共6页
目的　研究细胞内pH对胆碱能受体介导的Kir3 1/3 4电流的调节作用。方法　应用AzideNa、KHCO3 和通过灌流直接降低细胞内 pH ,用双电极电压钳和膜片钳方法观察在蛙卵细胞中表达的Kir3 1/ 3 4钾离子通道电流的变化和M受体激活对Kir3 1/ ... 目的　研究细胞内pH对胆碱能受体介导的Kir3 1/3 4电流的调节作用。方法　应用AzideNa、KHCO3 和通过灌流直接降低细胞内 pH ,用双电极电压钳和膜片钳方法观察在蛙卵细胞中表达的Kir3 1/ 3 4钾离子通道电流的变化和M受体激活对Kir3 1/ 3 4电流调节的变化。结果　细胞内 pH降低能抑制Kir3 1/ 3 4的电流 ;Kir3 1/ 3 4对细胞内pH的敏感性介于另外两种Kir通道Kir2 1和Kir2 3之间 ,即这三种通道对细胞内 pH的敏感性依次为Kir2 3>Kir3 1/ 3 4 >Kir2 1;细胞内pH降低能够减弱M1受体激活对Kir3 1/ 3 4的抑制作用 ,加强M2 受体激活Kir3 1/ 3 4电流后的去敏作用。结论　在维持细胞静息电位方面起重要作用的Kir3 1/ 3 4通道在细胞内pH降低的情况下基础电流和M受体激活调节电流均发生了变化 ,这些变化在缺血缺氧引起的细胞 (如心肌细胞 ) 展开更多
关键词 内向整流性钾通道Kir3.1/3.4 细胞内pH M受体
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基于BioWin3.1软件对Orbal氧化沟中4种组分的模拟研究 被引量：1
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作者 马昭 刘玉玲 +2 位作者 白戈 宣武赟 巩书涵 《西安理工大学学报》 CAS 北大核心 2016年第4期481-487,共7页
为了模拟Orbal氧化沟工艺有机物去除与脱氮除磷效果,基于ASDM数学模型,以BioWin3.1软件为模拟平台,对Orbal氧化沟工艺进行模拟研究。通过模型模拟值与实验实测值的对比可知,COD、TN、TP与氨氮的模拟值与实测值误差较小。说明BioWin3.1... 为了模拟Orbal氧化沟工艺有机物去除与脱氮除磷效果,基于ASDM数学模型,以BioWin3.1软件为模拟平台,对Orbal氧化沟工艺进行模拟研究。通过模型模拟值与实验实测值的对比可知,COD、TN、TP与氨氮的模拟值与实测值误差较小。说明BioWin3.1软件可以较好地模拟Orbal氧化沟工艺的有机物去除与脱氮除磷效果,可用于对Orbal氧化沟中的水质进行预测,也可为工艺的运行调试提供参考依据。 展开更多
关键词 ORBAL氧化沟 BioWin3.1 模拟 预测
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pcDNA3.1-GFP-LC3B真核表达载体的构建
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作者 刘宣宣 王文倩 +3 位作者 毛伟平 严浩 孟素芳 王芳 《安徽农业科学》 CAS 2015年第6期82-84,97,共4页
[目的]构建含GFP-LC3B基因的真核表达载体。[方法]从HEK293细胞中提取总RNA,以反转录得到c DNA为模板,根据Gen Bank公布的人源LC3B基因序列设计引物,通过PCR方式扩增目的基因,将基因和pc DNA3.1-GFP载体双酶切后,通过T4连接酶将基因连接... [目的]构建含GFP-LC3B基因的真核表达载体。[方法]从HEK293细胞中提取总RNA,以反转录得到c DNA为模板,根据Gen Bank公布的人源LC3B基因序列设计引物,通过PCR方式扩增目的基因,将基因和pc DNA3.1-GFP载体双酶切后,通过T4连接酶将基因连接到pc DNA3.1-GFP载体上,得到pc DNA3.1-GFP-LC3B真核表达载体。[结果]扩增出目的基因,构建了含目的基因的真核表达载体pc DNA3.1-GFP-LC3B。[结论]成功构建了含有人LC3B基因的真核表达载体pc DNA3.1-GFP-LC3B,为研究细胞自噬提供了基础。 展开更多
关键词 HEK293 CELLS LC3B pcDNA3.1-GFP 真核表达
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